结核分枝杆菌Mtb8.4基因疫苗与人白细胞介素12表达质粒联合免疫的细胞免疫应答观察

目的 观察结核分枝杆菌Mtb8.4基因疫苗与人白细胞介素12(hIL-12)联合免疫小鼠所诱导的细胞免疫应答.方法 15只C57BL/6N小鼠随机分为Mtb8.4基因疫苗 hIL-12质粒组(联合免疫组)、Mtb8.4基因疫苗组、卡介苗(BCG)组、空载体组和PBS组,基因疫苗、空载体和PBS经肌内注射法免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次,BCG组经尾部皮下注射1×106 CFU BCG免疫1次.ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性.结果 联合免疫组能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液IFN-γ和IL-2水平(分别为1 493.340±8.128pg/ml、747.489±48.676pg/ml)显著高于Mtb8.4基因疫苗组,与BCG组相当,IL-4分泌减少,特异性CTL杀伤活性增强.结论 hIL-12表达质粒能够增强Mtb8.4基因疫苗所诱导的细胞免疫应答.     

治疗型HBV基因疫苗免疫效果的研究

为探索治疗型HBV基因疫苗治疗慢性乙型肝炎的可行性 ,自行构建了HBV包膜蛋白前S2 ·S基因及人IL 2和IFN γ融合蛋白基因真核表达质粒 ,并将双质粒融合蛋白作为佐剂组合成治疗型HBV基因疫苗 ,在健康小鼠、HBV转基因 (Tg)小鼠、新西兰兔和恒河猴体内进行了免疫效果试验。结果发现 :①特异性CTL活性提高 ;②对HBsAg特异性T细胞增殖能力提高 ,HBsAg 3 0 μg /ml对pcS2 ·S免疫的小鼠脾细胞的刺激指数 (SI =5 6± 0 9)明显较空白质粒pcDNA3 1组 (SI =2 0± 0 5 )为高 (P <0 0 1) ,免疫组的IL 2 /IFN γ分泌水平为 (2 2 6 3± 41 0 5pg/ml) /(5 1 1± 7 7pg/ml) ,明显较空白组的 (69 0± 2 2 1pg/ml) /(0 9± 0 7pg/ml)为高 (P <0 0 1) ;③HBV基因疫苗免疫健康小鼠局部引流淋巴结中DCs的诱导HBsAg致敏T细胞增殖指数 (4 2 0 )较pcDNA3 1组 (2 5 5 )为高 ;⑤用在体电脉冲法注射治疗型HBV基因疫苗后 ,检测血清抗 HBs水平 ,无论是小鼠、兔还是猴均有明显提高。提示该治疗型HBV基因疫苗能较好地诱导体液和细胞免疫 ,为其治疗HBV感染提供了实验依据     

HBV DNA疫苗诱导健康及HBV转基因小鼠细胞免疫应答

采用HBVCTL表位多肽体外刺激或冲击免疫效 (E)、靶(T)细胞 ,以观察DNA疫苗诱导健康及HBV转基因 (Tg)小鼠细胞免疫效果。结果发现 ,DNA疫苗能有效诱导健康BALB/c小鼠CTL活性 ,活性强弱与E/T比值及其上清液中IFN γ分泌水平有一定关系。HBsAg表位多肽(pp2 0 )体外刺激DNA疫苗免疫组效应细胞 ,培养上清IL 1 2释放水平 (2 1 1 3± 39 8pg/ml)明显较对照组 (86 7±2 7 1 pg/ml)高(P <0 0 5 ,t=4 4 82 )。DNA疫苗免疫HBVTg小鼠诱导CTL活性 (1 2 7%± 6 7% )较蛋白疫苗免疫对照组(1 7%±3 2 % )高(P <0 0 1 ,t=3 6 2 9) ;其效应细胞体外受 pp2 0刺激后分泌IL 1 2水平 (4 0 0± 30 1pg/ml)明显高于同期空载体免疫对照组 (3 8±3 0 pg/ml,P <0 0 5 ,t=2 376 )。采用在体电脉冲法DNA疫苗接种的 5只HBVTg小鼠中 ,于 4周时有 2只血清HBsAg阴转 ,并于 8周时出现抗 HBs阳性 ,而对照组中无一例血清HBsAg发生变化。表明HBVDNA疫苗能有效诱导健康及HBVTg小鼠细胞免疫应答 ,提示其通过增强细胞免疫功能作为抗HBV免疫治疗的可行性     

