Akt/NF-κB信号途径在免疫复合物诱导肾系膜细胞增殖中的作用

目的 :观察免疫复合物 (IC)能否诱导体外培养的肾小球系膜细胞 (MC)增殖及其Akt/NF κB信号在其中的作用。方法 :实验设对照组、刺激组及Akt1正义 (SODN)、错义 (MSODN)与反义寡核苷酸 (ASODN)组。寡核苷酸组 :以lipofectin分别介导Akt1SODN、MSODN、ASODN转染MC 8h ;对照组和刺激组 :以lipofectin作用MC 8h。然后刺激组和寡核苷酸组均用聚合IgG(aggregatedIgG ,AIgG ,一种标准的IC模型 )刺激 ,对照组用等量的单体IgG刺激。用MTT比色法检测细胞的增殖 ,流式细胞术分析MC的细胞周期 ,RT PCR分析mRNA的表达 ,Westernblot检测蛋白的表达 ,电泳迁移率变动实验 (EMSA)检测NF κB的活性。结果 :IC可诱导MC中NF κB的活化 ,上调细胞周期蛋白cyclinD1的mRNA及蛋白表达 ,促进MC进入S期。Akt1ASODN可抑制Akt1蛋白的表达 ,抑制IC诱导的MC中NF κB活性 ,抑制cyclinD1mRNA及其蛋白的表达 ,进而抑制IC促进MC进入S期和增殖。Akt1SODN、MSODN则无上述抑制作用。结论 :IC可通过Akt/NF κB信号途径 ,介导体外培养的MC增殖。提示Akt/NF κB信号途径 ,可作为干预IC诱导MC过度增生的一个新的治疗靶点。     

补体C5b—9复合物诱导大鼠肾系膜细胞iNOS mRNA表达的实验 …

目的 观察人血清补体Ｃ５ｂ－９复合物对大鼠肾小球系膜细胞（ＭＣ）表达诱生性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡ的影响。方法 首先提取人血清补体Ｃ５ｂ－９复合物,然后用人Ｃ５ｂ－９复合物刺激培养的大鼠ＭＣ,检测ＭＣ在受Ｃ５ｂ－９复合物刺激后３、６、２４和４８ｈ时ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ的表达情况。同时检测其培养上清液中一氧化氮（ＮＯ）代谢产物－硝酸根（ＮＯ３＾－）和亚硝酸根（ＮＯ２＾－）含量的变化。结果 用人     

Akt/NF-κB信号途径参与免疫复合物诱导肾小球系膜细胞表达趋化因子

目的探讨Akt/NF-κB信号途径在免疫复合物(ICs)诱导肾小球系膜细胞(MC)表达趋化因子中的作用.方法 体外培养小鼠MC.对照组0.5%(v/v)lipofectin作用8h后IgG单体刺激;刺激组0.5%(v/v)lipofectin作用8h后AIgG(一种标准的ICs模型)刺激;反义、正义、错义寡核苷酸组 0.5%(v/v)lipofectin转导Akt1反义、正义、错义寡核苷酸8h后AIgG刺激.ELISA法检测单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞集落刺激因子(CSF-1)浓度, mRNA半定量用RT-PCR.EMSA法检测NF-κB活性.结果 MC有低水平NF-κB活化和组成性MCP-1、CSF-1 mRNA及蛋白表达.AIgG刺激后, NF-κB活化增强(0.35±0.06 vs 0.75±0.16, P＜0.01), MCP-1和CSF-1 mRNA表达上调(0.48±0.03 vs 0.72±0.02,P＜0.05;0.44±0.01 vs 0.59±0.02, P＜0.05),蛋白分泌增多(15.52±1.81 vs 43.05±3.18,P＜0.05; 389.06±13.75 vs 764.22±31.78,P＜0.05).Akt1反义寡核苷酸显著抑制AIgG诱导NF-κB活化(0.37±0.05 vs 0.75±0.16, P＜0.01)、MCP-1和CSF-1 mRNA(0.52±0.02 vs 0.72±0.02, P＜0.05; 0.44±0.01 vs 0.59±0.02, P＜0.05)及其蛋白(15.47±2.23 vs 43.05±3.18,P＜0.05;412.49±9.76 vs 764.22±31.78,P＜0.05)表达.正义、错义寡核苷酸无此作用.结论 Akt/NF-κB信号途径参与ICs诱导MC表达趋化因子MCP-1和CSF-1,提示此信号途径可作为抑制免疫复合物性肾小球肾炎炎症细胞浸润的一个新的治疗靶点.     

