疏风宣肺解毒方抗病毒的实验研究

目的通过现代实验学方法对疏风宣肺解毒方体内外抗流感病毒的实验观察,探讨疏风宣肺解毒方抗流感病毒的实验依据。方法接种流感病毒FM1株于MDCK细胞（狗肾细胞）,观察疏风宣肺解毒方体外抗流感病毒的作用;小鼠鼻腔内接种含流感病毒的鸡胚尿囊液,观察疏风宣肺解毒方对病毒感染小鼠死亡率、存活时间、肺指数和肺病变程度的影响。结果疏风宣肺解毒方中、高剂量组对感染流感病毒MDCK细胞有一定的保护作用;疏风宣肺解毒方中、高剂量组与流感模型组比较,在降低病毒感染小鼠死亡率、延长平均存活天数方面差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）,并能明显改善病毒感染小鼠的肺指数和肺病变程度（P〈0.05或P〈0.01）。结论疏风宣肺解毒方具有良好的抗病毒作用。     

银翘散提取物对小鼠流感病毒肺炎治疗作用的实验研究

目的观察银翘散对流感病毒（IV）感染小鼠肺组织的影响。方法以流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株（FM1）感染小鼠为模型,采用银翘散大、中、小三个剂量灌胃治疗。感染第5天对小鼠进行肺组织病理学观察和测定肺组织IV血凝滴度测定并计算肺指数。结果银翘散各给药组肺组织IV血凝滴度和肺指数明显降低,与病毒感染模型组比较有显著性差异（P〈0.05）。银翘散大剂量组与利巴韦林组比较无显著性差异（P〉0.05）;银翘散各治疗组间比较,大、小剂量组差异显著（P〈0.05）。结论银翘散大剂量组能有效改善病理性肺组织,降低肺组织IV血凝滴度和肺指数,与利巴韦林对照组比较,其对IV小鼠肺炎的改善作用相当。     

3种治法对流感病毒感染小鼠肺指数及肺指数抑制率的影响

目的;通过观察清热解毒、宣肺化痰、养阴清肺3种治法对流感病毒感染小鼠肺指数、肺指数抑制率的影响,进一步验证3种治法治疗流感病毒性肺炎作用的有效性。方法;选择3种治法的中药复方代表,并设利巴韦林为阳性对照,观察其对对流感病毒感染小鼠肺指数、肺指数抑制率的影响。结果;3种治法均能降低流感病毒感染小鼠的肺指数,与模型组比较,有显著性差异（P<0.05,P<0.01）。结论;3种治法均能减轻流感病毒感染小鼠引起的肺病变。      

清肺解毒方对流感病毒感染小鼠的保护作用

目的研究清肺解毒方对流感病毒感染小鼠的保护作用及对病毒性肺炎的治疗作用。方法小鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、阳性对照组,以及清肺解毒方5、2.5和1.25g/kg剂量组,采用滴鼻感染流感病毒,造模2 h后灌胃给药,连续6 d后继续饲养至感染后14d,统计小鼠死亡率、平均存活时间、死亡保护率和生命延长率,观察清肺解毒方对流感病毒感染小鼠的保护作用;参照以上实验方法于造模后第3天和第6天取肺,以肺指数、肺脏病毒滴度和肺组织病毒载量为评价指标,观察清肺解毒方对病毒性肺炎小鼠的治疗作用。结果与模型组相比,清肺解毒方2.5和1.25g/kg剂量组死亡率显著降低,死亡保护率明显提高(P<0.01),存活时间明显延长,生命延长率明显增加(P<0.01);造模后第3天和第6天小鼠的肺指数、肺脏病毒滴度及肺脏病毒载量显著降低(P<0.01)。结论清肺解毒方2.5和1.25 g/kg剂量组具有明显的抗流感作用。     

