miR-552通过PTEN/AKT信号通路促进非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为

目的 探讨miR-552通过调控PTEN/AKT信号通路促进人非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为及其相关机制。方法 通过qRT-PCR检测人肺癌组织样本和人非小细胞肺癌A549细胞系中miR-552、PTEN mRNA的表达情况;通过Western blotting检测PTEN、AKT、p-AKT蛋白的表达情况;通过CCK-8检测miR-552表达对A549细胞增殖能力的影响;通过Transwell小室检测miR-552表达对A549细胞迁移和侵袭能力的影响;通过流式细胞术检测miR-552表达对A549细胞凋亡能力的影响。结果 miR-552在肺癌组织和A549细胞中的表达显著上调。过表达miR-552可显著促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡,而抑制其表达则结果相反。与癌旁组织相比,肺癌组织中PTEN表达显著下调。过表达miR-552可下调PTEN蛋白表达,上调p-AKT蛋白表达,对AKT蛋白无影响,而抑制其表达则结果相反。结论 miR-552可能通过PTEN/AKT信号通路促进人非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为。     

miR-199-3p过表达调控肺癌A549细胞生长、侵袭及上皮间质转化机制研究

目的 探究miR-199-3p过表达靶向抑制SOX5对肺癌A549细胞生长、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响。方法 荧光素酶实验检测miR-199a-3p与SOX5靶向关系。构建SOX5 pcDNA载体过表达SOX5,将miR-199-3p与pcDNA-SOX5单独或联合转染A549,将细胞随机分为对照组(Control组)、miR-199-3p过表达组(mimic组)、SOX5组和mimic+SOX5组进行后续实验。克隆形成法检测肺癌A549细胞增殖情况,流式细胞术检测肺癌A549细胞凋亡情况,Transwell检测肺癌A549细胞侵袭能力;荧光显微镜观察肺癌A549细胞EMT形态学变化;蛋白免疫印迹试验检测Ki-67、PCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果 与SOX5组比较,mimic+SOX5组细胞克隆形成率降低,Ki-67、PCNA蛋白水平降低,细胞凋亡率升高,Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3/Caspase-3比值升高,细胞侵袭数降低,E-cadherin蛋白水平...     

过表达miR-186减弱EMT途径抑制白血病细胞增殖、迁移及糖酵解

目的 探究过表达miR-186对白血病细胞增殖、迁移、糖酵解和上皮间质转化(EMT)的影响。方法 体外培养人白血病HL-60细胞，然后转染mimic NC和miR-186 mimic至HL-60细胞，分别设为mimic NC组(阴性对照组)和miR-186过表达组，非转染的细胞设为对照组。miR-186表达水平采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法测定；细胞形态用倒置显微镜观察；细胞增殖抑制率采用活细胞计数(CCK-8)法测定；细胞迁移率采用Transwell小室法测定；乳酸生成量和葡萄糖消耗水平分别采用萄糖检测试剂盒和乳酸检测试剂盒测定；EMT相关因子[E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)]表达水平使用RT-qPCR和蛋白免疫印迹(WB)法测定。结果 转染24 h后，与对照组和mimic NC组相比，miR-186过表达组miR-186相对表达量、细胞增殖抑制率及E-cadherin mRNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05),而细胞迁移率、葡萄糖消耗水平、乳酸生成量及N-cadherin、Vimenti...     

