沉默FOXQ1基因抑制肝细胞癌SMMC-7721细胞迁移侵袭能力

目的：探讨沉默叉头框蛋白Q1(forkhead box Q1,FOXQ1)基因后对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）SMMC-7721细胞迁移侵袭能力的影响及其机制。方法: 制备FOXQ1-shRNA、NC-shRNA重组慢病毒,将其感染到SMMC-7721细胞中;实验设干扰组、阴性对照组和空白组,用Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭能力;利用qRT-PCR和Western blotting法检测SMMC-7721细胞中FOXQ1、MMP-2和MMP-9mRNA和蛋白的表达。结果: 随着肝癌SMMC-7721细胞的迁移侵袭能力的增强,FOXQ1的表达逐渐增加;干扰组较阴性对照组与空白组FOXQ1表达水平降低\[（0.34±0.03）vs（0.89±007）和（0.84±0.05）,P<0.05\];沉默FOXQ1基因后,SMMC-7721细胞的迁移侵袭能力显著下降\[(9.67±1.15) vs （25.67±208）和(27.33±2.52),P<0.05\],MMP-2与MMP-9表达水平下降\[MMP-2：(0.35±0.04) vs (0.61±0.05)和(065±008);MMP-9： (0.40±0.05) vs (0.73±0.07)和(0.77±0.06),均P<0.05\]。结论: 沉默FOXQ1基因的表达能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的迁移、侵袭能力,其机制可能与MMP-2与MMP-9的表达下调有关。     

MYEOV对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨骨髓瘤过表达基因MYEOV在人胰腺癌细胞中的表达情况及其下调对胰腺癌SW1990细胞增殖和迁移能力的影响。方法 构建慢病毒载体GV248，转染胰腺癌细胞株SW1990获得SW1990-sh1和SW1990-sh2两个实验组，以空白质粒转染作为阴性对照组，未干预细胞为空白对照组。qPCR和Western blot检测转染前后MYEOV mRNA与蛋白的表达水平；CCK-8法测定细胞增殖能力；划痕实验分析细胞迁移能力。qPCR检测TGF-β/SMAD通路中相关SMADs mRNA表达水平。结果 与正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6相比，MYEOV mRNA在6株胰腺癌细胞中表达水平明显增加（P<0.01）；但仅在PANC-1和SW1990细胞系中检测到低水平MYEOV蛋白表达。实验组中MYEOV mRNA和蛋白表达均明显下调。与对照组相比，SW1990细胞的增殖和迁移能力明显下降（P<0.001）。下调MYEOV能降低TGF-β通路中SMAD1、SMAD4、SMAD5和SMAD9 mRNA表达（P<0.01），而SMAD2、SMAD3和SMAD7 mRNA仅在SW1990-sh2组中表达下调（P<0.01）。结论 MYEOV在胰腺癌细胞系中转录水平高，MYEOV可通过TGF-β/SMAD通路促进胰腺癌细胞的增殖和迁移能力。     

慢病毒介导的Notch1基因沉默抑制软骨肉瘤SW1353细胞的增殖和侵袭

目的:探讨慢病毒介导的Notch1基因沉默对软骨肉瘤SW1353细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制。方法:将SW1353细胞分为对照组（未感染）、空载体组（LV-NC-shRNA慢病毒感染）和沉默组（LV-Notch1-shRNA慢病毒感染），RT-PCR和Western blot检测慢病毒的感染效果，MTT法和克隆形成实验检测各组细胞的增殖活力，Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力，Western blot检测PCNA、MMP-2和p-AKT蛋白的表达。结果:LV-Notch1-shRNA慢病毒感染使SW1353细胞中Notch1 mRNA和Notch1、PCNA、MMP-2、p-AKT蛋白的表达均明显降低（P<0.05），显著抑制了SW1353细胞的增殖和侵袭能力（P<0.05）。结论:Notch1基因沉默可抑制软骨肉瘤SW1353细胞增殖和侵袭，其作用机制可能与下调PCNA、MMP-2和p-AKT蛋白表达有关。     

