吡格列酮对老年冠心病合并糖尿病患者内皮祖细胞数量及脂联素水平的影响

目的：观察吡格列酮对老年冠心病合并糖尿病患者外周血中内皮祖细胞（EPCs）数量及血脂联素水平的影响。方法：本研究共入选65例老年（年龄≥60岁）冠心病合并糖尿病患者,随机分为吡格列酮组和安慰剂对照组,用药12周后利用流式细胞术双色分析法检测2组患者外周血中EPCs的百分比,其中EPCs以CD34＋/KDR＋双标记阳性确定,对比2组患者在服药前后EPCs数量及血脂联素水平的变化。结果：2组患者用药前EPCs数量基本相近,观察12周后吡格列酮组患者EPCs数量显著增加（0.027±0.017vs0.046±0.03,P〈0.05）,对照组患者12周后EPCs数量虽较前有所增加,但无统计学差异。12周后2组患者脂联素水平均有所增加,但吡格列酮组患者治疗前后血脂联素水平显著升高（4.5±1.7mg/Lvs7.0±2.3mg/L,P〈0.05）。结论：吡格列酮能够促进老年冠心病合并糖尿病患者EPCs的动员过程,还可提升患者血脂联素水平,可能具有抗动脉硬化功效。     

吡格列酮对内皮祖细胞增殖、凋亡及功能的影响

目的:观察不同浓度吡格列酮对大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)增殖、凋亡和功能的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:正常SD大鼠24只,随机分为A组(对照组)和B,C,D组[吡格列酮组剂量依次为10,20,40 mg/(kg·d)],灌胃处理10 d后断颈处死,密度梯度离心法获取骨髓单个核细胞,经鉴定后证实为EPCs. 每组细胞培养4 d后消化、计数并用完全培养液培养. 24 h后检测NO生成量,3 d后检测凋亡情况,7 d后检测增殖能力. 结果:与A组相比,B,C,D组EPCs增殖能力明显增高[B,C,D组A490 nm分别为(0.423±0.004), (0.680±0.008), (0.443±0.005) vs A组A490 nm (0.143±0.006), P<0.01];凋亡程度降低[B,C,D组分别为(32.8±0.8)%, (30.9±2.3)%,(33.0±3.9)% vs A组(40.1±1.1)%, P<0.01];培养上清中NO浓度显著提高[B,C,D组分别为(29.2±3.7), (41.0±7.7), (28.7±6.4) μmol/L vs A组(18.9±1.4), P<0.05];与C组相比,B组和D组促进EPCs增殖能力弱(P<0.01),培养上清中NO浓度相对低(P<0.05). 结论:不同浓度吡格列酮均能提高EPCs数量和功能;20 mg/(kg·d)吡格列酮对EPCs的作用较强.     

吡格列酮对糖尿病大鼠肾皮质血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在糖尿病大鼠肾皮质中的表达及PPARγ激动剂吡格列酮对其表达的影响.方法:①雄性SD大鼠经单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ,剂量为55 mg/kg)建立糖尿病模型,将糖尿病大鼠随机分为糖尿病组(DM组) 、糖尿病吡格列酮( pioglitazone 10 mg·kg-1·d-1)干预组(DP组),并以正常组(NC 组)作对照.②干预8周后,观察各组大鼠24 h尿蛋白(mg/24 h)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血糖及血脂的变化;用免疫组织化学和逆转录PCR检测肾皮质VEGF蛋白及mRNA表达.结果:①DM组大鼠24h尿蛋白、BUN、Scr、肾皮质VEGF蛋白及mRNA表达均较NC组明显升高;DP组大鼠24 h尿蛋白、BUN、Scr、肾皮质VEGF蛋白及 mRNA表达较DM组均有降低.②DM组血糖、血脂与NC组相比,差异有统计学意义,与DP组比较差异无统计学意义.结论:糖尿病大鼠肾皮质VEGF表达增强,吡格列酮可抑制糖尿病大鼠肾皮质VEGF的表达,减少尿蛋白,改善肾功能,延缓糖尿病肾病的发生、发展,发挥非降糖的直接肾保护作用.     

