微小RNA-212调控TOB2蛋白表达对转化因子-β1干预A549细胞诱导肺纤维化及上皮-间质转化的影响

目的 探讨微小RNA-212(miR-212)对转化因子-β1(TGFβ1)干预A549细胞诱导肺纤维化及上皮-间质转化(EMT)的影响及可能的相关机制.方法 体外培养A549细胞,实验分组:PBS组(常规培养)、TGFβ1组(含有5 ng/mL TGFβ1培养液培养)、TGFβ1+anti-miR-con组(转染an...     

双硫仑抑制非小细胞肺癌细胞上皮间质转化机制研究

目的 研究双硫仑(DSF)对转化细胞生长因子β₁(TGF-β₁)诱导A549细胞的上皮间质转化(EMT)的抑制作用及其可能的作用机制。方法 构建EMT模型,采用MTT实验检测细胞活性,通过细胞划痕、基质粘附、内皮细胞粘附、transwell小室实验测定DSF对细胞迁移、粘附和侵袭能力的作用。Western blot分析双硫仑对EMT模型中E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平的影响;qPCR检测DSF对Vimentin、E-cadherin以及EMT相关干细胞标志基因乙醛脱氢酶-1(ALDH-1)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和Octamer转录因子4(OCT4)等的mRNA表达水平的影响。结果 DSF可呈现剂量依赖性抑制肿瘤细胞的EMT过程,IC₅₀=80μM。与对照组相比,DSF对TGF-β₁诱导的A549发生EMT后迁移、粘附、侵袭能力的增强具有明显的抑制作用;DSF显著降低Vimentin的表达,促进E-cadherin的表达,且能显著降低干细胞标志基因ALDH-1、SOX2...     

上皮间质转化在肺癌诊治中的应用进展

上皮间质转化是当前诊治恶性肿瘤的热点话题。本研究回顾性分析上皮间质转化与肺癌诊治等的相关研究成果,探讨上皮间质转化的应用进展及其在肺癌诊治中的重要性等,以期为新时期医院在加强治愈肺癌方面提供重要的参考依据。     

miR-124-3p通过调节上皮间质转化抑制胃癌细胞SGC-7901迁移和增殖的研究

目的 探讨miR-124-3p是否通过调节上皮间质转化(EMT)抑制人胃癌细胞SGC-7901的迁移和增殖.方法 培养人胃上皮细胞(GES-1)和人胃癌细胞(SGC-7901、MGC-803、BGC-823);使用RT-PCR法检测人胃上皮细胞和人胃癌细胞中miR-124-3p的表达差异;对SGC-7901细胞中miR...     

亚硝酸钠诱导人肝癌SMMC-7721细胞上皮-间质转化

探讨亚硝酸盐诱导人肝癌SMMC-7721细胞发生上皮-间质转化(EMT)的作用。0.25～25 mmol·L-1亚硝酸钠处理细胞48 h后,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中的TGF-β1、IL-6和IL-8水平,相差倒置显微镜下观察细胞形态学变化,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞移动和侵袭能力,同时采用Western blotting方法检测EMT相关标记蛋白和p-AKT及下游信号分子的蛋白表达水平。结果表明,亚硝酸钠处理人肝癌细胞48 h,可以引起TGF-β1的分泌显著升高,并呈现剂量依赖性。亚硝酸钠对IL-8及IL-6的分泌也具有一定的增加作用,但不具有剂量依赖性。0.25 mmol·L-1亚硝酸钠作用48 h,诱导细胞形态向间质转化,增强波形蛋白和p-AKT及其下游信号蛋白的表达,抑制E型钙黏素蛋白的表达,促进细胞迁移和侵袭能力。结果提示,亚硝酸钠可能通过促进细胞分泌TGF-β1和IL-8,诱导人肝癌SMMC-7721细胞上皮-间质转化。     