慢病毒介导的RNA干扰FOXC2表达对皮肤鳞状细胞癌A431细胞功能影响

目的:探讨慢病毒介导的RNA干扰叉头框C2（FOXC2）表达对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和免疫印迹法检测人正常永生化上皮Hecate细胞和皮肤鳞状细胞癌A431细胞中FOXC2 mRNA和蛋白的表达水平。将体外培养的A431细胞分为对照组（正常培养）、NC-shRNA组（LV-NC-shRNA慢病毒感染）和FOXC2-shRNA组（LV-FOXC2-shRNA慢病毒感染）,采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹法检测细胞中蛋白激酶B（AKT）、磷酸化（p）-AKT、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）蛋白表达水平。结果:与Hecate细胞比较,A431细胞中FOXC2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P＜0.05）。与对照组比较,NC-shRNA组细胞中FOXC2 mRNA表达水平、细胞存活率、侵袭数目、克隆形成率、细胞凋亡率和FOXC2、p-AKT、CyclinD1、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平差异均无统计学意义（P＞0.05）;与对照组或NC-shRNA组比较,FOXC2-shRNA组细胞中FOXC2 mRNA表达水平、细胞存活率、侵袭数目、克隆形成率和FOXC2、p-AKT、CyclinD1、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平均明显降低,而细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）。结论:沉默FOXC2表达可抑制皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、侵袭并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制AKT信号通路活化有关。     

TGF-β1可通过ERK信号通路调节胃癌细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的 探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）/丝裂原活化的蛋白激酶（MAPK）通路在调节胃癌细胞MMP-2和MMP-9表达中的作用。方法 以MKN45和BGC823胃癌细胞系为研究对象。明胶酶谱法检测TGF-β1对各细胞MMP-2和MMP-9表达的影响,Western蛋白印迹检测在TGF-β1作用下各细胞中MAPK（P38、JNK、ERK）的活化情况。用相应MAPK通路的特异抑制剂对TGF-β1调节各细胞MMP-2和MMP-9的表达进行阻断研究。结果 TGF-β1可上调MKN45和BGC823细胞MMP-2和MMP-9的表达;TGF-β1可诱导BGC823细胞P38、MKN45和BGC823细胞ERK及JNK的活化;ERK特异抑制剂PD98059可明显抑制TGF-β1诱导MKN45和BGC823细胞MMP-2和MMP-9的表达,但P38特异抑制剂SB203580和JNK特异抑制剂SP600125对TGF-β1诱导这两种细胞MMP-2和MMP-9的表达无明显影响。结论 TGF-β1可通过活化ERK信号通路上调MKN45和BGC823胃癌细胞 MMP-2和MMP-9的表达。     

miR-629对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

摘 要：［目的］ 探讨miR-629在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响。［方法］ 选取手术切除的胰腺癌组织及其癌旁组织各72例,采用RT-PCR检测miR-629的mRNA表达水平。构建NC-shRNA和miR-629-shRNA慢病毒稳定细胞系,采用CCK-8法检测miR-629对细胞增殖的影响;采用Transwell检测miR-629对细胞迁移的影响;采用双荧光素酶报告基因和Western blot验证miR-629与SIRT3的靶向关系。［结果］ 与癌旁组织（0.40±0.04）比较,胰腺癌组织中miR-629的mRNA相对表达水平（1.71±0.15）显著增加（t=3.901,P<0.001）;与NC-shRNA细胞比较,miR-629-shRNA细胞的增殖能力均显著下降（F=2.719,P<0.001）;与NC-shRNA细胞（140.22±19.37）比较,miR-629-shRNA细胞的迁移能力（63.91±7.44）显著下降（t=4.612,P<0.001）;荧光素酶报告基因显示,转染SIRT3-WT后,miR-629-shRNA细胞的相对荧光素酶活性（0.33±0.05）较NC-shRNA细胞（1.25±0.12）显著增加（t=4.109,P<0.001）;western blot结果表明miR-629-shRNA细胞中SIRT3的蛋白表达水平（0.44±0.03）较NC-shRNA细胞（1.31±0.11）明显增加（t=3.692,P<0.001）。［结论］ miR-629在胰腺癌组织中高表达,可能通过靶向下调SIRT3的表达促进胰腺癌细胞的增殖和迁移,有望为胰腺癌的临床诊疗提供新的思路。     