热休克蛋白65增强小鼠对HBV DNA 疫苗免疫反应的研究

目的:观察热休克蛋白65的真核表达载体(pHSP65)对HBV DNA疫苗诱导BALB/c小鼠(H-2d)免疫应答的调节作用。方法:肌内注射空载体pcDNA3,HBV DNA疫苗加HSP65佐剂(pHBVS2S pHSP65)或不加佐剂(pHBVS2S);ELISA法测定血清抗HBs抗体;ELISPOT检测分泌IFN-γ的脾淋巴细胞;4 h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTLs活性。结果:HBV DNA佐剂组免疫小鼠抗HBsAg抗体滴度虽高于不加佐剂组,但无显著性差异;其IgG1/IgG2 a的比例不同于多肽免疫组,二者分别为0.395与10。佐剂组小鼠分泌IFN-γ的脾淋巴细胞量是不加佐剂组的2~3倍。CTLs细胞杀伤活性(E∶T=100)佐剂组与不加佐剂组分别为:(53.68±7.5)%、(42.81±7.7)%,差异显著(P<0.05)。结论:HBV DNA疫苗具有较强的免疫原性,能够诱导机体产生特异性的抗体及CTLs反应;HSP65佐剂能够有效提高小鼠对DNA疫苗的细胞免疫应答,有望成为DNA疫苗的免疫佐剂。     

泛素-结核抗原融合基因DNA疫苗诱导的小鼠细胞免疫应答

目的 构建结核杆菌Ag85A抗原DNA疫苗(pA)和泛素基因与Ag85A抗原基因融合的DNA疫苗(pUA),观察疫苗在小鼠中的免疫应答.方法 将构建的DNA疫苗pA和pUA分别肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,检测小鼠的血清抗体(IgG、IgG1、IgG2a)、细胞因子(IFN-γ、IL-4)和细胞毒性T淋巴细胞反应,比较融合基因DNA疫苗和单基因DNA疫苗诱导的免疫应答的强度.结果 pA组小鼠血清IgG水平高于pUA组(P＜0.01),但IgG2a/IgG1比值(4.16±0.20)低于pUA组(7.88±0.30)(P＜0.01).与pA组比较,pUA组小鼠IFN-γ分泌水平增高(P＜0.01),IL-4分泌水平下降(P＜0.01);pUA组的CTL活性高于pA组.结论 融合的DNA疫苗pUA诱生的抗原特异的体液免疫应答不及单基因DNA疫苗pA,但其能诱导更强的细胞免疫应答.提示泛素-Ag85A融合基因DNA疫苗对于防治结核病比单基因DNA疫苗更为有效.     

静脉注射T-bet重组腺病毒对小鼠过敏性气道炎症的抑制作用研究

目的 探讨静脉应用T-bet重组腺病毒(AdT-bet)对哮喘小鼠过敏性气道炎症的作用.方法 48只C57BL/6小鼠随机均分为AdT-bet处理组(A组)、AdLacZ处理组(B组)、PBS处理组(C组)和正常对照组(D组),每组12只.A、B、C组采用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝建立哮喘模型,于第19天激发前分别静脉注射50μl AdT-bet(108pfu)、AdLacZ、PBS.第26天测定肺泡灌洗液(BALF)中的细胞组分和IL-4、IL-5、IFNγ浓度,测定血浆IgE水平,观察肺组织病理学变化及GATA-3表达.结果 A组BALF中的嗜酸性细胞(EOS)、IL-4、IL-5分别为0.6%±0.2%、6.8±3.7pg/ml、12.5±4.8pg/ml,明显低于B组(分别为20.9%±6.8%、92.4±23.0pg/ml、56.5±11.8pg/ml)和C组(分别为20.8%±6.7%、90.4±22.8pg/ml、57.3±12.2pg/ml)(P＜0.01),而A组的IFNγ水平(720.0±50.0pg/ml)则明显高于B组(13.3±3.6pg/ml)和C组(12.3±5.0pg/ml).A组血浆中总IgE(38.8±9.5μg/ml)及OVA特异性IgE(19.2±4.8U/ml)水平显著低于B组(分别为66.9±10.2μg/ml、35.2±7.8U/ml)和C组(分别为68.6±9.6μg/ml、36.1±8.5U/ml)(P＜0.01).肺组织病理学观察提示B组和C组GATA-3表达明显增加,支气管平滑肌肥厚,黏膜充血、水肿,炎性细胞浸润,管腔内可见黏液栓,而A组GATA-3的表达明显减少,炎症性反应明显减轻.结论 静脉应用AdT-bet可抑制哮喘鼠IL-4、IL-5的合成,增强IFNγ的表达,抑制EOS在气道内的炎性浸润及血浆中IgE水平,其机制可能与AdT-bet增强Th1型反应,抑制GATA-3表达,从而抑制Th2型免疫反应有关.     

