细胞凋亡在小鼠病毒性心肌炎中的作用

目的 :探讨柯萨奇病毒 B3(CVB3)所致小鼠病毒性心肌炎 (VM)心肌细胞损伤的变化 ,观察细胞凋亡在心肌损伤中的作用。方法 :采用 CVB3制备小鼠病毒性心肌炎动物模型 ,分别于腹腔接种 CVB3后第 5、7、10、14、2 1、2 8d,取心肌组织切片 HE染色了解心肌损伤 (坏死 )情况 ;电镜和流式细胞仪检测 ,观察心肌中的细胞凋亡。结果 :心肌坏死方面 :光镜观察见对照组小鼠心肌组织无异常改变 ,实验组病鼠可见心肌细胞坏死和单核、淋巴细胞浸润 ,后期可见纤维化 ;心肌细胞凋亡方面 :电镜观察对照组心肌中未检出凋亡细胞 ,而病鼠心肌凋亡细胞检出率较高 5 8.33% (7/12例 ) ,且细胞凋亡多存在于炎症病灶周围的心肌细胞及病灶处炎性浸润细胞 ;各期病鼠心肌组织中的细胞凋亡比率较对照组明显增加 ,流式细胞仪检测平均心肌细胞凋亡百分率为 2 6 .74± 15 .2 2 % ,感染后第 7～ 14 d心肌细胞凋亡百分率明显高于其余时间 (P<0 .0 0 1)。结论 :小鼠病毒性心肌炎中心肌损伤坏死与凋亡共存 ,其中异常的心肌细胞凋亡与病毒性心肌炎的发病过程有关     

益心饮对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠心肌组织病理及超微结构的保护作用

目的:观察益心饮对病毒性心肌炎小鼠心肌组织病理及超微结构的影响。方法:用CVB3感染Balb/c小鼠制造病毒性心肌炎动物模型,分别用生理盐水、黄芪注射液及益心饮口服液灌胃治疗,分别观察7d和14d的心肌组织病理变化,并于电镜下观察小鼠心肌组织的超微结构。结果:益心饮口服液及黄芪注射液能明显减轻心肌变性坏死及炎性细胞浸润。结论:益心饮口服液对感染CVB3引起的病毒性心肌炎心肌组织病理及超微结构有明显的保护作用。     

氧自由基在病毒性心肌炎发病机理中的作用

目的：研究小鼠病毒性心肌炎氧自由基的持续时间及与心肌病变轻重的关系，从而为临床使用抗氧化剂的疗程提供理论依据。方法：用CoXB3病毒109／TCID(50)0．12ml腹腔接种4～6周龄Balb／c雄性小白鼠制作病毒性心肌炎模型。摘眼球取血测超氧化物歧化酶（SOD）、西二醛（MDA），同时取心脏病理检查。结果：第7天心脏病理切片气球样变性、灶性坏死、炎细胞浸润，病变以14d、21d最明显，28d、35d上述病变仍存在，但在坏死区有肉芽组织形成，说明进入恢复期。5初期（7d）与对照组相比下降不明显（P＞0．05），10d后明显下降，28d渐上升，35d与对照组对比无差异。同期轻、中度及重度心肌炎SOD值比较无差异（P＞0.05），，MDA7d即升高，14d、21d在达高峰，以后逐渐下降，35d时与正常对比无差异（P＞0．05）。结论：酶的恢复及MDA下降要比心肌炎病变恢复得早，且与病变轻重程度无明显关系，氧自由基不是导致心肌病变的主要原因，而是心肌代谢异常的结果。     