过表达lnc-TNFAIP3基因对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响

目的:应用慢病毒转染方法构建lnc-TNFAIP3基因过表达的胰腺癌细胞株,并观察其细胞行为学变化。方法:过表达质粒和慢病毒制备,转染进人胰腺癌细胞株PANC-1中,采用CCK-8、平板克隆实验检测其细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果:lnc-TNFAIP3基因过表达慢病毒成功转染PANC-1细胞,其细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱,细胞周期和细胞凋亡无显著差异,相关蛋白表达无显著差异。结论:转染过表达lnc-TNFAIP3基因的慢病毒构建的人胰腺癌细胞系PANC-1细胞行为发生了变化,提示lnc-TNFAIP3可能是一个有前景的胰腺癌治疗靶点,为lnc-TNFAIP3基因在胰腺癌中的研究提供了理论和实验数据。     

C-藻蓝蛋白抑制TGF-β1诱导的宫颈癌Caski细胞上皮-间充质转化

目的：探究C-藻蓝蛋白（C-phycocyanin,C-PC）对转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1,TGF-β1）诱导的 宫颈癌Caski细胞上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的影响。方法：根据处理方法不同将Caski细胞分为 3组即10 ng/ml TGF-β1处理组、 10 ng/ml TGF-β1+300 μg/ml C-PC共处理组和对照组（未加药处理）,处理24 h后观察细胞的形态 变化;采用划痕实验及Transwell实验分别检测TGF-β1和C-PC对Caski细胞迁移和侵袭的影响;Western blotting方法检测C-PC 对TGF-β1诱导的Caski细胞上皮表型标志蛋白E-cadherin、间质表型标志蛋白N-cadherin表达水平的影响;qPCR 法检测间质表 型相关锌指转录因子Snail、Zeb1、Twist mRNA的表达。结果：TGF-β1处理组Caski细胞失去原有的上皮表型的特征, 而TGF-β 1+C-PC共处理组细胞保持正常的上皮表型的特征;TGF-β1处理组Caski细胞的迁移率[（60.0±1.4） % vs（33.5±2.2） %、（40.0± 2.8） %, 均P<0.05]和侵袭穿膜细胞数[（108.2±6.2）vs（25.2±3.1）、（39.8±5.4）个, 均P<0.01]较共处理组和对照组显著升高;与对照 组相比,TGF-β1处理组Caski细胞中E-cadherin表达显著降低（P<0.05）,Twist、Snail、Zeb1的mRNA表达水平显著升高（P<0.01）, 而加入C-PC共处理可逆转上述改变（P<0.05或P<0.01）,同时显著降低N-cadherin的蛋白表达水平（均P<0.05）。结论：C-PC处 理能够抑制TGF-β1诱导的Caski细胞侵袭转移能力进而影响EMT过程,其机制可能与C-PC处理降低Twist、Snail、Zeb1的 mRNA表达有关。     

RNA干扰ART1表达对小鼠结肠癌细胞增殖的影响及其机制探讨

目的:通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰精氨酸特异性腺苷二磷酸核糖基化转移酶1(arginine-specific adenosinediphosphate-ribosyltransferase 1,ART1)基因的表达,研究沉默ART1基因对小鼠结肠癌CT26细胞增殖的影响及可能的机制。方法:细胞免疫荧光法检测ART1水平,以证实CT26细胞中有ART1的表达。用ART1-shRNA和阴性对照shRNA(negative control-shRNA,NC-shRNA)慢病毒感染CT26细胞后,分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中ART1mRNA和ART1、RhoA、c-myc及c-fos蛋白的表达;CCK-8(cell countingkit-8)法分析各组细胞增殖情况。结果:CT26细胞中有ART1的表达。ART1-shRNA和NC-shRNA慢病毒成功感染细胞,获得稳定低表达ART1基因的CT26细胞株。与感染NC-shRNA慢病毒和未感染的CT26细胞相比,感染ART1-shRNA慢病毒的CT26细胞中ART1mRNA表达水平及ART1、RhoA、c-myc和c-fos的蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),而细胞增殖抑制率明显升高(P<0.01)。结论:干扰ART1表达可抑制CT26细胞增殖,提示ART1在肿瘤生长、增殖过程中发挥重要作用,其机制可能与ART1基因沉默后RhoA及其下游因子c-myc和c-fos的表达被抑制有关。     

