肝癌中bcl-2和bax基因的表达及其关系

目的：为了探讨巨细胞凋亡基因在肝癌发生中的作用。方法：利用免疫组化ＡＢＣ法,检测了肝癌中细胞凋亡抑制基因ｂｃｌ－２,促细胞凋亡基因ｂａｘ的表达。结果：ｂｃｌ－２以及ｂａｘ的个体阳性率均比正常对照组有显著性提高;肝癌组中ｂｃｌ－２和ｂａｘ的表达呈正相关,但无显著性。结论：ｂｃｌ－２表达抑制细胞凋亡,导致肝癌发生;ｂａｘ表达促进细胞凋亡,使肿瘤维持在高殖状态 。     

UV-C诱导的体外凋亡SMC内Bcl-2蛋白表达的研究

目的 观察经ＵＶ－Ｃ照射后的凋亡ＳＭＣ内Ｂｃｌ－２蛋白表达的情况。方法 应用组织贴块法进行体外ＳＭＣ培养，ＳＰ免疫组织化学技术和图像分析技术检测经ＵＶ－Ｃ照射后的ＳＭＣ内Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果 ＵＶ－Ｃ照射体外ＳＭＣ后，细胞出现典型的凋亡形态学和生化指标的改变；凋亡ＳＭＣ胞浆内Ｂｃｌ－２表达下降和出现胞浆内Ｂｃｌ－２的迁移和再分布入核。结论 ＵＶ－Ｃ照射可引起体外ＳＭＣ凋亡，且Ｂｃｌ－２可能参     

抗凋亡基因bcl—2在EB病毒相关性鼻咽癌中的表达

目的：探讨抗凋亡基因ｂｃｌ－２与鼻咽癌发生及与ＥＢ病毒感染的关系。方法：应用ＰＣＲ技术和免疫组化ＳＰ法检测４６例鼻咽癌组织中ＥＢ病毒ＤＮＡ和抗凋亡基因ｂｃｌ－２的表达。结果：３７例ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性病例中３１例出现ｂｃｌ－２表达８３．８％，９例ＥＢ病毒ＤＮＡ阴性病例吸７例ｂｃｌ－２阳性反应，两组间无明显差异。结论：ｂｃｌ－２基因在鼻咽癌中的异常高表达与ＥＢ病毒的感染无明显关系。     

细胞凋亡调控因素有关基因的研究

抑制细胞凋亡的基因主要是Ｂｃｌ－２基因和Ｂｃｌ－２相关基因（Ｂｃｌ－ＸＬ，ＭＣＬ－１），其编码的蛋白质能抑制细胞凋亡和延长细胞寿命，其抑细胞凋亡作用以Ｂｃｌ－２最为重要。促进细胞凋亡基因或因素较多，主要有Ｂｃｌ－２相关基因（Ｂａｘ，Ｂｃｌ－Ｘｓ）、ｐ５３肿瘤抑制基因、ｃ－ｍｙｃ原癌基因、ＴＧＦ－β、Ｆａｓ抗原及其配体，其中Ｂａｘ基因、ｐ５３基因与Ｂｃｌ－２基因在细胞凋亡的调控作用方面密切相关     

食管癌变过程中p53、c-myc、bcl-2表达及其与细胞凋亡的关系

目的：探讨食管癌变过程中肿瘤抑制基因ｐ５３和癌基因ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２的变化及其与细胞凋亡的关系。方法：采用免疫组化法（ＡＢＣ）检测２７９例食管粘膜活检组织中ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２的表达以及细胞凋亡的变化。结果：从食管正常上皮到基底细胞增生、间变和癌，ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２免疫阳性表达率及细胞凋亡发生率和细胞凋亡指数（ＡＩ）均呈升高趋势，而且在同一阶段病变，ｐ５３和ｃ－ｍｙｃ阳性表达时凋亡指数高于其阴性表达，而ｂｃｌ－２阳性表达时凋亡指数低于其阴性表达。结论：在食管癌变过程中可能有多种肿瘤抑制基因和癌基因参与，细胞凋亡在食管癌变过程中可能有重要的生物学意义。     

