miR-620通过靶向ING4调控乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性

目的：探讨miR-620对乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性的影响及其机制。方法：收集2017年3月至2018年3月在海南省儋州市人民医院手术切除的21例乳腺癌患者的癌及癌旁组织标本,以及乳腺癌细胞MCF-7、BCaP-37和乳腺上皮细胞HBL-100,采用qPCR法检测癌组织和细胞中miR-620和生长抑制因子4(ING4)mRNA的表达。利用脂质体转染技术,分别将miR-620抑制剂（anti-miR-620）和抑制剂阴性对照（anti-miR-NC）、anti-miR-620和ING4小干扰RNA(si-ING4)、anti-miR-620和小干扰RNA阴性对照序列（si-NC）转染至MCF-7细胞,经放射处理后（依次记为IR+anti-miR-620组、IR+anti-miR-NC组、IR+antimiR-620+si-ING4组、IR+anti-miR-620+si-NC组）,利用克隆形成实验、MTT法和FCM分别检测细胞放射敏感性、细胞增殖活力、细胞周期分布和凋亡率。双荧光素酶报告基因实验和WB法验证miR-620和ING4的靶向关系。结果：与癌旁组织和HBL-100细胞比较,...     

GSDME通过调控细胞焦亡影响乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇的敏感性

[摘要] 目的：探讨GSDME是否通过调控细胞焦亡影响乳腺癌MCF-7 细胞对化疗药物紫杉醇（paclitaxel,PTX）的敏感性。方法：利用RNA干扰技术敲降GSDME在MCF-7 细胞中的表达,采用CCK-8 法、流式细胞术、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放实验及Wb技术分别检测GSDME低表达前后,PTX对细胞增殖、焦亡、LDH释放、GSDME-N端蛋白及cleaved-caspase-3 蛋白表达水平的变化情况。结果：与对照组比较,PTX处理组细胞的焦亡率、LDH释放量、GSDME-N端蛋白及cleaved-caspase-3 蛋白的表达水平均显著升高（均P<0.01）;与si-NC组比较,敲低GSDME可使si-GSDME组细胞对PTX的敏感性降低,其细胞焦亡率、LDH释放量及GSDME-N端蛋白表达水平均显著下降（均P<0.01）。结论：敲减MCF-7 细胞中GSDME的表达量可显著抑制细胞焦亡并降低细胞对PTX的敏感性。     

紫杉醇诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的蛋白质组研究

目的 研究紫杉醇诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的分子机制。方法 以100nmol／L紫杉醇作用MCF-7细胞24h后提取细胞总蛋白,利用蛋白质组技术,对紫杉醇诱导的MCF-7乳腺癌细胞凋亡前后的细胞蛋白进行二维电泳图谱分析,通过质谱鉴定差异蛋白质。结果 通过对凋亡前后的蛋白质组二维电泳图谱分析,找到了17个差异较大的蛋白质,其中6个蛋白质通过质谱得到了鉴定,它们是烯醇化酶、细胞核氯离子通道蛋白、角蛋白8、核糖体蛋白S12、galectin-1和Hint。结论 通过蛋白质组技术,发现了在紫杉醇诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡前后发生变化的6种蛋白质;这些差异蛋白质在紫杉醇诱导细胞凋亡中发挥一定的作用。     

MiR-129-5p靶向HMGB1抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移

目的 探讨miR-129-5p对骨肉瘤(OS)细胞增殖和迁移的影响以及对HMGB1的调控作用.方法 RT-PCR和Western blot法分别检测骨肉瘤细胞株MG-63、Saos-2和成骨细胞hFOB1.19中miR-129-5p和HMGB1的表达.生物信息学预测miR-129-5p与HMGB1基因是否存在结合位点,...     

