双嘧达莫体外抗肿瘤作用研究

目的检测双嘧达莫对肿瘤细胞的细胞毒作用,观察药物作用后肿瘤细胞形态的变化,通过测定药物对细胞周期及细胞凋亡的影响探讨其作用机制。方法用中性红法对K562人慢性髓原白血病细胞、MCF-7人乳腺癌细胞、A549人肺癌细胞和BEL-7402人肝癌细胞4种细胞进行细胞毒实验,计算半数抑制浓度IC50,光学显微镜下观察药物作用后的细胞形态,采用流式细胞术测定细胞周期时相和细胞凋亡率。结果双嘧达莫对四种肿瘤细胞的生长均有明显的抑制作用,且有较好的剂量-效应关系。药物作用2d后,与对照组相比,BEL-7402细胞数量明显减少,分布稀疏,形态变长,细胞突起变长,圆形细胞增多。40和60μg/ml双嘧达莫作用于BEL-7402细胞2d,可使G0/G1期细胞增多(P0.01)。60μg/ml双嘧达莫作用2d可以使BEL-7402细胞处于凋亡早期和凋亡晚期的细胞数量明显增加(P0.01),凋亡率为10.58%。结论双嘧达莫具有抑制肿瘤细胞生长的作用,使BEL-7402细胞形态发生改变,同时半数抑制浓度以上的剂量可将BEL-7402细胞周期阻滞在G0/G1期,高剂量的双嘧达莫对BEL-7402细胞凋亡具有诱导作用。     

蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡的作用。方法体外培养人肝癌细胞系BEL-7402细胞,MTT法测定细胞的生长抑制率。以终浓度为5.0μmol·L^-1的MG132作用BEL-7402细胞不同时间后用流式细胞仪检测其细胞凋亡率和细胞周期。结果流式细胞仪检测细胞周期随MG-132作用时间延长,G2/M期阻滞明显,并引起细胞凋亡。结论蛋白酶体抑制剂MG132能有效抑制人肝癌BEL-7402细胞增殖并将细胞阻滞在G2/M期,促进细胞发生凋亡。     

BMH-21诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究

目的探讨核仁应激对人肝癌BEL-7402细胞的凋亡诱导作用。方法以人肝癌BEL-7402细胞为研究对象,依据给药剂量实验分为4组:对照组(0μmol/L),1、2和4μmol/L组。MTT检测BEL-7402细胞生存率,共聚焦显微镜观察核仁应激标志蛋白变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白印迹检测凋亡相关蛋白表达。结果 MTT结果表明BMH-21对BEL-7402细胞生长抑制作用呈剂量依赖性,共聚焦显微镜观察发现BMH-21诱导BEL-7402细胞核仁应激标志蛋白发生变化,流式细胞仪检测结果表明BMH-21以剂量依赖性的方式诱导细胞凋亡,蛋白印迹结果显示凋亡相关蛋白表达明显增加(P0.05)。结论 BMH-21诱导人肝癌BEL-7402细胞核仁应激,导致细胞凋亡的发生。     

月腺大戟与狼毒大戟对人肝癌细胞BEL-7402体外增殖的影响对比研究

目的:对比研究月腺大戟与狼毒大戟对人肝癌细胞BEL-7402体外增殖的影响。方法:灌胃月腺大戟(0.097、0.485、0.2425g.kg-1)、狼毒大戟(0.05、0.025、0.0125g.kg-1)混悬液,每天1次,连续3d,末次给药后自大鼠腹主动脉采血,以分离的血清加培养液体外培养人肝癌细胞BEL-7402;MTT比色法测定生长抑制率;通过集落形成试验测定克隆形成率。结果:狼毒大戟对BEL-7402细胞增殖和克隆形成率有明显的抑制或降低作用,且与给药剂量呈正相关;月腺大戟对BEL-7402细胞增殖和克隆形成率无明显影响。结论:狼毒大戟对人肝癌细胞BEL-7402体外增殖抑制作用明显强于月腺大戟。     

藏药余甘子鞣质部位对人肿瘤细胞凋亡与周期的影响

目的研究藏药余甘子鞣质部位的体外抗肿瘤作用机制。方法余甘子鞣质部位40、80、160μg·m L-1作用于人肿瘤A549及BEL-7402细胞48 h,MTT法测定剂量反应曲线;倒置相差显微镜下观察两种细胞形态学的变化;流式细胞术测定细胞周期及凋亡的情况。结果不同浓度的余甘子鞣质部位作用48 h对A549和BEL-7402细胞均表现明显的细胞毒作用;倒置镜下可见加药组细胞生长受到明显抑制,细胞收缩变小;流式细胞术测定发现余甘子鞣质部位具有显著的诱导细胞早期凋亡和G2/M期阻滞作用。结论余甘子鞣质部位可通过诱导肿瘤细胞凋亡和对细胞周期阻滞而发挥其体外抗肿瘤作用。     