TGF-β1上调LSD1表达激活ERK/NF-κB p65通路促进胃癌增殖的实验研究

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)上调赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)表达激活下游细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)/核因子κBp65(NF-κB p65)信号通路促进胃癌细胞增殖的作用机制。方法利用外源性人重组TGF-β1作用于人胃癌细胞系MGC-803、SGC-7901、AGS和正常胃黏膜细胞系GES-1。MTT法检测各组细胞增殖活性。Western blotting法检测LSD1蛋白表达。将MGC-803细胞分为5组:空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+TCP(LDS1抑制剂)组、TGF-β1+SIS3(SMAD3抑制剂)组、TGF-β1+SCH772984(ERK1/2抑制剂)组。Western blotting法检测p-SMAD2、p-SMAD3、p-ERK1/2、p-p65蛋白和核p65蛋白表达。采用免疫荧光染色法检测p65在细胞核中的定位。结果TGF-β1可促进MGC-803、SGC-7901、AGS细胞的增殖活性,且上调LSD1蛋白表达,呈浓度和时间依赖性。与TGF-β1组比较,TGF-β1+TCP组MGC-803细胞LSD1蛋白表达下调,增殖抑制率降低(P<0.05)。与空白对照组比较,TGF-β1组MGC-803细胞LSD1、p-SMAD2、p-SMAD3、p-ERK1/2、p-p65和核蛋白p65蛋白表达量升高(P<0.05)。与TGF-β1组比较,TGF-β1+SIS3组LSD1蛋白表达无差异(P>0.05),TGF-β1+SCH772984组LSD1蛋白表达明显降低(P<0.05),p65蛋白核定位量也减少。结论LSD1在TGF-β1促进胃癌细胞增殖中发挥着重要作用,可能与TGF-β1上调LSD1表达与激活下游ERK/NF-κB p65信号通路,促进p65核转移有关。     

TGF-β1促进卵巢癌细胞转移机制的研究

目的探讨转化生长因子-β1促进卵巢癌细胞转移的机制。方法应用RT—PCR、WesternBlot和明胶酶实验等方法检测了卵巢癌细胞HO-8910和HO-8910PM中TGF—B1对MMP-2、MMP-9表达及分泌的调节作用;通过免疫组化方法检测了121例标本（包括31例正常卵巢组织、45例卵巢癌卵巢原发灶组织和45例卵巢癌转移灶组织）中TGF—B1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况。结果结果显示TGF-β1主要上调了低转移细胞系HO-8910中MMP-2和MMP-9的表达和分泌;免疫组化结果表明卵巢癌原发灶组织中MMP-2的表达高于正常卵巢组织（P〈0．05）;TGF-β1、MMP-2和MMP-9在卵巢癌转移灶中的表达均明显高于原发灶（P〈0．01）;且TGF-β1与MMP-2和MMP-9的表达均存在相关性（P〈0．05）。结论TGF-β1主要通过上调MMP-2和MMP-9的表达和分泌促进了卵巢癌细胞的转移。     

慢病毒载体介导 CDK2 基因沉默对黑素瘤B16-F1细胞生物学行为的影响

目的:探讨由慢病毒载体pUL介导的pUL-CDK2-shRNA3 (CDK2-shRNA)沉默CDK2基因后对小鼠黑素瘤B16-F1细胞恶性生物学行为的影响,初步探索其作用机制.方法:利用重组慢病毒载体CDK2-shRNA转染B16-F1细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,DAPI染色、AnnexinV-FITC/PI双染流式术检测细胞凋亡情况,流式术检测细胞周期变化,细胞黏附实验、transweU小室实验分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞周期信号通路上RB蛋白(成视网膜细胞瘤蛋白)、pRB蛋白、细胞周期相关转录因子E2F1及侵袭迁移相关蛋白基质金属酶-2(MMP-2)、基质金属酶-9(MMP-9)的表达水平.结果:与空白对照组和阴性对照组相比,CDK2-shRNA组细胞相对增殖率、细胞黏附率、细胞侵袭和迁移能力均显著下降(均P＜0.05).细胞凋亡率显著增加(均P＜0.05);G1期细胞显著增加而S期和G2期显著降低(P＜0.05).细胞周期相关蛋白pRB、E2F1明显降低而RB显著升高(P＜0.05),细胞侵袭和迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9明显降低(P＜0.05).结论:慢病毒载体pUL介导的shRNA沉默CDK2基因对B16-F1细胞恶性生物学行为有显著的抑制作用,其机制主要与细胞周期和细胞侵袭迁移相关蛋白表达变化有关.     

