创面肉芽组织细胞的原代培养

目的　探索开放创面肉芽组织细胞培养的可能性 ,比较早、晚期肉芽组织中培养细胞成分的差别。方法　用酶消化法对早 ( 7天 )、晚 ( 17天 )期开放创面的肉芽组织进行原代培养 ,并进行形态学及免疫组化检查。结果　开放创面早、晚期肉芽组织中的培养细胞成分有差异。结论　开放创面的肉芽组织可以进行细胞培养 ,早期以成纤维细胞为主 ,晚期肌成纤维细胞较多。     

创面肉芽组织细胞的原代培养

目的：探索开放创面肉芽组织细胞培养的可能性，比较早、期晚肉芽组织中培养细胞成分的差别。方法：用酶消化法对早（7天）、晚（17天）期开放创面的肉芽组织进行原代培养，并进行形态学及免疫组化检查。结果：开放创面早、晚期肉芽组织中的培养细胞成分有差异，结论：开放创面的肉芽组织可以进行细胞培养，早期以成纤维细胞为主，晚期肌成纤维细胞较多。     

封闭负压引流对肉芽成纤维细胞生物学行为的影响

目的 观察封闭式负压引流技术(VSD)对创面肉芽组织中成纤维细胞生物学行为的影响.方法 制作幼猪急性感染(绿脓杆菌感染模型)创面模型,设封闭负压引流治疗的为VSD组,常规换药治疗为对照组;观察创面肉芽组织成纤维细胞密度、胶原纤维数量、Ⅰ型/Ⅲ型胶原纤维比例和创面愈合时间,进行统计学比较.结果 VSD组成纤维细胞密度显著高于对照组(P＜0.01),胶原纤维数量显著高于对照组(P＜0.01),创面愈合时间明显短于对照组(P＜0.01).结论 封闭式负压引流能明显促进创面肉芽组织成纤维细胞的增殖,改善成纤维细胞胶原结构组成,缩短创面愈合时间.     

生肌散拆方丹参素对肉芽组织成纤维细胞的生物学作用

目的：研究生肌散中化瘀药丹参素对肉芽创面成纤维细胞的生物学作用。方法：体外培养肉芽组织成纤维细胞，分别加入不同浓度的丹参素，采用CCK-8、台盼蓝计数、流式细胞仪检测丹参素对成纤维细胞生长增殖的影响。结果：丹参素对肉芽组织中的成纤维细胞有抑制作用，有统计学意义(P＜0．05)。结论：生肌散中的单方丹参素对肉芽组织中的成纤维细胞有抑制作用，可防止创面的过度愈合。     

不同暂时性关腹材料对腹腔开放后创面愈合影响的研究

目的 观察腹腔开放后腹腔创面愈合的基本过程以及观察不同暂时性关腹材料对于愈合过程的影响。方法 选择24只健康SD雌性大鼠,随机分成四组：A组,单纯聚乙烯片临时关腹;B组,单纯聚丙烯网片临时关腹;C组,聚丙烯网片临时关腹外用生长激素;D组,聚丙烯网片临时关腹外用成纤维细胞生长因子。于腹腔开放后7d取创面肉芽,作病理组织学观察、肉芽微血管密度（MVD）计数、肉芽组织厚度及肉芽成纤维细胞数目比较。结果 各组创面愈合均良好,但聚丙烯网片关腹外用成纤维细胞生长因子组创面肉芽厚度、肉芽内微血管密度（MVP）及成纤维细胞数目都优于其他三组（P值均<0.05）。结论 聚丙烯网片应用于腹腔开放病人,可促进开放处肉芽组织的生长。局部加用生长激素和碱性成纤维细胞生长因子,可进一步加速创面的愈合,其中以聚丙烯网片外用成纤维细胞生长因子效果最好。     

Ⅲ度烧伤后肉芽切除断层皮下组织创面自体皮移植对创面愈合的影响

目的探讨对Ⅲ度烧伤后肉芽切除断层皮下组织创面,采用自体皮移植修复的机制,并评价其疗效.方法采用肉眼、病理组织学、免疫组织化学、电镜和流式细胞术,动态观察成年Ⅲ系小型猪Ⅲ度烧伤后肉芽切除断层皮下组织创面自体植皮术(A组)后,移植皮片活性与结构,移植床肉芽组织、胶原纤维、微血管、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)蛋白表达和成纤维细胞超微结构变化,并与Ⅲ度烧伤后传统的肉芽刮除纤维板创面自体植皮术(B组)进行比较,另设对照组,皮肤仅剃毛(C组). 结果术后3天,移植皮片成活,A组较B组皮片损伤轻、皮肤细胞增殖指数高、移植床血管内皮细胞及肉芽组织增生,bFGF表达明显.5天,两组血管内皮细胞及肉芽组织增殖旺盛,成纤维细胞呈蛋白合成旺盛和功能活跃象,新生胶原纤维出现,但B组增殖更加明显.7～14天,A组表皮结构及真皮毛细血管密度逐渐恢复正常,移植床肉芽组织逐渐成熟为纤维结缔组织,而B组则延后2天左右.21天后,A组愈合创面病理改变轻于B组.30～60天,A组创面收缩及改容程度明显轻于B组,且触之较软、移动度尚可. 结论Ⅲ度烧伤后肉芽切除断层皮下组织创面自体皮移植术的疗效优于传统手术.     

