Syncytin1的细胞特异性表达及其转录调控研究

目的 研究转录因子GCM1和GATA-3对Syncytin 1表达的调控作用.方法 应用实时RT-PCR检测绒癌细胞JEG-3和人星形胶质细胞瘤CCF-STTG1细胞Syncytin 1及其转录因子mRNA水平,并采用RNA干扰技术探讨GCM1和GATA-3对Syncytin 1转录的调控.结果 Syncytin 1、GCM1和GATA-3的mRNA水平在JEG-3与CCF-STTG1细胞间差异有统计学意义(均P＜0.01);流感病毒A感染使CCF-STTG1细胞Syncytin1、GCM1和GATA-3转录显著增高(均P＜0.001);GCM1 siRNA或GATA-3siRNA使JEG-3细胞Syncytin 1的表达显著降低(P＜0.05),而CCF-STTG1细胞没有显著改变(P＞0.05).结论 GCM1和GATA-3调控Syncytin 1在绒癌细胞JEG-3中的特异表达,但不足以调控病毒感染诱导的人星形胶质细胞瘤细胞CCF-STTG1的Syncytin 1异常转录.     

MSCs成骨分化中BMP2对成骨转录因子SATB2表达的调控作用

目的探索间充质干细胞（MSCs）成骨分化中骨形态发生蛋白2（BMP2）对成骨转录因子SATB2表达的调控作用。方法体外培养小鼠间充质细胞系C2C12,腺病毒介导的BMP2（Adv-BMP2）诱导其向成骨细胞分化,建立并验证C2C12细胞成骨分化细胞模型。Real-Time PCR和Western blotting分别检测C2C12细胞成骨分化过程中经不同浓度Adv-BMP2处理不同时间时SATB2 mRNA和SATB2蛋白表达;以经相应浓度Adv-β-Gal处理细胞作对照。结果经150 pfu/cell Adv-BMP2处理C2C12细胞5 d后,成骨细胞标志基因Ⅰ型胶原、骨唾液酸蛋白和骨钙素表达以及碱性磷酸酶活性均显著增加,MSCs成骨分化模型构建成功。150 pfu/cell Adv-BMP2诱导C2C12细胞成骨分化过程中,SATB2 mRNA和SATB蛋白表达随分化进程而增加;Adv-BMP2浓度为0～225 pfu/cell时,SATB2表达随Adv-BMP2浓度升高而增加。结论 BMP2可调控SATB2的表达,从而影响MSCs成骨分化。     

小鼠PGC-1α基因启动子的转录调控功能分析

目的 克隆小鼠PGC-1α基因的启动子并分析其转录调控模式.方法 设计引物,以小鼠肝脏组织DNA 为模板,PCR扩增PGC-1α基因启动子区并克隆入荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic 中,构建具有PGC-1α启动子转录活性的报告质粒pGL3-PGC-1α-Luc.通过特异性引物,引入替换碱基突变相关转录因子调控模序,构建点突变融合载体,并将其转染1c1c7 及c2c12 细胞系,检测荧光素酶的表达情况.结果 构建的pGL3-PGC-1α-Luc 系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA 测序分析都显示正确;PGC-1α基因启动子区域（-2533~＋78）具有较强的转录活性;突变失活PGC-1α基因启动子区域中的CRE及IRE反应原件导致转录活性明显降低.结论 成功构建小鼠PGC-1α基因启动子报告质粒,PGC-1α基因上游区域（-2533~＋78）具有较强的启动子活性;启动子区域中的CRE和IRE反应原件为主要转录调控位点.     