黄芪对小鼠病毒性心肌炎细胞凋亡及bcl-2/bax基因转录的影响

目的 :探讨黄芪对实验性病毒性心肌炎细胞凋亡及 bcl- 2 / bax基因的影响。方法 :Balb/ c小鼠 2 4只腹腔感染柯萨奇病毒 B3(CVB3)后随机分成 2组 :黄芪治疗组 (每天腹腔注射黄芪注射液 1 0 g/ kg)及对照组 ,第 8天取心脏标本 ,进行病理学检查、细胞凋亡 TUNEL 法检测以及逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)分析 bcl- 2和 bax m RNA的表达水平。结果 :1黄芪治疗组病变积分明显低于对照组 (P <0 .0 1 ) ;2黄芪治疗组心肌细胞凋亡指数 (AI)明显低于对照组 (P <0 .0 1 ) ;3黄芪治疗组心肌组织 bcl- 2的 m RNA的相对表达量明显高于对照组 (P <0 .0 1 ) ,bax m RNA的相对表达量无明显改变 (P >0 .0 5 ) ,bcl- 2m RNA/ bax m RNA比值则明显增高 (P <0 .0 5 )。结论 :黄芪可通过上调病毒性心肌炎小鼠心肌组织 bcl- 2的基因转录 ,抑制细胞凋亡 ,减轻心肌损伤     

静注免疫球蛋白对病毒性心肌炎小鼠的疗效及机理研究

目的:探讨静注免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)对病毒性心肌炎的疗效及其机理。方法:320只5周龄雄性BALB/c小鼠随机分为8组,感染组腹腔接种柯萨奇B3病毒(CVB3)制成心肌炎动物模型,在接种病毒后3、7 d分别腹腔注射IVIG(500 mg/kg.d-1)5 d和10 d,流式细胞仪定量检测心肌细胞凋亡率和坏死率,与心肌病理组织学积分和病毒滴度进行相关分析,并与中药黄芪疗效对比。结果:静注免疫球蛋白治疗组小鼠心肌内病毒滴度、心肌病理积分和心肌细胞凋亡率与坏死率明显低于病毒对照组和黄芪治疗组,以早期(感染后3 d)长程(10 d)治疗组效果最好。结论:静注免疫球蛋白通过抑制柯萨奇B3病毒,降低心肌细胞凋亡率和坏死率对病毒性心肌炎发挥疗效,其疗效高于传统中药黄芪。     

冬虫夏草提取液治疗实验性病毒性心肌炎研究

目的:旨在探讨冬虫夏草提取液早期治疗病毒性心肌炎小鼠模型的疗效。方法:10 0只成年雄性BALB/c鼠随机分为正常对照组(CG)、感染组(IG)和CSAE灌胃治疗组(CIG)。IG组、CIG组小鼠腹腔接种CVB3建立病毒性心肌炎小鼠模型,并于接种病毒后第7天、第14天分批处死。光镜下观察心肌组织学变化、心重/体重及小鼠存活率。结果:接种病毒后第7天及第14天CIG组心肌炎症坏死半定量分析较IG组显著减轻(P <0 .0 1) ,心重/体重降低(P <0 .0 1) ;CIG组14d存活率85 %显著高于IG组5 5 % (P <0 .0 5 )。结论:CSAE对VMC小鼠有保护作用。     

黄芪甲甙对病毒性心肌炎细胞凋亡作用的研究

目的　研究黄芪甲甙对病毒性心肌炎的细胞凋亡作用。方法　Balb/c小鼠腹腔接种CVB3建立病毒性心肌炎模型 ,随机分为黄芪甲甙治疗组及生理盐水对照组 ,心肌HE染色观察心肌病理改变 ,原位末端标记法与流式细胞仪方法观察细胞凋亡指数。结果　黄芪甲甙治疗组心肌病理积分明显低于对照组 (P <0 .0 1 ) ,细胞凋亡指数 [( 7.6± 3.2 ) %vs ( 1 2 .3± 3.6) % ,t=3.2 6,P <0 .0 5 ]及凋亡率[( 9.5± 5 .3) %vs ( 2 7.8± 9.2 ) % ,t=6.5 8,P <0 .0 1 ]均明显低于对照组。结论　黄芪甲甙对Balb/c小鼠CVB3病毒性心肌炎有显著的抗细胞凋亡的作用。     