臭灵丹抗甲1型流感病毒FM1株感染小鼠的药效学研究

【目的】观察臭灵丹抑制甲1型流感病毒FM1株感染的体内药效。【方法】采用小鼠流感病毒性肺炎模型,通过检测小鼠体质量变化和肺指数、肺组织病理变化确认药物的体内抗病毒药效。【结果】病毒对照组的肺指数较正常对照组显著升高(P<0.001),表明该模型复制成功;臭灵丹高、中、低剂量组均未能有效缓解流感病毒感染小鼠的体质量下降(P>0.05);臭灵丹高、中、低剂量组可显著降低流感病毒感染小鼠的肺指数(P<0.05)。小鼠肺组织病理检查结果显示:臭灵丹低剂量组可以缓解肺组织病理性炎症。【结论】臭灵丹对甲1型流感病毒FM1株感染小鼠的病毒性肺炎具有一定的抑制作用。     

胚芽滋养胶囊对流感病毒肺炎小鼠肺病理的影响

目的:观察胚芽滋养胶囊对流感病毒肺炎小鼠肺病理的影响.方法:以流感病毒FM1株滴鼻感染小鼠,致病毒性肺炎模型.应用胚芽滋养胶囊进行治疗,以病毒唑注射液为对照.观察小鼠肺大体和组织学病变情况.结果:流感病毒感染导致小鼠肺病毒性肺炎病变,病毒唑和胚芽滋养胶囊治疗可以减轻肺病变.结论:胚芽滋养胶囊对小鼠流感病毒所致的肺病变有一定的抑制作用.     

宣肺止嗽方镇咳化痰作用及其有关机理研究

目的：探讨宣肺止嗽方的镇咳化痰作用及其机理。方法：采用氨水引咳法、酚红排泌法观察宣肺止嗽方对小鼠的镇咳、化痰作用;烟熏法复制慢支模型,观察该方对慢支小鼠肺组织病理形态的影响。结果：宣肺止嗽方可延长小鼠咳嗽潜伏期,高剂量作用显著（P〈0.05）;抑制小鼠咳嗽次数,高、中剂量效果明显（P〈0.01）,低剂量无统计学差异,呈现一定的量效关系;明显增加小鼠气管酚红排泌量（P〈0.01）,亦表现出量效关系;减少慢支模型小鼠肺组织病理形态改变。结论：宣肺止嗽方具有镇咳化痰及减轻慢支模型小鼠肺部炎症改变的作用,提示该方镇咳化痰的作用机理可能与缓解气管炎症有关。     

毒热平注射液对FM1流感病毒感染小鼠的抗病毒作用研究

目的 观察毒热平注射液对FM1流感病毒致小鼠感染的抗病毒作用.方法 采用FM1流感病毒感染小鼠作为模型,测定其对感染小鼠死亡保护率及平均生活日的影响;测定其对感染小鼠体重及肺指数的影响;通过对肺脏标本进行HE染色,光镜观察感染小鼠肺部不同的病理改变;测定其对感染小鼠肺脏匀浆中的病毒滴度的影响,观察其直接杀伤病毒的能力.结果 在观察的时间内,毒热平注射液中剂量组与模型组比较,可显著延长其存活率(P<0.05);与模型组相比,毒热平可显著延长动物平均生存时间,中剂量组(P<0.05),大剂量组(P<0.05);显著降低小鼠的肺指数, 大剂量组(P<0.01),中剂量组(P<0.001);毒热平中、小剂量组体重较模型组有显著性差异(P<0.05);对肺脏进行大体及光镜下观察,均可发现模型组病变最为严重,毒热平不同剂量组对病毒感染小鼠的肺脏病变均有不同程度的改善作用;毒热平注射液中剂量组可明显降低肺匀浆中病毒滴度,与模型组比较(P<0.05).结论 毒热平注射液在体内可有效抑制病毒增殖,减轻受试动物肺部病变,降低肺指数,提高存活率,从而发挥抗病毒治疗的作用,为其临床应用提供了实验依据.     

痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠肺损伤及血凝滴度影响的研究

目的观察痰热清注射液对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)感染小鼠肺组织损伤及肺组织匀浆病毒血凝滴度的影响.方法采用流感病毒FM1感染小鼠模型,设立正常对照组、模型组、利巴韦林阳性药物组、痰热清注射液大、中、小剂量组.观察各组小鼠肺指数、肺匀浆的血凝滴度、肺组织的病理改变.结果与模型组比较,痰热清注射液大、中、小剂量组小鼠肺组织匀浆病毒血凝滴度明显降低(P＜0.05);痰热清注射液大、中剂量组小鼠肺组织病理形态学明显改善;与模型组比较,痰热清注射液大中小剂量组小鼠肺指数显著降低(P＜0.05).结论痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠肺匀浆的血凝滴度具有明显的降低作用,对其所致肺损伤具有明显的改善作用.     

抗病毒口服液药效学研究

目的：通过动物实验研究抗病毒口服液药效学。方法：细菌内毒素致家兔产生发热模型后不同时间体温波动情况、对流感病毒所致小鼠肺部病变和病毒增殖的影响、测定小鼠最大耐受量。结果：以0．193g/kg抗病毒口服液ig后,家兔体温变化与0．6105g/kg双黄连口服液组比较在0．5h即有差异;与模型对照组比较,高、中、低剂量组均有明显差异,且能维持4h降低体温。小鼠感染病毒后口服本品与模型对照组比较能显著降低动物死亡率（P＜0．05）,平均生活日数延长。但死亡保护率低于病毒唑。本品及病毒唑组,肺病变程度和肺指数均显著低于模型对照组（P＜0．05）,但其治疗效果不及病毒唑。小鼠最大耐受量不及病毒唑。小鼠最大耐受量倍数为人用量的125倍。结论：抗病毒口服液能明显降低由细菌内毒素所致的发热,具有清热解毒作用;能有效抑制病毒性肺部感染;安全无毒。     

银芩抗感微丸对流感病毒PR8株感染小鼠的治疗作用

目的:研究银芩抗感微丸对甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠的治疗作用。方法:在滴鼻感染正常小鼠建立流感病毒肺感染模型的基础上,检测小鼠的肺指数与肺病毒载量。结果:银芩抗感微丸各剂量组均可明显降低甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠的肺指数与肺病毒载量。结论:银芩抗感微丸对甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠具有一定的治疗和保护作用。     

季节性流感疫苗对小鼠感染H7N9禽流感病毒的保护效力

目的 评价季节性流感裂解疫苗对流感病毒H7N9的免疫保护效力。方法 用我国2012～2013年度季节性流感裂解疫苗,以腹腔注射方式免疫BALB/c小鼠,并设PBS免疫模型组,末次免疫14 d后以5 LD₅₀ A/Anhui/1（H7N9）进行攻试验。感染后观察记录小鼠临床表现,体重变化,并分别于第2天和第4天每组处死3只小鼠,取肺组织和鼻甲骨测病毒滴度和载量。结果 感染后疫苗与模型组小鼠体重下降明显,疫苗组存活率为10%,模型组全部死亡。感染后第4天疫苗组鼻甲骨滴度显著低于模型组。血凝抑制试验及中和实验表明免疫小鼠血清无中和H7N9病毒抗体。结论 季节性流感疫苗在小鼠中对于H7N9流感病毒感染无明显保护作用。     

龟肌肽对甲型流感病毒感染鼠模型疗效的观察

目的：观察龟肌肽注射液对甲型流感病毒感染鼠模型的疗效。方法：用甲型流感病毒PR－8株（H3N2）建立NIH小鼠呼吸道病毒感染模型，其中50只作病毒毒力试验，另70只随机分成5组，每组14只，前3组分别用浓度5mg/ml和2．5mg/ml的龟肌肽、三氮唑核苷作尾静脉注射，第4组为感染对照组，第5组为不感染病毒的空白对照组，观察各组14d内的每天死亡数。结果：高浓度龟肌肽组和低浓度龟肌肽组的存活率分别为64．3％和42．9％，三氮唑核苷对照组的存活率为85．7％，感染对照组小鼠7d内均死亡，而空白对照组小鼠均存活14d以上。高浓度龟肌肽存活率接近三氮唑核苷对照组（χ^2=1.71,P＞0．05）。结论：龟肌肽具有体内抗甲型流感病毒感染的作用，高浓度的龟肌肽疗效较佳。     