汉黄芩素调控miRNA-135b-3p靶向SIX4抑制A549细胞上皮间质转化的分子机制

目的 探究汉黄芩素对人非小细胞肺癌A549细胞侵袭转移的影响及其对EMT的作用和分子机制。 方法 （1）研究汉黄芩素对A549增殖、侵袭转移的影响。MTT实验检测汉黄芩素对A549细胞的毒性作用，HE染色观察汉黄芩素处理前后形态学变化，划痕实验、Transwell小室实验检测侵袭转移能力，Western Blot和qRT-PCR实验测定EMT相关标志物表达情况。（2）研究A549细胞EMT相关miRNA及调控机制。利用高通量测序技术，检测汉黄芩素处理TGF-β1诱导的A549后差异表达的miRNA，进行qRT-PCR验证；划痕实验、Transwell小室实验分析细胞转染miRNA mimic、inhibitor和NC后A549细胞侵袭转移能力，Western Blot和qRT-PCR实验测定EMT相关标志物的表达情况。运用GO和KEGG数据库分析，找出目标miRNA作用的靶基因；Western Blot实验和qRT-PCR实验验证miRNA mimic、inhibitor和NC转染后靶基因及蛋白的表达情况；双荧光素报告酶基因实验证明该miRNA对靶基因翻译的调控作用。 结果 （1）汉黄芩素可抑制A549细胞的生长增殖，上调TGF-β1诱导的A549细胞E-cadherin及下调Vimentin的表达，降低细胞迁移的能力，逆转细胞的形态变化。（2）高通量测序得到差异表达的miRNA，其中汉黄芩素可逆转miRNA-135b-3p在A549细胞EMT过程中的过表达，抑制A549细胞的侵袭和转移。 pathway分析及miRNA数据库靶基因预测miRNA-135b-3p可调控SIX4的表达。双荧光素报告基因实验显示miRNA-135b-3p可结合于SIX4基因的3’-UTR产生调控，过表达miRNA-135b-3p的A549细胞SIX4表达降低，敲低miRNA-135b-3p后可恢复。 结论 汉黄芩素调控miRNA-135b-3p靶向SIX4抑制A549细胞的侵袭转移和EMT过程。     

槲皮素通过miR-101/EZH2轴介导的EMT途径改善NSCLC吉西他滨耐药的机制研究 #br#

目的 从微小RNA-101（miR-101）/Zeste基因同源蛋白2（EZH2）轴的角度探究槲皮素逆转非小细胞肺癌 （NSCLC）上皮间质转分化（EMT）及吉西他滨（Gb）耐药性的分子机制。方法 用不同浓度槲皮素培养A549及A549/ Gb，CCK-8法筛选适宜的槲皮素浓度进行后续试验；取A549细胞分为空白组、A549+EMT诱导剂组、A549+槲皮素 组、槲皮素+EMT诱导剂组；A549细胞和A549/Gb分为A549组、A549/Gb组、A549/Gb+槲皮素组、A549/Gb+EMT诱导 剂组、miR-101-inhibitor组、槲皮素+miR-101-inhibitor组、miR-NC组；实时荧光定量PCR（qPCR）检测各组miR-101 表达水平；Western blot法检测EZH2、转化生长因子（TGF）-β1、果蝇母亲DPP同源物4（SMAD4）、p-SMAD4和EMT标 志蛋白E钙黏蛋白（E-cadherin）、N钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达；CCK-8法检测各组细胞光密度 （OD）值，并计算半数抑制浓度（IC50）及耐药指数（IR）。结果 槲皮素对A549及A549/Gb的IC50分别为64、128 μmol/L。 EMT诱导剂增强A549细胞EMT特性（N-cadherin及Vimentin表达升高，E-cadherin表达降低）后，A549细胞miR-101 表达降低，EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表达水平，IC50及IR升高（P＜0.05）；槲皮素可抑制A549细胞EMT 特性、降低IC50及IR，并上调miR-101，抑制EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表达（P＜0.05）；EMT诱导剂可逆 转槲皮素的上述作用（P＜0.05）。与 A549 细胞相比，A549/Gb 细胞的 EMT 特性增强，IC50、IR、EZH2、TGF-β1、pSMAD4/SMAD4表达均升高（P＜0.05）；抑制miR-101或EMT 诱导剂处理，均可进一步增强A549/Gb 细胞的EMT 特 性，升高IC50、IR，上调EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表达（P＜0.05）；槲皮素可抑制A549/Gb细胞的EMT进 程、降低其IC50、IR及EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表达（P＜0.05）；抑制miR-101表达可逆转槲皮素的上述 作用（P＜0.05）。结论 槲皮素可通过上调miR-101，抑制EZH2表达，进而抑制EMT进程，降低NSCLC细胞耐药性。     