HOTAIRM1靶向miR-129-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:研究长链非编码RNA HOTAIRM1（lncRNA HOTAIRM1）与微小RNA-129-5p（miR-129-5p）的靶向关系及其对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 方法:荧光定量PCR（qPCR）检测HOTAIRM1和miR-129-5p在人正常脑组织和胶质瘤组织中的表达。建立抑制HOTAIRM1表达细胞株,研究其对U251细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）、上皮钙黏素（E-cadherin）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）水平。生物学信息预测和双荧光素酶报告基因法分析HOTAIRM1和miR-129-5p之间的靶向关系。共转染si-HOTAIRM1和anti-miR-129-5p,观察抑制miR-129-5p表达对抑制HOTAIRM1表达诱导的U251细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。 结果:HOTAIRM1在胶质瘤组织中的表达明显上调（P<0.05）,miR-129-5p表达下调（P<0.05）。抑制HOTAIRM1表达显著降低U251细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量（P<0.05）,明显增加U251细胞凋亡率和p21、Bax、E-cadherin蛋白表达量（P<0.05）。miR-129-5p是HOTAIRM1的靶基因。上调或下调HOTAIRM1表达明显调控miR-129-5p表达（P<0.05）。抑制miR-129-5p表达逆转了抑制HOTAIRM1表达对U251细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Cyclin D1、MMP-2、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,并逆转了抑制HOTAIRM1表达对U251细胞p21、E-cadherin、Bax蛋白表达和细胞凋亡率的促进作用。 结论:lncRNA HOTAIRM1通过靶向miR-129-5p影响胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。     

lncRNA TPTEP1通过抑制miR-129-5p影响膀胱癌T24细胞的增殖和侵袭

目的:分析长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA) TPTEPl在膀胱癌组织和细胞的表达,观察其对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制.方法:收集2017年8月至2019年10月在武汉市东西湖人民医院泌尿外科接受手术治疗的43例膀胱癌患者的癌与癌旁组织标本,采用实时荧光定量...     

多西紫杉醇诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的探讨多西紫杉醇(docetaxcel)诱导体外培养人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用及凋亡的分子机制。方法通过MTT比色法分析多西紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响;应用光镜、电镜观察细胞形态学的改变;Annexin-V/PI双染流式细胞术检测肿瘤细胞周期动力学和凋亡诱导率的影响;免疫组化方法检测凋亡相关基因bax、bc1-2的表达变化。结果多西紫杉醇可明显抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,并可导致其形态学的改变;随着加药时间的增长,G2/M期细胞增多,G2/M期细胞和S期细胞的比值也随剂量呈递增关系;加药(IC50)48h后早期凋亡细胞明显增多,同时可上调bax和下调bc1-2的蛋白表达量。结论多西紫杉醇可明显抑制MCF-7肿瘤细胞的生长,诱导细胞凋亡。其分子机制可能与激活bax和抑制bc1-2等凋亡调控基因有关。     

miR-204对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨miR-204在人乳腺癌组织及MCF-7细胞中的表达水平及其对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 提取癌症和肿瘤基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库中浸润性乳腺癌的miR-204相关数据进行汇总,转染miR-204过表达病毒,筛选稳定转染细胞株并通过RT-qPCR检测转染率,MTT法检测过表达miR-204后乳腺癌MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 结果 miR-204在浸润性乳腺癌组织中的表达水平较癌旁组织明显下调（P＜0.001）,且与淋巴结转移和远处转移相关（P＜0.05）。过表达miR-204能够抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力（P＜0.05）;miR-204上调后,细胞凋亡率达到（34.7±1.9）%,细胞凋亡能力明显增强（P＜0.001）。结论 miR-204可抑制乳腺癌细胞增殖并介导细胞凋亡。     

miR-31-5p 通过调控TNS1 抑制乳腺癌细胞生物学行为及放疗抵抗的分子机制

目的：探讨miR-31-5p/张力蛋白1 基因（tension protein 1,TNS1）分子轴对乳腺癌细胞生物学行为的影响及其放疗抵抗的分子机制。方法：收集2017 年7 月至2017 年12 月南阳市中心医院肿瘤放疗科收治的、经手术切除的21 例乳腺癌患者癌及癌旁组织标本,以及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231 和SKBR-3,采用qPCR法检测癌组织和癌细胞系中miR-31-5p 的表达水平。通过6 MV-X射线照射MCF-7 细胞,构建放疗抵抗细胞株MCF-7R。随后,采用克隆形成实验、Transwell 小室法和AnnexinV/PI 染色流式细胞术检测过表达/敲降miR-31-5p 对MCF-7 和MCF-7R细胞放疗敏感性的影响;用双荧光素酶报告基因验证miR-31-5p 与TNS1 的靶向关系。结果：乳腺癌组织、细胞系和MCF-7R细胞中miR-31-5p 表达水平显著低于癌旁组织、人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和MCF-7 细胞（均P<0.01）。过表达miR-31-5p 显著抑制MCF-7R细胞的侵袭并促进细胞凋亡（均P<0.01）,沉默miR-31-5p 在MCF-7 细胞中结果相反。双荧光素酶报告基因法证实TNS1 是miR-31-5p 靶基因。过表达miR-31-5p 通过靶向下调TNS1 显著抑制MCF-7R细胞侵袭能力并促进细胞凋亡（均P<0.01）,沉默miR-31-5p 通过上调TNS1 显著促进MCF-7 细胞侵袭和抑制细胞凋亡（均P<0.01）,从而上调MCF-7R对放射治疗的敏感性。结论：miR-31-5p/TNS1 分子轴与乳腺癌放疗抵抗存在调控关系,且过表达miR-31-5p 可逆转MCF-7R细胞对放疗抵抗作用。     

