放射损伤骨髓基质细胞造血负调因子表达及其对血细胞生成的影响

目的　探讨在放射损伤条件下骨髓基质细胞 (BMSCS)造血负调因子表达的变化 ,及与血细胞生成的关系。方法　以 6GyCo60 照射小鼠制备损伤模型 ,分别用ELISA和放射免疫方法检测BMSCS 培养上清TGF β1、MIP 1α及TNF α ,并观察它们与骨髓有核细胞 (BMSCS)及氢化可的松量的关系。结果　放射损伤后的BMSCS 培养上清中第三天、第七天TGF β1、TNF α及MIP 1α显著升高 (P <0 .0 1) ,第十五天恢复正常 ,这与BMSCs的变化趋势正好相反 ,氢化可的松可显著抑制BMSCS 分泌TNF α、MIP 1α及TGF β1。结论　放射损伤后骨髓基质细胞造血负调因子表达有一过性上调期 ,可能成为放射损伤造血功能减退的原因之一。     

烧伤小鼠血清对离体培养的骨髓基质细胞的影响

目的 研究小鼠烧伤血清对离体培养的骨髓基质细胞的影响。方法 利用流式细胞仪、HE染色等技术观察小鼠烧伤后不同时间的血清对小鼠骨髓基质细胞（BMSC）贴壁率和基质祖细胞（CFU－F）集落形成的作用及对不同剂量的^60Coγ射线体外照射后的BMSC的影响。结果 小鼠烧伤后1－11d的血清对基质细胞贴壁率和CFU－F的形成主要表现为抑制作用，13－15d的血清主要表现为刺激作用。小鼠烧伤后15d的血清可明显减少50、70Gy照射后BMSC的凋亡和坏死。结论 小鼠烧伤后不同时间的血清对BMSC的作用不同，可能与血清内细胞因子的变化有关。     

60Co-γ照射后小鼠早期骨髓造血基质细胞的增殖指数及细胞凋亡的变化

目的:观察60Co-γ照射后小鼠早期骨髓造血基质细胞的增殖指数及细胞凋亡的变化.方法:60Co-γ照射后,用流式细胞仪测定细胞的细胞周期,得出凋亡细胞数和细胞增殖指数.结果:①照射后细胞增殖指数明显降低,随着放射损伤后时间的推移,增殖指数虽有所回升,但不明显.②照射后凋亡细胞数明显升高,而随着放射损伤后时间的推移,凋亡细胞数虽有所下降,但仍明显高于对照组.结论:提示骨髓造血基质细胞对辐射有较高的敏感性,并且细胞损伤后持续时间较长,恢复较慢.     

^60Co—γ照射后小鼠早期骨髓造血基质细胞的增殖指数及细 …

目的：观察＾６０Ｃｏ－γ照射后小鼠早期骨髓造血基质细胞的增殖指数及细胞凋亡的变化。方法：＾６０Ｃｏ－γ照射后,用流式细胞仪测定细胞周期,得出凋亡细胞数和细胞增殖指数。结果：（１）照射后细胞增殖指数明显降低,随着放射损伤后时间的推移,增殖指数虽有所回升,但不明显。（２）照射后凋亡细胞数明显升高,而随着放射损伤后时间的推移,凋亡细胞数虽有所下降,但仍明显高于对照组。结论：提示骨髓造血基质细胞对辐射有较     

转染TPO基因的骨髓基质细胞移植对放射损伤小鼠造血重建的影响

目的通过观察转染TPO基因的BMSCs移植对放射损伤后小鼠在血小板恢复及造血重建方面的作用,探索基质细胞介导的造血生长因子基因治疗促进造血功能重建的可行性。方法用单次剂量6.5Gy的60Co-γ射线照射受体鼠,照射后动物40只随机分四组,单纯骨髓细胞移植组(A组)、未转染BMSCs 骨髓细胞移植组(B组)、转染TPO基因的BMSCs 骨髓细胞移植组(C组)、转染空载体的BMSCs 骨髓细胞移植组(D组),分别于照射后24小时内给予骨髓细胞、BMSCs移植,在不同时相点进行血细胞计数。结果B组、C组、D组WBC最低值较A组高,且WBC的恢复时间提前约7天,同时有一定程度加速PLT的恢复。各组在不同时间的外周血Hb均相近。C组PLT下降程度轻,最低值较A组、B组、D组高,且维持在较高水平。结论骨髓细胞联合BMSCs移植有利于造血快速重建,主要是加速WBC的恢复,而TPO基因疗法主要促进PLT的恢复。     