病毒性心肌炎小鼠血清ICAM-1和TNF-α的变化及意义

目的探讨病毒性心肌炎小鼠血清细胞间黏附分子-1(intercellu lar adhesion molecu le-1,ICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的水平及两者的相关性和心肌病理变化。方法Balb/c雄性小鼠随机分为两组:正常对照组和柯萨奇B3病毒感染组,测定不同时期血清TNF-α和ICAM-1的水平和心肌病理变化。结果感染组7 d和14 d ICAM-1及TNF-α的水平和心肌病理变化均高于对照组,血清中ICAM-1与TNF-α水平呈正相关。结论ICAM-1与TNF-α在不同时期水平变化表明它们在病毒性心肌炎的发生发展中发挥重要作用。     

基于MCP-1的不同干预方式对病毒性心肌炎的影响作用

目的:比较N端2-8氨基酸缺失的突变型MCP-1(mMCP-1)干预和抗-MCP-1抗体干预对病毒性心肌炎小鼠发病的影响作用。方法:CVB3腹腔注射BALB/c小鼠,随机分组处理:病毒性心肌炎模型组、抗体干预组、羊IgG对照组、mMCP-1干预组和空质粒对照组,并设未感染生理盐水对照组。采用心肌注射的方式在心肌转移抗体或mMCP-1真核表达质粒pVMm。观察小鼠心脏重量和体重的比值(HW/BW)、血清CK-MB水平、心肌组织病理学积分(PS)、心肌组织病毒载量和心肌浸润的单个核细胞变化。结果:经20μg、40μg和60μg pVMm干预的小鼠,心肌组织病变和心肌损伤较模型组减轻;不同pVMm干预剂量对心肌组织浸润的单个核细胞数的影响作用不同,40μg或60μg pVMm干预的小鼠,心肌组织中浸润的单个核细胞数明显低于模型组,20μg pVMm干预的小鼠,心肌组织中浸润的单个核细胞数与模型组相比没有明显的差异。抗-MCP-1抗体干预和mMCP-1干预小鼠相比,HW/BW、血清CK-MB水平和PS未见明显差异。结论:mMCP-1和抗-MCP-1抗体均可缓解病毒性心肌炎心肌组织病变和心肌损伤,mMCP-1可替代抗-MCP-1抗体用于病毒性心肌炎的干预治疗。     

病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及心肌病变的电子显微镜观察

目的研究病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌超微结构改变及细胞凋亡的形态学变化。方法本实验在接种柯萨奇病毒B3(CVB3)建立VMC动物模型的基础上,用光学显微镜及电子显微镜观察心肌细胞的病变及心肌细胞凋亡。结果研究发现实验组小鼠在接种病毒5d后光镜或电镜下可见心肌病变及炎细胞浸润,7-9天病变达高峰,35天时病变基本恢复。VMC小鼠在接种病毒后7-9天,电镜下可见心肌细胞呈凋亡样改变,并可见凋亡小体。结论实验组小鼠在接种CVB3后可引起VMC,VMC中存在异常的心肌细胞凋亡现象。     

柯萨奇病毒B3感染致小鼠心肌细胞凋亡的研究

目的探讨柯萨奇病毒B3感染与心肌细胞凋亡的关系。方法将 10 0TCID50 柯萨奇病毒B3腹腔注射BALB/c小鼠 ,于接种后 3、5、7、9和 14天各处死 5只 ,取心脏 ,将右半心脏匀浆 ,冻融 3次后离心取上清 ,用HeLa细胞分离病毒并滴定其效价 ;左半心脏进行组织病理学检查和用TUNEL方法检测凋亡细胞。结果接种病毒后第 3天和第 5天光镜观察可见心肌纤维崩解、断裂 ;第 9天和 14天间质纤维增生 ,填充坏死心肌吸收后的间隙。接种后 3～ 9天心肌内可分离到病毒 ,第 7天病毒效价达高峰 ,第 9天下降 ,第 14天分离不到病毒 ;接种后 3～ 14天在心肌内检测到凋亡细胞 ,凋亡细胞数量呈逐渐增加趋势。结论柯萨奇病毒B3型感染BALB/c小鼠可以引发心肌细胞凋亡 ,心肌细胞凋亡是病毒性心肌炎的致病机理之一     

