嗅粘膜嗅鞘细胞修复脊髓损伤研究进展

脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后功能的恢复一直是医学界的难题,自从1928年Cajal断言哺乳动物中枢神经没有再生能力以来,脊髓损伤功能重建方面的研究停滞不前。近年来研究发现：嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）能够促进轴突再生,引导再生的轴突重新进入中枢神经系统,并与靶器官形成新的功能连接,促进神经功能的恢复。     

嗅鞘细胞移植促进脊髓损伤修复的研究进展

脊髓损伤是重要的致残因素,常遗留严重的残疾,包括运动功能丧失（瘫痪）、感觉障碍、膀胱排尿功能紊乱、肌痉挛、关节挛缩、疼痛、褥疮、心理障碍、性功能不全、甚至呼吸障碍。长期以来,国内外研究人员对脊髓损伤治疗手段的开发进行了大量的基础和临床试验,但迄今为止尚无特异性治疗方法,     

嗅鞘细胞移植在修复损伤脊髓中的作用

一般认为,中枢神经系统损伤后其再生、修复和功能恢复是绝对不可能的,脊髓损伤一直是全世界医疗界最棘手的问题。1981年神经学家在基础研究中证实中枢神经损伤后的神经结构修复是可能的,掀起了各国学者对脊髓修复研究的又一次热潮,其中关于细胞移植的研究开展得尤有成效。早在1973年,科学家就发现人类的鼻黏膜每周就要新陈代谢一次,这引起了很多致力于脊髓损伤修复研究的机构和学者的兴趣。成人嗅黏膜上皮是终生不断神经化的单位,产生新神经的干细胞来源目前尚未清楚,但被认为是一种嗅上皮的基本细胞,而嗅黏膜上皮的这种再生能力则要归功于…     

大鼠嗅鞘细胞移植对脊髓横断损伤的修复作用

目的观察嗅鞘细胞（OECs）移植后在体内的存活情况和对脊髓横断伤的修复作用。方法4月龄SD大鼠,体质量250g左右。显露T9段脊髓,完全横行切断脊髓。A组（20只）在损伤远近端注射由成年SD大鼠嗅球分离、培养、纯化的OECs,B组（20只）在相同位置注射DMEM培养液,C组（10只）单纯做T9节段的椎板减压。术后观察动物脊髓功能恢复情况,每2周测定1次后肢运动功能（BBB评分法）,共12周。术后3个月取损伤段及其临近脊髓标本,做HE染色、嗜银染色、抗NF和p75免疫组化染色。利用p75免疫组化染色来观察OECs在体内存活情况。结果手术后4周开始有运动功能恢复,在各个时间段BBB运动功能得分A组均显著高于B组（均P〈0.001）。A、B组都有神经纤维进入损伤区,在损伤近端,神经纤维数量A组显著多于B组（P〈0.001）,但都显著少于相应节段的C组（P〈0.001）。经过p75免疫组化的OECs存在于脊髓损伤段周围,最远可到距离损伤区边缘1.0cm处。脊髓损伤再生神经纤维的数量与运动功能恢复成正相关（P〈0.01）。结论OECs移植具有明显促进脊髓横断伤神经纤维再生和功能恢复的作用。     

嗅鞘细胞联合移植治疗脊髓损伤现状

脊髓损伤（spinalcordinjury,SCI）的治疗一直是医学界难题,随着人们对SCI病理生理过程认识的不断深入,各种治疗方法不断取得进展。近年来,细胞移植以其针对继发性损伤的有效性,在SCI治疗的研究中日益深入,显示出良好的应用前景。     

嗅鞘细胞修复脊髓损伤的研究进展

对嗅鞘细胞的生物学特性及其对脊髓损伤的研究进展进行回顾，总结嗅鞘细胞的研究和应用成果，为探讨脊髓损伤的修复对策提供指导和实验方法，以期为改善脊髓损伤的临床治疗效果提供新的思路和方法．     

嗅鞘细胞与脊髓损伤再生修复

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后再生修复困难,而嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植被认为是治疗SCI最有潜力、最希望的方法.本文就近年来关于OECs的生物学特性、在SCI中的应用及其机制研究方面作一简要介绍.     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的进展