金柴抗病毒胶囊防治甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠肺炎的实验研究

目的观察金柴抗病毒胶囊对甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠肺炎的防治作用,为进一步临床应用提供依据。方法采用滴鼻感染正常小鼠和免疫低下小鼠建立流感病毒感染肺炎模型,分别采用治疗和预防性给药,观察给药后各组对小鼠肺指数、死亡率、生存时间的影响。结果①金柴抗病毒胶囊所试3个剂量组均可明显降低正常小鼠感染后和免疫低下小鼠感染后肺指数、减少死亡率并延长生存时间。②金柴抗病毒胶囊所试3个剂量组在降低以上两种动物模型肺指数、降低免疫低下小鼠感染后死亡率的作用方面与达菲比较,差异无统计学意义。结论金柴抗病毒胶囊对流感病毒感染有较好的治疗和预防作用。     

中药对鼠流感病毒感染的预防效果研究

目的探索中药体内对鼠流感病毒感染的防治作用。方法采用流感病毒A/FM/1/47(H1N1)鼠肺适应株感染小鼠的肺指数及死亡保护实验动物模型评价银翘散制剂、玉屏风散制剂、冰香散对感染鼠的保护作用及肺重改善程度。结果银翘散制剂与玉屏风散制剂的肺指数抑制率达到35%～43%,冰香散滴鼻给药与雾化给药均有不同程度的降低肺指数的作用,肺指数抑制率在19%～25%之间;各试验药预先给药7d,病毒感染后继续给药5d,与病毒对照组相比,银翘散制剂在剂量20～40g/kg范围内对感染鼠的死亡保护率为50%～60%,玉屏风散制剂在剂量40～60g/kg范围内对感染鼠的死亡保护率为70%,冰香散雾化给药对感染鼠的死亡保护率为70%。银翘散制剂、玉屏风散制剂和冰香散延长鼠生命率在50%以上,尤以玉屏风散制剂效果显著,达76.31%。鼠平均生存时间均有不同程度的延长,大约在11～13.4d左右。结论银翘散制剂、玉屏风散制剂及冰香散这三类预防流感方药在体内表现出良好的防治流感病毒作用,为临床运用中药预防流感提供了科学的依据。     

人季节性H1N1流感病毒小鼠感染模型的建立

目的制备人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型,为研究流感病毒致病性、研发抗病毒药物提供模型动物。方法将人季节性H1N1流感病毒在鸡胚尿囊腔扩增后,滴鼻接种小鼠,4 d后将小鼠处死,挑选感染体征严重者进行实时荧光PCR(FQ-PCR)检测肺中的流感病毒,将检测阳性的肺上清在鸡胚尿囊腔扩增,接种于下一代小鼠。比较各代小鼠对流感病毒的适应情况,直至小鼠出现明显的感染体征,取肺研磨制成匀浆,获得流感病毒鼠肺适应株并检测其半数致死量(LD50)。将10 LD50的病毒液接种于小鼠,建立人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型,观察模型小鼠的一般活动状态、体质量变化、肺部病变,HE染色观察肺部病理切片,计算肺指数,FQ-PCR检测病毒RNA。结果人季节性流感病毒在小鼠体内传代4次后,鼠肺适应株制备完成,其经鼻的LD50为10-2.41/0.05 mL。人季节性流感病毒的小鼠感染模型,一般状态差,体质量明显减轻,肺指数增大,70%出现死亡。病理切片观察病变明显,FQ-PCR显示流感病毒阳性。结论成功建立了人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型。     

