EGCG通过下调Bcl-2、NF-κB(p65)表达,活化Caspase-3诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对人胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用,探讨EGCG诱导移植瘤细胞凋亡作用的分子机制. 方法:建立人胃腺癌(SGC7901)细胞裸鼠异种移植瘤模型,用不同剂量的EGCG进行治疗,并设对照;采用TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡情况,Western blot法检测肿瘤组织凋亡相关基因NF-κB(p65)、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况. 结果:EGCG对移植瘤生长有明显抑制作用;TUNEL法发现EGCG导致移植瘤内细胞发生凋亡;Western blot分析表明EGCG能下调NF-κB(p65)蛋白的表达,促使Bax/Bcl-2蛋白表达的比值增高,并且可以促进Caspase-3的活化. 结论:EGCG对人胃癌细胞裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,并能诱导移植瘤细胞凋亡.其机制可能与通过NF-κB(p65)的下调,促使Bax/Bcl-2比值增高,进而导致Caspase-3的活化而诱导细胞发生凋亡相关.     

大豆异黄酮诱导人食管癌裸鼠移植瘤细胞凋亡

[目的]研究大豆异黄酮诱导裸鼠EC-7906移植瘤凋亡的机制.[方法]建立人食管癌EC-7906裸鼠移植瘤模型,采用不同剂量的大豆异黄酮进行瘤旁注射,并设生理盐水和二甲亚砜(DMSO)两个对照组,用透射电镜和TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况,免疫组织化学法和RT-PCR法检测肿瘤组织的凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况.[结果]透射电镜和TUNEL法发现大豆异黄酮导致移植瘤内大量细胞发生凋亡;免疫组织化学法发现大豆异黄酮注射组瘤组织的bcl-2蛋白表达阳性率降低,bax蛋白表达阳性率明显提高;RT-PCR法发现大豆异黄酮注射组的bcl-2 mRNA条带密度随剂量的增大而递减,bax mRNA条带密度递增,[结论]大豆异黄酮对人食管癌EC-7906裸鼠移植瘤具有抑制作用,通过下调bcl2的表达和上调bax的表达而诱导食管癌移植瘤细胞发生凋亡.     

皮肤鳞状细胞癌NF-κB p65表达的临床价值

目的：研究NF-κB p65蛋白在皮肤鳞状细胞癌中表达的临床诊断价值。方法选择30例皮肤鳞状细胞癌患者以及10例健康体检者。比较两组患者的NF-κB p65蛋白阳性表达率,分析NF-κB p65蛋白的表达与皮肤鳞状细胞癌患者的临床病理特征之间的关系。结果皮肤鳞状细胞癌患者体内的NF-κB p65蛋白阳性表达率高于正常组织,差异有统计学意义（P﹤0.05）。皮肤鳞状细胞癌组织中NF-κB p65蛋白阳性表达率与侵袭深度、分化程度、临床分期、淋巴结转移、远端转移相关,差异有统计学意义（（P﹤0.05）;与性别、年龄、肿瘤大小无关,差异无统计学意义（（P﹥0.05）。正常皮肤组织鳞状上皮细胞核基本未见p65表达,胞质p65表达阳性;癌前病变中,病变鳞状上皮细胞细胞核见散在p65弱表达,胞质弱阳性;高度恶性鳞状细胞癌组织病变鳞状上皮细胞细胞核可见较多p65表达,胞质呈弥漫性阳性,血管内皮细胞胞核表达,胞质散在弱阳性。结论 NF-κB p65蛋白参与皮肤鳞状细胞癌的形成和发展,随患者病情的进展,NF-κB p65蛋白的阳性表达率越高。     

全反式维甲酸对EC9706荷瘤裸鼠抑瘤作用的实验研究

目的：观察全反式维甲酸的体内抗肿瘤作用，探讨其体内抑瘤的作用机制。方法：采用裸鼠EC9706人食管癌细胞实体瘤模型进行体内抑瘤实验研究，应用全反式维甲酸10d后处死裸鼠，观察荷瘤裸鼠的肿瘤生长情况，测定肿瘤生长抑制率；HE染色对肿瘤组织进行细胞形态学观察，TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡，免疫组织化学法检测凋亡相关基因bax及bcl-2蛋白的表达情况。结果：全反式维甲酸对裸鼠EC9706人食管癌细胞实体瘤生长具有明显的抑制作用，抑瘤率达60％以上。组织学观察及TUNEL检测结果显示，肿瘤组织中散在凋亡细胞和凋亡小体。免疫组织化学检测结果显示，凋亡相关基因bax蛋白表达增加，bcl-2蛋白表达下降。结论：全反式维甲酸具有较强的体内抗肿瘤作用，作用机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