脊髓损伤的治疗一直是医学界的难题.脊髓损伤后神经元无法依靠自身再生修复,轴突再生困难,同时神经胶质瘢痕阻碍再生轴突的通过,因此脊髓损伤后减少神经细胞坏死,促进轴突再生,减少胶质瘢痕的形成是临床治疗的关键.许多研究发现嗅鞘细胞是神经系统中具有促进神经轴突再生,引导轴突正确生长的独特细胞,为脊髓损伤的修复带来了希望,但临床结果很不理想,为了提高其修复神经和正确引导轴突生长的能力,目前许多研究将基因工程技术和组织工程技术应用于其种植过程中,取得了一定的成果.     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

目的帮助广大神经外科医生系统地了解嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)和OECs移植治疗脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)的实验性研究和临床应用的最新进展,以提高对SCI治疗策略和技术的全新认识。方法结合近年来OECs的研究、OECs移植治疗SCI的相关文献资料,分别介绍了嗅鞘细胞的生物学特性、OECs移植治疗SCI的可能机制、嗅黏膜嗅鞘细胞的研究、OECs联合移植的研究、脊髓损伤OECs移植时机的选择和OECs移植治疗SCI的临床研究。结果 OECs能促进轴突再生、营养受损神经和血管并且使轴突再髓鞘化,OECs移植到损伤的脊髓会改善其功能。结论 OECs移植治疗SCI的实验研究和早期临床应用均已证实OECs移植治疗SCI的有效性,但临床应用长期随访机制尚不够健全,缺乏系统的、客观的远期疗效评价体系,其作用的具体机制有待进一步明了。     

嗅鞘细胞移植联合应用甲基强的松龙修复急性脊髓损伤

目的探讨嗅鞘细胞髓内移植联合应用大剂量甲基强的松龙修复脊髓损伤的可行性和疗效,观察甲基强的松龙与嗅鞘细胞的相互作用。方法将Wistar大鼠做成脊髓半切模型,随机分成髓内单独移植嗅鞘细胞组(OEC)、嗅鞘细胞联合应用甲基强的松龙组(OEC MP)、单独应用甲基强的松龙组(MP)和对照组(CG)共四组,分期进行联合行为学综合评分(CBS评分)及组织学检查,评价各组对脊髓修复情况。结果CBS评分OEC组及OEC MP组较MP组及CG组在3周后各时段差别有显著意义(P<0.01);OEC组和OEC MP组没有明显差别(P>0.05);MP组与CG组有显著差别(P<0.05)。OEC组及OEC MP组组织学改变与MP组及CG组有显著差别,前两组间无显著差别。结论嗅鞘细胞髓内移植联合应用大剂量甲基强的松龙修复脊髓损伤具有很好的疗效,但未见MP与OEC的明显协同作用。     

嗅鞘细胞和间质干细胞用于治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤(SCI)的临床治疗主要以手术结合免疫治疗为主,但是往往不能收到良好的效果.干细胞能发挥神经保护和促进神经再生的特点,因而近年干细胞治疗SCI成为研究的热点之一,并在基础和临床研究中均获取得一定的进展.本文就嗅鞘细胞和间质干细胞用于治疗SCI的研究做一简要综述.     

嗅鞘细胞移植部位与剂量的选择对陈旧性脊髓损伤患者60例神经恢复的影响

目的:探讨嗅鞘细胞(Olfactory esheating cells OECs)移植部位与剂量治疗陈旧性脊髓损伤疗效的影响。方法:应用我院实验室由人胚胎的颅脑嗅球提取、纯化,培养1~2周的OECs,常规脊椎后入路切开硬脊膜借助手术显微镜将50 ul OECs悬液单点移植于受损脊髓上段与正常脊髓交界处(共30例A组)。用同样方法将50 ul×2(最多可达50 ul×4)OECs分多点移植于损伤脊髓上下端,即损伤脊髓与正常脊髓的交界靠近正常一侧(共30例B组)。结果:在我院自愿接受OECs移植的106例陈旧性脊髓损伤患者在术后2~4周内均应用美国脊柱脊髓损伤学会(ASIA)标准进行评价。患者在感觉、运动、大小便及植物神经功能方面均有不同程度的改善。其中B组病人较A组病人恢复更为明显。结论:手术将50 ul×2(最多可达50 ul×4)OECs分多点移植于损伤脊髓上下端优于将50 ul OECs单点移植于损伤脊髓上端的治疗方法。     