CCL5对人肺腺癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的:研究敲低CC基序趋化因子配体5(CCL5)在非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞中的表达及对A549细胞增殖、迁移、凋亡等生物学活性的影响,探讨CCL5促进A549细胞上皮间质软化(EMT)的可能分子机制。方法:体外培养肺腺癌A549细胞,应用shRNA敲低A549细胞中CCL5基因,分为阴性对照组(siRNA-NC)及实验组(siRNA-CCL5)。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中CCL5mRNA表达;CCK-8、Transwell实验观察下调CCL5表达后细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;蛋白印迹法(Western blot)检测E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及TGF-β信号通路TGF-β蛋白表达量的变化。结果:与对照组相比,敲低CCL5表达后实验组A549细胞CCL5mRNA表达下调(P<0.05);CCK-8实验结果显示A549细胞的增殖受到抑制(P<0.05);Transwell实验显示A549细胞的迁移、侵袭明显抑制(均P<0.05);A549细胞凋亡增加;West...     

蛇葡萄素对人前列腺癌DU145细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨蛇葡萄素（AMP）对人前列腺癌DU145细胞增殖、迁移和侵袭的影响,研究其对转化生长因子β（TGF-β）诱导的上皮间质转化（EMT）模型的作用。方法：用不同浓度的AMP处理DU145细胞,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖情况;Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力;细胞免疫荧光实验表征不同浓度TGF-β处理后细胞内E-cadherin和Vimentin表达情况,确定EMT模型最佳诱导浓度;Western blot法进一步检测加药后EMT模型E-cadherin和Vimentin表达情况。结果：AMP对DU145细胞增殖具有显著的抑制作用,24、48、72 h的IC50分别为35.62、32.71、28.43 μg·mL-1;Transwell实验显示AMP处理后穿膜细胞数明显减少,显著抑制细胞的迁移和侵袭能力;细胞免疫荧光实验表征发现TGF-β诱导后细胞内E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调,确定10 ng·mL-1为TGF-β诱导EMT模型的最佳浓度。Western blot法检测显示,与对照组相比,TGF-β组和TGF-β+AMP组的细胞内E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调,此外,与TGF-β组相比,TGF-β+AMP组细胞内E-cadherin表达变化无统计学差异,但Vimentin表达降低（P<0.05）,表明AMP具有逆转EMT过程的作用。结论：AMP不仅能够抑制人前列腺癌DU145细胞的增殖,还可抑制其迁移和侵袭能力,这可能与逆转EMT过程有关。     

双硫仑抑制非小细胞肺癌细胞上皮间质转化机制研究

目的 研究双硫仑(DSF)对转化细胞生长因子β₁(TGF-β₁)诱导A549细胞的上皮间质转化(EMT)的抑制作用及其可能的作用机制。方法 构建EMT模型,采用MTT实验检测细胞活性,通过细胞划痕、基质粘附、内皮细胞粘附、transwell小室实验测定DSF对细胞迁移、粘附和侵袭能力的作用。Western blot分析双硫仑对EMT模型中E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平的影响;qPCR检测DSF对Vimentin、E-cadherin以及EMT相关干细胞标志基因乙醛脱氢酶-1(ALDH-1)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和Octamer转录因子4(OCT4)等的mRNA表达水平的影响。结果 DSF可呈现剂量依赖性抑制肿瘤细胞的EMT过程,IC₅₀=80μM。与对照组相比,DSF对TGF-β₁诱导的A549发生EMT后迁移、粘附、侵袭能力的增强具有明显的抑制作用;DSF显著降低Vimentin的表达,促进E-cadherin的表达,且能显著降低干细胞标志基因ALDH-1、SOX2...     

LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的　探讨LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞迁移和侵袭作用的影响。方法　qPCR检测30例TNBC患者肿瘤组织、癌旁正常组织以及6种乳腺细胞（乳腺正常细胞MCF-10A,乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468、BT549、T47D）LincRNA-P21和miR-17-3p的表达。取MDA-MB-231细胞,单独过表达LincRNA-P21（实验设对照组、pcDNA3.1空白组、pcDNA-LincRNA-P21组）,抑制miR-17-3p表达（实验设对照组、miR-17-3p空白组、miR-17-3p抑制剂组）,过表达LincRNA-P21+抑制miR-17-3p表达（实验设对照组、miR-17-3p抑制剂组和pcDNA-LincRNA-P21+miR-17-3p inhibitor组）。CCK-8法检测MDA-MB-231细胞增殖,集落形成实验检测细胞的集落数量,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。Western blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果　TNBC患者组织中LincRNA-P21的表达明显低于癌旁组织（0.48±0.03 vs. 1.03±0.06,t=11.714,P＜0.01）,miR-17-3p的表达显著高于癌旁组织（2.93±0.17 vs. 1.02±0.04,t=15.593,P＜0.01）。乳腺癌细胞系中LincRNA-P21表达量明显低于MCF-10A,miR-17-3p表达量高于MCF-10A（P＜0.01）。单独过表达LincRNA-P21或抑制miR-17-3p后,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力均明显下降。过表达LincRNA-P21的同时抑制miR-17-3p,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力出现进一步下降,且上调E-cadherin的表达,抑制Vimentin的表达（P＜0.05）。结论　LincRNA-P21通过竞争性结合miR-17-3p来抑制MDA-MB-231细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭。     

整合素αvβ3抑制剂Cyclo-RGDfK对纤连蛋白诱导乳腺上皮细胞间质转化的影响

目的本研究探讨整合素αvβ3抑制剂(Cyclo-RGDfK)对纤连蛋白(fibronectin,FN)诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A上皮间质转化的影响。方法体外传代培养MCF-10A细胞,采用FN诱导建立上皮间质转化(EMT)模型。Western blot实验检测αv integrin、β3 integrin、上皮标志物E-cadherin和间充质标志物N-cadherin、Vimentin的蛋白表达;划痕修复实验和Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 Western blot结果显示FN作用48 h后可明显增强αv integrin、β3 integrin、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达,下调E-cadherin蛋白表达,在给予Cyclo-RGDfK作用后,FN诱导的N-cadherin和Vimentin表达上调和E-cadherin表达下调被明显逆转;划痕修复实验和Transwell小室实验结果表明,FN能显著增强MCF-10A细胞迁移和侵袭能力,Cyclo-RGDfK能显著抑制FN的诱导作用。结论 Cyclo-RGDfK能抑制FN诱导乳腺上皮细胞MCF-10A的EMT过程,降低细胞的侵袭和迁移能力,其可能是治疗乳腺癌转移的潜在药物。     

miR-208a促进非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的功能和机制研究

目的　探讨miR-208a对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法　（1）分别用miR-208a mimic、NC mimic、miR-208a inhibitor和NC inhibitor转染A549细胞。采用荧光定量PCR（qPCR）检测A549细胞中miR-208a过表达和干扰效率;采用CCK-8实验、Transwell实验和划痕实验检测miR-208a对A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响。利用生物信息学网站PicTar、miRanda、Targetscan和miRDB预测与miR-208a结合的下游靶基因;构建蛋白酪氨酸磷酸酶受体G（PTPRG）的3′UTR野生型和突变型双荧光素报告酶基因载体,和miR-208a共转染到HEK-293T细胞后观察荧光素酶活性变化。（2）取对数生长期的A549细胞,设置阴性对照组（si-NC组）、PTPRG敲低组（si-PTPRG组）和PTPRG敲低组＋miR-208a干扰组（si-PTPRG＋miR-208a inhibitor组）,采用CCK-8、Transwell实验和划痕实验检测PTPRG对A549增殖、侵袭和迁移的影响,qPCR和Western blot检测3组细胞PTPRG的mRNA和蛋白表达变化。结果　（1）miR-208a mimic组miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均高于NC mimic组（P＜0.05）;miR-208a inhibitor组的miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均低于NC inhibitor组（P＜0.05）。生物信息学分析显示PTPRG是miR-208a的靶基因,双荧光素报告酶实验结果显示miR-208a过表达能够降低PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,而敲低miR-208a能够增加PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,miR-208a能够与PTPRG的3′UTR序列结合。（2）与si-NC组相比,si-PTPRG组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力明显增高,PTPRG基因和蛋白表达水平下降（P＜0.05）;而与si-PTPRG组相比,si-PTPRG＋miR-208a inhibitor组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力下降,PTPRG基因和蛋白表达水平升高（P＜0.05）。结论　miR-208a可能通过靶向调控PTPRG来促进A549细胞的增殖、侵袭和迁移。     