E-cadherin/β-catenin影响胰腺癌PANC-1细胞糖酵解效应的实验研究

背景与目的:钙黏附蛋白E(E-cadherin)低表达与癌细胞的高侵袭转移潜能密切相关,但其与癌细胞葡萄糖代谢的关系鲜见报道。该研究旨在探讨E-cadherin与胰腺癌PANC-1细胞糖酵解效应的关系。方法:通过转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)引起E-cadherin低表达、敲减与E-cadherin相互作用的β-连环蛋白(β-catenin)的基因以及过表达E-cadherin等方法,检测PANC-1细胞通过糖酵解效应吸收葡萄糖和生成乳酸能力的变化以及糖酵解通路中关键基因的表达。结果:E-cadherin可以负向调控PANC-1细胞的糖酵解效应,抑制肿瘤细胞吸收葡萄糖和分泌乳酸的能力(P<0.05)。而与其相互作用的β-catenin可以正向调控PANC-1细胞的糖酵解效应,促进葡萄糖的吸收和乳酸的生成,结果差异有统计学意义(P<0.05)。同时糖酵解效应的关键调控分子去乙酰化酶3(sirtuin 3,SIRT3)也可以引起PANC-1细胞中E-cadherin表达的改变。结论:PANC-1细胞中E-cadherin低表达可以引起葡萄糖代谢模式的转化,促进PANC-1细胞的糖酵解效应,同时通过导入糖酵解效应的关键调控分子SIRT3也可以引起E-cadherin表达的改变。这些结果为研究胰腺癌侵袭转移过程中糖代谢模式的转化提供了重要线索,为通过改变糖酵解效应进而影响胰腺癌的侵袭转移潜能提供了干预模式。     

CTEN通过TGF-β1促进非小细胞肺癌细胞紫杉醇耐药的作用及机制研究

目的:探讨CTEN通过TGF-β1促进非小细胞肺癌（NSCLC）细胞紫杉醇耐药的作用和分子机制。方法:采用逐步增加剂量间歇作用的方法诱导非小细胞肺癌紫杉醇耐药细胞系并命名为A549/R,采用定量PCR和Western blotting检测耐药细胞和亲本细胞中CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白的表达,应用Lipofectamine 2000分别将CTEN高表达质粒pcmv-CTEN及其对照质粒pcmv转染至非小细胞肺癌A549细胞,分别为高表达组和对照组,分别用定量PCR和Western blotting检测CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白水平的变化;MTT法检测A549细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。应用Lipofectamine 2000分别将CTEN干扰质粒siCTEN及其对照siNC转染至紫杉醇耐药细胞系A549/R细胞,分别为干扰组和对照组,分别用定量PCR和Western blotting检测CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白水平的变化;MTT法检测A549/R细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。应用Lipofectamine 2000分别将TGF-β1干扰质粒siTGF-β1及其对照质粒siNC转染至非小细胞肺癌A549细胞,分别为干扰组和对照组,分别检测两组细胞中TGF-β1 mRNA及蛋白水平的表达情况,然后再分别用Lipofectamine 2000将CTEN高表达质粒pcmv-CTEN转染入两组细胞,MTT法检测A549细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。结果:成功构建在5 μg/mL紫杉醇中稳定生长的非小细胞肺癌耐药细胞系A549/R。定量PCR和Western blotting显示,CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白在紫杉醇耐药细胞系A549/R中的表达明显高于在其亲本细胞系A549中的表达;与对照组相比,高表达CTEN组的A549细胞中TGF-β1表达上升,细胞对紫杉醇的敏感性降低,细胞增殖增强;与对照组相比,低表达CTEN组的A549/R细胞中TGF-β1表达降低,细胞对紫杉醇的敏感性升高,细胞增殖减弱;在A549细胞中低表达TGF-β1后再过表达CTEN,其促进紫杉醇耐药及细胞增殖的作用也明显减弱。结论:CTEN具有促进非小细胞肺癌A549的紫杉醇耐药,促进细胞增殖的作用,其发生机制可能与上调TGF-β1的表达有关。     