缺氧诱导因子-1调控转录及相关转录抑制剂的研究进展

细胞低氧适应性反应可通过转录调节蛋白--缺氧诱导因子-1（HIF-1）和p300/CBP辅激动因子对低氧应答基因的转录激活介导。HIF-1是药学上重要的靶点,设计以HIF-1α/p300复合物为靶点的小分子转录抑制剂,可用于心脑血管疾病或肿瘤的治疗。本文就HIF-1α与p300的相互作用,以及氧依赖的特殊氨基酸羟化对HIF-1α蛋白稳定性和转录激活调控的研究进展作一综述。     

SP1调控PIWIL1基因启动子转录活性研究

目的 克隆转录因子SP1编码序列,构建真核表达质粒PCDNA3.1-SP1,并研究其对PIWIL1基因转录活性的影响。方法 RT-PCR法从正常人外周血总RNA中钓取SP1基因的编码序列,插入至真核表达载体PCNDA3.1（+）,酶切及测序鉴定重组质粒。Western blot法分别验证重组表达载体的在COS-7细胞中的表达效应。分别将活性最高的PIWIL1基因启动子报告基因截短体（即核心启动子区域）、活性最低的PIWIL1基因启动子报告基因截短体,与SP1重组质粒共转染COS-7细胞,利用Dual-Luciferase reporter assay system测定不同启动子活性区的PIWIL1基因转录活性的改变,同时应用光辉霉素A下调SP1的表达来进一步验证SP1对PIWIL1活性的影响。结果 酶切及测序鉴定结果显示SP1表达质粒构建成功,Western blot法结果表明重组SP1表达载体能有效表达于COS-7细胞,过表达SP1可明显提高PIWIL1不同活性区的启动子的活性（P<0.05）。结论 外源性SP1真核表达载体转染能有效表达于COS-7细胞,并对PIWIL1的转录活性起着上调的作用,提示SP1可能是PIWIL1转录活性的正调控元件之一。     

microRNAs 转录与表观遗传调控的研究进展

小分子RNA（microRNAs,miRNAs）是由17-25个核苷酸组成的非编码RNA,参与调节多种生物功能,包括发育、细胞增殖、细胞分化、信号传导、凋亡、代谢和寿命等。但关于miRNA调控的相关分子机制很大程度上仍未知。新近研究表明,转录调节或表观遗传改变可能是miRNA表达的重要调节机制。本文综述了miRNA转录和表观遗传调控的最新进展,对了解miRNA的调控具有重要意义。     

转录因子Ets-1表达载体的构建及调控小鼠成釉细胞MMP-20的表达

目的 构建转录因子Ets-1的pcDNA3.1/myc-HisA真核表达载体,转染小鼠成釉细胞,检测Ets-1调控小鼠成釉细胞MMP-20的表达,为研究Ets-1在牙釉质发育过程中的重要作用奠定基础.方法 以从小鼠成釉细胞中提取的总RNA逆转录所得cDNA为模板,用RT-PCR法扩增得出含有kpn Ⅰ和BamH Ⅰ的Els-1目的 基因连接到pcDNA3.1/myc-HisA真核表达载体上.将重组质粒瞬时转染到小鼠成釉细胞中观察,并通过实时定量RT-PCR的方法检测MMP-20 mRNA的相对表达量.结果 ①经过PCR引物扩增得到一约1399bp的基因片段,重组质粒pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-1双酶切进行初步鉴定后,与GenBank登录基因对比显示生物公司测序结果完全正确.②重组质粒pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-1转染小鼠成釉细胞后(以转染空载体pcDNA3.1/myc-HisA作为对照),实时定量RT-PCR检测MMP-20 mRNA的相对表达量上升明显.结论 成功构建了Ets-1的真核表达载体,初步研究证明小鼠成釉细胞核中Ets-1可以上调MMP-20基因表达水平.     

肿瘤坏死因子α调控启动子活性促进netrin-1的表达

目的 探讨TNF-α对netrin-1基因表达的影响,并对其调控机制作初步研究。方法 使用RT-PCR和Western blot方法检测TNF-α对netrin-1表达影响。PCR反应克隆出netrin-1启动子序列,构建pGL3-netrin-1-promoter荧光素酶报告基因表达载体。转染HEK-293A细胞检测荧光素酶活性。观察细胞因子TNF-α对netrin-1转录水平的表达调控。结果 首先证实了TNF-α能够上调Netrin-1的表达。其次成功构建pGL3-netrin-1-promoter荧光素酶表达载体,测序正确,然后利用双荧光素酶报告基因系统证实构建的报告基因载体启动子具有活性。发现肿瘤坏死因子TNF-α可以使netrin-1启动子活性显著增加 (P<0.05),TNF-α以剂量和时间依赖方式调节netrin-1启动子的活性。结论 细胞因子TNF-α可能通过调控启动子的活性而调节netrin-1的表达。     