IL—6在诱导M1白血病细胞分化后凋亡中的应用

目的 探讨ＩＬ－６能否诱导Ｍ１小鼠急性髓样白血病细胞凋亡及其分子机制。方法 透射电镜观察细胞形态判断有无凋亡发生：ＲＴ－ＰＣＲ及狭缝杂交分析ｂｃｌ－２家族成员表达水平的改变。结果：ＩＬ－６诱导Ｍ１细胞向巨噬细胞方向分化后，Ｍ１细胞发生凋亡；ｂｃｌ－２，ｂｃｌ－ＸＬ在ＩＬ－６诱导下表达下调，ｂａｘ表达上调，结论ＩＬ－６诱导Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ比例改变，使Ｍ１细胞分化后凋亡。     

文摘

活化巨噬细胞中ｂｃｌ－ＸＬ的生理学作用［英］／ＯｋａｄａＳ…／／ＪＩｍｍｕｎｏｌ．－１９９８，１６０．－２５９０～２５９６目的：ｂｃｌ－２家族基因参与凋亡的调控，细胞中Ｂｃｌ－２或ｂｃｌ－ＸＬ与ｂａｘ之间的表达比例可决定其存活或凋亡。已有资料表明，Ｎ...     

人神经母细胞瘤中bcl-2基因表达与肿瘤细胞凋亡间的关系及p16基因的表达

目的探讨人神经母细胞瘤中ｂｃｌ－２基因表达状况及与细胞凋亡的关系，以及ｐ１６基因的表达况状。方法应用原位杂交和免疫组化技术检测神经母细胞瘤中ｂｃｌ－２及ｐ１６两种基因的表达，并采用凋亡细胞原位检测方法对神经母细胞瘤组织切片中凋亡细胞数进行检测。结果原位杂交检测发现，２０例人神经母细胞瘤中，ｂｃｌ－２和ｐ１６基因表达阳性率均为９５％；免疫组化检测发现ｂｃｌ－２和ｐ１６蛋白表达阳性率均为１００％。χ２检验表明两种方法检测阳性率差异无显著性。凋亡细胞原位检测结果显示，肿瘤组织凋亡细胞数量随ｂｃｌ－２基因表达增强而减少。结论人神经母细胞瘤中ｂｃｌ－２基因有较普遍的表达，直接影响神经母细胞瘤中凋亡细胞的数量，ｐ１６基因未见明确的表达缺失。     

非小细胞肺癌中凋亡抑制基因Bcl-2的转录表达研究

目的 探讨Ｂｃｌ－２这度转录表达在人非小细胞肺癌发生、发展中的作用。方法 采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术和非放射性地高辛标记检测系统,检测了１３７份不同部位、不同性质的人肺组织中的Ｂｃｌ－２基因的ｍＲＮＡ表达。结果 肺组织中Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ的表达有从良性病变组织、远离癌灶的肺组织、癌旁组织到癌灶组织逐渐增高的趋势;其中,肺癌癌灶组织中Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ的表达较肺良性病变组织和远离癌灶的肺组     

实验性隐睾诱导小鼠生精细胞凋亡的研究

目的 研究手术隐睾所致成年小鼠生殖细胞凋亡及相关调节因子ｂｃｌ－２、ｂａｘ蛋白在曲细精管中的定位、变化。方法 以末端脱氧核糖核酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测凋亡的生殖细胞,生物素－抗生物素蛋白ＤＣＳ体系间接免疫荧光法检测Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ蛋白在曲细精管中的定位、分布。结果 隐睾术后３ｄ,手术侧睾丸重量及细胞凋亡数量与对侧地无明显区别。而６￣１５ｄ,睾丸重量明显减轻,凋亡细胞     

