两种成脂诱导培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞的研究

目的：比较两种培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞(Adipose-derived stem cell, ADSC)的成脂分化能力,探寻更为适宜的ADSC成脂诱导方案。方法：提取3例临床患者的脂肪干细胞(hADSCs)及出生6周大鼠的脂肪干细胞(rADSCs)。将hADSCs、rADSCs分别接种于六孔板,分为未诱导组、成脂诱导Ⅰ组和Ⅱ组,分别使用普通培养基,成脂诱导培养基Ⅰ和Ⅱ,培养10天后以油红O染色,镜下观察及检测490nm吸光度值(OD490),比较脂滴形成情况。结果：未诱导的hADSCs和rADSCs均呈成纤维细胞样生长。成脂诱导培养3天后出现脂滴;油红O染色显示,成脂诱导组脂滴呈橘红色。hADSCs和rADSCs的成脂诱导Ⅱ组形成的脂滴均明显大于诱导Ⅰ组,统计学分析显示hADSCs的成脂诱导Ⅱ组测得的OD490明显高于诱导Ⅰ组（P<0.01); 而两组的rADSCs的OD490无明显差异（P>0.05）。结论：hADSCs和rADSCs在两种诱导培养基中均可成脂分化,但成脂诱导Ⅱ组优于成脂诱导Ⅰ组。     

脂肪干细胞体外培养特性及成脂成软骨分化研究

目的:分析脂肪干细胞体外培养的特性和体外向成脂细胞和成软骨细胞分化的情况.方法:采集成年兔腹部脂肪组织,体外分离培养脂肪干细胞,并进行成脂细胞和成软骨细胞的体外诱导分化,采用油红O染色证明成脂细胞分化,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和Alcian Blue染色证明成软骨细胞分化.结果:脂肪干细胞形态为菱形,细胞可稳定传代,各代次间无形态上的差异.经油红O染色发现,脂肪干细胞可形成阳性脂滴,表明具有成脂分化能力.经Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和Alcian Blue染色后发现,脂肪干细胞可形成Ⅱ型胶原和硫酸蛋白聚糖,表明具有成软骨分化能力.结论:脂肪干细胞具有成脂成软骨分化能力,可成为脂肪和软骨组织工程研究的种子细胞.     

脂肪来源干细胞的基础研究及成脂应用进展

目前已经证实可以从脂肪组织中获取具有多向分化能力的细胞[1-2],这些细胞一般被称之为脂肪来源干细胞(adiposederived stem cells,ADSC)、脂肪来源基质细胞(adipose derivedstromal cells,ADSC)、脂肪来源的间充质祖细胞(adipose derived progenitor cells)或前脂肪细胞(preadipocytes),然而这些不同的     

两种培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞向脂肪细胞分化的比较

目的比较两种培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cell,ADSC)的成脂分化能力,探寻更为适宜的ADSC成脂诱导方案。方法提取3例临床患者的脂肪干细胞(h ADSCs)及出生6周大鼠的脂肪干细胞(r ADSCs),将h ADSCs、r ADSCs分别接种于六孔板,分为未诱导组、成脂诱导I组和II组,分别使用普通培养基、成脂诱导培养基I和II,培养10 d后以油红O染色,镜下观察及检测490 nm吸光度值(A490),比较脂滴形成情况。结果未诱导的h ADSCs和r ADSCs均呈成纤维细胞样生长,成脂诱导培养3 d后出现脂滴;油红O染色显示,成脂诱导组脂滴呈橘红色,h ADSCs和r ADSCs的成脂诱导II组形成的脂滴均明显大于诱导I组,统计学分析显示h ADSCs的成脂诱导II组测得的A490明显高于诱导I组(P<0.01);而两组的r ADSCs的A490无明显差异(P>0.05)。结论 h ADSCs和r ADSCs在两种诱导培养基中均可成脂分化,但成脂诱导II组优于成脂诱导I组。     

