mi R-22在压应力下软骨终板细胞中的表达及其对靶基因MMP-1的调控作用

目的 应用miRNA芯片技术筛选压应力下人软骨终板细胞中差异表达的miRNAs,研究与压应力相关的miR-22并进行生物信息学分析,探讨其对靶基因MMP-1的调控。方法 将6个月意外流产胎儿软骨终板进行软骨终板细胞的分离、培养。将第2代软骨细胞按实验要求种板培养并随机分为加压组与对照组。加压组施加周期性压力(5 MPa,6 h×5 d),使用TRIzol法提取各组RNA,miRNA芯片检测miRNA表达情况,然后用Realtime PCR(RT-PCR)对差异表达miR-22进行验证。通过靶基因预测软件预测MMP-1与miR-22基因的关系,miR-22 mimics脂质体转染Hela细胞后通过RT-PCR进一步验证。结果 芯片扫描结果显示加压组miR-22下调明显。RT-PCR检测显示压应力下人软骨终板细胞miR-22表达显著降低。miR-22 mimics转染目标细胞48 h后,miR-22的表达显著增高,同时MMP-1基因表达显著降低。结论 压应力下miR-22异常表达,miR-22可靶向负调控与软骨终板细胞退变相关的MMP-1基因。     

内皮素-1对人系膜细胞表达MMP-3及TIMP-1的影响

目的研究内皮素-1(ET-1)对人系膜细胞(MC)基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及其组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响。方法采用体外MC培养,应用细胞ELISA法测定MC内MMP-3、TIMP-1蛋白的表达。结果ET-1促进MC内MMP-3、TIMP-1蛋白表达,但MMP-3/TIMP-1比值呈剂量及时间依赖性下降。结论ET-1可能是人系膜细胞内MMP-3/TIMP-1比值下降的原因之一,这与肾小球细胞外基质降解受抑密切相关。     

基质金属蛋白酶-2、3及其组织抑制剂TIMP-1在子宫内膜异位症中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-3)及其抑制剂(TIMP-1)在子宫内膜异位症发生及发展中的作用.方法采用免疫组化SP法分别测定MMP-2、MMP-3 、TIMP-1在卵巢子宫内膜异位症异位内膜60例(A组),子宫腺肌症异位内膜40例(B组),子宫肌瘤子宫内膜30例(对照组C)的表达强度.结果 A、B组中MMP-2、MMP-3的表达强度明显高于对照组(P<0.05)而TIMP-1的表达明显低于对照组(P<0.05);A、B组间MMP-2、MMP-3 、TIMP-1 的表达无明显差异(P>0.05).结论在子宫内膜异位症中MMP-2、MMP-3的过度表达及TIMP-1的低表达可能与内异症的发生与发展有关.     

丹参单体IH764-3促进H2O2刺激的鼠肝星状细胞胶原降解

目的观察丹参单体IH764-3对鼠肝星状细胞株(HSCs)基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及其组织抑制因子(TIMP-1)表达的影响。方法应用体外细胞培养技术,用RT-PCR检测HSCsMMP-13mRNA水平;原位杂交和Westernblotting技术分别检测上述细胞TIMP-1mRNA和蛋白水平。结果IH764-3干预2h组MMP-13mRNA的表达强度明显上调,同时TIMP-1mRNA表达受抑制;IH764-3干预24h组TIMP-1蛋白表达受抑制。结论丹参单体IH764-3诱导HSCsMMP-13表达,抑制其TIMP-1表达是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

RGDS四肽促进大鼠肝星状细胞胶原降解机制的研究

目的：观察精-甘-天冬-丝氨酸（RGDS）四肽对纤维连接蛋白（FN）刺激的大鼠肝星状细胞（HSC）基质金属蛋白酶-13（MMP-13）及其组织抑制因子（TIMP-1）表达的影响。方法：应用体外细胞培养技术，用RT-PCR检测HSC MMP-13mRNA水平；原位杂交和Western blot技术分别检测上述细胞TIMP-1 mRNA和蛋白水平。结果：RGDS四肽干预2h组MMP-13 mRNA的表达强度明显上调，同时TIMP-1 mRNA表达受抑制；RGDS四肽干预24h组TIMP-1蛋白表达受抑制。结论：RGDS四肽诱导HSC MMP-13表达，抑制其TIMP-1表达是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