慢病毒介导的microRNA-155过表达对肝癌细胞HepG2增殖的影响

摘要： 目的 通过构建慢病毒 （LV） 介导的miRNA-155 （miR-155） 过表达载体， 探讨上调miR-155对肝癌细胞系 HepG2增殖的影响。方法 针对目标序列合成特异性miR-155过表达片段并克隆入慢病毒载体pGCSHL-GFP， 将重组miR-155-hRNA-LV和阴性对照空病毒载体转染HepG2细胞， 建立稳定过表达miR-155的细胞系。细胞设过表达组 （H组）、 阴性对照组 （negative control， NC组） 和正常组 （normal， N组）。实时荧光聚合酶链式反应 （qRT-PCR） 方法检测各组miR-155和PTEN的表达水平； Western blot检测各组PTEN、 CyclinD1、 CyclinA1+A2蛋白表达情况； 细胞增殖-毒性检测 （CCK-8） 细胞增殖情况。结果 H组miR-155表达量明显高于其NC组及N组， 靶基因PTEN的表达量低于NC组及N组 （均P＜0.05）。H组PTEN蛋白的表达量明显低于NC组和N组， 而CyclinD1、 CyclingA1+A2蛋白的表达量明显高于NC组和N组 （均P＜0.05）。CCK-8结果显示3组12 h时吸光度值开始出现差异， 24 h、 48 h、 72 h H 组吸光度值均明显大于NC组和N组 （P＜0.05）， 但后2组差异无统计学意义。结论 过表达miR-155可促进肝癌细胞系HepG2细胞增殖。     

LINC00094靶向miR-19b对非小细胞肺癌增殖、侵袭的抑制作用及其分子机制

目的 探讨LINC00094对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 将pcDNA3.1、pcDNA3.1-LINC00094、si-NC、si-LINC00094转染至非小细胞肺癌A549细胞中;将pcDNA3.1-LINC00094分别与miR-NC、miR-19b转染至A549细胞中,分别记为pcDNA3.1-LINC00094+miR-NC组、pcDNA3.1-LINC00094+miR-19b组。采用实时荧光定量PCR检测LINC00094和miR-19b表达水平;采用蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白和凋亡蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术和Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测LINC00094与miR-19b的靶向关系。结果 LINC00094在肺癌组织中低表达。过表达LINC00094可降低A549细胞的生存率,并抑制细胞迁移、侵袭（P<0.05）,且伴有相关蛋白表达水平的改变（P<0.05）。LINC00094靶向调控miR-19b,过表达miR-19b可逆转LINC00...     

miR-199a-5p调控DDR1抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移

目的初步探究miR-199a-5p对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。方法选取U251细胞为实验对象,构建miR-199a-5p过表达U251细胞株。实验分组:对照组(无转染的U251细胞,Control)、阴性对照组(转染空载体质粒U251细胞,NC)以及实验组(转染miR-199a-5p成熟模拟物,mimics)。实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-199a-5p表达;CCK-8检测转染miR-199a-5p后细胞增殖;细胞划痕实验与Transwell迁移实验检测各组U251迁移情况;Western blot检测DDR1表达;构建DDR1过表达U251细胞株,检测DDR1过表达对转染miR-199a-5p的U251细胞增殖和迁移的影响。结果mimics组细胞miR-199a-5p水平高于control组(P<0.01),细胞活力降低(P<0.01),增殖能力减弱(P<0.01)。转染miR-199a-5p组细胞DDR1表达水平降低(P<0.01)。与mimins组相比,转染pcDNA3.1-DDR1组能够上调DDR1(P<0.01),增加细胞活力,促进细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。结论miR-199a-5p能够下调DDR1表达,抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移。     