吡格列酮对外周胰岛素敏感性作用的临床研究

目的:评价吡格列酮对外周胰岛索敏感性的作用.方法:将符合2型糖尿病(T2DM)诊断并伴有超重的患者68例在强化生活方式干预的基础上予口服吡格列酮6个月,比较治疗前后外周胰岛素敏感性的变化.结果:患者血糖、血胰岛素水平均明显降低,外周胰岛素敏感性提高,体重指数(BMI)无明显变化,未出现肝功能损害及充血性心力衰竭患者.结论:吡格列酮对提高外周胰岛素敏感性作用明显.     

吡格列酮在抗动脉粥样硬化中的作用

动脉粥样硬化是一种多因素参与缓慢发展的疾病。已知慢性炎症、免疫等因素在动脉粥样硬化的发生、发展中起着不可忽视的作用。吡格列酮是噻唑烷二酮类（thiazolidinedione,TZDs）胰岛素增敏剂,作用于过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）。近年研究发现TZDs不仅有改善胰岛素抵抗、降血糖的作用,还具有降低血压、调节血脂、保护血管内皮细胞、抑制血管平滑肌细胞增殖、促进新生血管形成等作用,从而起到抗动脉粥样硬化的作用。本文就吡格列酮在上述方面的研究进展予以综述。     

吡格列酮对糖尿病肾病的疗效观察

目的 探讨吡格列酮对糖尿病肾病的临床效果.方法 50例糖尿病肾病患者按随机化原则分为A、B组,每组25例.两组均采用常规降糖治疗,A组25例在常规降糖治疗的基础上加用吡格列酮.检测治疗前后所有患者空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素敏感性指数(IAI)、血脂、24h尿蛋白定量、尿素氮、肌酐等指标.结果 (1)两组治疗后FPG、HbA1c和血脂三项均有所下降(P＜0.05),但A组效果优于B组(P＜0.05).(2)A组治疗后IAI较治疗前明显增高,收缩压、舒张压、24h尿蛋白量、肌酐、尿素氮等各项指标均低于治疗前(P＜0.05),而B组治疗前后上述指标差异无显著性意义.结论 吡格列酮能显著降低血糖,并明显减少糖尿病肾病的24h尿蛋白,降低肌酐、尿素氮,延缓糖尿病肾病的进展,对血压和血脂的改善也有一定的益处.     

吡格列酮对原发性高血压合并2型糖尿病血管内皮功能的影响

目的 观察吡格列酮(PGZ)对原发性高血压(EH)合并2型糖尿病(T2DM)患者血管内皮功能的影响.方法 选择56例EH合并T2DM患者做为治疗组,给予PGZ治疗12周,治疗前后分别测定超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血浆内皮素(ET)、一氧化氮(NO)的水平变化,另选取52例健康正常体检者做为对照组.结果 治疗组治疗...     

吡格列酮对慢性肾脏病患者血管内皮功能和肾功能的影响

目的 探讨吡格列酮对慢性肾脏病（CKD）患者血管内皮功能和肾病进展的影响.方法 采用随机、对照的方法选取非糖尿病的慢性肾脏病3～4期约60例,均予常规治疗,处理组27例患者同时加吡格列酮片（30 mg/d）,治疗4个月,观察治疗前及治疗4个月后的肱动脉内皮依赖性舒张功能（FMD）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、血清肌酐（Scr）、尿蛋白定量（Upr）等指标的变化.结果 吡格列酮处理组FMD改善、hs-CRP、Scr、Upr下降,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05或0.01）,且内皮依赖性血管舒张率升高与hs-CRP水平的降低呈负相关.结论 吡格列酮可以减轻非糖尿病CKD患者炎症,改善血管内皮功能,延缓肾病进展.     