Pim-3表达下调对舌鳞状细胞癌细胞凋亡的影响及其分子机制研究

目的:研究Pim-3表达下调对舌鳞状细胞癌细胞凋亡的影响,并探讨其凋亡的相关分子机制。方法:将Pim-3siRNA和对照siRNA分别转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,另设未处理组。利用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分析转染前后3组细胞中Pim-3mRNA和蛋白的表达,利用CCK-8试剂分析转染前后细胞增殖能力的变化,并进一步采用FCM法检测Pim-3表达下调对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的影响。最后,利用蛋白质印迹法分析转染前后细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad、pBad112、pBad136和pBad155表达的变化。结果:Pim-3siRNA能有效下调舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中Pim-3mRNA和蛋白的表达。Pim-3表达的下调能明显抑制Tca8113细胞的增殖并诱导其凋亡。此外,Pim-3表达下调能显著上调Bax蛋白的表达和下调Bcl-2和pBad112的表达(P<0.05),但不改变总的Bad蛋白和其他Bad磷酸化形式(pBad136和pBad155)蛋白的表达。结论:Pim-3表达下调诱导的细胞凋亡可能与Bax表达水平上升及Bcl-2和pBad112表达水平下降密切相关,因而Pim-3有望成为舌鳞状细胞癌治疗的分子靶点。     

内皮抑素抑制SKOV3细胞生长及其在裸鼠皮下移植瘤中的作用机制

目的:探讨内皮抑素对卵巢癌SKOV3细胞及其荷瘤鼠卵巢癌组织的生长作用及机制。方法:MTT法观测内皮抑素对体外SKOV3细胞的抑制作用,透射电镜观察细胞凋亡、免疫细胞化学检测SKOV3;细胞中bcl-2和bax蛋白表达;将SKOV3细胞移植至裸鼠皮下,观察内皮抑素对皮下移植瘤生长的影响;TUNEL和电镜法观察肿瘤细胞的凋亡,免疫组织化学和RT-PCR法检测瘤组织中bcl-2和bax的表达。结果:内皮抑素具有体外抑制SKOV3细胞增殖的作用(P<0．01);能诱导SKOV3细胞凋亡,但对bcl-2和bax的表达无明显影响。内皮以抑素能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0．05);其中bcl-2的表达低于对照组,而bax表达无明显改变。结论:内皮抑素具有抑制SKOV3细胞及皮下移植瘤生长的作用,其机制可能与诱发细胞凋亡和调节bcl-2／bax表达相关。     

白藜芦醇对胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖和凋亡作用的实验研究

目的:研究白藜芦醇(resveratrol, Res)影响人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的机制.方法:使用不同浓度Res处理SGC-7901细胞不同时间后,采用MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率;FCM和TUNEL法检测分析细胞周期和细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测细胞中bcl-2、bax、caspase-3和Fas蛋白的表达;RT-PCR检测Fas、bcl-2、bax、caspase-3 mRNA的表达.结果:Res对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用随着Res作用时间的延长和浓度的增加而明显增强(P<0.01,P<0.05),同时能诱导其发生凋亡(P<0.01);Res(150 μmol/L)能明显上调SGC-7901细胞中bax、caspase-3、Fas mRNA及其蛋白的表达,下调bcl-2 mRNA及其蛋白的表达.结论:Res抑制SGC-7901细胞的增殖、诱导细胞凋亡呈浓度、时间依赖性;这可能与Res上调肿瘤细胞Fas、bax和caspase-3的表达及下调bcl-2的表达有关.     