HL-60细胞ATRA诱导后MMP-9/TIMP-1表达的变化

为了检测HL-60细胞经过全反式维甲酸(ATRA)诱导后基质金属蛋白酶(MMP-9、MMP-2)及金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)表达变化,并探讨其变化的意义。采用瑞氏染色观察细胞形态,WST1实验测定细胞增殖变化,NBT还原实验测定细胞分化状态,RT-PCR方法检测MMP-9、MMP-2、TIMP-1、VEGF的mRNA的表达。结果显示,HL-60细胞经ATRA作用24h后,随着细胞增殖降低与分化的发生,MMP-9mRNA表达增加,TIMP-1mRNA和VEGF表达降低,MMP-2mRNA未见明显表达。ATRA诱导HL-60细胞分化后MMP-9表达增加,而TIMP-1表达降低,MMP-9不促进HL-60细胞表达VEGF。     

哮喘患者血浆IL-13、LTB-4、MMP-9、TIMP-1变化及临床意义

目的：探讨哮喘患者血浆IL-13、白三烯B4（LTB-4）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP-1）变化及临床意义。方法：选择哮喘患者及查体健康者（对照组）各30例,检测哮喘组急性发作期及稳定期的血浆IL-13、LTB-4、TIMP-1及TIMP-1/MMP-9比值,且与对照组比较;并对哮喘组各检测指标进行相关性分析。结果：哮喘组急性发作期血浆IL-13、LTB-4、MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1比值明显高于稳定期（P均〈0.05）,上述指标均明显高于对照组（P均〈0.01）;IL-13与LTB-4、MMP-9与TIMP-1、MMP-9、TIMP-1与TIMP-1/MMP-9比值均呈显著正相关（r分别为0.841、0.832、0.921、0.579,P均〈0.05）。结论：IL-13、LTB-4升高及MMP-9/TIMP-1失衡参与哮喘发病,检测IL-13、LTB-4、MMP-9、TIMP-1、TIMP-1/MMP-9比值可评估哮喘病情,指导治疗。     

多器官功能障碍综合征大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1和Ⅳ型胶原的表达

目的:检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)在多器官功能障碍综合征(MODS)大鼠肺组织中表达的变化,探讨MODS肺损伤的发生机制。方法:将40只成年雄性SD大鼠随机分为假手术对照组和盲肠结扎穿孔(CLP)模型组,其中,CLP组又根据造模后不同时点分为MODS 6 h组、MODS 12 h组、MODS 24 h组和MODS 48 h组,每组各8只。采用改良的CLP法构建MODS大鼠模型,于造模后不同时点处死大鼠并收集标本。血液生化检查及血气分析检测各组大鼠肝、肾和肺功能的情况,HE染色观察肺组织形态学改变,ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、MMP-9及TIMP-1含量的变化,RT-PCR和免疫组织化学法检测肺组织MMP-9及TIMP-1表达的变化,免疫荧光和Western blot法检测肺组织Ⅳ-C表达的变化。结果:与对照组比较,MODS各组均出现不同程度的肝、肾和肺功能损伤。光镜下对照组肺组织结构无明显改变,模型组肺组织损伤较重。与对照组比较,各模型组血清中TNF-α、IL-1β、MMP-9及TIMP-1的含量均明显升高(P0.05),于造模后12~24 h达高峰(P0.01)。各模型组肺组织MMP-9和TIMP-1表达明显高于对照组,MMP-9于造模后12 h达高峰(P0.01),TIMP-1于造模后24 h达高峰(P0.01)。与对照组比较,造模后6 h肺组织Ⅳ-C降低不明显,12~48 h显著下降,于24 h降至最低(P0.01)。结论:MMP-9和TIMP-1通过共同调节细胞外基质主要成分Ⅳ-C的合成和分解,在MODS肺损伤中发挥重要作用。     

软骨肉瘤中MMP-1及TIMP-1的表达及意义

目的 研究软骨肉瘤组织中MMP-1及TIMP-1的表达情况,探讨二者在软骨肉瘤间质浸润中的作用机制.方法 收集32例软骨肉瘤标本和10例内生性软骨瘤标本,分别用免疫组化法、Western blot法、实时荧光定量PCR法检测MMP-1、TIMP-1及Ⅱ型胶原的表达情况.结果 MMP-1和TIMP-1在软骨肉瘤中高表达,并随软骨肉瘤恶性程度的升高而加强(P<0.01);Ⅱ型胶原在软骨肉瘤中的表达降低(P<0.01).结论 MMP-1在软骨肉瘤中通过对细胞外基质(extracellular matrixc,ECM)的降解,来增加软骨肉瘤的侵袭能力.     

丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1和血脑屏障的影响

目的:探讨丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)和血脑屏障的影响.方法:90只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,NBP预处理低剂量组、中剂量组、高剂量组.采用线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2h再灌注24 h后以干湿重法测定脑组织含水量,伊文思蓝(EB)评估血脑屏障的破坏程度,实时PCR检测MMP-9及TIMP-1 mRNA的表达水平.结果:脑缺血再灌注后,脑组织含水量及EB含量明显增加,MMP-9和TIMP-1表达均增强,与假手术组比较差异有统计学意义.丁苯酞预处理各组脑组织含水量及EB含量较模型组明显下降,MMP-9表达显著减少,TIMP-1表达明显增加,丁苯酞预处理中、高剂量组差异无统计学意义.结论:丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠可通过调节MMP-9/TIMP-1的表达,降低血脑屏障通透性,减轻脑水肿,发挥预防性保护作用.     

牵张应力对人牙周膜细胞MMP-13/TIMP-1表达的影响及其信号转导途径研究

目的研究不同强度机械牵张应力对人牙周膜细胞基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及其组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响,并探讨机械牵张应力作用下人牙周膜细胞MMP-13/TIMP-1表达变化的信号转导途径。方法通过细胞牵张应力加载系统对体外培养的人牙周膜细胞同时施加0%、6%、12%和18%形变率的机械牵张应力,作用24 h后,用RT-PCR方法检测细胞受力后MMP-13/TIMP-1 mRNA表达的变化,用免疫印迹法检测其蛋白表达的变化。另外,通过使用不同信号途径的特异性抑制剂,用RT-PCR方法分别检测不同抑制剂对牵张应力作用下牙周膜细胞MMP-13/TIMP-1 mRNA表达的变化。结果人牙周膜细胞受力后,MMP-13/TIMP-1 mRNA及蛋白表达随牵张应力强度的增大明显增加。PD098059可抑制机械牵张应力作用下牙周膜细胞MMP-13 mRNA表达的增加。放线菌酮可抑制机械牵张应力作用下TIMP-1 mRNA表达的增加。结论不同强度机械牵张应力可以影响人牙周膜细胞MMP-13/TIMP-1的表达,进而影响牙周组织细胞外基质代谢。机械牵张应力作用下MMP-13表达的增加是通过ERK-MAPK途径。机械牵张应力作用下TIMP-1表达的增加是通过新生蛋白途径。     

低氧对人成熟树突状细胞MMP9/TIMP1及CCR7 表达的影响

目的： 观察低氧对人单核细胞来源成熟树突状细胞（mDCs）趋化因子受体（CCR7）,基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其组织抑制剂（TIMP-1）表达的影响,以期为改进DCs疫苗体内迁移能力低下提供新策略。方法： 分离制备人外周血单核细胞（PBMCs）,采用体外常规培养体系 ［粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）与白细胞介素-4（IL-4）共同刺激］ 诱导DCs,于诱导后第5 d加入TNF-α促成熟,48 h后将mDCs置低氧环境下（1％ O2、5％ CO2、94％ N2）分别继续培养6 h、12 h,设常氧对照组（21% O2、5% CO2）,收获细胞及培养上清;采用RT-PCR技术检测MMP-9、TIMP-1及CCR7的表达;明胶酶谱法检测培养上清中MMP-9的水平与活性,流式细胞术检测mDCs表面CCR7的表达。结果： RT-PCR及酶谱实验结果显示,低氧6 h、12 h处理组mDCs MMP-9水平显著下降;与对照组比较,各低氧处理组mDCs均未检测到TIMP-1 mRNA表达的变化;转录及细胞表面表达分析结果显示,与常氧对照组比较,低氧6 h处理组趋化因子受体CCR7表达显著降低,而12 h处理组其表达显著回升至近常氧组水平。结论： 低氧下调mDCs MMP-9表达,破坏MMP-9/TIMP-1平衡,可能是DCs疫苗体内迁移能力低下的主要因素之一。趋化因子受体CCR7在mDCs对低氧应答中可能起重要作用。     

基质金属蛋白酶-9及其组织抑制物-1在人胎盘的表达及意义

目的研究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases,MMP-9)及其组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMP-1)在不同孕期胎盘中的表达及与滋养层细胞侵蚀、子宫-胎儿血管系统建立的关系.方法应用原位杂交法检测56例胎盘(早孕16 例、中孕20 例、晚孕20例)中MMP-9及TIMP-1mRNA的表达.结果 MMP-9及TIMP-1mRNA主要表达于滋养细胞、绒毛间质血管壁及蜕膜组织中;MMP-9mRNA的表达早、中孕组明显强于晚孕组,TIMP-1mRNA的表达晚孕组明显强于早、中孕组,差异均有极显著性(P<0.01).结论 MMP-9及TIMP-1协同表达可能在滋养层细胞侵蚀、孕卵着床、血管重建过程中发挥一定的作用.     

