反义核酸对胃癌细胞端粒酶活性与细胞生长的抑制

目的阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性,表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性. 方法运用改良的端粒酶活性定量检测法,测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性;用台盼蓝染色法,观察胃癌细胞的活力.结果三种不同分化程度的胃癌细胞均有端粒酶活性的表达,但其活性的高低与其分化程度没有显著关系.在指定的浓度下,端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后,MKN-45和SGC-7901胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长的抑制,但在同样浓度条件下,MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制.错义序列对照组则无明显变化.结论端粒酶活性与胃癌细胞的分化没有显著相关性.端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制胃癌细胞的生长和端粒酶活性,其抑制作用有浓度依赖性和序列特异性,其作用机制是通过抑制端粒酶活性,端粒酶活性的抑制并不总是同细胞生长的抑制平行的.     

反义核苷酸抑制端粒酶活性与肿瘤的治疗

反义技术是根据碱基互补原则 ,用人工合成或生物体自身表达的特定序列的短片段核苷酸与靶基因或其ｍＲＮＡ配对结合 ,阻断靶基因表达的技术。自 1978年 ,Ｚａｍｅｃｎｉｃｋ等首次用反义技术抑制病毒基因表达获得成功后 ,其应用前景就日益广阔。现主要用于分子生物学基础研究 ,肿瘤、遗传病、病毒感染的基因治疗 ,动、植物品种的改良等。1　反义技术的基本作用机制[1]1 1　阻碍转录过程1 1 1　反义寡核苷酸渗入基因组特异区域 ,形成三股螺旋ＤＮＡ或环状ＤＮＡ。1 1 2　反义寡核苷酸对转录因子的圈套作用。1 2　阻碍翻译过程　反义寡核苷酸…     

抑制端粒酶活性治疗乳腺癌的新进展

端粒酶的激活对肿瘤细胞的恶性进展起到关键作用。综述端粒酶在乳腺癌肿决组织及外周血淋巴细胞中的高表达及其作为临床判断术后复发和预后的意义，以及针对端粒酶为靶点进行肿瘤治疗的新方法。     

Stathmin基因反义核酸对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用

目的　探讨 Stathmin基因的反义核酸 (AS- ODN)对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用 ,并观察与化疗药物合用后的协同作用 .方法　以高表达 Stathm in的人成骨肉瘤细胞系 SOSP- 96 0 7为靶细胞、反义 Stathmin(AS- ODN)为阻断剂 ,通过 MTT试验观察 AS- ODN对成骨肉瘤细胞的生长抑制作用及与紫杉醇 (PTX)的协同作用 ,流式细胞仪分析细胞增殖周期的影响 .结果　 AS- ODN及 AS- ODN与 PTX联合应用均明显抑制成骨肉瘤细胞的生长 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) .SOSP- 96 0 7在 AS- ODN作用下 ,细胞分裂阻滞在分裂期的中期 ,并诱导细胞发生凋亡 .结论　 Stathmin基因的反义核酸(AS- ODN)对成骨肉瘤细胞的生长可能起十分重要的作用 ,它有望成为成骨肉瘤治疗的新靶点 ,与抗癌药联合应用有协同作用     

端粒酶反义寡核苷酸对SGC-7901胃癌细胞生长的作用

目的 探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸（PS－ASODN）对胃癌细胞生长的作用。方法 脂质体介导的PS－ASODN作用于SGC－7901细胞后，MTT法计算细胞生长抑制率，流式细胞学观察细胞周期及细胞凋亡率变化。结果 终浓度为3、2及1μM的PS－ASODN对SGC－7901细胞均有抑制作用，抑制率与对照组相比差异有显著性意义（P＜0．01）；流式细胞学检测到凋亡峰，细胞阻滞于G0／G1期。对照寡核苷酸无上述作用。结论 以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸不但明显抑制胃癌细胞的增殖，而且具有促凋亡作用，对胃癌具有重要治疗价值。     

反义核酸抑制肝癌细胞生长的研究进展

某些肿瘤的发生与癌基因的激活和抑癌基因的失活有关,它们都是正常细胞内存在的,其编码的产物多为信号传导系统中的某些效应分子。癌基因和抑癌基因及它们的产物在细胞正常生长和分化中发挥重要作用,他们的突变会造成信号系统的紊乱,影响细胞的正常生命过程,从而引起肿瘤。特别是某些癌基因编码生长因子或其受体,并以自分泌的形式作用于瘤细胞,促进其生长,这是某些肿瘤无限生长的分子基础。因此,许多学者企图用反义核酸抑制癌基因的表达或自分泌生长因子的分泌或封闭其受体,来研究反义核酸在肿瘤治疗中的作用。反义基因疗法是目前肿瘤基因治疗中的一个重要方面。     