多西紫杉醇联合曲格列酮对人前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:探讨多西紫杉醇联合曲格列酮(troglitazone,TGZ)对人前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用,并初步探索其作用机制.方法:建立人前列腺癌裸鼠移植瘤模型,观察多西紫杉醇联合TGZ对移植瘤生长的抑制作用,FCM法检测移植瘤细胞的凋亡率,免疫组织化学法检测移植瘤组织中bcl-2和bax蛋白的表达情况.结果:与对照组比较, 多西紫杉醇联合TGZ可明显抑制人前列腺癌裸鼠移植瘤的生长,肿瘤体积和质量明显下降,细胞凋亡率明显上升;免疫组织化学法检测结果显示,移植瘤组织中bax蛋白的表达明显增强,bcl-2蛋白的表达明显减弱.结论:多西紫杉醇联合TGZ对前列腺癌有一定的抑制作用,其作用机制可能是通过上调促凋亡蛋白bax的表达及下调抗凋亡蛋白bcl-2的表达,导致肿瘤细胞加速凋亡而实现的.     

POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞中的信号调控

目的:旨在探讨原癌基因POKemon和核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB) p65在肝癌细胞中的信号调控作用.方法:采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法分别检测POKemon、NF-κB p65 mRNA和蛋白在肝癌细胞株HepG2和SMMC7721及人胚胎肝细胞LO2中的表达情况;随后应用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)法依次分别抑制POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞中的表达,观察二者在肝癌细胞中的变化,并应用FCM法检测对肝癌细胞凋亡的影响.结果:POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞HepG2和SMMC7721中的表达量明显高于人胚胎肝细胞LO2;特异性针对POKemon基因的siRNA抑制POKemon的表达后,NF-κB p65在HepG2和SMMC7721细胞中的表达量也明显下降,转染前后分别为2.12±0.14vs 1.37±0.11和2.08±0.16vs 1.35±0.13,差异有统计学意义(P＜0.05),且肝癌细胞凋亡明显增加分别为(5.07±0.46)％vs (39.65±3.75)％和(5.71±0.83)％vs (33.21±3.66)％,差异有统计学意义(P＜0.05);特异性针对NF-κB基因的siRNA抑制NF-κB p65的表达后,POKemon在HepG2和SMMC7721细胞中的表达则无明显变化,其表达量转染前后分别为1.86±0.12vs 1.90±0.13和1.91±0.11 vs 1.85±0.11,差异无统计学意义(P＞0.05),但明显提高HepG2和SMMC7721细胞的凋亡率,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:原癌基因POKemon可通过调控NF-κB p65的表达而阻遏肿瘤细胞凋亡,促进肝癌的发生、发展.     

靶向p65基因的miRNA对人三阴性乳腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

背景与目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)是乳腺癌中预后较差的一个亚型,如何防治TNBC的快速生长成为近几年临床研究的热点之一。NF-κB信号通路在肿瘤发生、发展的各个环节中扮演重要角色,有望成为肿瘤基因治疗新的方向。本研究通过建立人TNBC裸鼠移植瘤模型,观察靶向沉默NF-κB p65亚基的微小RNA(microRNA,miRNA)治疗对TNBC裸鼠移植瘤生长及凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:建立人TNBC细胞株MDA-MB-231裸鼠移植瘤动物模型,瘤旁注射p65miRNA质粒(p65miRNA组),同时以注射Neg-miRNA质粒和PBS作为Neg-miRNA对照组和空白对照组。监测肿瘤生长变化,测量肿瘤质量。流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测肿瘤细胞凋亡的变化。免疫组化法检测肿瘤组织中p65的表达。Western blot法检测肿瘤组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果:经p65miRNA处理后,裸鼠肿瘤的生长受到明显抑制。FCM结果表明,p65miRNA组肿瘤细胞凋亡率为(31.08±3.52)%,明显高于Neg-miRNA组(5.76±1.02)%和空白对照组(4.29±0.86)%(P<0.05)。此外,p65miRNA组裸鼠肿瘤组织p65和Bcl-2的蛋白表达明显下调,Bax的蛋白表达显著上调。结论:p65miRNA能抑制人TNBC裸鼠皮下移植瘤的生长,且在体内可诱导肿瘤细胞凋亡。     