吡格列酮与心血管疾病的研究进展

目前,心血管疾病已经成为严重危害人类健康的主要疾病。常见的心血管疾病有高血压、左心室肥厚、冠心病等。如何治疗这类疾病并取得满意的效果已经成为研究热点。近来研究发现,吡格列酮作为治疗糖尿病的新药[1,2],对心血管疾病有潜在的预防作用[3]。本文将重点讨论心血管疾病与吡格列酮的关系。     

吡格列酮改善糖尿病前期胰岛素抵抗的研究

目的:探讨对于糖尿病前期进行吡格列酮干预治疗的效果。方法:将40例糖尿病前期患者给予吡格列酮片30mg/d治疗,疗程3个月,治疗前后均测定血糖、血脂、胰岛素、糖化血红蛋白。结果:治疗后患者血糖、胰岛素、糖化血红蛋白较治疗前有显著减低(P<0.01),三酰甘油降低(P<0.05)。结论:吡格列酮对于糖尿病前期患者具有显著改善胰岛素抵抗和糖代谢、脂代谢紊乱的作用。     

普伐他汀对培养人内皮祖细胞药理作用的影响

目的观察普伐他汀对培养人内皮祖细胞（EPC）数量、增殖、迁移、黏附及一氧化氮（NO）合成能力的影响。方法采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,贴壁筛选法培养内皮祖细胞,培养7d后收集细胞并分别加入普伐他汀10μmol／L及100μmol／L,干预48h,免疫组化、荧光显微镜和流式细胞仪鉴定内皮祖细胞,分别观察内皮祖细胞的数量、增殖迁移黏附能力、细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、mRNA的表达以及培养液中NO的水平。结果普伐他汀组促进外周血内皮祖细胞扩增,并显著改善外周血内皮祖细胞的黏附、迁移、增殖以及eNOSmRNA表达和NO合成的能力。结论他汀类药物可增加培养人内皮祖细胞数量并改善其功能。     

大鼠外周血内皮祖细胞分离培养与鉴定

目的 获得大鼠外周血内皮祖细胞(EPCs)并进行鉴定.方法 首先采用密度梯度离心法获得大鼠外周血单个核细胞,然后用EGM-2完全培养基体外培养条件下诱导单个核细胞分化为靶标细胞,最后分别用EPCs特异性标记物CD133和Flk-1检测及内吞乙酰低密度脂蛋白(ac-LDL)和荆豆凝集素-1(UEA-1)的能力,识别和鉴定靶标细胞.结果 靶标细胞培养至第6天呈纺锤形,梭状排列,具有与典型EPCs形态一致的生物学特征,CD133及FLK-1双抗体荧光检测结果阳性,内吞ac-LDL及UEA-1的能力实验结果阳性,证明该纺锤形细胞为EPCs.结论 通过密度梯度离心法及多细胞因子诱导大鼠外周血单个核细胞获得EPCs的方法可行,该方法可为EPCs的基础研究及临床应用提供理论与实验方法学基础.     

人外周血内皮前体细胞的分离、培养及流式细胞仪动态检测

目的:建立人外周血内皮前体细胞（EPCs）分离、诱导的方法,并利用流式细胞仪鉴定人内皮前体细胞的培养效果,为血管生成的细胞治疗研究奠定基础。方法：Ficoll密度梯度离心提取单个核细胞（MNCs）,接种在人纤连蛋白包被的培养板上,培养于EGM 2MV中,4?d后,粘附细胞用Dil AC LDL和FITC UEA 1染色,采用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜观察。第4天到第7天,应用流式细胞仪动态检测粘附细胞表面标志CD34、CD31、KDR。结果：MNCs培养4?d后,荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜下可观察到Dil AC LDL和FITC UEA 1双阳性的粘附细胞,流式细胞仪检测结果显示,CD34、CD31、KDR阳性细胞表达率分别为（2.50±1.47）%、（5.72±1.66）%、（36.24±3.24）%。第5、6和7天,CD34和CD31阳性细胞阳性率分别为（8.45±3.97）%、（22.52±3.86）%,（14.13±2.79）%、（42.76±3.67）%,（21.14±2.91）%、（54.67±3.44）%。结论：外周血中确实存在EPCs,并且在体外能被诱导分化为成熟的内皮细胞。     