小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长调控的实验研究

目的 研究放射损伤小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长的影响。方法 采用体外小鼠骨髓基质细胞贴壁培养法和粒系祖细胞（CFU－GM）培养法。结果 伤后3－7d，有基质细胞贴壁的CFU－GM生长明显低于无贴壁组；伤后14d贴壁层形成后，放射损伤组的CFU－GM生长明显低于正常对照组；放射损伤后3－7d，骨髓基质细胞可抑制正常CFU－GM生长，用薄层琼脂分隔基质细胞贴壁层与靶细胞，其抑制作用减弱。当无外源性集落刺激因子（CSF）时，基质细胞贴壁层对CFU－GM生长仍显示一定刺激作用，结论 辐射使骨髓基质细胞功能受到一定损伤，但在放射损伤造血修复与重建过程中，骨髓基质细胞仍起着“刺激”与“抑制”双重的动态平衡调控作用。     

小鼠骨髓基质细胞形态及其对造血的调控

应用体外骨髓基质细胞贴壁培养的方法,观察了小鼠骨髓贴壁细胞的形态及其对造血的调控作用。结果表明,两类大小、形态、吞噬功能及组化染色有所差异的基质细胞群体分别具有巨噬细胞和成纤维细胞样特征。贴壁细胞对粒—单系祖细胞的增殖表现为明显的刺激作用,而对多能造血干细胞无明显调控。提示骨髓基质细胞在造血祖细胞阶段的分化增殖过程中具有一定作用。     

当归多糖对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞细胞周期及细胞凋亡的影响

目的:探讨当归多糖(Angelica polysaccharides,APS)对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞(Bone marrow mononuclear cells,BMNCs)细胞周期及细胞凋亡的影响,旨在阐明APS防护辐射性造血损伤的分子机制.方法:BALB/c小鼠随机分为3组:正常对照组、生理盐水(NS)组和A...     

刺五加注射液对放射损伤小鼠骨髓造血微环境的保护作用

目的　观察刺五加注射液对放射损伤小鼠骨髓造血微环境的保护作用。方法　①60 Coγ射线辐射小鼠建立骨髓微血管放射损伤模型 ;②取 6周龄左右雌性小鼠随机分为正常、模型、模型 刺五加注射液低剂量、模型 刺五加注射液高剂量和模型 复方丹参注射液 5组 ,采用分光光度计法分别测定提取的各组小鼠股骨骨髓血红蛋白溶液标本的光密度(OD)值 ;鼠尾采血测定外周血红细胞、白细胞数量和血红蛋白含量 ;并分别观测骨髓毛细动脉根数、面积和骨髓造血组织容量百分率。结果　刺五加注射液能明显降低放射损伤小鼠骨髓血红蛋白含量、提高外周血红细胞和白细胞的数量以及增加骨髓毛细动脉根数、面积和骨髓造血组织容量百分率。结论　刺五加注射液能明显修复放射损伤小鼠骨髓微血管 ,保护骨髓造血微环境     

骨髓基质细胞移植对大鼠脊髓损伤后COX-2基因表达的影响

目的观察骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）移植对大鼠脊髓损伤后COX-2 mRNA表达的影响。方法分离培养BMSCs并传代。取Wistar雌性大鼠72只随机分为3组：A组18只（假手术组）、B组27只（细胞培养基对照组）和C组27只（BMSCs组）。B组和C组脊髓损伤后进行DMEM或BMSCs损伤周围区注射。应用RT-PCR法和免疫荧光方法检测损伤脊髓组织内COX-2 mRNA的表达及COX-2蛋白分布情况。结果 COX-2 mRNA在A组大鼠脊髓组织中低水平表达。脊髓损伤移植术后,C组COX-2 mRNA表达水平均显著高于相应时间点的B组（P〈0.01）。免疫荧光结果显示,A组COX-2仅表达于脊髓内的血管。脊髓损伤后,B组和C组COX-2表达分布则发生变化,主要见于损伤周围区脊髓内的血管和少数脊髓腹侧灰质内的神经元。结论 BMSCs移植能够增加脊髓损伤后COX-2 mRNA的表达。     