小鼠腹腔巨噬细胞凋亡时线粒体的改变及其调控

目的：研究小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中线粒体和磷酸烟酰胺腺嘌呤（NADPH）氧化酶活性的变化以及信使分子对线粒体膜电位,细胞内活性氧（reactive oxgen species,ORS)和凋亡的影响。方法：激光扫描共聚焦显微术、流术细胞术和荧光标记技术等。结果：1地塞米松诱导巨噬细胞快速凋亡;2例粒体膜电位快速去极化,NADPH氧化酶活性剧降,ROS快速减少,ROS清除剂促进凋亡,3－蛋白激酶C（protein kinaseC,PKC)促进凋亡,ROS急剧减少、线粒体膜去极化;环腺苷酸（cAMP）抑制凋亡、ROS急剧减少,线粒体膜去极化;环鸟苷酸（cGMP),酪氨酸蛋白激酶（TPK）略抑制凋亡,不影响ROS变化,但影响线粒体膜去极化,结论1：地塞米松处理使线粒体内NADPH氧化酶活性剧降,生成ROS迅速减少从而促进巨噬细胞凋亡,2信使分子影响线粒休生成ROS的变化以及线粒体膜去极化从而影响巨噬细胞凋亡,提示线粒体变化,尤其是ROS和膜电位的变化影响巨噬细胞凋亡。     

地塞米松诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中[Ca~(2 )]i的变化

目的　研究地塞米松诱导凋亡小鼠腹腔巨噬细胞 [Ca2 ]i的变化及其对凋亡的影响以及信使分子对凋亡和 [Ca2 ]i变化的影响。方法　激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记术。结果　 1 凋亡巨噬细胞内fluo 3荧光强度逐渐增强。胞内钙库受体抑制剂 ,尤其是Ca2 内流阻断剂抑制细胞内fluo 3荧光强度变化 ,同时使细胞凋亡率降低 ;2 .staurosporine和DcAMP显著降低巨噬细胞凋亡率并明显抑制fluo 3荧光强度改变。genistein和亚甲蓝稍降低巨噬细胞凋亡率 ,并降低fluo 3荧光强度升高幅度。结论　 1 胞外Ca2 内流和内源性Ca2 释放 ,主要是胞外Ca2 内流使[Ca2 ]i逐渐升高并促进巨噬细胞凋亡 ;2 .PKC促进 [Ca2 ]i升高和巨噬细胞凋亡。cAMP抑制[Ca2 ]i升高和巨噬细胞凋亡。cGMP、TPK降低 [Ca2 ]i升高幅度并稍抑制巨噬细胞凋亡。结果提示 ,[Ca2 ]i是信使分子调控巨噬细胞凋亡的主要靶点。     

Apamin inhibits THP-1-derived macrophage apoptosis via mitochondria-related apoptotic pathway

The development of atherosclerotic lesions is mainly due to macrophage death. The oxidative stresses of monocytes/macrophages play a vital role in the initiation and amplification of atherosclerosis. Apamin, a component of bee venom, exerts an anti-inflammatory effect, and selectively inhibits the Ca(2+)-activated K(+) channels. The mechanisms involved in the inhibition of macrophage apoptosis have been fully elucidated. We induced oxidized low-density lipoprotein (oxLDL) in THP-1-derived macrophage and studied the effect of apamin on intercellular lipid levels, mitochondria-related apoptotic pathway and numbers of apoptotic cells. Oil-red O staining indicates that the inhibition of apamin in the condition significantly prevents intracellular lipid deposition. Treatment with apamin significantly decreased the apoptotic macrophages by decreasing the expression of pro-apoptotic genes Bax, caspase-3 and PARP protein levels, as well as through increasing expression of anti-apoptotic genes Bcl-2 and Bcl-xL protein levels in the absence and presence of oxLDL. In vivo, with apamin treatment reduced apoptotic cells death by TUNEL staining. These results indicate that apamin plays an important role in monocyte/macrophage apoptotic processing, which may provide a potential drug for preventing atherosclerosis.     