中国株HIV-1 gag基因核酸疫苗免疫小鼠的实验研究

目的　研究开发针对我国人类免疫缺陷病毒 1(HIV 1)流行株的艾滋病治疗性疫苗 ,构建含中国流行株HIV 1核心蛋白(gag)基因的核酸疫苗 ,并评价其诱导的体液和细胞免疫反应效果。方法　将HIV 1gag基因插入到真核表达载体 pCI neo中 ,构建了真核表达质粒pCI neoGAG ,并经XbaⅠ/SalⅠ双酶切及测序鉴定。将pCI neoGAG和空载体pCI neo免疫BALB/c小鼠 ,通过ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体和IFN γ,通过MTT实验检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖实验 ,通过乳酸脱氢酶 (LDH)实验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)反应。结果　酶切及测序结果表明成功地构建了HIV 1gag基因核酸疫苗 ;与空载体pCI neo组比较 ,pCI neoGAG免疫组小鼠血清的抗HIV 1p2 4抗体滴度和IFN γ均升高 (P<0 0 1)。pCI neoGAG免疫组小鼠的脾淋巴细胞增殖实验刺激指数 (SI)以及特异性CTL活性均高于空载体pCI neo组 (P<0 0 1)。结论　构建的针对我国HIV 1流行株的gag基因核酸疫苗免疫小鼠可以诱导特异性体液和细胞性免疫应答 ,为进一步研制适用于我国的HIV治疗性疫苗奠定了基础     

白细胞介素2提高HBV-S DNA疫苗的免疫效应

目的观察IL-2真核表达载体对HBV-SDNA疫苗诱导BALB/c小鼠的特异性免疫应答的影响.方法肌肉注射基因疫苗及IL-2真核表达载体,ELISA法检测小鼠血清抗HBs,4h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL活性.结果免疫8周后,单纯注射pCR3.1-S及共注射IL-2真核表达载体的小鼠血清450nmA值分别为1.24±0.10及1.98±0.17.CTL细胞杀伤活性分别为(50.5±6.4)%及(61.9±7.1)%,两组均有明显差异(P＜0.01).结论IL-2的真核表达载体能够提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答.基因疫苗可能用于预防及治疗HBV感染.     

融合基因DNA疫苗STxB-VP1和MDC-VP1对CVB3的免疫效果研究

目的构建融合基因DNA疫苗pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1,并免疫小鼠,观察其免疫效果。方法从痢疾志贺菌PCR扩增志贺毒素B亚单位(STxB)基因片段,用RT-PCR法从小鼠脾细胞扩增巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)基因片段。将这两个基因片段分别与柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的衣壳蛋白VP1通过一个编码15肽的柔性接头(Linker)相连接,构建真核表达质粒pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1。120只BALB/c小鼠随机均分为6组,分别在胫骨前肌注射pcDNA3、pcD-NA3/STxB、pcDNA3/MDC、pcDNA3/VP1、pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1,每3周1次,共3次。每次免疫后20d检测血清中中和抗体水平,最后1次免疫后20d用7LD50的CVB3进行致死性攻击,观察小鼠生存率。结果成功构建了融合基因疫苗pcD-NA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1。各组小鼠的生存率分别是10%、10%、15%、40%、20%和75%,中和抗体水平及血中病毒滴度均与生存率一致。结论与pcDNA3/VP1相比,pcDNA3/MDC-VP1可诱导产生高水平的中和抗体,提高小鼠生存率,而pcDNA3/STxB-VP1仅诱导出低水平的中和抗体,小鼠的生存率降低。     