补体C5b-9复合物诱导大鼠肾系膜细胞iNOS mRNA表达的实验研究

观察人血清补体C5b 9复合物对大鼠肾小球系膜细胞 (MC)表达诱生性一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA的影响。方法 :首先提取人血清补体C5b 9复合物 ,然后用人C5b 9复合物刺激培养的大鼠MC ,检测MC在受C5b 9复合物刺激后3、6、2 4和 48h时iNOSmRNA的表达情况。同时检测其培养上清液中一氧化氮 (NO)代谢产物———硝酸根 (NO3- )和亚硝酸根(NO2- )含量的变化。结果 :用人C5b 9复合物刺激培养大鼠的肾MC能使其表达iNOSmRNA ,培养上清液中NO3- NO2- 含量也明显升高。人C5b 9复合物对MC的刺激作用能部分被相应的抗人C5b 9复合物抗体和RNA合成抑制剂———放线菌素D所抑制。结论 :人补体C5b 9复合物具有刺激大鼠肾MC合成NO的作用。     

肾小球系膜细胞增殖在糖尿病肾病肾小球硬化中作用的研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病患者常见的微血管慢性并发症.系膜细胞(MC)是肾小球内主要的细胞成分.高糖刺激可通过降低细胞内源性硫化氢的浓度、激活转化生长因子β(TGF-β)超家族和影响长链非编码RNA(Ln-cRNA)水平促进系膜细胞增殖.系膜细胞的异常激活在糖尿病肾小球硬化的进程中起重要推动作用.     

花生四烯酸产物对系膜细胞增殖作用的研究

用［３Ｈ］胸腺嘧啶核甙（［３Ｈ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ，［３Ｈ］－ＴｄＲ）掺入法测定花生四烯酸产物对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞的增殖作用。前列腺素Ｅ２（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ，ＰＧ）抑制血清所致的系膜细胞增殖。血栓素Ａ２（ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ，Ｔｘ）类似物Ｕ４６６１９、白三烯（ｌｅｕｋｏｔｕｉｅｎｅ，ＬＴ）Ｃ４、ＬＴＤ、１２－羟二十碳四烯酸（１２－ｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃａｃｉｄ，１２－ＨＥＴＥ）、１５－ＨＥＴＥ促进静息的系膜细胞增殖，ＬＴＢ４及５－ＨＥＴＥ无此作用。用特异性蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫｃ）抑制剂可抑制Ｕ４６６１９、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４及１２－ＨＥＴＥ的促增殖作用。ＰＧＦ２α、Ｕ４６６１９、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４促进系膜细胞合成二脂酰甘油（ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ，ＤＡＧ）。ＰＧＦ２α及ＬＴＤ４刺激系膜细胞合成三磷酸肌醇（ｉｎｏｓｉｔｏｌｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＩＰ３）。提示部分花生四烯酸产物活化ＰＫＣ而促进系膜细胞增殖。     

细胞因子对肾小球系膜细胞增殖的影响

应用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＭＴＴ比色法，观察了人重组ＩＬ－１β，ＩＬ－６和ＴＮＦα对体外培养的成人肾小球系膜细胞增殖的影响，结果表明，在无血清培养条件下，ＨｒＩＬ－１β，ＨｒＩｌ－６和ＨｒＴＮＦα在一个较大的浓度范围内，均不能刺激系膜细胞的增殖；而有少量胎牛血清存在时，ＨｒＩＬ－６和ＨｒＴＮＦα可以促进系膜细胞增殖，但ＨｒＩＬ－１β无此作用另外，在实验中还发现，雷公藤多甙（ＴⅡ）对系膜细胞生长具有     

肾小球系膜细胞增生与系膜硬化机制的初步探讨

我们应用细胞培养及免疫组化的方法，探讨了肾小球系膜细胞增生及系膜硬化的机制，并进而观察了它们在肾小球硬化听作用。结果显示：系膜细胞有自分泌功能，肿瘤坏死因子和血管内皮素可促进系膜细胞增生。大量增多的系膜基质不但含有Ⅳ型胶原，也有Ⅲ型胶原。系膜细胞增生，系膜基质增多最终导致肾小球硬化。     