bcl-2与NF-κB／p65在弥漫性大B细胞淋巴瘤不同亚型中表达的意义

 目的　探讨bcl-2与NF-κB／p65蛋白在弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）不同亚型中的表达及其意义。方法　用免疫组织化学方法检测DLBCL患者CD10、bcl-6、MUM-1蛋白的表达,以Hans等的分型原则将其划分为GCB和非GCB／ABC亚型,同时标记bcl-2与NF-κB／p65抗体,比较bcl-2与NF-κB／p65蛋白在GCB和ABC亚型中的表达情况并分析二者与DLBCL两种主要亚型生存率的相关性。结果　bcl-2与NF-κB／p65蛋白在DLBCL中的表达率为67.1 %和77.1 %, 二者表达呈正相关;GCB亚型中bcl-2与NF-κB／p65的表达率分别为52.0 %和56.0 %,ABC亚型中bcl-2与NF-κB／p65蛋白的表达率分别为75.6 %和88.9 %,ABC亚型中bcl-2与NF-κB／p65的表达率高于GCB亚型;在GCB亚型中,bcl-2与NF-κB／p65蛋白的表达与总生存率无显著的相关性,而在ABC亚型DLBCL中,bcl-2与NF-κB／p65蛋白的表达与生存率密切相关。结论　仅在ABC亚型DLBCL中,bcl-2与NF-κB／p65蛋白的表达是影响预后的重要不利因素,因此,需在DLBCL亚分型的基础上评估bcl-2与NF-κB／p65蛋白表达的预后意义。     

RNAi抑制NF-KB通路相关基因对喉鳞癌凋亡及转移的影响

目的:用RNA干涉方法探讨NF-κB通路参与喉癌发生、发展的可能机制.方法:RT-PCR、West-em Blot检测喉鳞癌组织中NF-κB通路中相关基因表达,RNA干涉方法抑制P65,P50表达,流式细胞仪,TUNEL方法检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭力.结果:36例喉鳞癌组织中21例p65 mRNA表达上调(58.33%)高于癌旁组织(P=0.012),13例出现p50mRNA表达上调(36.11%),但与癌旁组织比较无显著差异(P=0.602).喉鳞癌组织的p65蛋白表达明显较癌旁组织增强(P=0.044),而p50蛋白表达无显著差异.特异siRNA转染Hep2细胞明显抑制p50,p65基因表达,该作用可持续10天.RNAi抑制p65基因表达使Hep2细胞凋亡率增加,在转染后第7天最高达29.89%,与对照组比较升高超过10倍(P=0.020);同时使Hep2细胞侵袭力明显下降(P=0.003),而干涉p50基因对细胞凋亡及细胞侵袭性影响不明显.结论:RNAi抑制p65表达诱导Hep2细胞凋亡、抑制细胞侵袭力,提示抑制p65表达与常规治疗结合可能成为改善喉癌预后的选择.     

白藜芦醇抑制ls174t细胞生长及其在裸鼠皮下移植瘤中的作用机制

目的 探讨白藜芦醇对结肠癌ls174t细胞及其鼠移植瘤组织生长的作用及机制.方法 二苯基溴化四氮唑蓝(MTY)法检测白藜芦醇对体外ls174t细胞的抑制作用,透射电镜观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的改变,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2和bax mRNA的表达,Western blot法检测bcl-2和bax蛋白的表达.将ls174t细胞移植至裸鼠皮下,观察白藜芦醇对皮下移植瘤生长的影响;RT-PCR法检测瘤组织中bcl-2和bax mRNA的表达,Western blot法检测瘤组织中bcl-2和bax蛋白的表达.结果 (1)白藜芦醇具有体外抑制ls174t细胞增殖的作用,25、50、100、200、400 μmol/L的白藜芦醇作用ls174t细胞24 h,抑制率分别为1.0%、9.1%、17.4%、27.8%和66.5%;作用48 h,抑制率分别为3.6%、13.7%、30.2%、58.4%和86.1%;作用72 h,抑制率分别为18.1%、33.0%、48.6%、61.2%和89.4%,差异有统计学意义(P<0.01).不同浓度的白藜芦醇作用ls174t细胞后,随自藜芦醇浓度的增加,bcl-2 mRNA和蛋白表达降低,baxmRNA和蛋白表达增强.流式细胞仪检测显示,白藜芦醇能诱导ls174t细胞的凋亡,使细胞周期阻滞于S期.(2)白藜芦醇可抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,最大抑制率为47.9%.200 mg/kg白藜芦醇治疗组和800 mg/kg白藜芦醇治疗组的裸鼠皮下移植瘤重量分别为(4.10±0.18)g和(3.05±0.35)g,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).白藜芦醇可使裸鼠肿瘤组织中bcl-2 mRNA和蛋白表达降低,而bax mRNA和蛋白表达增强.结论 白藜芦醇具有抑制ls174T细胞和皮下移植瘤生长的作用,其机制可能与诱发细胞凋亡和调节bcl-2、bax表达有关.     