上皮-间质转化在肺纤维化中的研究进展

肺纤维化是众多肺部疾病的最终表现结果,其形成过程十分复杂,发生的机制也尚未完全阐明。目前的研究发现,上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是肺纤维化发病机制中的一个关键步骤。转化生长因子-β、Notch和Wingless-type信号通路是普遍认可的介导调控EMT的信号通路。微小核糖核酸及内质网应激等在EMT过程中发挥重要作用。充分认识EMT在肺纤维化发生发展中的作用,有助于寻找治疗肺纤维化的新方法和新药物。本文就近年来国内外学者对EMT在肺纤维化中的研究新进展进行综述。     

橙皮苷对TGF-β1诱导的A549非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的影响

目的：探讨橙皮苷对转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）诱导的人非小细胞肺癌细胞上皮-间质转化的影响。方法：以A549人非小细胞肺癌细胞系作为研究对象。用MTT法,分别检测橙皮苷对正常培养条件或TGF-β1刺激下细胞增殖的影响。应用2种方法评估橙皮苷对TGF-β1刺激条件下A549细胞的上皮间质转化：圆形度值定量评估细胞的形态变化;双抗体夹心酶联免疫吸附法（enzyme linked-immuno-sorbent assay,ELISA）检测上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin,E-cad）、ɑ-平滑肌肌动蛋白（ɑ-smooth muscle actin,ɑ-SMA）、基质金属蛋白酶抑制因子-1（tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1）和基质金属蛋白酶-9（metallopreoteinases-9,MMP-9）水平。结果：0~40 μmol·L^-1的橙皮苷对正常培养条件或TGF-β1刺激后A549细胞的增殖没有显著影响。5 ng·mL^-1 TGF-β1能够诱导A549细胞的上皮间质转化：由上皮特征的铺路石状的细胞形态转化为梭形形态,圆形度值减少;E-cad分泌量减少和ɑ-SMA合成量增加。另外,MMP-9分泌量增加,MMP-9/TIMP-1比值增加。在细胞出现形态改变后,应用橙皮苷（20 μmol·L^-1或40 μmol·L^-1）能够降低ɑ-SMA、MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值,增加E-cad水平,对细胞的圆形度值没有影响。结论：橙皮苷减轻TGF-β1诱导的非小细胞肺癌细胞的上皮间质转化程度,对非小细胞肺癌的转移和扩散有一定的抑制作用。     

GLi1的表达及与上皮-间质转化的关系

非小细肺癌(NSCLC)是全球癌症中发病率和死亡率最高的疾患,尽管目前多学科综合治疗包括分子靶向药物、靶向抗体与化疗药物联用等手段,使肺癌的治疗效果有所改善,但其5年生存率仍然很低(14％-15％)[1].转移是影响疗效的最主要障碍,近来研究发现上皮-间质转换(epithelial mes-enchymal transitions,EMT)现象及音猬因子(sonichedgehog,SHH)信号途径中GLi1表达与肿瘤发生转移密切相关.现对GLi1在非小细胞肺癌中表达及与EMT的关系进行综述.     

长链非编码RNA H19通过miR-4735-3p/HIF-1α信号轴介导姜黄素抑制甲状腺癌上皮—间质转化

目的 明确姜黄素对甲状腺癌细胞的抑制作用及发挥作用的机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time-PCR,qPCR)分析姜黄素诱导后长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)的表达。细胞转染升高或降低目的基因的表达。细胞计数试剂盒(cell counting Kit)-8测定细胞活力。Transwell实验检测姜黄素处理后甲状腺癌细胞侵袭与迁移的改变。采用Western blot分析上皮-间质转化。荧光素酶报告基因实验明确微小RNA(microRNA,miRNA)与lncRNA以及靶基因之间的结合位点。结果 姜黄素抑制甲状腺癌的增殖、上皮-间质转化和长链非编码RNA H19的表达，姜黄素通过H19抑制甲状腺癌细胞上皮-间质转化，H19在甲状腺癌组织中的表达高于正常组织，H19的表达与患者TNM分期及远处转移密切相关，高H19表达与总生存率降低显著相关，H19可以作为竞争性内源RNA通过结合miR-4735-3p来调节缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)的表达，...     