热休克蛋白90反义核酸抑制人消化道肿瘤细胞生长的作用

近年来,热休克蛋白90(ＨＳＰ90)的生物学作用受到人们的关注。ＨＳＰ90为胞浆分子伴侣的主要成员,其在肿瘤细胞生长、增殖中的作用值得研究。我们将反义ＨＳＰ90重组子转染人胃癌细胞系ＳＧＣ7901、人胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ7901/ＶＣＲ、人肝癌细胞系ＨＣＣ7402及人食管癌细胞系Ｅｃ109,研究了ＨＳＰ90蛋白在这些细胞中的表达及其对细胞生长的影响。一、材料及方法1细胞系:人胃癌细胞系ＳＧＣ7901、人胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ7901/ＶＣＲ、人肝癌细胞系ＨＣＣ7402及人食道癌细胞系Ｅｃ109;ＨＳＰ90反义核酸转染细胞ＡＨＳＧＣ7901、ＡＨ…     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞癌细胞表达的影响

目的 探讨针对端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞端粒酶活性的抑制及对P53和PCNA基因表达的影响。方法 用PCR－ELISA法检测喉癌细胞株Hep-2细胞内端粒酶的活性，用免疫组化的方法检测喉癌细胞P53和PCNA基因的表达。结果 该反义寡核苷酸可抑制喉癌细胞端粒酶活性，此作用有序列特性性和浓度依赖性。40μM反义核苷酸抑制了喉癌细胞PC－NA的表达，而对P53表达无明显影响。结论 靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞Hep-2PCNA基因的表达。     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF—7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF－7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分（hTR）模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF－7细胞。发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72h,端粒酶活性较对照组降低61.0%（P＜0.05）;细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0／G1期细胞数增多,S期及G2／M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化。提示：端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景。     

白蛋白纳米载体介导的反义核酸对肝癌细胞端粒酶活性的抑制

目的 利用纳米载体增强端粒酶反义寡核苷酸时肝脏肿瘤细胞端粒酶活性的抑制作用.方法 实验设6组:空白对照组、纯纳米粒组、游离正义寡核苷酸组、游离反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸-纳米粒组和反义寡核苷酸-纳米粒组.用TRAP-ELASA法检测端粒酶反义寡核苷酸对肿瘤细胞端粒酶活性的影响,以MTT法测定端粒酶反义寡核苷酸对肝脏肿瘤细胞(HepG2)生长的抑制作用.结果 ①纯纳米粒组、游离端粒酶正义核苷酸组和端粒酶正义核苷酸-白蛋白纳米粒处理组的端粒酶活性与空白对照组差异无显著性(P>0.05).②游离端粒酶反义核苷酸和端粒酶反义核苷酸-白蛋白纳米粒处理的肿瘤细胞的端粒酶活性与空白对照相比明显下降(P<0.05),且两者之间差异存在显著性(P<0.05).③纯纳米粒组、游离端粒酶正义核苷酸和端粒酶正义核苷酸-白蛋白纳米粒对肿瘤细胞的抑制作用很小.游离端粒酶反义核苷酸的抑制作用明显,端粒酶反义核苷酸-白蛋白纳米粒的抑制作用最强,两者之间差异有显著性(P<0.05).结论 白蛋白纳米粒可作为反义技术治疗的有效载体,增强端粒酶反义核苷酸的抑制作用.     

榄香烯乳对胃癌SGC—7901细胞株端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的 探讨榄香烯乳治疗胃癌细胞的作用机制。方法 应用四唑盐比色试验、端粒重复扩增--微孔板杂交法、TUNEL染色研究榄香烯乳对胃癌细胞SGC-7901的细胞生长、端粒酶活性及诱导凋亡的作用。结果 榄香烯乳对胃癌SGC-7901细胞生长具有较强的抑制作用。榄香烯乳抗癌作用与抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡有关。榄香烯乳抑制端粒酶活性的效果与浓度及时间相关。结论 榄香烯乳对胃癌细胞生长具有很强的抑制作用,与抑制端粒酶活性、诱导凋亡有关。     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分(hTR)模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF-7细胞.发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72 h,端粒酶活性较对照组降低61.0%(P<0.05);细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0/G1期细胞数增多,S期及G2/M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化.提示端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景.     

端粒酶活性与胃癌关系的临床病理研究

目的　探讨端粒酶与胃癌的发生及其临床病理特征的关系。方法　采用端粒酶重复序列扩增的PCR技术(PCR TRAP)检测了 6 4例胃癌组织及其癌旁组织的端粒酶活性。结果　胃癌组织中端粒酶活性检出率明显高于癌旁组织 (χ2 =81 78,P <0 0 1)。低分化及未分化胃癌端粒酶活性阳性率显著高于高度分化及中度分化胃癌 (χ2 =7 96 ,P <0 0 1)。结论　端粒酶活性增高可能是导致胃癌发生的重要因素 ,端粒酶活性检测可作为胃癌诊断和预后判断的辅助指标     

端粒酶反义基因对恶性胶质瘤细胞生长的作用

目的研究端粒酶RNA的反义寡核苷酸(AODN)抗恶性胶质瘤细胞系的作用。方法采用脂质体包裹AODN转染恶性胶质瘤细胞系U251-MG细胞。用四唑盐MTT法测定细胞生长曲线,用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测细胞的端粒酶活性变化;用流式细胞术检测凋亡细胞。结果2~8μmol/L AODN转染恶性胶质瘤细胞系,培养1~4 d,恶性胶质瘤细胞系端粒酶活性下降,且有剂量依赖性和时间依赖性。AODN转染的恶性胶质瘤细胞培养后细胞增生速度减慢,发生了细胞凋亡。而无义寡核苷酸则无此效应。结论AODN能特异性抑制恶性胶质瘤细胞的端粒酶活性,诱导细胞凋亡。     

端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用

目的本研究将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸（PS-ASODN）经lipotap脂质体转染作用于肝癌细胞系BEL-7402,观察其对肝癌细胞端粒酶活性的影响,同时检测其对癌细胞的生长抑制作用,旨在探讨PS-ASODN对肝癌的治疗价值,为临床治疗肝癌提供一定的试验数据。方法分别采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附（ELISA）法检测不同浓度PS-ASODN对bel-7402的细胞增殖、细胞凋亡和端粒酶活性的作用。结果PS-ASODN能抑制BEL-7402细胞的生长,降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论端粒酶与BEL-7402增殖活性有关,抑制端粒酶活性可能成为肝癌基因治疗的新靶点。     

人不同乳腺癌细胞株端粒酶活性与放射敏感性的关系

目的 :通过检测人不同乳腺瘤细胞株的端粒酶活性及其 2Gy的存活分数 (SF2 )的相关性 ,探讨端粒酶活性是否能成为检测肿瘤细胞放射敏感性的一个指标。方法 :8株人不同肿瘤细胞株 (Hep 2、Hela、U2 5 1、ZR 75 30、MCF 7、MDA MB 4 35S、T 4 7 D、F5 39 15 90 )在指数增长期留取细胞 ,然后分别用TRAP ELISA检测其端粒酶活性 ,克隆形成实验检测其放射敏感性参数SF2 。结果 :8株人乳腺癌细胞株端粒酶活性各不相同 (P <0 .0 1) ,其中ZR 75 \|30端粒酶活性检测呈阴性 ,余 7株细胞端粒酶活性检测呈阳性 ,SF2 亦不相同 (P <0 .0 1) ,但端粒酶活性与SF2 之间无明显的直线相关关系 (P =0 .341)。结论 :8株人不同肿瘤细胞株的端粒酶活性及其放射敏感性各不相同 ,但其端粒酶活性不能成为检测其放射敏感性的指标。     

端粒酶反义寡核苷酸对膀胱癌端粒酶活性及细胞增殖的影响

目的 :探讨端粒酶反义核苷酸对膀胱癌的治疗作用。方法 :以端粒酶 RNA模板区为靶点 ,不同剂量的序列为 TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸 ( PS- ASON)作为实验组 ( A、B、C) ,以硫代磷酸修饰 1 3个核苷酸的随机引物作为对照组 ( D) ,仅加入培养基作为空白对照组 ( E) ,与人膀胱癌细胞株 BIU87细胞共同孵育 ,TRAP- ELISA方法检测端粒酶活性变化 ,计数1～ 30 d细胞数 ,计算细胞倍增时间 ,MTT法测定 ASON对细胞的抑制率。结果 :2 5例膀胱癌组织中 ,2 4例 ( 96% )表达端粒酶活性 ,4例癌旁组织无端粒酶活性表达。与随机引物及空白对照组比较 ,实验组的 ASON能明显降低端粒酶活性 ,减少细胞增殖数目 ,增加抑制率及延长倍增时间 ,并显示剂量的依赖性 ( P<0 .0 1 )。结论 :以端粒酶 RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸引起膀胱癌 BIU87细胞端粒酶活性下降 ,增殖抑制 ,引起细胞退化 ,对膀胱癌的治疗有潜在的意义。     

蛇毒对人及小鼠传代细胞的杀伤作用

本文应用体外微量培养方法,测定9种蛇毒(眼镜王蛇、眼镜蛇、金环蛇、银环蛇、青环海蛇、蝮蛇、尖吻蝮,竹叶青及圆斑蝰)对4株人体肿瘤细胞系(鼻咽癌、肝癌、子宫颈癌及胃癌)和2株小鼠传代细咆(骨髓瘤细胞及小鼠肥大细胞)的杀伤作用和抑制生长作用。结果表明眼镜蛇毒对肿瘤细胞的杀伤作用最强。胃癌及鼻咽癌细胞株对多种蛇毒呈现较高的敏感性。     

细小病毒H－1对肿瘤细胞株的杀伤研究

本文利用细胞集落形成测定细胞存活率的方法，检测了仓鼠细小病毒（ＰＶＨ－１）对２株不同分化程度的胃癌细胞的抑制作用。同时收集感染后４８ｈ、７２ｈ、９６ｈ、１４４ｈ的胃癌细胞，利用电镜观察胃癌细胞的变化。结果表明，ＰＶＨ－１能抑制不同分化程度的胃癌细胞株，其敏感性与胃癌细胞的分化程度有关。