凝血酶对骨髓来源内皮祖细胞增殖能力的影响

目的:观察凝血酶对骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)增殖能力的影响并探讨其机制。方法:密度梯度离心法从大鼠骨髓分离EPCs,培养7 d后收集贴壁细胞并加入不同浓度凝血酶(10-2,10-1,1,10,100 U/mL)干预一定时间(6,12,24,48 h)。CCK-8试剂盒检测EPCs增殖。实时定量PCR检测凝血酶刺激以及NF-κB抑制剂预处理以后EPCs的VEGF mRNA表达变化,ELISA法检测其分泌量变化。结果:凝血酶干预组的细胞增殖数均高于对照组,10 U/mL凝血酶作用24 h对内皮祖细胞数量影响最为显著(P<0.05)。与对照组相比,凝血酶刺激后VEGFmRNA表达及分泌量均增高,使用NF-κB抑制剂预处理后可以抑制凝血酶的这种作用。结论:凝血酶可以通过NF-κKB途径上调VEGF的表达,促进EPCs增殖。     

降血糖药对内皮祖细胞作用的研究进展

内皮祖细胞（EPC）在糖尿病血管并发症中发挥重要作用。大量研究证明,临床部分降血糖药可通过调节EPC功能进而发挥改善糖尿病并发症的作用。其中二甲双胍可通过多效性调节机体氧化应激水平或AMP活化蛋白激酶下游信号通路改善糖尿病患者的EPC功能;吡格列酮可通过调节端粒酶活性延缓EPC衰老;阿卡波糖、西格列汀和胰岛素在临床研究中均显示出提高EPC活性的作用,其机制主要表现为促进EPC增殖、迁移、黏附等。降血糖药的这种降血糖之外的药理作用可能是改善糖尿病并发症的机制之一。本文在分析EPC对糖尿病并发症血管修复影响的基础上,对降血糖药调控EPC数量和功能的研究进展作一综述。     

恒磁场对雷帕霉素作用下大鼠内皮祖细胞增殖和迁移的影响

目的 观察恒磁场对雷帕霉素作用下大鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPC)增殖和迁移能力的影响.方法 密度梯度离心法获得SD雄性大鼠的骨髓EPC,无菌条件下培养6 d.实验分为5组:空白对照组、雷帕霉素(1 ng/ml)组及雷帕霉素+不同强度的恒磁场(0.1、0.5、1.0 mT)组.各组皆于24 h后收集标本,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖能力,改良的Boyden小室法测定EPC的迁移能力.结果 雷帕霉素组EPC增殖显著低于空白对照组(0.252±0.006 vs 0.328±0.025,P<0.05),EPC迁移能力显著降低(31±3 vs 48±5,P<0.05);0.5 mT和1.0 mT恒磁场组EPC增殖显著强于雷帕霉素组(0.278±0.008、0.280±0.010,P<0.05),EPC迁移能力显著高于雷帕雷素组(37±3、38±4,P<0.05).结论 0.5 mT和1.0 mT恒磁场有拮抗雷帕霉素的作用,可促进EPC的增殖和迁移.     