六神丸中脂蟾毒配基的离子抑制色谱分析

目的建立测定六神丸中脂蟾毒配基的离子抑制色谱分析法。方法采用C18柱,流动相为乙腈-0.5%醋酸水溶液(52∶48)。检测波长为299.4 nm。结果此法在0.025~0.35μg范围内线性关系良好,脂蟾毒配基的平均加样回收率为99.3%,RSD为2.25%,r=0.9999。结论此分析方法简便可靠,灵敏度高,重现性好,可作为六神丸的质量控制手段。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素通过上调Slug促进结直肠癌细胞上皮-间质转化的研究

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(TSA)诱导结直肠癌细胞HCT116发生上皮-间质转化(EMT)的潜在分子机制.方法 TSA处理结直肠癌细胞HCT116,观察细胞形态变化;划痕实验观察细胞迁移侵袭能力的变化.实时定量PCR、Western blot检测HCT116细胞EMT标志物以及Slug的表达情况.siRNA敲除Slug表达,Western blot检测HCT116细胞EMT标志物表达变化,以及细胞形态变化.结果 TSA可以促进结直肠癌细胞HCT116的迁移能力,诱导HCT116细胞发生EMT转化,包括细胞形态改变,EMT标志物表达变化.TSA可以促进EMT关键转录因子Slug的表达,包括蛋白和mRNA水平;敲除Slug表达可以抑制TSA诱导的EMT转化过程.结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA通过上调Slug的表达促进结直肠癌细胞HCT116发生EMT转化,从而提高其迁移能力.     

LINC00094靶向miR-19b对非小细胞肺癌增殖、侵袭的抑制作用及其分子机制

目的 探讨LINC00094对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 将pcDNA3.1、pcDNA3.1-LINC00094、si-NC、si-LINC00094转染至非小细胞肺癌A549细胞中;将pcDNA3.1-LINC00094分别与miR-NC、miR-19b转染至A549细胞中,分别记为pcDNA3.1-LINC00094+miR-NC组、pcDNA3.1-LINC00094+miR-19b组。采用实时荧光定量PCR检测LINC00094和miR-19b表达水平;采用蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白和凋亡蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术和Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测LINC00094与miR-19b的靶向关系。结果 LINC00094在肺癌组织中低表达。过表达LINC00094可降低A549细胞的生存率,并抑制细胞迁移、侵袭（P<0.05）,且伴有相关蛋白表达水平的改变（P<0.05）。LINC00094靶向调控miR-19b,过表达miR-19b可逆转LINC00...     

CCL21对胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化的影响

目的 研究CCL21能否参与诱导胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化.方法 取不同浓度(0、50、100、150μg·L-1)的CCL21作用胃癌SGC-7901细胞,划痕试验检测该细胞侵袭能力.镜下观察该细胞形态的变化.Western blot分别检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-9的蛋白表达.结果 150μg·L-1浓度的CCL21作用胃癌SGC-7901细胞后,较其它浓度侵袭能力强,同时使胃癌SGC-7901细胞的胞体逐渐变为长梭状,部分可见伪足生成.E-cadherin蛋白表达下降(P<0.05),N-cadherin、Vimentin、MMP-9蛋白表达升高(P<0.05).结论 CCL21可能参与诱导胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化.     

miR-200b 靶向DNMT3A 抑制非小细胞肺癌细胞增殖与诱导凋亡

摘要： 目的 探讨miR-200b是否通过靶向调控DNMT3A抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖与诱导凋亡。方法 运用qRT-PCR检测miR-200b在不同非小细胞肺癌细胞株中的表达; 将miR-200b mimics、 scramble、 DNMT3A-siRNA、 control-siRNA分别转染于A549细胞, 其中scramble与control-siRNA分别作为miR-200b mimics与DNMT3A-siRNA 的阴性对照组。采用 Western blot 检测 A549 细胞中 DNMT3A 蛋白表达; 采用 MTT 与 AnnexinV-FITC/PI 染色法分别检测 A549 细胞的增殖与凋亡, 比较 miR-200b mimics 与 DNMT3A-siRNA 对 A549 细胞增殖与凋亡的影响。结果 qRT-PCR 结果显示, miR-200b 在非小细胞肺癌 A549、 H1299、 L78、 H460 细胞中的表达均明显低于正常人支气管上皮 16HBE 细胞, 其中以 A549 细胞下调最为明显 （P < 0.05）。Western blot 结果显示, 外源过表达 miR-200b 或沉默 DNMT3A 能明显下调 A549 细胞中 DNMT3A 蛋白的水平。MTT 结果显示, 转染 miR-200b mimics 或沉默 DN⁃ MT3A 48 h、 72 h、 96 h 后, 反映细胞增殖的光密度 （OD） 值与各自阴性对照组比较明显减小 （P < 0.05）。AnnexinV- FITC/PI 染色结果显示, 转染 miR-200b mimics 或沉默 DNMT3A 后, A549 细胞的凋亡率分别为 （23.33%±0.90%、 20.41%±0.70%） 均高于各自阴性对照组 （5.28%±0.55%、 5.68%±0.47%, P < 0.05）。结论 miR-200b通过下调DNMT3A 抑制人非小细胞肺癌细胞增殖与诱导凋亡。     