小鼠脂肪干细胞分离培养方法

目的：建立一种简单高效的小鼠脂肪干细胞分离培养方法,为小鼠模型中间充质干细胞研究提供充足的细胞来源。方法体外分离小鼠腹股沟皮下脂肪组织,应用0．1％胶原酶NB4消化,含10％ FBS的低糖DMEM培养基贴壁培养小鼠脂肪干细胞,并对其细胞形态、体外增殖能力、多向分化潜能及表面标记进行分析研究。结果体外分离培养的小鼠脂肪干细胞具有良好的细胞形态、极强的增殖能力,体外经三向诱导,具有成脂、骨及软骨分化潜能,表面标记CD34、CD105阳性,Sca-1高表达,不表达CD45及 SSEA-1。结论利用该实验方法,能培养出高纯度、具有良好干性及极强增殖能力的小鼠脂肪干细胞。     

脂肪干细胞的研究进展

脂肪干细胞是成体间充质干细胞的一种,具有多向分化的潜能、取材容易、来源广泛适宜自体移植等优点,是继骨髓间充质干细胞之后的又一再生医学种子细胞的来源,成为国内外研究的热点。本文综述了脂肪干细胞的生物学特性与临床应用前景。     

p62基因缺失对人脂肪间充质干细胞成脂的促进作用

目的：探讨p62基因缺失对人脂肪间充质干细胞（hADSCs）自噬活性的影响,阐明脂肪分化的分子机制。方法：应用Ⅰ型胶原酶消化法从人大腿皮下脂肪抽吸液中分离培养hADSCs,使用80 μmol·L^-1油酸（OA）联合地塞米松和胰岛素对hADSCs进行成脂诱导;将hADSCs分为对照组和p62基因缺失组,p62基因缺失组hADSCs转染p62 shRNA慢病毒载体,对照组hADSCs转染hADSCs空载体。采用CCK-8实验绘制2组细胞的生长曲线并观察细胞增殖活性变化;应用尼罗红染色观察脂滴的形成（尼罗红脂滴染色阳性细胞数）,Western blotting法检测成脂标志转录因子C/EBPα和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型/微管相关蛋白1轻链3Ⅰ型（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ）蛋白表达,磺酰成二胺（MDC）染色检测2组细胞成脂中的自噬活性（MDC染色阳性细胞数）,采用LC3与Mitotracker Red荧光共定位检测2组细胞的线粒体自噬活性,使用环孢菌素A（CsA）分别抑制2组细胞线粒体自噬活性并进行成脂诱导,光镜下计数含脂滴细胞数。结果：分离培养的细胞呈多角形或梭形,传代后细胞呈漩涡状排列;OA诱导hADSCs成脂后,细胞内有大量脂滴形成。CCK-8实验,在培养6 d后p62基因缺失组细胞增殖活性较对照组明显降低（P<0.01）。2组细胞诱导成脂后,与对照组比较,p62基因缺失组hADSCs中尼罗红脂滴染色阳性细胞数增多,C/EBPα蛋白表达水平升高（P<0.01）,MDC染色阳性细胞数明显升高（P<0.05）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平升高（P<0.01）,细胞中LC3的点状化和颗粒化增多,与线粒体的共定位现象增加。使用CsA抑制线粒体自噬后,光镜下观察,p62基因缺失组含脂滴细胞数降低到与对照组接近的水平。结论：p62基因缺失可通过增强总自噬及线粒体自噬促进hADSCs的成脂。     

聚氨酯介导TRIB2-siRNA转染人源脂肪干细胞的体外成脂分化

目的 使用阳离子型聚氨酯(cationic polyurethane,CPU)介导TRIB2-siRNA体外转染人源脂肪干细胞沉默TRIB2基因表达,研究基因沉默效率及基因沉默对干细胞成脂分化的影响.方法 在氮/磷(N/P)为10:1的条件下,混合CPU与TRIB2-siRNA或阴性对照siRNA(NC)制备复合物,并...     