Effect of Ligustrazine on the Expression of LFA-1, ICAM-1 Following Bone Marrow Transplantation in Mice

Asablood activatingChinesedrug ,ligustrazinecanimprovethemicroenvironmentofbonemarrow ,increasetheadherentfunctionofstromalcellsandpromotethegrowthofhematopoieticcells[1] .Toin terprettherolesthatligustrazineplaysinbonemar rowhematopoieticreconstitutionan…     

组织芯片检测甲状腺转录因子-1蛋白在肺癌细胞核中表达的定量研究

目的 揭示甲状腺转录因子-1（TTF-1）蛋白在正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞、人胚胎肺泡上皮细胞、肺癌原发灶及淋巴结转移灶中的表达特点及规律。方法 用组织微阵列技术构建包含20例正常成人肺组织、15例胚胎肺组织、100例肺癌原发灶及其相应的55例淋巴结转移灶的765点阵的石蜡组织芯片。用免疫组化SP法检测该芯片中TTF-1蛋白的表达。用Leica Q500MC图像分析系统定量测试组织芯片上TTF-1蛋白的表达强度。结果 胚胎肺泡上皮细胞核TTF-1阳性单位（PU）值小于正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞核TTF-1的PU值（P〈0．001）;不同类型肺癌癌细胞核TTF-1的PU值均小于胚胎肺泡上皮细胞和正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞核TTF-1的PU值（P〈0．001）;肺腺癌和肺小细胞癌癌细胞核TTF-1的PU值均大于肺鳞癌和肺大细胞癌癌细胞核TTF-1的PU值（P〈0、001）;肺鳞癌癌细胞核TTF-1的PU值大于肺大细胞癌癌细胞核TTF-1的PU值（P〈0．001）。肺的腺癌、鳞癌和大细胞癌淋巴结转移灶中癌细胞核TTF-1的PU值均大于其癌原发灶癌细胞核TTF-1的PU值（P〈0．001,P〈0．001,P〈0．05）;肺小细胞癌淋巴结转移灶癌细胞核TTF-1的PU值与其原发灶癌细胞核TTF-1的PU值基本相同（P〉0．05）。有淋巴结转移的肺癌原发灶癌细胞核TTF-1的PU值大于无淋巴结转移的肺癌原发灶癌细胞核TTF-1的PU值（P〈0．001）;癌细胞胞核TTF-1的PU值与肺癌大体类型、分化程度和患者性别无关（P〉0．05）;TNMⅡ-Ⅳ期癌细胞胞核TTF-1的PU值大于Ⅰ期（P〈0．001）。结论 TTF-1的表达量在正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞、胚胎肺泡上皮细胞和肺癌细胞核中的表达具有差异性并依次减少;肺癌细胞核TTF-1的表达具有癌组织类型差异性,腺癌和小细胞癌相对较高,鳞癌和大细胞癌极少;TTF-1胞核高表达的肺癌易发生转移,TTF-1胞核高表达的肺的腺癌、鳞癌和大细胞癌癌细胞为具有明显转移能力的肺癌细胞的重要标志之一。     