白藜芦醇对人结肠癌细胞上皮间质转化的抑制作用

目的观察白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人结肠癌细胞HCT-8上皮间-质转化(EMT)的影响,初步探讨其可能存在的机制。方法取对数生长期的人结肠癌HCT-8细胞,采用不同浓度的白藜芦醇(0、40、80、120μmol/L)对细胞分别进行干预24、48、72 h;MTT法检测不同时间Res对HCT-8细胞增殖活性的影响;细胞黏附试验检测Res对HCT-8细胞黏附能力的影响;Transwell小室试验检测Res对HCT-8细胞迁移和侵袭能力的影响;进一步采用蛋白免疫印迹法和qRT-PCR分别检测Res对HCT-8细胞中蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和mRNA表达的影响。结果 Res(浓度为40、80、120μmol/L)在干预后24、48、72 h均可以明显抑制HCT-8细胞的增殖活性(P<0.05)。与空白对照组相比,细胞的同种黏附能力增强,异种黏附能力降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组相比,Res 120μmol/L对细胞迁移和侵袭能力均具有明显的抑制作用(P<0.05),Res 120μmol/L作用HCT-8细胞48 h后,HCT-8细胞中上皮间质标志性蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)和mRNA的相对表达量增加(P<0.05),而AKT蛋白的表达无明显变化(P>0.05),P-AKT蛋白的表达明显减少(P<0.05);N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和mRNA的相对表达量显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论白藜芦醇通过调控细胞EMT抑制人结肠癌HCT-8细胞的迁移和侵袭能力,其作用机制可能受PI3K/AKT信号通路的调控。     

埃克替尼联合TP化疗治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及对miR-204-5p、miR-1269表达的影响

目的 从miR-204-5p、miR-1269表达变化方面观察埃克替尼联合TP化疗治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的临床有效性和安全性。方法 前瞻性选取2019年2月—2020年12月河北北方学院附属第一医院胸外科NSCLC患者82例,计算机随机数字生成法分为对照组（n＝41）、试验组（n＝41）。对照组给予TP化疗,紫杉醇剂量175 mg·m^-2,第1天静脉滴注;卡铂剂量300 mg·m^-2,第2天静脉滴注。4周为1个周期,治疗4个周期。试验组在对照组TP方案治疗基础上加用埃克替尼,TP化疗方案及操作同对照组,同时口服埃克替尼,每次125 mg,每天3次,当患者出现3级及以上不良反应时,可暂停（1～2周）服用,待症状缓解或消失再次恢复每次125 mg,每天3次。4周为1个周期,治疗4个周期后进行效果评价。比较两组临床疗效、不良反应发生情况,分别于治疗前、治疗2个周期、治疗4个周期检测两组患者肺功能［第1秒呼气容积（FEV₁）、最大呼气容积（FVC）］、肿瘤标志物［糖类抗原125（CAl25）、癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）］、miR-204-5p、miR-1269水平。结果 治疗4个周期后,试验组客观缓解率（ORR）为43.90%,疾病控制率（DCR）为82.93%,分别高于对照组的24.39%、63.41%（P<0.05）;治疗前两组患者FEV₁、FVC比较,差异无统计学意义（P>0.05）;治疗2个周期、4个周期后两组FEV₁、FVC均较治疗前升高,且同时间点试验组高于对照组（P<0.05）。治疗前两组患者CA125、CEA、CYFRA21-1比较,差异无统计学意义（P>0.05）;治疗2个周期、4个周期后两组CA125、CEA、CYFRA21-1较治疗前降低,且同时间点试验组低于对照组（P<0.05）;治疗前两组患者miR-204-5p、miR-1269表达水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）;治疗2个周期、4个周期后两组miR-204-5p较治疗前升高,miR-1269较治疗前降低,且同时间点试验组miR-204-5p高于对照组,miR-1269低于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 埃克替尼联合TP化疗治疗晚期NSCLC效果显著,可有效改善患者肺功能,降低肿瘤标志物水平,调节miR-204-5p、miR-1269表达,且安全性高。     