人补体C_(5b～9)复合物对大鼠肾系膜细胞一氧化氮生成的影响

目的 :探讨人补体C5b～ 9复合物对大鼠肾小球系膜细胞 (MC)合成一氧化氮 (NO)的影响。方法 :首先提取人补体C5b～ 9复合物 ,同时培养出大鼠肾小球MC。然后用C5b～ 9复合物刺激MC ,观察刺激后 6h、2 4h、和 48h培养上清液中NO代谢产物 -硝酸根 (NO-3 )和亚硝酸根 (NO 2 )量的变化 ,并测定刺激后 2 4h、48h时MC内环鸟苷酸 (cGMP)的水平。结果 :用人C5b～ 9复合物刺激大鼠MC后可致培养上清中NO 3 /NO 2 含量增加 ,细胞内cGMP水平上升。NO合成增多能够被NO合酶 (NOS)抑制剂—─ -NG-硝基 -L -精氨酸甲基酯 (L -NAME)所抑制。结论 :人C5b～ 9复合物能够增加大鼠肾MC的NO合成。     

Platelets mediate glomerular cell proliferation in immune complex nephritis induced by anti-mesangial cell antibodies in the rat.

We investigated whether platelets, which are rich in growth factors, could mediate glomerular cell proliferation in immune complex glomerulonephritis (GN) in the rat induced with an antibody directed against the Thy-1 antigen present on mesangial cells. Rats were depleted of platelets (mean platelet count less than 20,000/mm3) with goat anti-rat platelet IgG before induction of GN and platelet depletion was maintained for 48 hours. At 72 hours sections were immunostained for cyclin, an S-phase-related nuclear antigen, to identify proliferating cells, and for the common leukocyte antigen (CD45) to identify infiltrating leukocytes. Platelet depleted rats had fewer proliferating resident glomerular cells (CD45-, cyclin+) compared to controls (0.8 +/- 0.5 vs. 2.8 +/- 1.4 cells/glom cross section, P less than 0.01) and better renal function (creatinine 1.07 +/- 0.12 vs. 1.27 +/- 0.15 mg/dl, P less than 0.05). These effects were not due to changes in circulating or glomerular leukocyte counts, complement, or glomerular antibody binding. These studies provide the first direct evidence that platelets mediate glomerular (probably mesangial cell) proliferation in antibody-mediated GN.     

ERK/c-Fos通路在Ang-(1-7)抑制Ang-Ⅱ诱导大鼠肾系膜细胞株增殖中的作用

目的：研究ERK1/2/c-Fos通路在血管紧张素-（1-7）［Ang-(1-7)］抑制血管紧张素Ⅱ（Ang-Ⅱ）诱导的大鼠肾系膜细胞株（GMCS）增殖中的作用。方法：在培养的大鼠肾系膜细胞(GMC)中，加入不同浓度的Ang-(1-7)与Ang-Ⅱ共同培养，用结晶紫计数法检测GMC数目；Western blotting检测GMC中p-ERK1/2和c-Fos蛋白的表达。结果： Ang-(1-7)呈剂量依赖性地抑制Ang-Ⅱ诱导的GMC数目的增加和GMC内p-ERK1/2和c-Fos蛋白的表达。结论：ERK/c-Fos通路参与Ang-(1-7)抑制Ang-Ⅱ诱导的GMC的增殖。     

TLR/STAT通路在HMGB1诱导的系膜细胞增殖中的作用

目的:探讨TLR/STAT通路在HMGB1诱导的系膜细胞增殖中的作用.方法:将体外培养的人系膜细胞分为正常对照组和HMGB1刺激组,培养6、12和24小时后收集细胞,免疫细胞化学检测PCNA表达的变化;免疫细胞化学和流式细胞术检测TLR2蛋白表达的变化;PCR技术检测STAT1/STAT3mRNA表达的变化.结果:人重组HMGB1刺激系膜细胞后,能够促使其增殖;与正常对照组相比,HMGB1刺激组中TLR2蛋白表达增强;与正常对照组相比,HMGB1刺激组中STAT1和STAT3mRNA表达增强;TLR2蛋白与STAT1、STAT3mRNA表达均呈显著正相关(r=0.830,P＜0.001;r=0.926,P＜0.001);PCNA阳性表达率与STAT1、STAT3mRNA表达亦呈显著正相关(r=0.817,P＜0.001;r=0.863,P＜0.001).结论:HMGB1可能通过与其受体蛋白TLR2结合,进而激活STAT1/STAT3,促进系膜细胞增生,从而导致肾脏损害.     

Role of CD19 signal transduction in B cell biology

Immunologic Research - Knockout studies have established an important role for the B lymphocyte surface protein CD19 in physiology. Previous studies by us and others have examined how CD19 might...     

