巨噬细胞在泡沫细胞化过程中的代谢活性变化

本实验在氧化型低密度脂蛋白作用下于小腹膜巨噬细胞的基础上，应用四氮唑蓝比色分析法，探讨巨噬细胞在向巨噬细胞源性泡沫细胞转化过程的代谢活性的变化规律。     

蛇毒多肽X在巨噬细胞泡沫化过程中的Ca2+拮抗作用

为研究由中华眼镜蛇毒分离纯化而得的蛇毒多肽X在巨噬细胞泡沫化过程中的Ca2+拮抗作用。将C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞置于10mg/L氧化型低密度脂蛋白中培养,制备泡沫样细胞;应用Ca2+荧光指示剂技术,检测蛇毒多肽X对泡沫样细胞Ca2+水平的缓慢与即刻影响。结果发现,在10mg/L蛇毒多肽X中孵育的泡沫样细胞Ca2+水平为3.61×10-7mol/L,为对照细胞的40.2%;而蛇毒多肽X对细胞Ca2+水平的即刻影响不明显。结果提示,在巨噬细胞泡沫化过程中,蛇毒多肽X可拮抗细胞Ca2+水平的增高,从而阻止泡沫细胞的形成。     

动脉粥样硬化敏感小鼠C57BL/6J腹膜巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立

泡沫细胞的出现是动脉粥样硬化斑块中有特征性的病理形态改变。本实验选择对动脉粥样硬化形成较敏感的纯系小鼠C57BL/6J,取其腹膜巨噬细胞与10mg·L-1氧化低密度脂蛋白共同孵育96h,建立了典型的巨噬细胞源性泡沫细胞模型。实验结果显示,培养的泡沫样细胞与在无脂蛋白培养基中培养的C57BL/6J小鼠巨噬细胞和在氧化低密度脂蛋白中培养的昆明种小鼠巨噬细胞比较,脂质成分大量增多,出现脂质颗粒,细胞内总胆固醇增加,其中胆固醇酯含量大于游离胆固醇,符合泡沫细胞的定义。本实验从离休细胞培养方面探寻建立小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞的可能性,为动脉粥样硬化的形成机理分析和防治研究提供了一种可靠的病理细胞模型。     

巨噬细胞对肌源性泡沫细胞生成的影响

平滑肌细胞增殖并形成泡沫细胞是动脉粥样硬化的中晚期病变特点之一。本实验研究了巨噬细胞对平滑肌细胞清道夫受体活性及肌源性泡沫细胞形成的影响。用细胞酶联免疫吸附法测定平滑肌细胞氧化型低密度脂蛋白的结合和摄入量以显示清道夫受活性，别测定细胞内胆固醇含量以显示脂质沉积。     

巨噬细胞内脂质代谢及泡沫细胞形成机制的研究进展

动脉粥样硬化是以动脉内膜下胆固醇积聚为特征的慢性疾病。泡沫细胞是构成动脉粥样斑块的主要成分,大多由于巨噬细胞内脂质代谢紊乱引起。巨噬细胞通过胞饮、清道夫受体介导的方式吞噬胞外胆固醇,在胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)和中性胆固醇酯水解酶(nCEH)作用下维持细胞内脂质平衡,多余的胆固醇可以通过ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、ATP结合盒转运体G1(ABCG1)和清道夫受体B1(SR-B1)排出。该文介绍巨噬细胞内胆固醇摄取、酯化水解和外溢过程,以及泡沫细胞形成的机制。     

氯通道参与脑血管平滑肌细胞Ca2+池操纵性Ca2+内流

研究Cl-通道在牛脑血管平滑肌细胞Ca2+池操纵性Ca2+内流中的作用.采用培养的脑血管平滑肌细胞,在生物荧光双波长影像分析系统用Fura-2/Am荧光探针测定单个细胞内游离Ca2+浓度.结果发现① Cl-通道阻断剂DIDS(0.75 μmol/L)能降低内皮素1(10-7 mol/L)刺激引起的脑血管平滑肌细胞Ca2+内流,抑制率为29.6%±3.9%,随后加入Cl-通道阻断剂NPPB(10 μmol/L)能继续降低平台相,抑制率为44.9%±8.7%;交换加药顺序,NPPB能降低内皮素1刺激引起的Ca2+内流,DIDS能进一步降低Ca2+内流.②DIDS(0.75 μmol/L)能降低三磷酸腺苷(10 μmol/L)刺激引起的脑血管平滑肌细胞Ca2+内流,抑制率为26.7%±10.5%,随后加入NPPB(10 μmol/L)能继续降低平台相,抑制率为54.3%±9.6%;交换加药顺序,NPPB能降低三磷酸腺苷刺激引起的Ca2+内流,DIDS能进一步降低Ca2+内流.③DIDS(0.75 μmol/L)能降低环匹阿尼酸(10 μmol/L)刺激引起的脑血管平滑肌细胞Ca2+内流,抑制率为26.5%±5.0%,随后加入NPPB(10 μmol/L)能继续降低平台相,抑制率为46.1%±4.2%;交换加药顺序,NPPB能降低环匹阿尼酸刺激引起的Ca2+内流,DIDS能进一步降低Ca2+内流.提示对DIDS、NPPB敏感的非同一性Cl-通道参与内皮素1、三磷酸腺苷、环匹阿尼酸触发的脑血管平滑肌细胞 Ca2+池操纵性Ca2+内流.     

巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中载脂蛋白E基因表达的变化

研究单核－巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中细胞载脂蛋白E表达的变化,以佛波醇酯（10^-7mol/L)诱导人单核细胞性THP－1细胞分化为巨噬细胞（72h),再以氧化型低密度脂蛋白（50mg/L)刺激巨噬细胞形成泡沫细胞（48h),用逆转录－聚合酶链反应检测这一过程中载脂蛋白E在mRNA水平上的变化。结果显示,单核细胞分化为巨噬细胞的同时伴随着载脂蛋白E表达的增加,巨噬细胞吞噬脂质转化为泡沫细胞后载脂蛋白E的表达进一步增加。     

巨噬细胞源性泡沫细胞是动脉粥样硬化治疗的新靶点

巨噬细胞是机体防御系统的重要细胞成分之一，其特有功能是能够保护机体抵抗感染。巨噬细胞具有内吞脂质、释放氧化物及免疫介质的能力，与动脉粥样硬化(atheroselemsis，As)的发生发展密切相关。     

巨噬细胞源性泡沫细胞适配子PM1的特异性

目的研究特异性寡核苷酸适配子PM1与巨噬细胞源性泡沫细胞和动脉粥样硬化病变结合的特异性,为动脉粥样硬化的体内靶向治疗提供实验依据。方法对适配子PM1进行FITC标记,荧光显微镜分别观察适配子与血管平滑肌细胞、巨噬细胞、内皮细胞、巨噬细胞源性泡沫细胞结合情况。采用高脂方法建立兔动脉粥样硬化模型,利用PCR方法和荧光显微镜观察适配子与动脉粥样硬化病变结合情况。结果适配子PM1与巨噬细胞源性泡沫细胞和动脉粥样硬化病变组织高度特异性结合,但不结合血管平滑肌细胞、巨噬细胞、内皮细胞和正常动脉组织。结论筛选出的适配子PM1能特异性结合巨噬细胞源性泡沫细胞和动脉粥样硬化病变。     

巨噬细胞氧化修饰极低密度脂蛋白及Cu2+修饰的极低密度脂蛋白对单核细胞与内皮细胞粘附的影响

极低密度脂蛋白(VLDL)与小鼠腹腔巨噬细胞温育24小时和48小时后,其硫代巴比妥酸反应物质值明显高于无细胞对照组,琼脂糖电泳速度也加快,两者一致。结果说明小鼠腹腔巨噬细胞可以氧化修饰极低密度脂蛋白。VLDL在体外用Cu²⁺修饰后。硫代巴比妥酸反应物质明显增加,琼脂糖凝股电泳速度加快。比较正常的VLDL(n—VLDL)及Cu²⁺氧化的VLDL(Ox—VLDL)对内皮细胞粘附单核细胞的影响时,发现在所用各种浓度下,Ox—VLDL单核细胞的粘附率比n—VLDL组大得多(p<0.0001),说明VLDL被氧化后明显增加单核细胞与内皮细胞的粘附。     

去甲肾上腺素和哌唑嗪对自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞膜Ca~(2+)-ATPase活性和PMCA1 mRNA表达的影响

目的 观察去甲肾上腺素及其俚.肾上腺素能受体拮抗剂哌唑嗪对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Ca~(2+)-ATPasee活性及mRNA表达的影响.方法 采用生化酶学法和逆转录聚合酶链反应技术观察不同浓度去甲肾上腺素和哌唑嗪对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Ca~(2+)-ATPase活性和mRNA表达的影响.结果 与自发性高血压大鼠组比较,10~(-7)mol/L去甲肾上腺素能减弱Ca~(2+)-ATPase活性(P<0.01)及mRNA的表达(P<0.01),10~(-5) mol/L和10~(-6) mol/L哌唑嗪能减弱10~(-7)moL/L去甲肾上腺素对Ca~(2+)-ATPase活性的抑制作用(P<0.05).10~(-6) mol/L哌唑嗪可抑制10~(-7)mol/L去甲肾上腺素对PMCA1 mRNA表达的影响(P<0.05).单用哌唑嗪对Ca~(2+)-ATPase活性及mRNA表达水平无明显改变(P>0.05).结论 去甲肾上腺素抑制自发性高血压大鼠Ca~(2+)-ATPase活性和下调PMCA1 mRNA表达,可能是通过α_1肾上腺素能受体途径介导基因转录的下调.哌唑嗪可通过阻断α_1肾上腺素能受体途径抑制去甲肾上腺素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Ca~(2+)-ATPase活性和PMCA1 mRNA表达的影响.     