TrkA-siRNA增强人乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇的敏感性

目的 探讨靶向抑制TrkA基因表达后,人乳腺癌细胞MCF-7对化疗药物紫杉醇敏感性的变化.方法 8 μmol/L紫杉醇作用于乳腺癌MCF-7亲本细胞株和TrkA-siRNA转染细胞株24、48小时后,MTT法检测细胞增殖抑制效应,Western blot检测凋亡蛋白caspase-3的活化.倒置显微镜观察细胞株生长的形态学变化.结果 紫杉醇作用24、48小时后,其对TrkA-siRNA细胞株的生长抑制均高于MCF-7亲本细胞株(P＜0.05),且48小时抑制率高于24小时(P＜0.05).Western blot结果显示,caspase-3蛋白在紫杉醇作用24小时后被激活,其在TrkA-siRNA细胞株中的表达高于MCF-7亲本细胞株(P＜0.05).结论 TrkA-siRNA能增加乳腺癌细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性.     

蝙蝠葛碱在人乳腺癌MCF-7细胞对5氟尿嘧啶敏感性的研究

目的 探讨人乳腺癌MCF-7细胞受蝙蝠葛碱(Dauricine,Dau)作用后,对5氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的影响。方法 分别以终浓度为2.5 μg/mL的蝙蝠葛碱、50 μg/mL的5-FU、2.5 μg/mL的蝙蝠葛碱和50 μg/mL的5-FU作用于人乳腺癌细胞MCF-7,运用MTT法检测细胞增殖活性,Transwell实验分析细胞的迁移,DAPI染色检测细胞的凋亡,Western blot法检测cyclinD1和Bcl-2蛋白的表达。结果 MTT实验结果显示联合使用阈下浓度的蝙蝠葛碱增强了5-FU对细胞增殖的抑制;Transwell实验表明联合应用阈下浓度的蝙蝠葛碱进一步加剧了5-FU对细胞迁移的抑制;DAPI染色说明联合应用阈下剂量的蝙蝠葛碱加强了5-FU对细胞凋亡的诱导,Western blot实验表明联合应用阈下浓度的蝙蝠葛碱进一步抑制了cyclinD1和Bcl-2蛋白的表达。结论 蝙蝠葛碱可有效增强人乳腺癌MCF-7细胞对5-FU的敏感性。     

hSulf-1过表达提高乳腺癌MCF-7细胞对PARP抑制剂AZD2281的敏感性

探讨人硫酸酯酶-1（human sulfatase 1,hSulf-1）基因过表达是否提高乳腺癌MCF-7细胞对PARP抑制剂AZD2281的敏感性。方法：采用不同浓度AZD2281处理细胞,并筛选AZD2281处理的最佳浓度。将携hSulf-1基因的重组腺病毒Ad5-hSulf1感染MCF-7细胞,以Ad-hSulf1和AZD2281单独或联合处理MCF-7细胞,以Ad5-EGFP处理为对照。采用流式细胞术检测细胞周期,克隆形成实验检测细胞克隆形成率,Western blotting检测细胞周期蛋白依赖性激酶4（cyclin dependent kinase 4,CDK4）及磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,p-AKT）的表达,Transwell法、MTT法分别检测细胞的迁移及增殖。结果：AZD2281浓度为7 μmol/L时对MCF-7细胞的抑制作用趋于峰值,用于后续实验。Ad5-hSulf1+AZD2281联合处理与AZD2281单独处理相比,MCF-7细胞的G2/M期细胞比例明显增多[（22.15±0.17）% vs（17.44±0.57）%,P<001],细胞克隆形成率[（21.43±1.52）% vs（49.43±1.44）%,P<0.01]及细胞周期蛋白CDK4的表达[（0.67±0.02）vs（0.72±0.02）,P<0.05]、AKT的磷酸化水平[（0.17±0.003）vs（0.42±0.02）,P<0.01]均明显降低,同时细胞的增殖率和迁移能力也有明显下降[（57.69±4.83）% vs（79.35±5.44）%;（10.33±1.53）个vs（50.67±2.31）个,均P<0.01]。结论：hSulf-1过表达可明显提高乳腺癌细胞MCF-7对AZD2281的化疗敏感性,阻滞细胞周期于G2/M期,并更明显地抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,这一效应可能是通过调节细胞周期蛋白CDK4及AKT通路产生的。     