脂肪干细胞向软骨细胞诱导分化能力的研究

目的 探讨脂肪干细胞体外定向分化为软骨细胞的能力.方法 在特定培养基条件下,采用"微团"培养方法对脂肪干细胞进行成软骨诱导,于诱导7,14d后应用Ⅱ型胶原免疫组化和aggrecan免疫荧光检测成软骨表型;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测脂肪干细胞诱导0周、2周和4周后前Ⅱ型胶原蛋白、aggrecan和Sox9的mRNA基因表达情况.结果 脂肪干细胞经诱导后,由长梭形转变为三角形、多角形或短梭形.逐渐聚集成结节,胞外基质Ⅱ型胶原免疫组化着色和aggrecan免疫荧光阳性,前Ⅱ型胶原蛋白、aggrecan和Sox9的mRNA基因均稳定表达.结论 脂肪干细胞在特定培养基条件下可以定向软骨细胞方向分化,并能够稳定表达软骨细胞特异袁型.     

脂肪干细胞的研究进展

脂肪源性间充质干细胞（ADSCs）是从脂肪组织中分离得到的一种成体干细胞,简称脂肪干细胞,它和骨髓间充质干细胞一样,具有自我更新和多向分化潜能,在体外各种诱导条件下可分化为成骨、软骨、脂肪、肌肉、神经、肝和内皮等细胞。脂肪组织在体内含量多、获得容易、创伤小,且ADSCs具有数量多、增殖能力强、可以自体移植等优势,有望成为组织工程理想的种子细胞,在基因治疗、细胞移植等方面具有广泛的应用前景。     

地塞米松调节骨髓基质细胞成脂及成骨分化的组织化学研究

目的：观察地塞米松对骨髓基质细胞分化成脂肪细胞的影响,探讨激素性股骨头缺血性坏死的发病机制。 方法：骨髓基质细胞在含有不同浓度地塞米松的培养基中培养,苏丹Ⅲ染色作脂肪细胞计数。采用生化分析仪 测定细胞内甘油三酯含量及碱性磷酸酶活性。结果：脂肪细胞数随地塞米松浓度增大及作用时间延长而增多。 实验组甘油三酯含量明显高于对照组。碱性磷酸酶活性随地塞米松浓度增大而降低。结论：地塞米松能够直接 诱导骨髓基质细胞分化成脂肪细胞,减少其向成骨细胞分化,这可能与激素性骨坏死的发病机制有关。     

BICC1对骨髓基质细胞定向分化的调控作用研究

目的:探讨BICC1在骨髓基质细胞向成骨细胞及脂肪细胞分化过程中的作用。方法:构建Bicc1过表达质粒Bicc1-pcDNA3.1,以pcDNA3.1为对照,分别转染小鼠骨髓基质细胞ST2。对两组细胞进行成脂和成骨诱导,在成骨诱导14 d时碱性磷酸酶染色检测成骨分化情况,在成脂诱导5 d时利用油红O染色检测脂滴形成情况;采用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞Bicc1过表达对成骨及成脂相关因子的影响。结果:酶切及测序结果显示Bicc1过表达质粒构建成功,将其转染到ST2细胞后,Bicc1 mRNA表达水平较对照组升高15.23倍（P＜0.05）。成骨诱导条件下,Bicc1过表达组ST2细胞碱性磷酸酶染色增强,成骨相关因子Osterix、碱性磷酸酶、Osteopontin、Runt相关转录因子2（Runx2）和骨钙素的mRNA和/或蛋白表达水平显著上升（均P＜0.05）。成脂诱导条件下, Bicc1过表达组ST2细胞中脂滴形成减少,油红OD520较对照组明显降低（P＜0.01）,成脂相关因子过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）、CCAAT增强子结合蛋白α（C/EBPα）、脂肪酸结合蛋白（FABP4/aP2）和adipsin的mRNA及蛋白表达水平显著下降（均P＜0.05）。结论:BICC1可促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化,抑制其向脂肪细胞分化。     