黄芪多糖对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞功能的影响

目的以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，观察不同浓度黄芪多糖对细胞活力和凋亡以及对胆固醇流出的影响。方法将THP-1细胞诱导分化成泡沫细胞，用不同浓度黄芪多糖对其干预24h，XTT法检测细胞活力，Annexin V／PI染色、caspase3活性检测观察细胞凋亡情况。γ计数仪检测胆固醇流出。结果黄芪多糖呈剂量依赖性（10—100μg／m1）诱导THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡，抑制细胞活力；促进胆固醇流出。结论黄芪多糖可影响THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞活力，诱导凋亡，促进胆固醇流出。     

激素敏感脂酶基因高度表达对泡沫细胞形成的作用

中国仓鼠卵细胞在给予β－ＶＬＤＬ后，细胞内蓄积胆固醇酯，形成泡沫样细胞。以腺病毒基因转移方法书激素敏感脂酶基因转染到中国仓鼠卵细胞中，得到了来自激素敏感脂酶的胆固醇酯水解活性高度表达，此时，β－ＶＬＤＬ导致的胆固醇酯蓄积作用被阻断，提示增加胆固醇酯水解可以防止泡沫细胞形成。     

三磷酸腺苷结合盒转运体A1在泡沫细胞胆固醇流出中的作用

以THB-1细胞源泡沫细胞为研究对象，观察三磷酸腺苷结合盒转运体A1在单核-巨噬细胞源泡沫细胞胆固醇流出中的作用。实验采用流式细胞术检测的方法，来判断三磷酸腺苷结合盒转运体A1激动荆22(R)-羟基胆固醇和抑制剂4，4-二异硫氰酸二丙乙烯2，2-二磺酸(4，4’-diisothiocyanostilbene-2，2’-disulfonic acid,DIDS)对THP-1细胞源泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响。实验结果发现，22(R)-羟基胆固醇作用THP-l细胞源泡沫细胞不同时间后，能明显增加细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1的蛋白表达，流式细胞术检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的平均荧光强度从0h的31．1增加到24h的45．2；而DIDS作用THP-1细胞源泡沫细胞不同时间后，能明显降低细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1的蛋白表达，平均荧光强度从0h的29．4降低到24h的10．4。胆固醇流出实验发现，22(R)-羟基胆固醇作用THP-1细胞源泡沫细胞不同时问后，能明显增加细胞胆固醇流出：而DIDS作用THP-1细胞源泡沫细胞不同时间后，能明显降低细胞胆固醇流出。这些结果表明，三磷酸腺苷结合盒转运体A1在THP-1细胞源泡沫细胞胆固醇流出中起着重要的作用。     

Protective effect of selenium-enriched lactobacilluson CCI_4-induced liver injury in mice and its possible mechanisms

AIM: To study the protective effects and mechanisms of Se-enriched lactobacillus on liver injury caused by carbon tetrachloride(CCI_4) in mice. METHODS: Seventy-two ICR mice were randomly divided into four groups: normal group, CCl_4-induced model group, low Se-enriched lactobacillus treatment group(L-Se group), and high Se-enriched lactobacillus treatment group(H-Se group). During a 3-wk experimental period, the common complete diet was orally provided daily for normal group and model group, and the mice in L-Se and H-Se groups were given a diet with 2 and 4 mg of organoselenium from Se-enriched lactobacillus per kg feed, respectively. From the 2~(nd) wk of experiment, the model group, L-Se group, and H-Se group received abdominal cavity injection of olive oil solution containing 500 mL/L CCl_4(0.07 mL/100 g body mass) to induce liver injury, and the normal group was given olive oil on every other day for over 2 wk. In the first 2 wk post injection with CCl_4, mice in each group were killed. The specimens of blood, liver tissue, and macrophages in abdominal cavity fluid were taken. Then the activities of the following liver tissue injury-associated enzymes including glutathione peroxidase(GSH-Px), superoxide dismutase(SOD), alanine aminotransferase(ALT) and aspartate aminotransferase(AST) as well as malondialdehyde(MDA) content were assayed. Changes of phagocytic rate and phagocytic index in macrophages were observed with Wright-Giemsa stain. Plasma TNF-α level was measured by radioimmunoassay. The level of intracellular free Ca~(2+)([Ca~(2+)]_i) in hepatocytes was detected under a laser scanning confocal microscope. RESULTS: During the entire experimental period, the AST and ALT activities in liver were greatly enhanced by CCl_4 and completely blunted by both low and high doses of Se-enriched lactobacillus. The Se-enriched lactobacillusprotected liver homogenate GSH-Px and SOD activities were higher or significantly higher than those in model group and were close to those in normal group. CCl_4 significantly increased MDA content in liver homogenates, while administration of Se-enriched lactobacillus prevented MDA elevation. Phagocytic rate and phagocytic index of macrophages decreased after CCl_4 treatment compared to those in normal control, but they were dramatically rescued by Se-enriched lactobacillus, showing a greatly higher phagocytic function compared to model group. CCl_4 could significantly elevate plasma TNF-α and hepatocyte[Ca~(2+)]_i level, which were also obviously prevented by Se-enriched lactobacillus. CONCLUSION: Se-enriched lactobacillus can intervene in CCl_4-induced liver injury in mice by enhancing macrophage function activity to keep normal and beneficial effects, elevating antioxidant-enzyme activities and reducing lipid peroxidation reaction, inhibiting excessive release of TNF-α, preventing the dramatic elevation of [Ca~(2+)]_i in hepatocytes.     