西洋参对小鼠病毒性心肌炎的疗效及机制

目的:探讨西洋参(Panax quinquefolium)对BALB/C小鼠Coxsackie B_3病毒性心肌炎的治疗作用。方法:雄性4周龄BALB/C小鼠腹腔接种CVB_3病毒液,建立VMC模型,接种30min后用西洋参煎剂灌胃每日1次,持续最长至4周。观察小鼠存活率、心肌病理改变、心肌内病毒滴度、心肌细胞凋亡坏死率、外周血T细胞亚群及抗心肌抗体的改变。结果:西洋参治疗组比病毒感染组存活率提高,心肌组织病理改变恢复加快,心肌细胞凋亡坏死率减低及外周血T细胞亚群比例改善,自身抗体减少(P<0.05)。结论:西洋参对CVB小鼠有较好的治疗作用。晚期效果好于黄芪。     

病毒性心肌炎小鼠心肌骨桥蛋白和I 型胶原表达的动态变化

目的:观察病毒性心肌炎(VMC) 小鼠心肌骨桥蛋白(OPN) 及I 型胶原(Col I) 的表达,探讨OPN 在VMC 发病中的作用机制。方法:以 柯萨奇病毒 B3 (myocarditic coxsackievirus B3, CVB3) 感染BALB/C 小鼠建立 VMC 模型,取心肌组织行 HE 和 Masson 染色,并计算病理积分及心肌胶原纤维容积分数(CVF);RT-PCR 检测Col I 含量;RT-PCR及ELISA 法检测OPN 表达。结果:VMC 组第7 天心肌细胞大量坏死,炎性改变明显,随后炎性病灶逐渐吸收,第28 天病灶周围炎细胞几近消失,纤维化明显;VMC 组各时间点心肌病理积分、OPN mRNA 表达均明显高于同时间点对照组(P<0.05),以 第7 天最高,第 14 天开始下降,与 ELISA 检测结果一致;第7, 14 天 Col I mRNA 表达较弱,第21, 28 天表达增强,均高于对照组(P<0.05),与CVF 结果一致,且 Col I mRNA 与CVF 呈正相关。结论:VMC 急性期即出现OPN 表达增加,至恢复期仍高于对照组,提示OPN 可能参与VMC 急性期的炎症反应,并促进恢复期胶原表达。     

黄龙口服液对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠白介素12水平及自然杀伤细胞活性的影响

目的 :探讨黄龙口服液干预柯萨奇B3 (CVB3 )病毒性心肌炎小鼠动物模型血清IL 12水平和NK细胞活性的影响。方法 :CVB3 诱导Balb/c小鼠心肌炎为研究对象 ,给予黄龙口服液进行干预 ,分别于用药后第 3,7和 14d测定小鼠血清IL 12水平和NK细胞活性。同时测定心脏组织中病毒滴度 ,进行心肌病理学检查。结果 :黄龙组小鼠血清IL 12水平明显升高 ,NK细胞活性增强 ,早期小鼠心脏组织中病毒滴度下降 ,心肌损害较轻。结论 :黄龙口服液干预病毒性心肌炎小鼠在免疫损伤中起到一定的保护作用 ,早期提高宿主对病毒免疫应答能力 ,能有效提高CVB3 感染小鼠血清IL 12水平和提高NK细胞活性 ,从而在早期降低心脏组织中病毒滴度 ,减轻心脏损伤程度 ,有效改善预后。     

A MURINE MODEL OF ACUTEMYOCARDITIS INFECTED BYCOXSACKIE VIRUS B3m

A murine model of acute myocarditis charac.tcrized by necrosis and inflammation was inducedby injecting BALB/e mice with myocarditic Cox.sackie virus B3m (CVB3m). The incidence ofmyocarditis was 62.170 (139/224). Kinetic studiesrevealed a close relationship between virus recovery,host imjnune responses and myocardial lesions.Viremia appeared on day 2 post infection(pi) andtermiuatcd when seruru specific antibodies appearedon day 5 pi. Vinrs was recovered from the myocar.dimn on day 2 pi and lasted 9 days. Only miIdthe myocardium. Maximal cardiac lesions appearedon day 10 pi when the viruses had disappeared fromthe myocardium and serum specific antibodies wereahout undetectabIe. Spleen T Iymphocyte percen.tage iLicreased markedly in correspondence wi(h themaximal myocardial lesions. Cardiac lesions beganto resolve on day 14 pi while spleen T lymphocyteto resolve on day 14 pi while spleen T lymphocytepercentage normalized to the originallevel. As therearc striHng resemblances between this model and acute viral myocarditis in newborns, the model mayprovide an opportunity for studying the inununo-pathogenesis and treatment of human acute viralmyocarditis.     

CD4+T淋巴细胞在小鼠病毒性心肌炎发生发展中的作用

目的探讨CD4⁺ T淋巴细胞（CD4⁺ T细胞）在小鼠柯萨奇病毒B₃(coxsackievirus, CVB₃)所致病毒性心肌炎发生发展中的作用。方法随机将70只BALB/c健康雄性小鼠分为正常对照组(n=15)和病毒感染组(n=55)，正常对照组小鼠腹腔接种不含病毒的eagle氏液0.15mL，病毒感染组小鼠腹腔接种0.15mL TCID50 为109/mL的CVB₃ Nancy株病毒液。分别于接种病毒后第7、10、14、21、28d随机取正常对照组小鼠3只、病毒感染组小鼠8只断髓处死，无菌条件下取心脏，光镜下观察心肌组织的病理变化并计算心肌病理组织学积分，应用免疫组化方法检测CD4⁺ T细胞在心肌中的表达，并与心肌病理组织学积分作相关性分析。结果病毒感染组小鼠心肌可见CD4⁺ T细胞的表达，且与心肌病理组织学积分成显著正相关（r=0.98，P＜0.01），不同时期CD4⁺ T细胞表达强弱不同，以第10～14d最强（P＜0.01)。结论CD4⁺ T细胞在小鼠病毒性心肌炎发病过程中，清除病毒的同时还引起了自身心肌损伤。     

硒对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其作用机制

目的: 探讨硒对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,阐明其对PI3K-Akt信号传导通路中Akt、磷酸化Akt(p-Akt)及其下游靶基因编码的Bax和Bcl-2蛋白的作用机制。 方法: 60只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、病毒对照组和硒干预组(n=20)。正常对照组小鼠连续3 d腹腔注射不含病毒的培养液200 μL;病毒对照组小鼠腹腔注射100半数组织培养感染剂量(TCID₅₀)柯萨奇病毒B组病毒(CVB3)液200μL,连续3d;硒干预组小鼠在病毒对照组同样的处理后灌胃给予100 μg·kg^-1亚硒酸钠,每日1次,连续处理14d。接种CVB3的第15天处死小鼠,TUNEL法检测心肌细胞的凋亡情况,光镜下观察心肌病理变化,Western blotting法检测心肌细胞中Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平。 结果: 与病毒对照组比较,硒干预组小鼠生存率明显升高(P<0.01)。硒干预组小鼠的心肌病理改变较病毒对照组减轻。硒干预组小鼠心肌细胞凋亡率低于病毒对照组(P<0.01)。与病毒对照组比较,硒干预组小鼠心肌细胞中p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平增加,Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低,Bax/Bcl-2蛋白比值下降(均P<0.01)。 结论: 硒对CVB3感染导致的VMC小鼠心肌细胞有保护作用,其作用机制与硒通过活化心肌细胞的PI3K-Akt信号通路、调控其下游Bcl-2和Bax蛋白表达和抑制心肌细胞凋亡有关。