ERK信号途径对EGF诱导的HaCaT细胞增殖具有双向调节作用

目的利用带有ERK-2基因的腺病毒载体感染成角质细胞系HaCaT,探讨ERK信号途径在EGF对HaCaT细胞增殖影响中的作用。方法用3H-TdR掺入法检测HaCaT细胞增殖及PD98059对EGF促HaCaT细胞增殖的影响。腺病毒载体转染HaCaT细胞,流式细胞仪检测转染率,W estern b lot检测ERK-2蛋白的表达。结果1μg/L和10μg/L EGF可促进HaCaT细胞增殖,而100μg/L EGF促增殖作用反下降。PD98059抑制EGF引起的HaCaT细胞增殖,且具有浓度依赖性。腺病毒载体具有高转染率,感染Ad-ERK2的HaCaT细胞高表达ERK-2。EGF抑制转染的HaCaT细胞增殖。结论ERK信号途径在EGF促HaCaT细胞增殖中具有双向调节作用。     

Gq-PLC-IP3信号通路在钙敏感受体介导的A549细胞增殖中的作用

目的 探讨缺氧活化钙敏感受体（CaSR）在人非小细胞肺癌细胞A549细胞增殖中的信号转导途径。 方法 将A549细胞随机分为对照组、缺氧组（H）、缺氧+ CaSR激动剂组（H+Gd）、缺氧+ CaSR抑制剂组（H+NPS）与磷脂酶C（PLC）通路抑制剂组（H+Gd+U73122）。应用Western blotting分析不同处理情况下CaSR、增殖细胞核抗原（PCNA）在A549细胞中的表达;采用激光扫描共焦显微镜技术检测不同处理情况下细胞内钙离子浓度的变化;利用流式细胞术检测不同药物处理对细胞周期及增殖指数的影响;HE染色观察不同药物处理后细胞数量的变化。 结果 缺氧导致A549细胞的CaSR与PCNA表达增加,细胞增殖指数上调,细胞数量增加,氯化钆（GdCl3）（CaSR激动剂）能够放大缺氧的作用,NPS2390（CaSR抑制剂）可以减弱缺氧的作用,上述效应均可被U73122（PLC通路抑制剂）抑制。 结论 缺氧活化的CaSR通过Gq-PLC-IP3信号通路介导A549的增殖。     

Anti-IgM诱导人B淋巴瘤Daudi细胞凋亡的信号传导通路

目的 研究B细胞抗原受体（BCR）介导的细胞凋亡,探索其可能的信号传导通路。阐明B细胞凋亡的分子机制。方法 ^3H掺入法检测细胞生长,应用FACS方法分析细胞周期和细胞凋亡,Western blot检测anti-IgM刺激引起Daudi细胞信号分子的变化。结果 anti-IgM可导致人B淋巴瘤Daudi细胞发生凋亡。细胞凋亡的数量与anti-IgM浓度呈正相关,Western blot结果显示,anti-IgM刺激引起Daudi细胞内氨酸蛋白分子磷酸化水平的变化速度与浓度相关;但随时间的延长,变化状况趋于稳定;在48-72h,许多被激活的,呈现磷酸化的栈氨酸蛋白分子又回复到低磷酸化或去磷酸化的静止状态,另外,虽然JNK1和ERK2蛋白水平未发生明显改变,但JNK/SAPK的重要下游分子之一,c-Jun的蛋白表达水平及其63和73位点的丝氨酸磷酸化水平立即长高并维持在高水平状态。结论 anti-IgM刺激激活JNK/SAPK,JNK/SAPK通路可能参与了anti-IgM引起的Daudi细胞的凋亡过程。     

白细胞介素2致痫与蛋白酪氨酸激酶/信号转导子和转录激活子信号转导途径的关系

目的 研究白细胞介素2(IL-2)致痫与蛋白酪氨酸激酶(Jak)/信号转导子和转录激活子(Stats)信号转导途径的关系.方法用免疫细胞化学方法研究IL-2致痫大鼠脑内蛋白酪氨酸激酶Jak1的表达变化,及预先应用Jak1抑制剂和糖皮质激素干预后,再用IL-2致病后脑内N-甲基-D天门冬氨酸型受体-1(NMDAR-1)和谷氨酸(Glu)的表达变化.结果侧脑室注射IL-2后大鼠出现明显的癫痫发作,其Jak1的表达较对照组明显增强(P<0.01),免疫抑制剂环孢霉索可部分抑制此效应;Jak1抑制剂植物异黄酮和免疫抑制剂糖皮质激素可明显抑制IL-2致痫大鼠的癫痫行为,其NMDAR-1和Glu的表达较IL-2组显著降低(P<0.05).结论在IL-2致癌中,Jak1在其信号转导途径中发挥重要作用.