大鼠骨髓基质干细胞向神经元样细胞的分化

目的:体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）向神经元样细胞的分化。方法： 用DMEM培养液冲洗骨髓,收集骨髓细胞接种在培养瓶中体外扩增、纯化。用诱导剂诱导BMSCs分化为神经元样细胞。用免疫组化ABC法鉴定神经丝蛋白（NF-200）、微管相关蛋白（MAP-2）、神经元特异核蛋白（NeuN）、巢蛋白(Nestin) 、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、GAD和ChAT的表达。结果： BMSCs经诱导后,胞体增大,并伸出细长突起,与神经元形态相似。免疫组化显示大部分细胞NF-200,MAP-2,NeuN和Nestin表达阳性,(3±0.8)%的细胞GAD表达阳性,(5±0.3)%的细胞ChAT表达阳性,而GFAP 表达阴性。结论： BMSCs可被诱导分化为神经元样细胞,部分细胞可表达GAD与ChAT。     

Effect of gamma irradiation on nuclear factor—kappa B in cultured bone marrow stromal cells

Objective: To explore the effect of gamma irradiation on nuclear factor-kappa B in cultured bone marrow stromal cells. Methods: Immunocytochemistry, Western blot and electrophoretic mobility shift assay (EMSA) were used. Results: The expression of NF-kB in cultured mouse bone marrow stromal cells (BM-SCs) on the level of protein was elevated after exposure to 60Co in the dosage of 8. 0 Gy with the use of im-munocytochemistry and Western blot. The activity of nuclear factor-kappa B in cultured BMSCs was significantly increased after exposure to gamma irradiation by using EMSA. The activity peak was at the 4th h after irradiation. Conclusion: Our results suggest that the activation of nuclear factor-kappa B in the BMSCs after irradiation may be involved in the protection of BMSCs against apoptosis and in the recovery of hematopoiesis after radiation.     

川芎嗪对大剂量化疗小鼠骨髓基质细胞损伤的保护作用

目的：观察川芎嗪对大剂量甲氨喋呤（MTX）化疗所致骨髓基质细胞（BMSC）损伤的保护作用及其量效关系。方法：建立大剂量MTX化疗损伤BMSC的小鼠模型后，按每千克体重腹腔注射川芎嗪0mg（对照组）、20mg（Ⅰ组）、40mg(Ⅱ组），1次／d,第21天采取骨髓细胞进行体外BMSC培养，成纤维细胞集落（CFU－F）计数，BMSC层粘附率测定和BMSC层上造血细胞混合集落培养，结果：BMSC生长，CFU－F计数，BMSC层粘附率，BMSC层上造血细胞混合集落数目均表现为Ⅱ组＞Ⅰ组＞对照组（P＜0．05，P＜0．01）。结论：川芎嗪对大剂量MTX引起的BMSC损伤有明显的保护作用，且呈剂量依赖性。     

The Effect of Sheng Bai Solution on Irradiated Mice Bone Marrow Cell Division Index and DNA Content

Before and after general irradiation with ~(60)Co-γ, mice were orally given Sheng Bai Solution (SBS) for one week. SBS alleviated the irradiation-induced reduction of bone marrow cell chromosome division index. The irradiationinduced decrease of marrow DNA amount, thymic and splenic fractions, and total leukocyte number were restored to some extent. SBS also helped to ameliorate general condition of patients.     

成人骨髓基质细胞体外培养及鉴定

目的 :探讨简易的成人成骨细胞体外培养方法 ,为进一步研究成骨细胞及骨组织工程提供技术平台。方法:手术中抽取健康成人骨髓组织 ,采用全骨髓培养法在体外进行培养 ,细胞汇合后改用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素 C的条件培养基进行传代培养 ,观察细胞增殖和分化情况 ,并对细胞进行鉴定。结果:培养的成人成骨细胞表现出成骨细胞的形态特征 ,细胞碱性磷酸酶 (AL P)阳性率为 6 8% ,经 Von Kossa's染色证实其能最终形成钙结节。结论:全骨髓培养法所培养的细胞具有成骨细胞的特性 ,可作为骨组织工程种子细胞培养的常规方法。     

髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞超微结构的影响

目的 研究来源于骨髓基质细胞的髓内脂肪细胞对其超微结构的影响。方法向骨髓基质细胞的培养板中加入不同浓度(0，10^3，10^4，10^5，10^6／mL)的脂肪细胞悬液，共培养12d，每4d取单层细胞爬片，经固定、脱水、原住包埋，超薄切片后电镜观察骨髓基质细胞细胞超微结构。结果共培养体系中，骨髓基质细胞表面绒毛及伪足减少，线粒体数目增加用轻度肿胀，细胞核浓聚，染色质边集，核型不规整甚至碎裂。结论从形态学上证实了脂肪细胞能改变骨髓基质细胞的超微结构。     

硫酸软骨素蛋白多糖酶结合骨髓基质干细胞修复亚急性大鼠脊髓挤压伤的实验研究

目的 分析大鼠亚急性脊髓损伤(SCI)后联合应用骨髓基质干细胞移植和硫酸软骨素酶ABC的可行性,并探讨其相互作用.方法 取新生SD大鼠的股骨和胫骨分离培养MSCs,调整细胞浓度为2.0×105/cm2备用.取体质量220～240g健康成年雄性SD大鼠24只制备SCI动物模型,并随机分为4组,A组对照组,B、C、D组每组6只,分别于SCI损伤区注射5μLMSCs;5μL硫酸软骨素酶(ChABC)和ChABC+MSCs.采用BBB评分法评价伤后1、2、3、7、14d大鼠双后肢的运动功能.伤后14d取材行HE染色并计算损伤区最大横径和坏死总面积;行GFAP-CS56、GFAP-GAP-43和GFAP-NF160免疫荧光染色评价神经纤维束的再生情况.结果 损伤后算14天BBB评分结果示,A组与B、C、D组比较差异均有统计学意义(P<0.05),B、D组及C、D组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),B、C组间无显著性差异.HE染色显示14天时各组均有空洞形成,伤后坏死总面积比较,B、C、D组与A组比较均有显著性差异(P<0.05),B、C、D三组之间D组与前两组比较存在显著性差异(P<0.05).免疫组织化学染色示,A组GFAP反应最强,损伤区空洞明显可见且范围大于其他三组,D组介于B、C组之间;B、C和D组的GAP-43表达增多,且以D组为最:D组损伤区内的神经纤维通过明显多于其他三组.结论 硫酸软骨素酶ABC联合骨髓基质干细胞移植对脊髓损伤有一定修复作用.     

三羟异黄酮对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞的保护作用

目的　探讨三羟异黄酮(genistein,GEN)对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)的保 护作用。方法　成年雄性小鼠辐射前24h给予GEN,6.0Gyγ射线辐射后观察BMSCs的形态变化、成纤维细胞集落 (CFU -F)形成数量、BMSCs层对正常小鼠骨髓细胞(BMCs)的粘附能力以及血管细胞粘附分子(VCAM- 1)、纤维连接素(Fn) 和层粘素(Ln)等细胞粘附分子的变化。结果　GEN处理组辐射后BMSCs虽然形态上与单纯辐射损伤组在光镜下无差异, 但其CFU -F形成数量、对正常BMCs的粘附能力以及VCAM -1、Fn和Ln等细胞粘附分子的表达均较单纯辐射损伤组高而且 恢复较快。结论　GEN可减小辐射对小鼠BMSCs的损伤,促进受损BMSCs增殖、粘附功能恢复,改善骨髓造血微环境,有 利于辐射损伤小鼠造血重建,具有辐射防护作用。     

电离辐射致小鼠骨髓基质细胞凋亡的研究

目的探讨电离辐射致骨髓基质细胞(BMSC)凋亡的规律。方法采用流式细胞仪、电镜技术观察不同剂量6OCoγ射线照射后BMSC的凋亡变化。结果经50Gy剂量照射后,BMSC木见有明显的形态学改变,而经100和200Gy照射后 BMSC出现了明显的凋亡改变。流式细胞检测显示,经50Gy剂量照射后,BMSC的凋亡率与正常对照相比变化不明显(P＞0.05);100Gy照射后BMSC的凋亡率出砚了明显改变(P＞0.01),而且这种变化始于照射后4h,至照后24h到达高峰,随后凋亡率慢慢下降;200Gy照射组的凋亡率略高于100Gy组,但差异不明显(P＞0.05)。结论体外培养的BMSC受一定剂量的6OCoγ射线照射后可发生凋亡,并且有较强的辐射抗性。