雷公藤红素对人胰腺癌细胞PANC-1增殖、侵袭和迁移的抑制作用

背景与目的：雷公藤红素（celastrol）是雷公藤的主要活性成分，现代研究发现其具有广泛的抗癌活性，对胰腺癌细胞凋亡有一定的促进作用。该研究旨在探讨celastrol对胰腺癌细胞PANC-1增殖、侵袭和迁移的作用。方法：将PANC-1细胞分为PANC-1组、celastrol（5 μmol/L）组、celastrol（10 μmol/L）组和celastrol（20 μmol/L）组，分别用0、5、10和20 μmol/L的celastrol处理PANC-1细胞，细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）检测细胞增殖倍数，Transwell检测各组PANC-1细胞的侵袭能力，划痕实验检测各组细胞迁移能力。蛋白质印迹法（Western blot）检测Ki-67、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）的蛋白表达水平。结果：与PANC-1组比较，celastrol（5 μmol/L）组、celastrol（10 μmol/L）组和celastrol（20 μmol/L）组细胞增殖倍数明显降低，细胞增殖标记蛋白Ki-67的蛋白表达水平与PANC-1组比较也明显降低；同时，celastrol（5 μmol/L）组、celastrol（10 μmol/L）组和celastrol（20 μmol/L）组侵袭细胞数与PANC-1组相比明显减少；此外，与PANC-1组比较，celastrol（5 μmol/L）组、celastrol（10 μmol/L）组和celastrol（20 μmol/L）组划痕闭合率显著降低，VEGF和MMP-9的蛋白表达水平也显著低于PANC-1组。结论：Celastrol能抑制人胰腺癌细胞PANC-1增殖、侵袭及迁移。     

脑胶质瘤相关癌基因1对人胰腺癌PANC-1细胞增殖的影响

目的:探讨脑胶质瘤相关癌基因1(glioma-associated oncogene1,GLI1)对人胰腺癌PANC-1细胞增殖的影响。方法:构建靶向GLI1基因的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)慢病毒重组载体pLVTHM-GLI1-shRNA(以空载体pLVTHM-GFP为对照),经包装后感染胰腺癌PANC-1细胞,应用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法检测各组细胞中GLI1、bcl-2、bcl-xl和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA和蛋白的表达;CCK8(cell counting kit-8)法分析各组细胞的生长情况。结果:成功构建了稳定低表达GLI1的GLI1-shRNA-PANC-1细胞,与PANC-1细胞和GFP-PANC-1细胞比较,GLI1-shRNA-PANC-1细胞中GLI1mRNA和蛋白表达水平分别下调了(82.1±3.2)和(76.7±2.2)(P<0.01),bcl-2mRNA和蛋白表达分别下调了(49.7±5.4)、(43.5±9.4)(P<0.01);而blc-xl和PCNAmRNA和蛋白表达水平无明显变化。GLI1-shRNA-PANC-1细胞的增殖抑制率明显高于GFP-PANC-1、PANC-1细胞(P<0.05)。结论:干扰GLI1基因的表达可抑制人胰腺癌PANC-1细胞的增殖,其机制可能与下调bcl-2的表达有关。     