骨癌痛小鼠脊髓水平CREB转录共激活因子1表达的变化

目的 探讨骨癌痛小鼠脊髓水平CREB转录共激活因子1（CRTC1）表达的变化.方法 采用随机数字表法,46只C3H/HeJ雄性小鼠随机分为假手术组（Sham组,n=23）和肿瘤组（Tumor组,n=23）,Tumor组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔接种溶于α-MEM的NCTC2472纤维肉瘤细胞,建立骨癌痛模型,Sham组小鼠接种不含肿瘤细胞的α-MEM.两组在术前1d、术后4d、7d、10 d、14 d、21 d检测痛行为学,并于相应时间点痛行为学检测后,分别随机选取3只小鼠处死,取脊髓L3-L5节段,采用Western Blot法检测CRTC1的蛋白表达水平.结果 与Sham组比较,Tumor组接种后各时间点机械缩足阈值[（1.35±0.14）g,（1.10±0.28）g,（0.78±0.25）g,（0.47±0.16）g,（0.34±0.16）g]明显降低（P＜0.05）,自发抬足次数[（3.12±0.74）次,（6.02±0.67）次,（7.42±1.22）次,（10.82±0.98）次,（12.48±1.06）次]明显增加（P＜0.05）.与基础值相比,Sham组和Tumor组脊髓水平CRTC1的表达在术后4d升高（P＜0.05）;与基础值和Sham组相比,Tumor组脊髓水平CRTC1的表达在术后7d、10d、14d、21 d均升高（P＜0.05）.结论 骨癌痛小鼠脊髓水平CRTC1的蛋白表达上调,该变化可能参与了骨癌痛的发生和维持.     

人结直肠癌组织中转录调节因子Ets-1蛋白的表达

目的:检测结直肠癌组织中转录调节因子Ets-1蛋白的表达,以探讨其与结直肠癌浸润、转移等的关系.方法:取结直肠癌(男22例,女18例;腺癌29例,黏液腺癌11例;高分化15例,中低分化25例;浸润深度:深层28例,浅层12例;淋巴结转移:有16例,无24例)及其相应正常组织标本各40例,采用免疫组织化学SP法检测Ets-1蛋白的表达.结果:结直肠癌组织中Ets-1蛋白的阳性表达率高于正常组织(P＜0.05).结直肠癌组织中Ets-1蛋白阳性表达率与浸润深度有关(P＜0.05),与肿瘤的分化程度和有无淋巴结转移无关(P均＞0.05).结论:Ets-1蛋白的高表达可能与结直肠癌的发生及浸润转移有关.     

骨质疏松小鼠模型中骨组织Caveolin-1表达

目的 探讨骨质疏松小鼠模型中骨组织Caveolin-1表达变化.方法 双侧卵巢切除法建立小鼠骨质疏松模型;用双能X线骨密度仪测骨矿密度;HE染色观察骨组织变化;免疫组织化学法检测骨组织Cave-olin-1表达.结果 去卵巢12周小鼠股骨骨矿密度明显下降,同时其HE染色组织学改变符合骨质疏松症病理变化.骨质疏松组小鼠骨组织Caveolin-1表达明显低于对照组,Caveolin-1在小鼠幼年组表达最高.结论 去卵巢骨质疏松模型小鼠骨组织Caveolin-1表达降低,Caveolin-1信号分子可能具有抑制骨质疏松形成与发展作用.     

兔蛛网膜下腔出血后细胞代谢和局部脑血流量变化的初步研究

目的探讨兔蛛网膜下腔出血后细胞代谢的变化及其与局部脑血流量(rCBF)之间的关系。方法二次注血法制作兔蛛网膜下腔出血(SAH)模型,利用磁共振氢谱研究脑组织细胞代谢的变化,并利用激光多普勒血流仪观察rCBF的变化。结果正常组NAA/Cho+Cr为0.885±0.044,SAH组在注血后NAA很快减少,第3 d减为注血前的75%,第7 d下降最为显著,为注血前的61%,第14 d轻度回升。rCBF在注血后的第3 d下降最为明显,随后开始回升,第14 d为SAH前的67%。病理检查显示:颞叶、顶叶局部脑区神经细胞的细胞质浓缩、核浓染,以SAH后第7d最为明显,没有发现细胞坏死。结论NAA/Cho+Cr的减少与SAH后的局部脑缺血密切相关,但是较rCBF的下降晚,说明SAH后同时存在细胞代谢和rCBF的变化,并且细胞代谢变化可能是脑血管痉挛的继发反应。     