红花多糖对荷瘤小鼠肿瘤组织基质金属蛋白酶-9、组织金属蛋白酶抑制剂-1mRNA表达影响的研究

目的 探讨红花多糖(safflower polysaccharide,SPS)对荷瘤小鼠肿瘤组织中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-9、组织金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitors of metalloproteinase,TIMP-1)mRNA表达的影响.方法 BABL/c小鼠腋下接种S180肉瘤,腹腔注射SPS连续10 d,给药结束24 h后取肿瘤组织Real time-PCR法测MMP-9、TIMP-1 mRNA表达水平.结果 SPS低剂量组、中剂量组和高剂量组肿瘤组织中MMP-9的表达量分别是模型对照组的0.452、0.204、0.026倍,TIMP-1的表达量分别是模型对照组的3.4、5.2、10.0倍.结论 SPS能够抑制肿瘤组织中MMP-9基因的表达,促进TIMP-1基因的表达,具有抑制肿瘤及其转移的作用.     

活性氧对平滑肌细胞合成基质金属蛋白酶-1, 3及其抑制物的影响

目的:探讨活性氧(ROS)对血管平滑肌细胞合成基质金属蛋白酶-1,3(MMP-1,3)和基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)的影响,从而推测其是否促进动脉粥样硬化斑块的破裂。方法:体外培养胎儿主动脉平滑肌细胞,加入含100μmol/L黄嘌呤,5U/L黄嘌呤氧化酶的无血清培养液,孵育24h,收集细胞上清液。用Westernblotting方法检测浓缩后的细胞上清液中MMP-1,3和TIMP-1的含量。结果:黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶组细胞上清液中的MMP-1含量明显少于正常对照组,并且转化成活性形式;MMP-3的含量明显多于正常对照组,并且转化成活性形式;TIMP-1的含量明显少于正常对照组。结论:ROS对MMPs-TIMPs平衡的影响很复杂,可能对动脉粥样硬化斑块的破裂起一定作用。     

缺氧对肺动脉成纤维细胞MMP-2、TIMP-1表达的影响

目的：探讨缺氧对肺动脉成纤维细胞（Fpa）分泌基质金属蛋白酶（MMPs）、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）的影响。 方法： 采用酶谱法测定Fpa培养基中MMP-2的酶活性，免疫印迹法检测培养基中MMP-2、TIMP-1 的蛋白水平，免疫组化法测定细胞原位的蛋白表达， RT-PCR法检测mRNA表达量。 结果： 缺氧后Fpa分泌的MMP-2酶活性、细胞内外蛋白表达量、mRNA表达量均下降；而TIMP-1的表达则呈相反变化。 结论： 缺氧可使肺动脉成纤维细胞MMP-2/TIMP-1的表达失衡，可能参与缺氧性肺血管重建。     

维药买朱尼含药血清影响大鼠关节软骨细胞基质金属蛋白酶1及其组织抑制因子1的表达

背景：基质金属蛋白酶1及其组织抑制因子1的失衡是骨关节炎软骨降解的关键。 目的：观察维药买朱尼对白细胞介素1β诱导的大鼠关节软骨细胞基质金属蛋白酶1及其组织抑制因子1表达的影响。 方法：从1周龄SD大鼠关节中分离培养原代软骨细胞,鉴定后选用第2代细胞随机分为正常对照组、模型组、买朱尼组。模型组和买朱尼组用10 μg/L的白细胞介素1β干预24 h后,买朱尼组在此基础上加入体积分数10%的买朱尼含药血清,模型组加入正常大鼠血清,继续培养12,24,48 h进行实验。 结果与结论：各组细胞培养48 h,RT-PCR检测发现体积分数10%的买朱尼含药血清可上调软骨细胞基质金属蛋白酶组织抑制因子1 mRNA的表达同时抑制基质金属蛋白酶1 mRNA的表达,但此作用在细胞培养的24,36 h时不明显。同时免疫荧光细胞化学染色也显示买朱尼含药血清可促进软骨细胞基质金属蛋白酶组织抑制因子1的表达。说明买朱尼可以调节白细胞介素1β诱导的大鼠关节软骨细胞基质金属蛋白酶1及其组织抑制因子1的表达,且此作用具有时间依赖性。     