褪黑素对急性脊髓损伤大鼠血清及脊髓内神经生长因子表达的影响

目的研究褪黑素（MT）对脊髓损伤大鼠血清及脊髓内神经生长因子（NGF）表达水平的影响。方法84只健康成年雄性SD大鼠随机分为模型对照组（n=36）、模型MT组（n=36）及假手术组（n=12）。建立脊髓损伤模型后,模型对照组给予无水乙醇,模型MT组给予MT,均为腹腔注射。对比术后12h、3、5d大鼠血清及脊髓组织中NGF的表达及Tarlov评分。结果术后12h模型对照组及模型MT组Tarlov评分显著低于假手术组（P〈0．05）。模型MT组TarlOV评分稍高于模型对照组,但差异无统计学意义（P〉0．05）。术后3、5d模型MT组Tarlov评分均显著高于模型对照组（P〈0．05或P〈0．01）。术后12h、3、5d模型对照组和模型MT组血清NGF水平、脊髓组织NGF蛋白及NGFmRNA水平均较假手术组显著上升,模型MT组则显著高于模型对照组（P〈0．05或P〈0．01）。结论MT通过调高脊髓损伤大鼠体内NGF的表达起到减轻神经细胞损伤、促进神经细胞再生和神经功能恢复作用。     

嗅鞘细胞抑制脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白聚糖表达的实验研究

目的:探讨嗅鞘细胞(OECs)移植的治疗作用及其对影响硫酸软骨素蛋白聚糖类分子(CSPGs)表达的影响。方法:将培养的OECs移植于脊髓半横断的Wistar大鼠,移植术后对模型进行数个时间点的BBB运动功能评分,损伤即移植术后4周,对实验组和对照组动物取材,进行免疫组织化学和Western blotting检测。结果:移植后4周,实验组动物的BBB评分高于对照组动物。免疫组织化学和Western blotting检测发现,实验组动物损伤处CSPGs物质表达低于对照组动物。结论:OECs促进脊髓损伤动物运动功能恢复的作用可能与抑制CSPGs分子表达有关。     

肋间神经移植加NGF、BDNF基因修饰的OECs修复大鼠脊髓损伤

目的探讨自体肋间神经移植加NGF、BDNF基因修饰的嗅神经鞘细胞（OECs）修复大鼠脊髓损伤（Spinal cord injury,SCI）。方法SD大鼠72只,经T11、T12间隙平面切取2mm的半侧脊髓,制成半切伤模型。动物分为A、B、C三组,每组24只。A组：将自体肋间神经纤维损伤脊髓近端前角灰质与远端前索白质桥接连接,伤侧L1、L2、L3、L4脊神经节与近端后索白质及远端后角灰质与近端后索白质桥接连接,并植入NGF、BDNF基因修饰的OECs;B组：同上述方法移植肋间神经,不植入OECs;C组：单纯脊髓损伤,脊髓半切缺损处填充明胶海棉,术后4、8周对各组动物进行神经功能检查（斜板实验检查,BBB评分）,感觉诱发电位（SEP）和运动诱发电位（MEP）检测以及组织学检查。结果术后4周时,A、B组和动物神经功能,斜板试验,BBB评分及SFP、MEP检测结果均优于C组,8周时,A组动物神经功能,斜板试验,BBB评分,SEP、MEP检测结果均优于B组和C组,镜下见移植组织存活,充填于缺损处,部分脊髓组织融合,结论肋间神经移植加NGF、BDNF基因修饰的OECs对SCI的修复有一定的疗效。     