哮喘模型小鼠脾脏和肺脏CD8~+T细胞的作用机制研究

目的建立哮喘小鼠模型,探讨CD8+T细胞在哮喘中的作用。方法将32只BALB/c小鼠随机均分为对照组和哮喘组,哮喘组小鼠建立哮喘模型。测定两组小鼠的气道反应性,对肺泡灌洗液(BALF)行细胞学分类和计数,观察肺组织的病理变化。用免疫磁珠纯化柱纯化两组小鼠脾、肺组织的CD8+T细胞,加入卵蛋白(OVA)刺激,用ELISA法检测培养96h后CD8+T细胞上清中IL-4、IL-10及IFN-γ的水平。结果哮喘组小鼠存在气道高反应性,证明模型构建成功。哮喘组BALF中的细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的比例均较对照组明显增加(P<0.05),巨噬细胞比例明显降低(P<0.05)。哮喘组肺间质中有大量炎性细胞浸润,气道上皮损伤,杯状细胞肥大增生,有大量黏液分泌,黏膜下胶原纤维沉积。对照组无明显的炎症改变。哮喘组肺CD8+T细胞分泌的IL-4(203.20±16.59pg/ml)较对照组(3.29±1.61pg/ml)明显增加(P<0.05),IL-4在两组脾CD8+T细胞培养上清中均未检出。哮喘组脾CD8+T细胞分泌IFN-γ水平(4997.05±189.07pg/ml)较对照组(4509.73±378.10pg/m...     

转化医学与疫苗发展

转化医学是医学研究的一种新模式,是在实验室研究和临床医疗之间建立的一条快速通道,是基础研究与临床研究的相互转化和促进。人类与传染性疾病抗争过程中发明了疫苗,疫苗的产生和发展过程也是与相关学科和技术相互转化的过程。作者以3种与肿瘤相关的疫苗开发为例,展现疫苗的研发过程、现有疫苗存在的问题以及利用新技术解决这些问题的思考。在人类面临新出现的传染性疾病、病原体变异导致的再现传染性疾病威胁的今天,搭建科研院校—疫苗生产企业—疾控中心的产学研平台,促进科研成果的快速转化,利用新技术改进传统疫苗、研制新型疫苗,预期会有更多安全有效的疫苗问世。     

抗原优化与亚单位疫苗的研制

介绍了近年来为增强亚单位疫苗的免疫效果而采取的一些策略和方法，如抗原表位与免疫调节剂的融合、抗原的脂质化修饰、多抗原肽及颗粒化抗原的制备。提示新型亚单位疫苗的研制有赖于多学科理论和技术的发展。     

A psychosocial vaccine against militarism

Militarism is considered to be a psychosocial disease. An aetiological agent for this disease has been identified. Acting much like a computer virus, this agent is shown to produce a radical transformation of the consciousness of parties in conflict, without their realizing what has happened. This results in a paranoid illusion in the minds of both parties, an illusion made real by the fact that both parties accept it as real. To provide immunity against militarism, a psychosocial vaccine has been developed, and is described.     

治疗性乙肝疫苗研究进展

治疗性疫苗是指能打破慢性感染者体内免疫耐受、重建免疫应答的新型疫苗,以诱导细胞免疫应答为主,是抗病毒、抗肿瘤治疗新手段.乙肝治疗性疫苗研究在多分子蛋白疫苗、抗原抗体复合物、表位疫苗及DNA疫苗方面均取得一定进展,部分新型疫苗甚至能部分清除肝细胞内cccDNA,为治疗慢性乙肝提供了新的手段.     

人类病毒疫苗的研究进展

简述了传统灭活病毒疫苗和减毒活疫苗的应用状况以及新型合成肽疫苗、亚单位疫苗、抗独特型抗体疫苗、基因工程疫苗的研究状况，对核酸疫苗的研究进展，发展前景及存在问题进行了讨论。     

结核疫苗研究进展

卡介苗(BCG)的免疫保护作用存在争议,多重耐药结核杆菌(MDR-TB)的出现,以及艾滋病(AIDS)的流行,导致结核病(TB)的发病率呈现回升趋势,给TB防治提出了新的挑战.因此,发展新的TB疫苗成为TB防治的迫切需要.本文综述结核疫苗研究的最新进展.     

登革病毒DNA疫苗的研究进展

目前登革病毒（ dengue virus ）感染已成为全球严重的公共卫生问题,亟待有效的疫苗进行特异性预防。与减毒活疫苗、灭活疫苗等传统疫苗相比,DNA疫苗具有制备简便、价格低廉、无感染风险、便于储运以及长效性好等特点,成为近年来登革病毒疫苗研究的热点。该文综述了登革病毒DNA疫苗构建策略、接种方式、免疫策略、免疫佐剂、免疫效果等方面的研究进展。     

复制型DNA疫苗的研究进展

复制型DNA疫苗是基于常规DNA疫苗和RNA复制子疫苗的基础上发展起来的一种新型疫苗，既具有稳定性好、安全性高的优点，又实现了外源基因的高效表达。本文就复制型DNA疫苗的构建、作用机制、优点以及最新的研究进展作一简要综述。