靶向 siRNA 沉默 NF -κB/p65对肺腺癌细胞株 A549增殖与凋亡的影响

目的：研究运用 RNA 干扰（RNA interference,RNAi）技术抑制 NF -κB/ p65基因的表达对人肺腺癌细胞株 A5492细胞增殖、周期及凋亡的影响,探讨 NF -κB/ p65基因在肺腺癌发生发展中的作用。方法：利用阳离子脂质体 LipofectamineTM2000将人 NF -κB/ p65的小干扰 RNA 转染入肺腺癌细胞株 A549中。运用 real time - PCR 和 Western blot 技术检测 A549细胞内 NF -κB/ p65、增殖相关基因 Cyclin D1和凋亡相关基因 Bcl-2、Bax 的 mRNA 的转录水平和蛋白的表达情况,MTT 法检测细胞的增殖活力,显微镜下观察细胞的生长情况。结果：NF -κB/ p65 siRNA 能有效地抑制 A549细胞中 NF -κB / p65基因在 mRNA 水平上的表达（P﹤0.001）,同时下调 Cyclin D1和 Bcl -2的表达（均 P ﹤0.01）。上调 Bax 表达（P ﹤0.001）;蛋白表达也具同样趋势。MTT 实验证明 p65 siRNA 转染组中细胞增殖减慢;显微镜镜下观察显示,细胞生长减慢,凋亡形态改变明显。结论：体外实验初步证明 NF -κB/ p65基因在肺腺癌细胞株 A549增殖分化与凋亡方面扮演重要角色,通过沉默其表达可抑制肺腺癌细胞株 A549增殖并诱导其凋亡。进一步证实 NF -κB/ p65对 Cyclin D1、Bcl -2、Bax 具有调控作用,他们共同参与了肺腺癌的发生发展过程。     

雷帕霉素对食管鳞癌裸鼠移植瘤生长及mTOR/p70S6K信号通路的影响

目的:探讨雷帕霉素(rapamycin, RAPA)对荷人食管鳞癌裸鼠移植瘤生长及mTOR/p70S6K信号通路的影响.方法:建立人食管鳞癌细胞株EC9706的裸鼠移植瘤模型,观察经RAPA和RAPA联合顺铂治疗后荷瘤裸鼠的肿瘤生长情况;应用TUNEL、RT-PCR及Western 印迹法观察肿瘤组织中的细胞凋亡、mTOR和p70S6K mRNA以及mTOR、p70S6K和p-p70S6K的蛋白表达.结果:RAPA和顺铂均使肿瘤生长速度减慢(P<0.05),并且2者联合应用效果更好(P<0.01);TUNEL检测发现,RAPA在体内能引起EC9706细胞的凋亡(P<0.05);RT-PCR和Western 印迹法检测结果表明,RAPA在体内降低了mTOR、p70S6K mRNA和mTOR、p-p70S6K的蛋白表达,但可提高p70S6K的蛋白表达水平.结论:RAPA在体内通过抑制mTOR/p70S6K信号通路的活性促进细胞凋亡,从而抑制人食管鳞癌细胞EC9706裸鼠移植瘤的生长.     