不同氧浓度微环境对大鼠骨髓间充质干细胞成骨及成脂肪分化的影响

目的 观察不同氧浓度微环境对间充质干细胞分化的影响,对比分析间充质干细胞在体外常规培养与机体生理的微环境中分化情况的差异.方法 从大鼠骨髓中分离获取间充质干细胞;体外培养扩增后,取第3代骨髓间充质干细胞,以5×105/mL浓度接种到6孔培养板中,贴壁后分别加入成骨和成脂诱导分化因子;并分别给予高压氧(1.5kPa,60min)和低压氧(-1.5kPa,60min)处理, 1次/d×5d.诱导2周后进行钙结节茜素红染色和Von Kossa染色检测成骨分化情况;油红染色检测脂肪样细胞形成数量.结果 与常规分化组比较,高压氧组钙化结节数量明显增加约为常规组的(1.5±0.1)倍(P<0.01);脂肪样细胞数量也明显增加,约为常规组的(1.6±0.2)倍(P<0.01).低压氧组钙化结节数量明显减少约为常规组的(0.6±0.2)倍(P<0.01);脂肪样细胞数量明显减少,约为常规组的(0.5±0.1)倍(P<0.01).结论 高浓度氧微环境可以促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨和成脂分化,低浓度氧则表现为抑制.     

过敏性紫癜患儿外周血白细胞表面黏附分子CD11b、CD54表达的研究

目的探讨过敏性紫癜(HSP)患儿外周血白细胞表面黏附分子CD11b、CD54在发病中的作用及其与病情的关系.方法采用全血直接免疫荧光流式细胞术检测24例HSP患儿及20例正常小儿外周血白细胞表面黏附分子(AMS)CD11b、CD54的表达.结果 (1)HSP组与对照组比较:淋巴细胞(L)、单核细胞(M)、多形核细胞(PMN)表面CD11b、CD54的阳性细胞百分率(PPC)和(或)平均荧光强度(MFI)普遍上调(P＜0.05或P＜0.01),其中以M的AMS上调最为显著;(2)HSP肾炎组与HSP非肾炎组比较:三类白细胞表面CD11b 、CD54的PPC和(或)MFI表达上调,CD54表达显著上调(P＜0.05或P＜0.01).结论 (1)AMS在HSP的发病中发挥了重要作用;(2)在三类白细胞表面CD54表达均同时上调的水平有可能作为判断HSP病情程度的免疫学指标;(3)本研究结果可能为HSP的抗黏附疗法提供了一些依据.     

急性脑梗死患者外周血CD54、CD42b的变化与临床意义

目的:探讨急性脑梗死患者外周血CD54、CD42b表达的变化、临床意义以及两指标间是否存在相关性。方法:用流式细胞仪测定29例(正常)对照者与30例急性脑梗死患者发病72h内、7天及14天时外周血CD54、CD42b的表达。结果:与对照组相比,除CD42b的表达在急性脑梗死发病14天时接近对照组外,其余各值均有显著改变,CD54表达上调而CD42b表达下调。结论:CD54、CD42b之间无相关性,是相对独立的指标;它们可能参与了急性脑梗死的病理过程,对临床治疗有参考价值。     