贝伐单抗联合培美曲塞维持治疗对晚期非鳞状非小细胞肺癌患者循环microRNA-19以及白细胞介素-27表达的影响

目的：探讨贝伐单抗联合培美曲塞维持治疗晚期非鳞状非小细胞肺癌疗效及对循环microRNA（ miR）-19和白细胞介素（ interleukin,IL）-27表达水平的影响。方法选择2013年3月至2014年3月入住该院的经一线含铂类方案化疗获得控制的晚期非鳞状非小细胞肺癌患者45例,遵循知情同意原则分为培美曲塞组（25例）和贝伐单抗联合培美曲塞组（20例）;分别观察1年内两组疗效以及患者外周血miR-19、IL-27的表达。结果培美曲塞联合贝伐单抗组和培美曲塞组的疾病控制率分别为80％和48％,总有效率分别为45％和24％,两组间疾病控制率和总有效率比较均存在统计学差异（P＜0．05）;培美曲塞联合贝伐单抗组外周血miR-19表达约是培美曲塞组的0．57倍,两组间相比存在统计学差异（P＜0．05）。与培美曲塞组相比,培美曲塞联合贝伐单抗组外周血IL-27表达升高,两组间相比存在统计学差异（P＜0．05）。结论贝伐单抗联合培美曲赛维持治疗有助于改善晚期非鳞状非小细胞肺癌的治疗效果,降低外周血miR-19、升高IL-27的表达。     

Inhibition of microRNA-148b-3p alleviates oxygen-glucose deprivation/reoxygenation-induced apoptosis and oxidative stress in HT22 hippocampal neuron via reinforcing Sestrin2/Nrf2 signalling

MicroRNAs (miRNAs) have emerged as crucial regulators of neuronal injury during cerebral ischaemia/reperfusion injury. Various miRNAs are dysregulated during this pathological process; however, the precise role of these miRNAs in regulating neuronal injury remains largely unknown. In the current study, we explored the potential function of microRNA-148b-3p (miR-148b-3p) in regulating neuronal injury induced by oxygen-glucose deprivation/reoxygenation (OGD/R) in vitro, a cellular model for mimicking cerebral ischaemia/reperfusion injury. We found that miR-148b-3p expression was significantly decreased in neurons in response to OGD/R exposure. Importantly, miR-148b-3p overexpression decreased cell viability and exacerbated apoptosis and reactive oxygen species (ROS) production in OGD/R-exposed neurons. By contrast, miR-148b-3p inhibition improved cell viability and decreased apoptosis and ROS production in OGD/R-exposed neurons. Notably, Sestrin2, a cytoprotective gene, was identified as a miR-148b-3p target gene. miR-148b-3p inhibition markedly increased Sestrin2 expression as well as the activation of nuclear factor erythroid-2-related factor 2 (Nrf2) antioxidant signalling. Moreover, silencing of Sestrin2 or Nrf2 significantly reversed the miR-148-3p-inhibition-mediated protective effect in OGD/R-injured neurons. Overall, these results demonstrate that miR-148b-3p inhibition protects neurons from OGD/R-induced apoptosis and ROS production through reinforcing Nrf2 antioxidant signalling via upregulation of Sestrin2. Our study indicates that the miR-148b-3p/Sestrin2/Nrf2 axis plays an important role in regulating neuronal injury and may serve as a potential therapeutic target for providing neuroprotection during cerebral ischaemia/reperfusion injury.