机械牵张对兔角膜成纤维细胞细胞外基质基因表达的影响

目的 研究机械牵张与白介素-1β（IL-1β）联合作用对兔角膜成纤维细胞细胞外基质相关基因表达的影响。方法 对原代提取的兔角膜成纤维细胞进行牵张幅度15%、频率0.1 Hz的周期性牵张12、24、36 h,同时给予IL-1β处理,采用实时荧光定量PCR检测细胞基质金属蛋白酶（MMPs）、基质金属蛋白酶的组织抑制剂（TIMP-1）和I型胶原α1（Collagen Iα1）mRNA表达变化水平。结果 IL-1β单独作用可以诱导角膜成纤维细胞MMP-1、MMP-3和MMP-9 mRNA表达;MMP-1和MMP-3 mRNA表达随时间而降低,MMP-9、TIMP-1、Collagen Iα1 mRNA则随时间而增加;IL-1β与机械牵张联合作用使MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA表达水平上调,TIMP-1和Collagen Iα1 mRNA表达下调,且具有时间依赖。单独机械牵张使Collagen Iα1 mRNA表达下降,IL-1β与机械牵张联合作用使其表达进一步下调,且具有时间依赖性。结论 机械牵张与炎性因子联合作用可加剧角膜组织破坏,促进角膜膨隆的发生发展。     

氯喹对体外活化肝星状细胞自噬与胶原代谢的影响

目的:研究不同浓度的自噬抑制剂氯喹(CQ)对活化的大鼠肝星状细胞系HSC-T6中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响及可能机制。方法:应用转化生长因子β1(TGF-β1)活化HSC-T6细胞,给予CQ干预24 h。实验分组为:control组、TGF-β1组、TGF-β1+CQ(15μmol/L)组、TGF-β1+CQ(30μmol/L)组和TGF-β1+CQ(60μmol/L)组。采用Western blot技术检测微管相关蛋白轻链3(LC3)比值LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、自噬靶蛋白P62、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶13(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)和TIMP-2的表达情况;免疫细胞化学检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;RT-q PCR检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、MMP-13、TIMP-1和TIMP-2mRNA的表达变化。结果:CQ干预后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高且呈剂量依赖性;P62蛋白表达TGF-β1+CQ组均显著高于TGF-β1组(P0.01)。TGF-β1组的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量较control组显著增加,TGF-β1+CQ组较TGF-β1组也有明显增加。α-SMA的表达在TGF-β1组和TGF-β1+CQ组均显著高于control组(P0.05),而TGF-β1组和TGF-β1+CQ各组之间无显著差异。MMP-13表达在TGF-β1+CQ组较TGF-β1组显著下降(P0.05);TIMP-1和TIMP-2在TGF-β1+CQ组较TGF-β1组显著升高(P0.05),且呈剂量依赖性。结论:自噬抑制剂CQ能显著增加HSC-T6细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达并呈剂量依赖性,这可能与其上调TIMP-1及TIMP-2的表达并抑制MMP-13表达有关。     

MMP-9/TIMP-1表达在糖尿病鼠皮肤伤口愈合过程中的变化及意义初探

目的：观察基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、组织金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的表达和MMP-9/TIMP-1比值在糖尿病组和正常组大鼠皮肤伤口愈合过程中不同时点表达的动态变化，探讨其可能的作用机制。 方法:糖尿病大鼠形成6周后行皮肤伤口造模，采用HE染色、Masson染色和免疫组织化学方法评估伤口形成后3、7、14 d伤口组织的再上皮化、炎症细胞浸润、肉芽组织厚度、新生血管形成和胶原纤维密度的情况；通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测术后不同时点MMP-9、TIMP-1在伤口组织中的表达情况。结果:糖尿病大鼠伤口愈合明显迟缓。术后第3 d两组间胶原纤维、肉芽组织、新生血管和再上皮化没有差异，术后第7 d糖尿病组以上指标得分均低于正常组，第14 d这种趋势更加明显；而第3 d至14 d，糖尿病组的单核巨噬细胞浸润得分均低于正常组。术后第3 d两组MMP-9表达均达高峰，第7、14 d呈逐渐下降趋势，糖尿病组MMP-9表达水平在各时点均高于正常组；术后第3 d两组TIMP-1表达均达高峰，第7、14 d呈逐渐下降趋势，糖尿病组TIMP-1表达水平在各时点均低于正常组；正常组MMP-9/TIMP-1蛋白水平比值始终维持在一个动态平衡的稳定水平，而糖尿病组却长期处于高水平状态。结论:异常的胶原产生、新生血管重建、炎症反应、再上皮化、肉芽形成可能是糖尿病鼠创面愈合减慢的组织病理学基础；皮肤组织MMP-9/TIMP-1的平衡性改变可能是这种组织病理学异常的重要原因之一。