甲壳胺膜负压伤口疗法对难愈性创面血管内皮生长因子和成纤维细胞的影响

目的:观察甲壳胺膜负压伤口疗法治疗难愈创面对其新生肉芽组织中血管内皮生长因子和成纤维细胞表达的影响。方法:2017年11月-2019年11月,笔者科室收治的100例难愈创面患者按随机数字表法分为治疗组(甲壳胺膜负压伤口疗法治疗)和对照组(传统外科换药治疗),每组50例。患者入院后当日、治疗第7天、第14天分别留取创面中心肉芽组织标本送免疫组化检测,电子显微镜下观察肉芽组织中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)和成纤维细胞(Fibroblast)的表达情况,测算每组患者治疗后第7天和第14天VEGF和成纤维细胞分布密集和稀疏的情况。结果:入院当日,两组患者创面肉芽组织的VEGF和成纤维细胞均表达稀疏;第7天,治疗组患者中有66%的难愈创面肉芽组织的VEGF和成纤维细胞表达密集;第14天,治疗组患者中有69%的难愈创面肉芽组织的VEGF和成纤维细胞表达密集。而对照组在治疗第7天、第14天全部表达为稀疏。结论:甲壳胺膜负压伤口疗法可以使大部分难愈创面肉芽组织中成纤维细胞和血管内皮生长因子表达密集,从细胞蛋白水平证明该治疗方法可以有效促进难愈创面新生肉芽组织的生长。     

羊膜负载骨髓间充质干细胞与表皮细胞对放创性皮肤损伤促愈合研究

目的探讨治疗放创性全厚皮肤缺损创面的方法及效果. 方法贵州小香猪8只,每只背部脊柱两侧均有放创性全层皮肤缺损圆形创面(Ф3.67cm)各3个,共48个创面.将经处理的人羊膜(human amniotic mambrane, HAM)分别负载自体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)和表皮细胞,移植到其左侧24个创面作为实验组(A组);以单纯无种植细胞的HAM敷盖其右侧前16个创面(B组);以单纯油纱布敷盖其右侧后8个创面(C组).B、C作为对照组.观察移植后1～3周内各组创面愈合、肉芽组织生长及上皮化等情况,并进行创面组织HE染色及vWF免疫组织化学检测.用图像分析法测算各组各时间点创面平均面积(cm2),并计算其愈合百分率. 结果 C组于伤后 22～23天愈合,B组于伤后19～21天愈合;A组于伤后15～17天愈合,较B、C组分别提前6～7天和5～6天,愈合质量好.移植15～17天,A组与B、C组创面平均残留面积及愈合面积百分率比较,差异有统计学意义(P＜0.01). A组创面的新生上皮已完全覆盖整个创面,肉芽组织生长旺盛,肉芽组织中vWF、成纤维细胞和毛细血管含量丰富,可见胶原沉积;B、C组创面仍见许多炎性细胞浸润,肉芽组织中vWF、成纤维细胞和毛细血管含量少,胶原沉积不明显. 结论 HAM负载自体MSCs和表皮细胞植入对放创性全厚皮肤缺损创面有较好的促愈合作用,愈合质量较高.     

生肌化瘀方及其拆方对体外培养创面肉芽组织成纤维细胞周期的影响

目的 :从细胞分裂周期变化角度探讨生肌化瘀方促进创面修复及皮肤修复的机理。 方法 :采用体外培养创面肉芽组织成纤维细胞 ,并用乳鼠皮肤成纤维细胞作对照 ,分别加入用血清药理学方法制备的生肌方、化瘀方、生肌化瘀方大、小剂量药物血清。通过流式细胞仪检测成纤维细胞分裂周期的变化。 结果 :模型组细胞处于S期的比例低于正常组 (P <0 0 5 )。生肌方组细胞处于S期的比例明显高于正常组 (P <0 0 1)。化瘀方组细胞处于S期的比例明显低于正常组 (P <0 0 5 )。生肌化瘀方各剂量组细胞处于S期的比例均与正常组相比差异无显著性 (P >0 0 5 )。 结论 :生肌化瘀方通过调控创面肉芽组织成纤维细胞增殖周期的影响 ,使创面修复达到皮肤修复。     

自体组织工程化皮肤修复全层皮肤缺损的实验研究

目的为制成含表皮细胞与成纤维细胞的双层皮肤替代物,直接用于修复全层皮肤缺损.方法选用长枫杂交仔猪10只,酶消化法获取皮肤表皮细胞与成纤维细胞,将原代培养处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与30%氧化异丙烯F-127 混匀成细胞悬液后,种植聚羟基乙酸(polyglycolic acid,PGA)形成细胞-生物材料复合物,用于修复自体动物背部直径4 cm全层皮肤缺损,以单纯生物材料(PGA+氧化异丙烯)充填的创面作为对照组.修复术后1,2,4,8周取材,通过组织学和基底膜特殊染色等方法对新生组织进行评价.结果第1周新生组织即出现表皮与真皮2层结构,特殊染色观察到连续的基底膜.第2周表皮与真皮均较前增厚.修复后第8周组织工程化皮肤的形态结构均与正常皮肤相似.对照组则无皮肤形成,仅见大量肉芽组织.结论应用组织工程技术,以PGA+氧化异丙烯为表皮细胞、成纤维细胞载体构建的组织工程化皮肤可修复全层皮肤缺损.