毛蕊花糖苷通过下调CD44表达抑制胶质瘤细胞上皮间质转化和侵袭

目的： 探讨毛蕊花糖苷（verbascoside,VB）对胶质瘤细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）和侵袭的影响及其分子调控机制。方法： 分别使用不同浓度（0,50,100,200 μmol·L^-1）的VB处理胶质瘤U87和U251细胞24 h。使用Jet Prime转染100 μmol·L^-1VB处理的细胞：对照组（转染空载质粒）、VB组（转染空载质粒+100 μmol·L^-1的VB）、oe-CD44组（转染CD44过表达质粒）、Both组（转染CD44过表达质粒+100 μmol·L^-1VB）。CCK-8法和Transwell试验分别检测VB对U87和U251细胞增殖、侵袭能力的影响。Western blot检测各组细胞的CD44和EMT相关蛋白Snail、Vimentin、N-cadherin的表达水平。结果： VB能呈浓度依赖性抑制胶质瘤U87和U251细胞的增殖和侵袭能力,下调CD44及EMT相关蛋白Snail、Vimentin、N-cadherin的表达水平。而CD44过表达时则明显上调以上蛋白表达水平,增加细胞增殖和侵袭能力。当CD44过表达并加入100 μmol·L^-1的VB时,能减弱VB下调CD44以及EMT相关蛋白Snail、Vimentin、N-cadherin表达水平的作用,同时能明显减弱VB所抑制的细胞增殖及侵袭能力。结论： VB通过下调CD44的表达而抑制胶质瘤细胞的上皮间质转化。     

MicroRNA-21 promotes epithelial-mesenchymal transition and migration of human bronchial epithelial cells by targeting poly (ADP-ribose) polymerase-1 and activating PI3K/AKT signaling

Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is known to be involved in airway remodeling and fibrosis of bronchial asthma. However, the molecular mechanisms leading to EMT have yet to be fully clarified. The current study was designed to reveal the potential mechanism of microRNA-21 (miR-21) and poly (ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1) affecting EMT through the PI3K/AKT signaling pathway. Human bronchial epithelial cells (16HBE cells) were transfected with miR-21 mimics/inhibitors and PARP-1 plasmid/small interfering RNA (siRNA). A dual luciferase reporter assay and biotin-labeled RNA pull-down experiments were conducted to verify the targeting relationship between miR-21 mimics and PARP-1. The migration ability of 16HBE cells was evaluated by Transwell assay. Quantitative real-time polymerase chain reaction and Western blotting experiments were applied to determine the expression of Snail, ZEB1, E-cadherin, N-cadherin, Vimentin, and PARP-1. The effects of the PI3K inhibitor LY294002 on the migration of 16HBE cells and EMT were investigated. Overexpression of miR-21 mimics induced migration and EMT of 16HBE cells, which was significantly inhibited by overexpression of PARP-1. Our findings showed that PARP-1 was a direct target of miR-21, and that miR-21 targeted PARP-1 to promote migration and EMT of 16HBE cells through the PI3K/AKT signaling pathway. Using LY294002 to block PI3K/AKT signaling pathway resulted in a significant reduction in the migration and EMT of 16HBE cells. These results suggest that miR-21 promotes EMT and migration of HBE cells by targeting PARP-1. Additionally, the PI3K/AKT signaling pathway might be involved in this mechanism, which could indicate its usefulness as a therapeutic target for asthma.     

微RNA-132-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡

目的 研究微RNA(miR)-132-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡中的作用及其作用机制。方法 该研究起止时间为2018年2月至2019年7月。定量聚合酶链反应（qPCR）检测正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19和葡萄膜黑色素瘤细胞SP6.5、M23中miR-132-3p表达。SP6.5细胞中转染miR-132-3p干扰质粒（anti-miR-132-3p）、第10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）过表达质粒（pcDNA3.1-PTEN）或共转染anti-miR-132-3p和PTEN干扰质粒（si-PTEN）,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法检测PTEN、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达,生物信息学预测结合双萤光素酶报告实验分析miR-132-3p与PTEN的靶向关系。结果 与ARPE-19细胞相比,SP6.5、M23细胞中miR-132-3p表达量（0.26±0.02比0.94±0.09、0.81±0.08）明显升高（P<...