蔡氏扶正消瘕汤对胃癌SGC-7901细胞黏附分子表达的影响

目的：探讨蔡氏扶正消癌汤对人体外生长胃癌细胞SGC-7901表面黏附分子的影响以及作用的计量和效应关系。方法：流式细胞仪检测细胞膜表面E-Cadherin,CD44,CD44-v6和CD54的表达。结果：蔡氏扶正消瘕汤作用48h后,SGC-7901细胞膜表面的E-Cadherin表达增高,CD44、CD44-V6和CD54表达减少。随着药物剂量增加,E-Cadherin表达阳性细胞表达逐渐升高;CD44、CD44-v6、CD54表达的阳性细胞比率逐渐下降,抑制率也逐渐升高。结论：蔡氏扶正消瘢汤在抑制人胃癌细胞SGC-7901体外增殖的基础上,能够增加胃癌细胞SGC-7901表面E-Cadherin的表达,减少胃癌细胞SGC-7901表面CD44,CD44-V6和CD54的表达,并在计量和效应间存在联系,说明蔡氏扶正消瘕汤能阻止胃癌SGC-7901细胞对邻近正常组织的浸润及远处转移,从而发挥抗癌作用。     

结肠康I号对UC大鼠T淋巴细胞亚群CD4、CD8和细胞黏附因子CD54的影响

目的 探讨经验方结肠康I号治疗溃疡性结肠炎的免疫机制.方法 以5 %2,4,6-三硝基苯磺酸和50 %乙醇注入大鼠肛门制备溃疡性结肠炎模型,灌胃给药15 d后,流式细胞仪单克隆抗体法检测T淋巴细胞亚群CD4、CD8及细胞黏附因子CD54.结果 造模后CD4、CD8显著降低,CD4/CD8、CD54显著升高(P＜0.05或P＜0.01);经结肠康I号治疗后,与模型组比较,结肠康I号大、小剂量组CD4、CD8显著升高,CD4/CD8、CD54显著降低(P＜0.05).结论 结肠康I号具有调节CD4/CD8平衡及抑制细胞黏附因子CD54表达的作用.     

葛根素抑制酒精导致细胞成脂分化研究的初步报告

目的探讨葛根素对酒精诱导人骨髓间充质细胞（MSCs）成脂分化的抑制作用。方法采用梯度离心法分离、培养人MSCs。取传代细胞,随机分为三组：对照组、模型组（酒精组）和实验组（酒精＋葛根素）。检测细胞内碱性磷酸酶（AIP）活性;油红“0”染色,脂肪细胞计数。结果分组干预10d,模型组细胞内ALP活性[（27±10）U／100mg蛋白]明显降低,显著低于实验组[（40±10）U／100mg蛋白]和对照组[（39±9）U／100mg蛋白],P〈0．05。实验组细胞内AIJP活性,与对照组比较差异无统计学意义,P〉0.05。干预21d,模型组脂肪细胞最多,实验组较模型组明显减少（P〈0．05）,对照组几乎无脂肪细胞出现。结论葛根素能抑制酒精诱导成人MSCs向脂肪细胞分化,保持其成骨分化能力。     

非小细胞肺癌外周血淋巴细胞CD54、LRP的表达及其意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSELE)外周血淋巴细胞CD54和LRP表达的意义.方法用流式细胞术检测初治50例非小细胞肺癌患者治疗前后外周血淋巴细胞CD54及LRP的表达,对照组为20例健康献血者.结果 CD54在Ⅳ期NSELE表达显著高于Ⅲ期(P<0.01).在NC PD患者中CD54及LRP的表达显著高于CR PR患者(P<0.01).治疗前CD54的表达显著高于治疗后(P<0.01).CD54及LRP的表达与肿瘤直径、病理类型、分化程度等无显著关系(P>0.05);LRP在临床分期、治疗前后的表达,差异无显著性(P>0.05).结论 CD54及LRP表达均与近期疗效有效率呈负相关,可作为非小细胞肺癌预后评估的指标.     

基质细胞对髓性白血病细胞的促分化作用

髓性白血病存在着骨髓基质细胞的异常。本文从基质细胞对骨髓造血细胞的支持作用、基质细胞异常与髓性白血病的关系、基质细胞对髓性白血病细胞株的促分化作用以及细胞因子对髓性白血病的促分化作用等几个方面对国内外文献进行了综述,阐明基质细胞对髓性白血病细胞的促分化作用,并描述基质细胞的应用前景。