人VEGF166基因转染兔骨髓内皮祖细胞及对其增殖的影响

目的探讨人血管内皮生长因子165（hVEGF165）基因转染兔骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）及对EPCs增殖的影响。方法体外分离、培养、扩增并鉴定EPCs,脂质体介导转染携带增强型绿色荧光蛋白标记的VEGF166质粒、空白质粒,同时经ELISA法检测转基因EPCs表达VEGF蛋白,并采用CCK-8法检测对其增殖的影响。结果FITC标记剂豆凝集素I和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白荧光双染证实正在分化的EPCs,同时经免疫组化法证实VEGF受体2FLk-1和VIII因子的表达;VEGF165质粒转染组EPCs上清液中表达VEGF166,VEGF165转染EPCs的转染率约22．5％;hVEGF165基因转染促进EPCs增殖。结论hVEGF165基因可成功转染EPCs,且可促进EPCs的增殖,为基因治疗血管性疾病提供了动物实验基础。     

人脐血内皮祖细胞的体外培养

目的从人脐带血中分离内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）,建立人脐血内皮祖细胞体外培养的方法,为实现内皮祖细胞的移植及实验研究提供足量的细胞来源。方法采用密度梯度离心法分离人脐带血内皮祖细胞,在EGM-2培养基中培养,采用流式细胞仪、免疫组化和免疫荧光鉴定EPCs。结果脐带血单个核细胞在经EGM-2培养过程中出现梭形贴壁和铺路石样等形态;1周后既分化成EPCs,细胞免疫荧光CD133染色率在培养第7天为（67.2±2.12）%,免疫组化CD34染色率为（89.67±2.05）%,流式细胞仪鉴定该种细胞CD133与KDR的双阳性率达87.8%。可确定该细胞为EPSc。结论采用本培养方法可获得良好的内皮祖细胞用于实验研究。     

兔外周血内皮祖细胞的培养与鉴定

目的研究兔外周血内皮祖细胞(EPCs)的分离和定向培养的方法,并对其功能进行鉴定。方法从兔股静脉插管抽取静脉血20 mL,采用淋巴细胞分离液进行密度梯度离心法分离单个核细胞,接种于人纤连蛋白包被的培养板上,分别予含血管内皮生长因子(VEGF)20 ng／mL或内皮细胞生长添加剂(ECGS)30μg／mL的M199培养基培养。培养2周后进行免疫荧光染色鉴定内皮祖细胞。结果每毫升外周血可分离1×106～2×106个单个核细胞,两组均于接种后第2～3天细胞胞体增大,有的呈多边形或梭形;第4天出现条带或栅栏状分布;第7～8天梭形细胞增多;第14天左右出现细胞集落,其特点是中央为圆形细胞,外周是梭形细胞;添加VEGF的培养基组每接种5×105个单个核细胞出现5～10个细胞集落,而添加ECGS者出现8～15个。第4周,添加VEGF的培养基组的细胞开始脱落而死亡,而添加ECGS的细胞仍持续稳定生长,呈铺路石样分布。两组在荧光显微镜下均可见双阳性的EPCs,血管性假性血友病因子(vWF)染色阳性。结论采用VEGF和ECGS均可体外培养兔外周血内皮祖细胞,且均能使其诱导分化为内皮样细胞,而ECGS较VEGF诱导效果更佳。     

通心络体外促进人外周血内皮祖细胞的增殖

目的：观察中药通心络（Tongxinluo）对体外培养的人外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）增殖的影响。方法：采用密度梯度离心法分离培养人外周血单个核细胞，经FITC标记荆豆凝集素I（FITC-UEA-I）和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白（Dil-acLDL）双染色鉴定为正在分化的EPCs，并进一步通过流式细胞仪检测其表面标志CD34、CD133。分别以不同浓度（O、50、100、200、500、750和1000μg／ml）通心络超微粉溶液作用36h，以及500μg／ml通心络超微粉溶液作用不同时间（O、6、12、24和36h）后，MTT法观察EPCs增殖的情况。结果：与对照组比较，不同浓度通心络组均改善了EPCs的增殖功能（P〈0.05），在500μg／ml时最为显著（P〈0.01）；500μg／ml通心络能明显促进EPCs增殖能力（P〈0.05，P〈0.01），随时间延长促进作用逐渐增强，36h达到高峰（增殖率为54．18％，P〈0.01）。结论：通心络体外能显著改善外周血内皮祖细胞增殖的能力。