缺血后处理通过抑制线粒体途径减轻缺血/再灌注诱导的肠黏膜细胞凋亡

目的：探讨缺血后处理减轻缺血/再灌注损伤肠黏膜细胞凋亡的机制。方法:SD大鼠随机分为4组（n=8）：假手术（sham）组、缺血/再灌注（I/R）组、缺血预处理（IPreC）组、缺血后处理（IPostC）组;应用透射电子显微镜和激光共聚焦扫描显微镜分别观测各组大鼠肠黏膜细胞线粒体形态结构改变和线粒体跨膜电位的变化。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法和免疫组织化学方法分别检测各组大鼠肠黏膜细胞凋亡发生情况以及肠黏膜细胞bcl-2、bax mRNA及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果:与I/R组相比,IPostC组和IPreC组大鼠肠黏膜细胞线粒体形态结构改变明显减轻,线粒体跨膜电位显著升高（均P<0.05）,肠黏膜细胞凋亡率明显降低（均P<0.05）,肠黏膜细胞bcl-2 mRNA和Bcl-2蛋白表达水平显著上升,bax mRNA和Bax蛋白表达水平明显下降（均P<0.05）,IPostC组和IPreC组相比各项指标差异无显著差异（均P>0.05）。结论:缺血后处理可能通过抑制线粒体途径减轻缺血/再灌注诱导肠黏膜细胞的凋亡。     

姜黄素诱导人食管癌EC9706细胞凋亡过程中核磷蛋白的表达与定位变化

目的探讨核磷蛋白NPM在癌细胞诱导凋亡过程中在细胞内、细胞核基质上的定位与表达变化,以及NPM与凋亡调控相关蛋白的关系,探索其在凋亡调控中的作用。方法在姜黄素诱导人食管癌EC9706细胞凋亡的基础上,以亚细胞蛋白质组学方法分析NPM在核基质中的存在与变化,并以免疫印迹法杂交实验进行确证;激光扫描共焦显微镜观察NPM在EC9706细胞凋亡过程中的定位与变化,以及NPM与Bax、Bcl-2等基因产物的共定位关系。结果 NPM存在于EC9706细胞核基质蛋白组分中,并在姜黄素处理后表达下调。NPM在EC9706细胞凋亡过程中发生显著的胞质-核之间的穿梭定位变化,并与Bax、Bcl-2等蛋白具有共定位关系,且共定位区域发生了变化。结论 NPM是一种核基质结合蛋白,在EC9706细胞凋亡中的表达与定位变化,及其与凋亡调控蛋白的共定位关系提示,它在EC9706细胞凋亡调控中具有重要作用。     

Requirement for ERK activation in sinomenine-induced apoptosis of macrophages

Sinomenine (SN), an immunnosuppressive compound derived from the Chinese medicinal plant Sinomenium acutum, has been used to treat autoimmune diseases effectively. Previous studies show SN can inhibit lymphocytes proliferation and macrophage production of pro-inflammatory factors. However, little is known about the mechanisms by which SN inhibits macrophage functions. In this study, we demonstrated that SN could inhibit the proliferation of murine macrophages RAW264.7 by inducing apoptosis in a dose- and time-dependent manner. We found activation of extracellular signal-regulated protein kinase (ERK) in SN-treated macrophages, and requirement for ERK activation in SN-induced apoptosis of macrophages. Contemporarily, the expression of p27/KIP1, proapoptotic factor Bax increased, and expression of Bcl-2 decreased, which might cooperate to induce apoptosis. Inhibiting ERK activation reduced the increased expression of p27 and Bax, but had no effect on the decreased expression of Bcl-2, suggesting the involvement of ERK activation in the SN-induced increased expression of p27 and Bax. These results demonstrated that SN could induce apoptosis of macrophages through activation of ERK, and ERK activation might partially involve in the increased expression of p27 and Bax in apoptotic macrophages. Therefore, induction of macrophage apoptosis through ERK activation may be one of mechanisms by which SN exhibits its immunosuppressive function.     

氯化钴预处理减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡

目的　研究氯化钴 (CoCl2 )预处理对大鼠海马神经元缺氧 复氧后凋亡的影响及其机制。　方法　用CoCl2 处理原代培养大鼠海马神经元 ,并使其暴露于无氧环境。用TUNEL染色法和激光共聚焦显微镜分别检测缺氧后细胞凋亡率以及细胞线粒体膜电位和胞内游离钙。　结果　CoCl2 预处理明显减少海马神经元在缺氧 复氧后的凋亡数 ,并对急性缺氧期间海马神经元的细胞内Ca2 +浓度和线粒体膜电位具有稳定作用。　结论　CoCl2 预处理对急性缺氧引起的海马神经元凋亡可能具有保护作用 ,其机制可能与其稳定缺氧时细胞内Ca2 +浓度和线粒体膜电位有关。     