异丙酚联合瑞芬太尼对腹腔镜胆囊切除术患者麻醉效果及CBF、GMR的影响

目的探讨异丙酚联合瑞芬太尼对腹腔镜胆囊切除术患者脑血流量(CBF)、葡萄糖代谢率(GMR)的影响及麻醉效果,为腹腔镜胆囊切除术患者麻醉方式的选择提供参考。方法选择我院2017年5月～2018年5月收治的拟行腹腔镜胆囊切除术的160例患者作为研究对象,按照麻醉方式不同分为观察组和对照组,各80例,其中对照组给予七氟醚麻醉,观察组给予异丙酚联合瑞芬太尼复合麻醉,观察两组患者的麻醉诱导及恢复情况。结果观察组患者的诱导时间、拔管时间、睁眼时间及PACU停留时间明显短于对照组;拔管后30 min、拔管后60 min,观察组患者的OAA/S评分明显高于对照组;T2和T3时,观察组患者的CBFV和PI值明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。与清醒时相比,两组患者意识消失后不同脑区的GMR均明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论异丙酚联合瑞芬太尼对腹腔镜胆囊切除术患者进行麻醉,可以减少其麻醉诱导时间、拔管时间、睁眼时间以及PACU停留时间,改善CBF和GMR,具有较好麻醉效果,值得临床推广使用。     

体外循环心脏直视手术期间天麻素对患者脑血流量/脑氧耗比值的影响

目的观察体外循环心脏直视手术期间天麻素对患者脑血流量/脑氧耗的影响,并探讨其在体外循环心脏直视术期间的脑保护作用。方法选择择期在中低温心脏停跳CPB下二尖瓣置换的患者30例,随机分为试验组和对照组,每组各15例。两组患者采用统一的麻醉方案和体外循环方法,试验组在CPB前静脉滴注天麻素注射液(600mg),对照组静脉滴注生理盐水。分别于麻醉后CPB开始前鼻咽温为36℃时(T1)、CPB降温至28℃升主动脉阻断20min时(T2)、心脏复跳20min鼻咽温为36℃时(T3)采集桡动脉和颈内静脉球部的静脉血液进行血气分析,测量颈静脉球部血氧饱和度(SjvO2),计算动脉血氧含量(CaO2)、脑氧摄取率(CERO2)。结果组内比较,CERO2:T2时与T1比较两组均显著降低(P<0.01),T3时较T2回升(P<0.01);脑血流量/脑氧耗比值(CBF/CMRO2):对照组和试验组T2与T1比较差异均存在统计学意义(P<0.05)。组间比较,CERO2:T2、T3时试验组均显著低于对照组(P<0.01);CBF/CMRO2:T2时试验组明显低于对照组(P<0.05)。结论 CPB中天麻素能降低脑氧耗,有利于改善大脑氧供需平衡。     

大肠腺癌组织中凝血酶敏感蛋白-1和微血管密度检测

目的:探讨大肠腺癌组织中凝血酶敏感蛋白 1 (thrombospondin 1, TSP- 1)的表达及其临床意义。方法:利用免疫组织化学SP法检测 45例大肠腺癌组织中TSP- 1的表达及微血管密度 (microvesseldensity, MVD),并以15例正常大肠黏膜组织为对照。结果:正常大肠黏膜组织中未见TSP- 1阳性表达;大肠腺癌组织中TSP- 1的阳性率为 42. 2% (19 /45)。TSP- 1阳性组MVD为(14. 37±4. 86 ),低于TSP- 1阴性组的 ( 29. 80±6. 35 ) (t=2. 735,P<0. 01);TSP- 1的阳性表达率随肿瘤Dukes分期的增加而降低(χ2 =4. 62,P<0. 05),与MVD呈负相关 (r=-0. 783,P<0. 01)。结论:TSP 1的阳性表达抑制了大肠癌新生血管的形成,从而阻止其发展及转移。     

转录因子Ets1和Ets2在小鼠睾丸组织中的表达及其意义

目的:检测Ets家族转录因子Ets1和Ets2在小鼠睾丸组织中的表达,探讨其对小鼠睾丸发育的调控及其对精原干细胞(SSCs)增殖、分化的可能影响.方法:取生后第1、5、10、15、20、25、30、35、40、50和70天的小鼠睾丸组织,对成年小鼠进行白消安10 mg·kg-1腹腔注射,分别在注射后第0、3、5、8、1...