B型流感病毒B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台的搭建及BALB/c小鼠感染模型的建立

目的 利用基因工程技术全基因合成B型流感病毒B/Yamagata/16/88的8个基因节段,并利用反向遗传技术从体外拯救B型流感病毒B/Yamagata/16/88,同时建立BALB/c小鼠感染模型,为下一步研究B型流感病毒致病机制、传播机制以及开发新型疫苗奠定基础。方法 通过基因合成和反向遗传技术体外拯救B型流感病毒B/Yamagata/16/88。全基因组测序验证拯救病毒基因组序列与Genbank序列的一致性。将拯救病毒以10⁵EID₅₀的攻毒剂量人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、生存率、肺脏病毒复制等方面进行致病性分析,建立小鼠感染模型。结果 成功从体外拯救出B型流感病毒B/Yamagata/16/88,命名为B-S9。全基因组测序结果表明,B-S9基因组序列与Genbank公布序列一致。B-S9能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠呈现低致病性;攻毒后第3天,B-S9感染小鼠体重出现下降,攻毒后第8天,小鼠体重开始回升;攻毒后第3天和第6天,B-S9感染小鼠的肺脏内均能检测到病毒复制,且攻毒后第3天的小鼠肺脏病毒滴度比攻毒后第6天的小鼠肺脏滴度高132倍。结论 成功搭建B型流感病毒B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台,并建立BALB/c小鼠感染模型。目前国内外对B型流感病毒的研究比较少,该反向遗传操作平台的建立为B型流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定了基础,同时也为包括B型流感病毒减毒活疫苗在内的新型疫苗的研制开辟了新途径。     

新型H7N9病毒在同居小鼠中的传播途径

目的 进一步了解新型H7N9流感病毒的致病性、传播能力以及通过何种途径进行传播。方法 H7N9病毒感染小鼠后与同居小鼠合笼，研究同居小鼠的临床变化指征、病毒复制情况、病毒在组织中的分布以及病理变化。以同居小鼠分泌物接种其他小鼠，观察同居小鼠通过何种途径传播病毒。结果 H7N9病毒可以在肺组织、肠组织和脑组织中复制，并可以在同居小鼠中传播。H7N9病毒感染小鼠其咽、眼分泌物以及粪便均具有感染性，其中尤以咽拭子的传播风险最高。结论 H7N9病毒可以不通过适应就感染小鼠，并引起小鼠间传播。被感染小鼠分泌物具有感染性。     

B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台的搭建及BALB/c小鼠感染模型的建立

【摘要】 目的 本研究利用基因工程技术全基因合成B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88的8个基因节段,并利用反向遗传技术从体外拯救B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88,同时建立BALB/c小鼠感染模型,为下一步研究B型流感病毒致病机制、传播机制以及开发新型疫苗奠定基础。方法 通过基因合成和反向遗传技术体外拯救B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88。全基因组测序验证拯救病毒基因组序列与Genbank序列的一致性。将拯救病毒以105EID50的攻毒剂量人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、生存率、肺脏病毒复制等方面进行致病性分析,建立小鼠感染模型。结果 成功从体外拯救出B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88,命名为B-S9。全基因组测序结果表明,B-S9基因组序列与Genbank公布序列一致。B-S9能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠呈现低致病性; 攻毒后第3天,B-S9感染小鼠体重出现下降,攻毒后第8天,小鼠体重开始回升;攻毒后第3天和第6天,B-S9感染小鼠的肺脏内均能检测到病毒复制,且攻毒后第3天的小鼠肺脏病毒滴度比攻毒后第6天的小鼠肺脏滴度高132倍。结论 成功搭建B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台,并建立BALB/c小鼠感染模型。目前国内外对B型流感病毒的研究还较少,该反向遗传操作平台的建立为B型流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定了基础,同时也为包括B型流感病毒减毒活疫苗在内的新型疫苗的研制开辟了新途径。