冠心病患者来源HDL对小鼠腹腔巨噬细胞脂质沉积及凋亡的影响

目的:探讨冠心病(CAD)患者来源的高密度脂蛋白(HDL)对小鼠腹腔巨噬细胞脂质沉积及凋亡的影响。方法:分离提取健康人群、稳定型冠心病(SCAD)及急性心肌梗死(AMI)患者的HDL,并观察其对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞内脂质沉积及细胞凋亡的影响。采用油红O检测细胞内脂质沉积,用DCFH-DA检测活性氧簇(ROS)的水平,annexin V/PI检测巨噬细胞凋亡率,Western blot检测巨噬细胞ATP结合盒转运体(ABC)A1、ABCG1、Bcl-2和Bax的表达。结果:ox-LDL处理后巨噬细胞脂质沉积增加, ABCA1和ABCG1表达上调(P<0.05);与单纯ox-LDL处理组相比,联合健康人HDL(HDL_healthy)处理后巨噬细胞脂质沉积减少,ABCA1和ABCG1表达上调(P<0.05),而联合SCAD患者HDL(HDL_SCAD)或AMI患者HDL(HDL_AMI)处理后巨噬细胞脂质沉积进一步增加,ABCA1和ABCG1表达下调(P<0.05);与HDL_...     

Bcl-2 delays macrophage engulfment of human B cells induced to undergo apoptosis

The capacity to be recognized and engulfed by phagocytes is an important characteristic of cells dying by apoptosis. Phagocytosis of apoptotic cells occurs rapidly in vivo, probably prior to plasma membrane breakdown. While the molecular mechanisms mediating phagocytosis of apoptotic cells are beginning to be defined, little is yet known of the relationship between the cell-death program itself and the surface changes on the dying cells that signal for engulfment. Here, we investigate to what extent the apoptosis repressor Bcl-2 can modulate the recognition and phagocytosis of human B cells exposed to triggers of apoptosis. Burkitt lymphoma (BL)-derived, Bcl-2⁻ B cells were induced into apoptosis either by the Ca²⁺-ionophore ionomycin or by the inhibitor of protein synthesis cycloheximide. Apoptotic BL cells, but not viable BL cells, were recognized and phagocytosed by monocyte-derived macrophages. bcl-2-transfected BL populations showed a reduced capacity both to undergo apoptosis in response to these inducing agents and to interact with macrophages. Like their Bcl-2⁻ counterparts, Bcl-2⁺ BL cells interacted with macrophages only after activation of their apoptotic program as assessed by changes in nuclear morphology. These results demonstrate not only that continued protein synthesis in B cells undergoing apoptosis is not essential for their recognition by macrophages, but also that macrophage recognition of apoptotic B cells cannot be uncoupled from the cell-death program that is controlled by Bcl-2. In this respect, the behavior of B cells contrasts markedly with that of neutrophils in which Bcl-2 has been reported to inhibit apoptosis without affecting phagocytic clearance (Lagasse and Weissman, J. Exp. Med. 1994. 179: 1047).     

hDaxx基因转染抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡

利用真核表达载体pEGFP/hDaxx在巨噬细胞中高表达hDaxx ,研究hDaxx对巨噬细胞凋亡的影响。将pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,Westernblot鉴定Daxx的表达 ,荧光显微镜观察GFP hDaxx融合蛋白在细胞内的表达及定位 ,用地塞米松诱导巨噬细胞凋亡 ,细胞用Giemsa染色后 ,观察细胞形态变化并计算巨噬细胞凋亡率。结果显示 :GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中成功表达并定位于细胞核 ,且GFP hDaxx融合蛋白不影响Daxx的特异性 ;地塞米松对照组与pEGFP对照组凋亡率无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,而pEGFP/hDaxx组凋亡率显著降低 (P <0 0 1) ,即hDaxx即时高表达降低地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡率。Daxx为调控蛋白 ,GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中表达并定位于细胞核 ,且hDaxx即时高表达可抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡。