三羟异黄酮对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞体外抑瘤效应、细胞周期及凋亡的影响

 目的探讨三羟异黄酮（Genistein GEN）对体外培养人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM抑瘤作用、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测GEN单独及联合阿霉素对体外培养人乳腺癌MCF-7/ADM细胞的抑制作用;荧光分光光度法检测GEN对阿霉素在MCF-7/ADM细胞的蓄积作用;用流式细胞仪（FCM）检测细胞周期及凋亡率的变化。结果GEN单独及联合阿霉素对体外培养MCF-7/ADM细胞均有明显生长抑制作用,GEN单独作用48 h后表现为随时间的延长抑制作用明显增强,当GEN浓度达到60 μg/ml时,其抑制作用急剧上升（P<0.01）。联合阿霉素后与对照组相比抑制率明显上升（P<0.01）,并随GEN浓度的加大其抑制作用增强,细胞内阿霉素的浓度也随之升高。与对照组相比,细胞周期均有G2/M期阻滞作用,细胞凋亡百分比以联合组最高（P<0.01）,G₁期前出现典型的亚二倍体凋亡峰。结论GEN单独及联合阿霉素对体外培养人乳腺癌MCF-7/ADM细胞具有抑瘤增效作用,可以提高阿霉素在MCF-7/ADM细胞内的蓄积、对细胞周期具有G₂/M期阻滞作用,显著诱导MCF-7/ADM细胞凋亡,可能是其发挥逆转多药耐药分子生物学机制之一。     

（125）I联合ADM对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响

目的研究放射性粒子125I联合化疗药物多柔比星（阿霉素,ADM）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响。方法按2×2析因设计将乳腺癌敏感株MCF-7细胞随机分成A、B、C、D 4组,A组：空白对照组;B组：单纯125I粒子组;C组：单纯ADM组;D组：125I粒子＋ADM组。采用流式细胞术检测各组干预后的细胞周期分布及细胞凋亡率。结果 （1）单纯125I粒子近距离低剂量率持续照射后将MCF-7细胞阻滞于G2~M期1。25I联合ADM将MCF-7细胞周期主要集中在G0~G1期,同时伴有较大比例的细胞凋亡。（2）各组细胞的早期凋亡率分别为：A组（0.99±0.05）%、B组（19.22±4.92）%、C组（16.57±4.73）%、D组（3.16±1.08）%;各组晚期凋亡及坏死率为：A组（0.32±0.18）%、B组（3.16±1.39）%、C组（3.24±0.75）%、D组（28.99±7.96）%,D组晚期凋亡及死亡率明显提高。结论 125I放射性粒子能有效诱导乳腺癌细胞凋亡,与化疗药物ADM联合作用除诱导细胞凋亡,还可导致大量细胞死亡,具有协同、增效的作用。     

miR-490-3p逆转MCF-7／ADM细胞对阿霉素耐药性的影响

【摘 要】目的 探讨miR-490-3p在阿霉素（ADM）耐药乳腺癌细胞系MCF-7／ADM中的表达情况及其对MCF-7／ADM细胞增殖、凋亡和ADM耐药的影响。方法 以野生型人乳腺癌细胞系MCF-7及其耐药型细胞系MCF-7／ADM为研究对象,用实时荧光定量PCR（qPCR）比较两种细胞中miR-490-3p的表达水平,将miR-490-3p的过表达载体pcDNA1（+）miR-490-3p瞬时转染至MCF-7／ADM细胞（过表达组）后采用qPCR检测转染效果,同时设pcDNA3.1（-）空载体对照组和空白对照组;采用MTT法测定转染pcDNA3.1（+）miR-490-3p对各组MCF-7/ADM细胞增殖能力的影响,测定ADM对MCF-7／ADM细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度（IC50）及逆转倍数以评价对ADM敏感性的变化;分别于瞬时转染48 h后用Annexin V／FITC流式细胞术检测各组MCF-7/ADM细胞的凋亡率,Western blotting检测耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）,乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达,荧光分光光度计检测胞内ADM药物浓度,流式细胞仪检测P-gp活性。结果 MCF-7／ADM细胞中miR-490-3p的表达水平为0.24±0.07,显著低于野生型MCF-7细胞的1.02±0.03（P＜0.05）;过表达组瞬时转染24～96 h的miR-490-3p水平持续升高,均高于空载体对照组和空白对照组（P＜0.05）;过表达组的增殖抑制率随转染时间的延长而增加,转染24、48、72和96 h的增殖抑制率依次为（17.52±1.87）％、（31.67±2.79）％、（45.09±1.88）％和（61.82±2.52）％,高于空载体对照组（P＜0.05）;ADM对过表达组的IC50值为（11.27±2.34）μg／ml,低于空白对照组的和空载体对照组（P＜0.05）,且过表达组相对于空白对照组和空载体对照组的逆转倍数分别为3.35倍和3.39倍;与其余两组相比,过表达组的MCF-7/ADM细胞早、晚期凋亡率和细胞内药物浓度均升高,P-gp、BCRP和MRP1表达及P-gp活性均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 上调miR-490-3p可逆转MCF-7／ADM细胞对ADM的耐药性,可能通过降低耐药蛋白表达及抑制P-gp活性有关,且升高其水平可抑制细胞增殖并诱导凋亡。     

乳腺癌细胞耐药过程中p38MAPK活性与细胞凋亡的关系

目的研究乳腺癌细胞耐药过程中p38MAPK活性与细胞凋亡的关系,探讨p38MAPK信号转导途径在其中的作用。方法 以p38MAPK特异性抑制剂SB203580处理乳腺癌耐药细胞MCF-7／ADM,采用流式细胞技术分析对细胞凋亡的影响;MTT检测MCF-7／ADM细胞对阿霉素的半数药物抑制浓度（IC50）;Western blot检测SB203580处理MCF-7／ADM和MCF-7两株细胞后p38MAPK蛋白表达水平;RT—PCR检测细胞内MDR-1 mRNA水平。结果SB203580（10μmol／L）干预24h后MCF-7／ADM细胞的凋亡率为（26．73±4．90）％,与未干预组和对照组凋亡率相比差异有显著统计学意义（F=143．80,P〈0．001）;MCF-7／ADM细胞对阿霉素的敏感性明显提高（F=148927．10,P〈0．001）,相对逆转率达68．45％;与对照组和未干预组相比,干预组的MDR1 mRNA（F=9139．24,P〈0．001）及p38MAPK（F=685．42,P〈0．001）蛋白表达水平明显降低。结论p38MAPK信号转导途径与乳腺癌耐药密切相关,其可能机制为p38MAPK保护人乳腺癌耐药细胞（MCF-7／ADM）逃避凋亡,阻断该通路可增强乳腺癌耐药细胞发生凋亡。     

β-榄香烯对MCF-7／ADM细胞株中乳腺癌干细胞作用的初步研究

目的探讨乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7／ADM与阿霉素敏感细胞株MCF-7／S中乳腺癌干细胞（BCSCs）含量及乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和P-糖蛋白（P-gp）表达的差异,观察中药β-榄香烯（β-ELE）对BCSCs及BCRP和P-gp表达的影响。方法 应用无血清细胞培养法培养MCF-7／ADM和MCF-7／S细胞株,形态学观察不同细胞株无血清细胞球培养的成球率,RT PCR检测两种细胞株中BCRP和P-gp的mRNA水平,流式细胞仪检测BCRP和P-gp的阳性表达率及CD44+CD24^-／low细胞比例。应用15μg/ml β-ELE作用MCF-7/ADM细胞株48h后,检测细胞成球率及BCRP、P-gp基因与蛋白表达的变化。结果 与MCF-7／S细胞比较,MCF-7／ADM细胞的成球率及BCRP、P-gp mRNA水平较高。MCF-7／ADM细胞中BCRP和P-gp蛋白的阳性表达率分别为（77.78±9.55）％和（32.33±5.12）％,CD44+CD24-／low细胞比例为（64.79±11.78）％,均高于MCF-7／S细胞的（3.97±1.51）％、（14.26±2.51）％和（18.79±3.28）％,差异均有统计学意义（P＜0.01）。β-ELE能明显抑制MCF-7／ADM细胞的成球率及BCRP、P-gp基因与蛋白的表达（P＜0.01）。结论 MCF-7／ADM是BCSCs相对富集的一种耐药细胞株且高表达BCRP和P gp,β-ELE能够抑制MCF-7／ADM细胞中BCSCs比例及其成球率,并降低耐药蛋白的表达。     

U0126对MCF-7细胞株化疗敏感性及XIAP蛋白表达的影响

目的：探讨MEK抑制剂U0126对乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡诱导和化疗增敏作用及其与X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）的相关性。方法：利用体外培养乳腺癌细胞株MCF-7，采用MTF比色法观察U0126、紫杉醇（PTX）、阿霉素（ADM）对MCF-7生长的影响；应用流式细胞术观察用药前后细胞周期变化和凋亡率；以Westernblot法检测用药前后XIAP蛋白表达变化。结果：与单药相比，U0126与PTX、ADM联合可显著抑制MCF-7的增殖，增加细胞的凋亡率；联合用药组XIAP蛋白的表达比单药组明显降低。结论：MEK抑制剂U0126与PTX、ADM序贯性联合应用可以协同性增加对MCF-7化疗的敏感性，其机制可能与下调XIAP的表达有关。     

基因转染LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞凋亡的影响

目的：探讨基因转染人源抗菌肽LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响。方法：将含人LL-37/hCAP-18的真核表达质粒瞬时转染人MCF-7细胞,48h后,MTT比色检测MCF-7细胞的增殖,流式细胞术检测MCF-7细胞周期及凋亡,细胞免疫组化染色检测MCF-7细胞中Bax、Bcl-2的表达。结果：重组基因瞬时转染MCF-7细胞48h后,与各对照组相比,肿瘤细胞的生长增殖受到显著抑制（P〈0.05）;转染重组基因组肿瘤细胞凋亡率显著高于各对照组（P〈0.05）,但细胞周期无明显变化;与对照组相比,转染重组基因pEGFP-c1-LL-37的MCF-7细胞中Bcl-2表达显著下降（P〈0.05）,Bax由阴性表达转为表达明显升高。结论：LL-37/hCAP-18可以通过上调促凋亡因子Bax、下调抗凋亡因子Bcl-2诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖。     

PCNA的表达与人乳腺癌细胞凋亡的关系

目的：研究增殖细胞核抗原（PCNA）的表达与人乳腺癌细胞凋亡的关系。方法：以乳腺癌细胞株MCF-7／S（化疗敏感细胞株）为研究对象,应用MTT比色法检测阿霉素（ADR）对体外培养的MCF-7／S细胞增殖抑制作用,末端标记（TUNEL）法检测ADR诱导乳腺癌细胞凋亡,免疫细胞化学法检测ADR作用前后PCNA的表达。结果：ADR抑制MCF-7／S细胞增殖,旱剂量依赖性,IC50为0．128mg／L;ADR作用组MCF-7／S细胞的凋亡率（Apoptoticrate,AR）为0．261,与对照组细胞的凋亡率0．0449相比明显增高（P〈0．01）;PCNA阳性表达率为0．3371,与对照组PCNA阳性表达率0．5152相比明显降低（P〈0．01）。结论：乳腺癌肿瘤细胞的凋亡率（AR）和PCNA的阳性表达呈负相关;ADR能诱导MCF-7／S细胞凋亡,并能抑制其增殖。     

植物多酚类化合物抑制人乳腺癌MCF-7/ADM细胞的筛选

目的研究从儿茶素、槲皮素、大豆苷元、芝麻素、阿魏酸和白藜芦醇等六种植物多酚类化合物,筛选出对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞具有抑制作用的药物。方法MTT法初筛对MCF-7/ADM细胞具有毒性作用的植物多酚类化合物;再通过均匀设计筛出无毒性剂量时联合多柔比星（阿霉素）对MCF-7/ADM细胞抑制作用最强的植物多酚类化合物;最后经单细胞凝胶电泳检测筛出后的植物多酚类化合物联合阿霉素对正常肝细胞的毒性作用。结果槲皮素、白藜芦醇、阿魏酸能抑制MCF-7/ADM细胞增殖;经均匀设计后认为白藜芦醇联合阿霉素对MCF-7/ADM细胞的抑制作用比其余两者明显;单细胞凝胶电泳试验证明白藜芦醇联合阿霉素对正常肝细胞无毒性作用。结论白藜芦醇联合阿霉素对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞具有抑制作用,且基本无毒害作用。     

低频率超声对MCF-7/DOX细胞多药耐药逆转的体外研究*

目的:观察低频率超声空化效应对人乳腺癌细胞株MCF-7/DOX 多药耐药的逆转作用,并探讨其逆转肿瘤多药耐药的机制。方法:以不同的超声辐射时间照射MCF-7/S 、MCF-7/DOX 细胞,采用MTT 法筛选出非细胞毒剂量的超声照射时间。以无毒剂量的超声照射联合不同浓度的DOX,比较单独DOX组与联合组MCF-7/DOX 细胞对DOX的IC 50值有无明显差异,从而判断低频率超声的增敏作用,并计算增敏倍数和相对逆转效率。用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞内阿霉素的浓度。结果:低频率超声辐射对MCF-7/DOX 细胞具有一定的细胞毒作用,其非细胞毒辐射时间是10s。非细胞毒性的超声辐射可显著增加阿霉素对MCF-7/DOX 细胞的抑制率（从21.65%±0.05% 升至43.13%±0.19%）,可显著降低阿霉素对MCF-7/DOX 细胞的IC 50 （从61.08± 0.27μg/mL降至 28.12± 5.94μ g/mL）;对MCF-7 细胞的抑制率（从66.47% ± 0.02%升至 67.25% ± 0.20%）及IC 50 （从0.84± 0.07μ g/mL 降至 0.802 ±0.03μ g/mL）无明显的影响。低频率超声对MCF-7/DOX 细胞的逆转倍数为2.17倍,相对逆转效率为:54.71% 。流式细胞仪检测结果显示:单独应用DOX,MCF-7 细胞的凋亡率为33.99% ,MCF-7/DOX 细胞的凋亡率为4.4% ,低频率超声与DOX合用后,MCF-7/DOX凋亡率为13.70% 。低频率超声处理后,MCF-7/DOX 细胞内DOX浓度显著增加,峰值明显右移,但尚不能达到敏感细胞的水平。结论:低频率超声可部分逆转人乳腺癌MCF-7/DOX 细胞对阿霉素的耐药性,其逆转机制考虑为低频率超声空化效应增加细胞膜的通透性,增加肿瘤细胞内抗肿瘤药物的浓度,从而杀灭耐药的肿瘤细胞,逆转肿瘤耐药性。      

Med19基因敲减增加乳腺癌细胞化疗敏感性及其可能的机制

目的:研究中介体(mediator,Med) 19对乳腺癌化疗敏感性的影响并分析其分子机制.方法:选用多柔比星(adriamycin,ADM)耐药的人乳腺癌细胞MCF-7/ADM和亲本细胞MCF-7(NC组),采用慢病毒载体介导RNA干扰方法构建Med9稳定低表达的MCF-7/ADM与MCF-7细胞株(KD组),并用Real-time PCR和Western blotting方法验证干扰效果.CCK-8法检测慢病毒介导的Med19敲减前后两种细胞对ADM、顺铂(cisplatin,DDP)和紫杉醇(taxinol,TAX)药物敏感性的变化.Real-time PCR和Western blotting检测Med19敲减对多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1)和细胞凋亡基因Bcl2、Bax及Caspase-3、active Caspase-3的表达的影响.流式细胞术检测敲减Med19及ADM处理对细胞凋亡的影响.结果:与MCF-7相比,MCF-7/ADM细胞对ADM、DDP和TAX均具有耐药性.成功构建Med19稳定低表达的MCF-7/ADM与MCF-7细胞株,并且其对ADM、DDP、TAX的敏感性增加,药物作用IC50显著降低(均P＜0.05).MCF-7/ADM细胞Med19 mRNA和蛋白表达显著高于MCF-7细胞,Med19的敲减可降低MCF-7/ADM细胞中MDR1 mRNA与蛋白表达水平(均P＜0.05)并可增加MCF-7/ADM及MCF-7细胞中凋亡相关active Caspase-3、Bax的蛋白表达,降低Bc12的蛋白表达(均P＜0.05).此外,与NC及NC+ ADM组相比,KD组及KD+ ADM组凋亡水平显著增加(均P＜0.05).结论:Med19高表达参与乳腺癌化疗耐药,其机制可能与Med19调节MDR1的表达并影响细胞凋亡有关.     

Death receptor-dependent and -independent pathways in anticancer drug-induced apoptosis of breast cancer cells

Apoptosis is a crucial event for anticancer drug efficacy. The signal pathways activated by anticancer drugs are classified as death receptor (DR) -dependent or -independent. The mechanisms by which anticancer drugs induce apoptosis via DR-dependent pathways are not fully understood. In the present study, we assessed differential activation of signal transduction pathways leading to apoptosis by anticancer drugs in breast cancer cell lines. Three breast cancer cell lines, MDA-MB-231, MCF-7, and MCF-7ADM, which is drug-resistant, were used. Drug sensitivity and apoptosis were assessed by MTT assay and TUNEL, respectively. Expression of apoptosis-related protein was assessed by Western blotting and RT-PCR. The sensitivities of MDA-MB-231 and MCF-7 cells to mitomycin C (MMC) and adriamycin (ADM) were similar. In contrast, sensitivity of MDA-MB-231 cells to paclitaxel (TXL) was 30-fold greater than that of MCF-7 cells, 0.03 micro M in MDA-MB-231 and 0.9 micro M in MCF-7 cells, respectively. Treatment with MMC increased expression of DR4 and Fas in a time-dependent manner in MDA-MB-231 cells. Treatment with ADM increased expression of DR4 and DR5 but not Fas, whereas treatment with TXL increased expression of Fas but not DR4 and DR5 in MDA-MB-231 cells. Although treatment of MCF-7 cells with ADM increased expression of DR4 and DR5 but not Fas, expression of DR4, DR5, and Fas by the drug-resistant cells did not change following treatment with ADM. Activation of Fas, DR4, and DR5 in drug-sensitive cells in response to anticancer drugs is dependent on the cytotoxic effect of each drug. In drug-resistant cells, apoptosis is induced via DR-independent pathways mediated by mitochondrial dysfunction.     

Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和促凋亡作用

目的 探讨Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和促凋亡作用。方法 利用脂质体将真核表达载体pIRES2-EGFP-Noxa瞬时转染至乳腺癌MCF-7细胞,通过RT-PCR检测转染后Noxa基因mRNA的表达,Western blot检测转染后蛋白的表达,MTT 比色法测定细胞增殖的抑制,流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,Hoechst 33342染色检测细胞的凋亡情况。结果 Noxa基因转染后在乳腺癌MCF-7细胞中成功表达。转染后mRNA及蛋白表达持续上升,其转染后24h、48h、72h mRNA的相对灰度值分别为(0.347±0.031)、(0.703±0.041)、(1.044±0.033),差异具有统计学意义（P<0.05）。转染24h、48h、72h后蛋白表达的相对灰度值为(1.171±0.086)、(1.013±0.088)、(0.886±0.063),差异具有统计学意义（P<0.05）。Noxa基因的表达使得乳腺癌MCF-7细胞出现增殖抑制,其24h、48h、72h抑制率分别为（23.9±4.2）%、（36.6±3.0）%、（47.0±3.3）%,差异具有统计学意义（P<0.05）。流式细胞仪检测显示MCF 7细胞DNA合成受到抑制,细胞周期主要抑制在G0/G1 期。其转染24h、48h、72h的G0/G1期分别为（68.1±2.5）%、（72.6±1.5）%、（75.6±0.9）%,与阴性对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）;其24h、48h、72h凋亡率分别为（11.5±0.9）%、（19.6±0.8）%、（25.4±0.7）%,组间差异有统计学意义（P<0.05）。Hoechst 33342染色显示Noxa基因转染后细胞出现凋亡,其24h、48h、72h凋亡率分别为（7.3±4.1）%、（16.8±3.3）%、（23.8±2.3）%,与阴性对照组相比,其差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后能够抑制细胞增殖并促进其凋亡。     

PTPRZ1通过调控PI3K/Akt通路促进乳腺癌细胞增殖和多西他赛耐药

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶受体Z1型(protein tyrosine phosphatase receptor type Z1,PTPRZ1)对人乳腺癌MCF-7细胞多西他赛耐药性的影响及其作用机制。方法:将MCF-7细胞暴露于逐渐增强浓度的多西他赛中建立对多西他赛耐药的乳腺癌细胞（MCF-7/Doc）。采用CCK-8法分别检测MCF-7和MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性。qRT-PCR和Western blot检测细胞中PTPRZ1 mRNA及蛋白表达水平。克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式实验检测细胞凋亡情况。最后采用Western blot检测PTPRZ1调控乳腺癌化疗敏感性的作用机制。结果:CCK-8实验表明成功构建了乳腺癌多西他赛耐药细胞株MCF-7/Doc,克隆形成实验表明MCF-7/Doc细胞增殖能力显著高于亲本MCF-7细胞（P＜0.05）;MCF-7/Doc细胞中,PTPRZ1 mRNA及蛋白水平均显著上调（P＜0.05）。过表达PTPRZ1能显著增强MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性和增殖能力,显著抑制细胞凋亡（P＜0.05）;敲减PTPRZ1能显著降低MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性,并能显著诱导细胞凋亡（P＜0.05）。Western blot结果显示,PTPRZ1能够激活PI3K/Akt信号通路。结论:PTPRZ1通过介导PI3K/Akt信号通路促进乳腺癌对多西他赛的耐药性。     

Fluoxetine synergys with anticancer drugs to overcome multidrug resistance in breast cancer cells

Multidrug resistance (MDR) is the main obstacle in breast cancer chemotherapy, a reversal reagent with high reversal effect but low toxicity is the hotpot issue at present. The antidepressant fluoxetine (FLX) is a new highly effective chemosensitizer; however, the possible mechanism of FLX in reversal of MDR is unclear. In this study, the effect of FLX on MDR mediated by apoptosis was researched in resistant/sensitive breast cancer cells, which treated by FLX/adriamycin (ADM)/paclitaxel (PTX) alone or FLX?CADM, FLX?CPTX combination. Apoptosis assay demonstrated that FLX combined with ADM enhanced the proportion of apoptosis remarkably in MCF-7/ADM but not MCF-7 cells; however, increased the apoptosis rates in both cells when FLX?CPTX combination. Results of apoptosis proteins assay showed a upgrade of p53 and a downgrade of Bcl-2 level by FLX?CADM or FLX?CPTX combinations in both cells. Our findings indicated that by synergism with anticancer drugs, FLX modulation of apoptosis via targeting p53 and Bcl-2 expression, FLX reverse the breast cancer cell??s resistance and enhance the chemosensitivity to ADM and PTX.     

HSP 90与survivin在人乳腺癌细胞中的作用及机制探讨

目的:研究热激蛋白90(heat shock protein 90,HSP 90)和survivin在人乳腺癌细胞中的相互作用以及对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法:以人乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象,用HSP 90抑制剂格尔德霉素(geldanamycin,GA)处理后,Western印迹法检测细胞中P-STAT3、survivin蛋白表达的变化;RT-PCR检测survivin mRNA的变化;MTT法检测其对细胞的增殖活性影响;流式细胞术检测凋亡的变化。结果:HSP90抑制剂GA可使人乳腺癌细胞MDA-MB-231中P-STAT3减少、survivin的蛋白表达减少,细胞的增殖活性降低,凋亡增多。结论:在MDA-MB-231细胞中,HSP 90可能通过激活JAK-STAT3信号通路,影响survivin转录表达,共同促进该肿瘤细胞的高增殖、低凋亡的恶性行为。     

新型光敏剂联合阿霉素对乳腺癌细胞增殖及周期的影响

目的:研究新型光敏剂叶绿素衍生物(Chlorophyl derivative4,CPD4),联合阿霉素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及周期的影响,初步探讨联合用药的作用机制,为临床开辟新的治疗方法提供实验依据.方法:以人乳腺癌MCF-7细胞系为研究对象,新型光敏剂和乳腺癌传统化疗药物阿霉素(ADM)联合给药.采用流式细胞仪检测ADM组(2个浓度组分别预处理24小时、48小时)、光动力效应组、联合用药组细胞凋亡率和周期分布:流式细胞仪分析ADM(20ng/mL)预处理24小时、48小时对细胞平均荧光强度的影响以及ADM预处理24小时、48小时后加入CPD4 1.5μg/mL孵育不同时间细胞平均荧光强度的变化.结果:联合用药组细胞凋亡率明显高于单药组,差异有统计学意义(P＜0.01);光动力效应可造成MCF-7细胞G_0/G_1期阻滞,低浓度ADM预处理后GdM期细胞增加,联合用药时G_2/M期细胞升高.ADM预处理MCF-7细胞24小时、48小时细胞平均荧光强度与对照组荧光强度比较差异无统计学意义(P＞0.05);ADM预处理MCF-7后能增加光敏剂CPD4进入细胞的量,在CPD4孵育2小时细胞平均荧光强度最强,且ADM预处理48小时组＞预处理24小时组＞对照组.结论:ADM预处理MCF-7细胞后能够增加光敏剂CPD4进入细胞的量;光动力效应联合ADM具有协同作用.     

呼肠孤病毒诱导乳腺癌微球体细胞凋亡

目的:探讨呼肠孤病毒对乳腺癌微球体细胞凋亡的影响。方法:以干细胞培养液培养乳腺癌细胞MCF-7和BT474,形成微球体,分别用呼肠孤病毒和表柔比星处理微球体,FCM检测MCF-7、BT474微球体细胞中CD44+CD24-/low细胞的比例,TUNEL法检测微球体细胞的凋亡,Western blotting检测MCF-7细胞及其微球体细胞中Ras的表达。结果:呼肠孤病毒对乳腺癌MCF-7和BT474微球体细胞的感染率显著高于亲本细胞(均P<0.05)。表柔比星作用下MCF-7和BT474微球体细胞中CD44+CD24-/low细胞比例明显升高[(8.1±0.4)%vs(18.0±4.5)%,P<0.01;(0.6±0.2)%vs(0.9±0.13)%,P<0.05]。呼肠孤病毒感染后MCF-7和BT474微球体细胞中CD44+CD24-/low细胞比例明显下降[(8.1±0.4)%vs(0.8±0.2)%,(0.6±0.2)%vs(0.2±0.1)%;均P<0.05]。MCF-7和BT474微球体细胞在呼肠孤病毒感染后凋亡率明显增加[(1.90±0.21)%vs(5.0±1.4)%,P<0.05;(0.20±0.1)%vs(1.0±0.16)%,P<0.05]。MCF-7细胞及其微球体细胞均高表达Ras,且两者水平相似。结论:与表柔比星相比,呼肠弧病毒对乳腺癌微球体细胞的抑制作用明显,还可明显诱导乳腺癌微球体细胞凋亡。     

miR-15a诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的作用机制

目的 探讨miR-15a在诱导乳腺癌细胞凋亡中的作用及机制.方法 采用定量聚合酶链反应检测人乳腺上皮细胞株MCF-10A和乳腺癌细胞株MCF-7中miR-15a的表达水平.采用软件预测miR-15a的靶点,并通过荧光素酶报告基因系统验证.将miR-15a经脂质体法转染MCF-7细胞,采用Western blot法检测Bcl-2蛋白的表达,并采用流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡率.结果 miR-15a在乳腺癌细胞株MCF-7中的表达明显低于乳腺上皮细胞株MCF-10A (0.253∶1,P＜0.0001).miR-15a可显著抑制抗凋亡基因Bcl-2 3′-UTR荧光素酶报告基因的表达(P＜0.05).与未转染组(对照组)相比,miR-15a转染组MCF-7细胞中Bcl-2的表达水平显著下降,凋亡明显增加(P＜0.05).结论 miR-15a 作为一个潜在的抑癌基因,可通过靶向于Bcl-2诱导乳腺癌细胞MCF-7发生凋亡,其可为乳腺癌的临床治疗提供新的靶点和理论依据.