葡萄糖转运蛋白-1通过Wnt/β-catenin通路促进骨肉瘤MG63 细胞迁移

[摘要] 目的:探讨葡萄糖转运蛋白-1（glucose transporter-1,Glut-1）通过Wnt/β-catenin 通路促进骨肉瘤细胞MG63 的迁移及其机制。方法: 构建针对Glut-1 基因的RNA 干扰重组腺病毒（Ad-Glut-siRNA）及含对照序列的重组腺病毒（Ad-GFP）,感染MG63 细胞沉默Glut-1 基因表达;通过Transwell小室法检测Blank组、Ad-AFP组、Ad-Glut-siRNA 组、GSK-3 抑制剂AZD2858 组细胞的迁移能力;应用免疫荧光实验检测各组细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）的表达变化以及β-连环蛋白（β-catenin）的进核情况,通过Western blotting 实验检测各组细胞的MMP-2、MMP-9 表达变化以及Blank 组、Ad-AFP组、Ad-Glut-siRNA组细胞FZD7、β-catenin、Dsh 蛋白表达变化。结果: 沉默Glut-1 基因后,MG63 细胞迁移能力明显下降（P<0.05）;再给于AZD2858 处理后,细胞的迁移能力恢复（P<0.05）。与Blank 组和Ad-GFP组细胞相比,Ad-Glut-siRNA 组MG63 细胞E-cadherin 表达显著升高（P<0.05）,vimentin、MMP-2、MMP-9 以及FZD7、β-catenin、Dsh蛋白表达显著降低（均P<0.05）;与Ad-Glut-siRNA组相比,AZD2858 组细胞E-cadherin 表达显著降低（P<0.05）,vimentin、MMP-2 和MMP-9 表达显著升高（P<0.05）。结论: Glut-1 基因高表达与骨肉瘤MG63 细胞侵袭转移具有密切联系,其可能机制在于Glut-1 高表达后激活Wnt/β-catenin 通路使EMT相关蛋白Ecadherin表达降低、vimentin以及MMP-2、MMP-9含量上升,从而促进MG63 细胞的转移。     

miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为

目的：探讨miR-192-5p靶向E盒锌指结合同源框2(ZEB2)对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响及其作用机制。方法：利用TCGA数据库数据分析miR-192-5p和ZEB2在胰腺癌组织中的表达及两者的相关性。采用qPCR法和WB法分别检测人正常胰腺上皮细胞HPNE和胰腺癌PANC-1细胞中miR-192-5p和ZEB2的表达水平。利用脂质体转染技术转染PANC-1细胞,实验分为miR-192-5p mimic组、Mimic NC组、miR-192-5p inhibitor组、Inhibitor NC组、Mimic NC+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1-ZEB2组。CCK-8法、克隆形成、划痕愈合、Transwell实验分别检测转染PANC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。qPCR法、WB法、双重免疫荧光实验检测PANC-1细胞中ZEB2、E-cadherin、vimentin的表达水平。通过生物信息学网站预测miR-192-5p的靶基因,并利用双...     

高强度聚焦超声波通过调控miR-1297/PTEN分子轴抑制胰腺癌细胞的增殖与迁移

目的: 探讨高强度聚焦超声波（high intensity focused ultrasound,HIFU）通过miR-1297/PTEN分子轴抑制胰腺癌细胞增殖和迁移的作用机制。方法: HIFU 作用于体外培养的胰腺癌PANC-1 细胞1、2 和3 s,采用CCK-8 法、Transwell 小室法和Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术分别检测HIFU对PANC-1 细胞增殖、迁移和凋亡的影响;用qPCR和Western blotting 法分别检测HIFU 对PANC-1 细胞miR-1297 和PTEN表达的影响,用双荧光素酶报告基因验证miR-1297 与PTEN的靶向关系。通过转染miR-1297 inhibitor 和PTEN-siRNA,采用Western blotting 法检测HIFU对Akt 磷酸化的影响。结果: 随着HIFU作用时间的延长,对胰腺癌PANC-1 细胞增殖和迁移能力的抑制作用不断增强,并促进细胞凋亡（均P<0.01）,抑制PANC-1细胞中miR-1297的表达和促进PTEN的表达（均P<0.05或P<0.01）;同时,miR-1297 靶向作用PTEN并下调其表达水平。HIFU显著抑制Akt 的磷酸化水平（P<0.05 或P<0.01）。结论: HIFU通过下调miR-1297抑制PTEN的表达并阻断Akt 信号通路,进而抑制胰腺癌发生发展的进程。