AEG-1基因促进乳腺癌细胞株MCF-7转移

目的 观察AEG-1基因在细胞水平对乳腺癌细胞MCF-7转移的影响。方法 通过将siRNA转染进MCF-7细胞,沉默细胞中AEG-1表达量,以转染阴性siRNA作为对照组。分别采用Transwell小室检测细胞迁移侵袭能力、CCK8实验检测细胞增殖能力。同时通过检测细胞中VEGF的变化及HUVEC细胞体外管腔形成实验考察AEG-1对于血管新生的影响。结果 沉默AEG-1,MCF-7细胞的迁移能力、侵袭能力和增殖能力明显受到抑制。沉默AEG-1,MCF-7细胞的VEGF表达明显降低。上清处理HUVEC细胞,沉默AEG-1组的血管新生能力明显受到抑制。结论 沉默AEG-1基因能显著抑制MCF-7细胞转移的多个层面,包括细胞迁移、侵袭、增殖以及血管新生。表明AEG-1基因在乳腺癌转移过程中起着重要作用,也为将来乳腺癌治疗开拓了新思路。     

雷公藤内酯醇通过调控miR-142-3p/HSP70通路抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移

目的：探究雷公藤内酯醇（TP）通过miR-142-3p/HSP70信号通路对人乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的影响。方法：常规培养MCF-7细胞,将其分为6组：对照组、TP组、miR-142-3p inhibitor组、TP+inhibitor组、miR-142-3p mimic组和TP+mimic组,用转染试剂将相应的核酸或质粒转染MCF-7细胞。qPCR法、EdU细胞增殖实验、Transwell小室实验、细胞划痕实验、WB法分别检测转染后各组MCF-7细胞中miR-142-3p和HSP70 mRNA的表达,MCF-7细胞的增殖、侵袭、迁移能力和HSP70蛋白表达水平。结果：TP或miR-142-3p过表达能显著促进MCF-7细胞中miR-142-3p和HSP70的表达,敲减miR-142-3p则可明显抑制MCF-7细胞中miR-142-3p和HSP70的表达,TP可逆转由敲减miR-142-3p对MCF-7细胞中miR-142-3p和HSP70表达的影响;TP、过表达miR-142-3p均可明显抑制MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.05）,敲减miR-142...     

Enhancing cisplatin sensitivity in MCF-7 human breast cancer cells by down-regulation of Bcl-2 and cyclin D1

MCF-7 human breast cancer cells are relatively resistant to cisplatin treatment compared to other breast cancer cell lines. In order to identify possible targets for sensitizing the breast cancer cells to cisplatin treatment protein expression levels and the phosphorylation status of 27 different signaling proteins were examined. MCF-7 cells expressed high levels of anti-apoptotic Bcl-2 protein relative to more cisplatin sensitive breast cancer cells. After cisplatin treatment a decrease in cyclin D1 was seen in all the breast cancer cells studied. Therefore, Bcl-2 and cyclin D1 were chosen as putative targets for increasing cell death and growth arrest induced by cisplatin, thereby enhancing the drug sensitivity in MCF-7. RNA interference, using Bcl-2- and cyclin D1- siRNAs sensitized MCF-7 cells to cisplatin treatment and by simultaneous knockdown of both Bcl-2 and cyclin D1 further sensitization was seen. This shows the potential of targeting both apoptotic- and cell cycle-regulating pathways to enhance the effect of chemotherapy.