利用RNA干扰技术治疗慢性心衰大鼠的研究

目的利用RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术抑制心衰大鼠受磷蛋白（phospho—lamban，PLN）mRNA的表达，改善心脏功能。方法构建表达PLN shRNA的重组腺相关病毒载体（rAAV2-phRi1及rAAV2-phRi2）；通过经腹心包穿刺术将rAAV2-phRi1及rAAV2-phRi2注入心衰大鼠心包内，基因导入后10d，30dRT—PCR法检测RNAi对心肌细胞PLN mRNA的抑制效应，并测定肌浆网Ca^2＋-ATP酶（sarcoplasmic reticulum Ca^2＋-ATPase，SERCA2a）活性，比较血流动力学的变化。结果rAAV2-phRi1及rAAV2-phRi2心包注射后，与心衰组比较，10d时PLN mRNA分别降低18．76％／16．36％，SERCA2a活性及血流动力学指标无明显改善；30d时rAAV2-phRi1及rAAV2-phRi2对PLN mRNA的抑制效率为85．32％／67．65％，SERCA2a活性增加104％／74％，血流动力学显著改善（P〈0．05），达到假手术组水平（P〉0．05）；rAAV2-phRi1的抑制效率，对心功能的改善显著优于rAAV2-phRi2（P〈0．05）。结论在体水平上，RNAi能够抑制心衰大鼠PLN mRNA表达，改善心脏功能，rAAV2-phRi1优于rAAV2-phRi2。     

致糖尿病因素对血管内皮细胞内游离Ca~(2+)浓度的影响

应用荧光探针和激光共聚焦扫描技术观察高糖、高胰岛素、高胰岛素原、肿瘤坏死因子及佛波酯类物质等及糖尿病因素对培养的人脐静脉内皮细胞胞内游离钙离子的作用。高糖、高胰岛素原及肿瘤坏死因子（1～3．5Mu／L）可引起群体细胞内钙离子浓度明显升高（P＜0．01），而0．2Mu/L肿瘤坏死因子作用较弱（P＜0．05），高胰岛素作用不明显（P＞0．05）。动态观察可见，高糖、高胰岛素原、肿瘤坏死因子和佛波酯类物质可引起单个内皮细胞胞内钙离子浓度升高，以核区为显著。肿瘤坏死因子和高胰岛素可诱发"钙振荡"，大剂量佛波酯类物质促使细胞排钙。提示在糖尿病血管并发症中许多致病因子可能通过影响内皮细胞胞内、外钙离子水平而导致其一系列功能和结构损害。     

动脉粥样硬化敏感小鼠C_（57）BL／6J腹膜巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立

泡沫细胞的出现是动脉粥样硬化斑块中有特征性的病理形态改变。本实验选择对动脉粥样硬化形成较敏感的纯系小鼠Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ，取其腹膜巨噬细胞与１０ｍｇ·Ｌ－１氧化低密度脂蛋白共同孵育９６ｈ，建立了典型的巨噬细胞源性泡沫细胞模型。实验结果显示，培养的泡沫样细胞与在无脂蛋白培养基中培养的Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠巨噬细胞和在氧化低密度脂蛋白中培养的昆明种小鼠巨噬细胞比较，脂质成分大量增多，出现脂质颗粒，细胞内总胆固醇增加，其中胆固醇酯含量大于游离胆固醇，符合泡沫细胞的定义。本实验从离休细胞培养方面探寻建立小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞的可能性，为动脉粥样硬化的形成机理分析和防治研究提供了一种可靠的病理细胞模型。