嗅神经鞘细胞移植治疗实验性脊髓损伤的研究

目的:观察移植体外培养的嗅神经鞘细胞(OEC)对大鼠脊髓左半侧横断伤的治疗作用。方法:将应用改良Nash法培养的OECs移植到成年大鼠T10脊髓左半侧横断处,8周后分别采用改良Tarlov法运动学功能评分、辣根过氧化物酶(HRP)顺行示踪、透射电镜观察、P75免疫组织化学染色及HE染色等方法,观察动物的运动功能、脊髓再生的轴突和髓鞘、OEC的存活和脊髓损伤程度。结果:8周时治疗组运动学功能评分高于对照组(P<0.05);治疗组再生轴突穿越损伤区,对照组则无再生轴突穿越;超微结构显示治疗组轴突数量多于对照组,且髓鞘的完整性强于对照组,OEC表现为星形胶质细胞样和雪旺氏细胞样两种,包绕轴突髓鞘;免疫组化染色显示移植后8周OECs仍然存活,在损伤区均匀、散在分布;损伤后8周脊髓损伤区有胶质瘢痕及空洞形成。结论:移植的嗅神经鞘细胞可促进大鼠运动功能的恢复、脊髓轴突的再生和髓鞘的重塑。     

大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞的分裂增殖和免疫细胞化学特性

目的:体外培养大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs),观察其形态、分裂增殖和免疫细胞化学特性,探索自体嗅黏膜嗅鞘细胞作为OECs来源的可能性。方法:采用差时贴壁的方法分离培养成年大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞,相差显微镜下观察细胞形态和分裂增殖;用免疫组化方法观察GFAP、NGFRp75、S鄄100、NGF、BDNF、NT鄄3的表达。结果:培养的细胞根据形态来分,可分为双极、多极和偏平状;细胞分裂时先回缩成球形,分裂成两个子球,再伸出突起,变成梭形或多极形。GFAP、NGFRp75、S鄄100、BDNF和NT鄄3表达阳性。结论:在含血清培养基上,大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞能正常分裂增殖和分泌神经营养因子。     

Notch-1对大鼠嗅球成鞘细胞神经生长因子表达的影响

目的 观察Notch-1对嗅球成鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)神经生长因子(nerve growth factor,NGF)表达的影响.方法 原代培养大鼠OECs,用有活性的Notch质粒(NotchICV),无活性的Notch质粒(NotchVK)以及空质粒分别转染OECs,将实验对象分成NotchICV转染组,NotchVK转染组和空白质粒组,应用免疫荧光双标、Western blot及RT-PCR技术,检测各组OECs中NGF及其mRNA的表达变化.结果 转染Notch-1后,OECs中NGF的表达明显增高.免疫荧光双标结果显示,NotchICV转染组OECs 中NGF的表达较NotchVK转染组和空白质粒组均明显增高(P<0.05);RT-PCR结果显示,NotchICV转染组OECs中NGF mRNA的表达(0.496 1±0.026 9)均高于NotchVK转染组(0.244 5±0.013 4)及空白质粒组(0.245 9±0.016 0)(P<0.01);Western blot结果显示,NotchICV转染组OECs中NGF的表达(0.887 5±0.016 6)均高于NotchVK转染组(0.686 2±0.059 2)和空白质粒组(0.682 1±0.067 0)(P<0.01).结论 Notch-1转染OECs后,其NGF的表达上调,提示Notch-1能增强OECs中NGF的合成.     

嗅鞘细胞移植联合应用GDNF对大鼠脊髓损伤的治疗作用

目的：研究嗅鞘细胞（OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因了（GDNF）对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法；建立成年SD大鼠脊髓T8半横断损伤模型，将体外培养纯化的OECs植入脊髓损伤处，同时局部应用GDNF，采用斜板试验和BBB联合功能评分观察大鼠运动功能恢复情况，并通过辣根过氧化物酶逆行示踪技术评价OECs和GDNF对神经元存活和纤维再生的影响。结果：（1）OECs和GDNF联合应用时对皮质和红核神经元有逆行性保护作用；可促进脊髓下行传导束再生，肢体运动功能恢复，（2）OECs和GDNF联合应用组对脊髓损伤的修复作用最强，高于GDNF或OECs单用组。结论：联合应用GDNF和OECs在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。