冬凌草甲素联合地塞米松对多发性骨髓瘤U266细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨冬凌草甲素联合地塞米松对多发性骨髓瘤 U266细胞增殖与凋亡的影响及其相关分子机制。方法培养 U266细胞至对数生长期,分别采用高、中、低浓度的地塞米松、冬凌草甲素单独或联合处理 U266细胞,以二甲基亚砜（DMSO）处理为对照,于处理后24、48、72 h 利用 CCK-8法检测细胞增殖情况;应用 Annexin V-FITC／PI 标记及流式细胞术检测细胞凋亡;利用实时荧光定量 PCR 法检测细胞 Notch1、NF-κB／p65、bcl-2基因表达水平的变化;Westernblot 法分析 Notch1、cleavedNotch1、NF-κB／p65、bcl-2蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,不同剂量的药物处理组均能有效抑制 U266细胞的增殖并促进其凋亡（P＜0.05）,两种药物联合应用对 U266细胞的抑制增殖和诱导凋亡具有协同作用（P＜0.05）。 U266细胞经地塞米松处理后其 NF-κB／p65、bcl-2 mRNA 和蛋白表达水平均有所下调（P＜0.05）,冬凌草甲素处理组及联合处理组 U266细胞 Notch1、cleaved Notch1、NF-κB／p65、bcl-2蛋白表达水平均显著下调（P＜0.05）。结论冬凌草甲素联合地塞米松对 U266细胞增殖的抑制作用及凋亡诱导作用显著增强,其作用机制可能与抑制 Notch1信号通路有关。     

双歧杆菌对实验性大肠癌化bcl-2及bax基因表达的影响

目的 通过观察大肠癌裸鼠移植瘤bcl-2及bax基因的蛋白表达水平,探讨双歧杆菌的抑瘤途径及机制.方法 采用免疫组化SP法检测了40只裸鼠大肠癌移植瘤bcl-2及bax基因的蛋白表达率及表达强度.结果 双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤bcl-2蛋白表达率及阳性细胞密度均低于肿瘤对照组,bax基因的表达情况则相反.结论 双歧杆菌可使大肠癌裸鼠移植瘤的bcl-2基因表达下调,bax基因表达增强,最终诱导肿瘤细胞凋亡,实现其抗瘤目的.     

组蛋白去乙酰化酶在食管鳞癌中的表达及其表达下调对EC9706细胞生物特性的影响

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase2,HDAC2)在食管鳞癌组织中的表达,并研究其表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,以及分析其相关的分子机制。方法:采用免疫组织化学法检测食管鳞癌组织中HDAC2蛋白的表达。将特异性针对HDAC2基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和对照siRNA分别转染食管鳞癌EC9706细胞,实验分3组:未处理组、对照siRNA组和HDAC2siRNA组。蛋白质印迹法检测各组EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达。CCK-8计数法检测转染前后细胞的增殖情况。FCM法检测细胞周期和细胞凋亡的变化。蛋白质印迹法检测与细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达变化。结果:HDAC2蛋白在食管鳞癌组织中表达的阳性率为79.71%,显著高于癌旁不典型增生组织的51.11%和正常食管黏膜组织的23.19%,3者之间差异具有统计学意义(χ2=44.121,P=0.000);此外,HDAC2蛋白表达与患者的年龄和性别无关(P均>0.05),但是与组织学分级、浸润深度、TNM分期和淋巴结转移均显著相关(P均<0.05)。HDAC2siRNA能有效下调食管鳞癌EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达,明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖,促使细胞周期静止在G0/G1期,并诱导细胞凋亡。蛋白质印迹法检测结果显示,HDAC2表达下调能明显提高p21和凋亡相关蛋白bax的表达量,同时降低细胞周期蛋白cyclin D1和bcl-2的表达量。结论:HDAC2可能在食管鳞癌的发生、发展中具有重要作用,其表达下调介导的食管鳞癌细胞增殖抑制、细胞周期静止以及细胞凋亡可能与p21、bax的表达升高和cyclin D1、bcl-2表达降低密切相关。     

NF-κB在TNF-α诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)诱导的宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法培养宫颈癌Hela细胞,不同处理因素按指定时间作用后,RT-PCR检测NF-κBp65mRNA的表达,免疫印迹和免疫组化检测NF-κB p65活性的变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果静息状态下,在Hela细胞中NF-κB p65具有微弱活性水平,TNF-α诱导Hela细胞NF-κB活化与其诱导细胞凋亡明显相关,NF-κB p65单抗能显著抑制TNF-α(10ng/mL)诱导的Hela细胞NF-κB活化,抑制率为49.69%,并增强其诱导Hela细胞凋亡的作用,凋亡增加率为57.52%。结论TNF-α在诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时活化NF-κB。NF-κB p65单抗可通过抑制NF-κB活化以增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。