姜黄素Ⅲ与丝裂霉素联用抑制肝癌细胞BEL-7402的实验研究

目的研究姜黄素Ⅲ联合丝裂霉素抑制体外人肝癌细胞BEL-7402生长增殖的效果。方法体外培养人肝癌细胞BEL-7402,以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测2种药物对癌细胞的抑制率及联合用药时的抑制率。结果姜黄素Ⅲ、丝裂霉素均能抑制体外肝癌细胞增殖并呈时间与剂量依赖性。姜黄素10、20、40、80μmol／L与丝裂霉素1、2μmol／L联合用药24、48、72h的抑制率显著高于单独用丝裂霉素、姜黄素Ⅲ（P〈0．05）,两者呈现出相加的抗癌效果。结论姜黄素Ⅲ能有效抑制体外人肝癌BEL-7402细胞增殖．联合丝裂垂素用药时能提高丝裂霉素对人肝癌BEL-7402细胞的敏感性。     

胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞增殖和膜流动性的影响

目的:研究胡桃醌诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡及其作用机制。方法:采用MTT法测定细胞生长抑制率,通过流式细胞仪观察凋亡细胞,采用荧光偏振技术离体动态地检测30 min内胡桃醌对BEL-7402细胞各向异性r、荧光偏振度P和微粘度η的影响,分析细胞膜流动性的改变。结果:各浓度的胡桃醌均可抑制人肝癌BEL-7402细胞的生长,诱导其凋亡,IC50为13.78μM。不同浓度胡桃醌均可引起BEL-7402细胞膜的r、P和η值显著性降低(P<0.05),尤其在前1 min内r、P、η值下降迅速,1min后各指标下降的趋势渐渐平缓。结论:胡桃醌能显著增加BEL-7402细胞的膜流动性,促进其本身进入细胞内部,抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

酪丝亮肽注射液Ⅰ期临床耐受性研究

目的:评价抗癌新药酪丝亮肽的人体安全性,确定推荐Ⅱ期临床研究的剂量。方法:分为连续3 d和30 d给药两部分。共入选21例健康受试者和18例恶性肿瘤患者,每剂量组3例,3 d给药试验共设7个剂量组(0.15,0.3,0.6,1.2,2.4,3.6,4.8 mg.m-2.d-1),连续静脉给药3 d;30 d给药试验共设6个剂量组(0.3,0.6,1.2,2.4,3.6,4.8 mg.m-2.d-1),连续静脉给药30 d。结果:21例健康受试者和18例恶性肿瘤患者连续给药均无不良事件发生,没有出现剂量限制性毒性。未观察到骨髓抑制、肝肾功能损害、消化道及心血管系统毒性。结论:酪丝亮肽无明显毒副作用,人体耐受性好。推荐Ⅱ期临床使用剂量及方法为:酪丝亮肽注射液1.2~2.4 mg.m-2.d-1,静脉给药,连用30 d。     

新化合物2-[(4-苄氧基)苯胺基]-6-环己胺基嘌呤的体外抗肿瘤活性

目的研究新化合物2-[(4-苄氧基)苯胺基]-6-环己胺基嘌呤(S701)的体外抗肿瘤活性。方法采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法),检测S701在1⁵0μmol·L-1浓度范围内对人肺癌A549细胞、人结直肠腺癌Lo Vo细胞和人肝癌BEL-7402细胞存活率的影响,计算半数抑制浓度(IC50),并观察相应的细胞形态学变化。结果在150μmol·L-1浓度范围内对人肺癌A549细胞、人结直肠腺癌Lo Vo细胞和人肝癌BEL-7402细胞存活率的影响,计算半数抑制浓度(IC50),并观察相应的细胞形态学变化。结果在1⁵0μmol·L-1浓度范围内,S701作用24 h对人肺癌A549细胞、人结直肠腺癌Lo Vo细胞和人肝癌BEL-7402细胞存活率均表现出不同程度的抑制作用,且呈现出一定的浓度依赖趋势。S701 A549细胞、Lo Vo细胞和BEL-7402细胞的IC50分别为13.43、28.56、13.02μmol·L-1。形态学结果显示,S701对上述三种肿瘤细胞均有不同程度的杀伤作用,其作用随浓度的增加而增强。结论新化合物S701可抑制A549细胞、Lo Vo细胞和BEL-7402细胞的生长,在体外具有一定的抗肿瘤活性。     

文蛤体液蛋白体内外抗肿瘤作用的研究

[摘要]目的：由文蛤体液中获得一种新的抗肿瘤蛋白。方法：采用电镜技术、流式细胞仪技术、微管蛋白α-tubulin的荧光染色技术、电泳技术,研究了MML作用后细胞凋亡、细胞周期及微管蛋白的变化情况;建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型,观察MML的体内抗肿瘤活性。结果：发现MML可显著抑制肿瘤细胞生长, IC50达到52.2μg&#8226;mL-1。作用机制的研究表明MML可以增加肿瘤细胞膜通透性、抑制微管蛋白聚合、使肿瘤细胞停滞在G2/M期;MML对人肝癌BEL-7402移植性肿瘤小鼠具有显著的抗肿瘤作用。结论：文蛤体液蛋白是一种新型的抗肿瘤蛋白,主要通过增加细胞膜的通透性、引起细胞凋亡、抑制微管蛋白聚合产生抗肿瘤作用。     

三肽化合物酪丝亮肽对巨噬细胞吞噬及肿瘤细胞杀伤功能的影响

目的：研究三肽化合物酪丝亮肽(YSL)对巨噬细胞(M(?))吞噬功能、肿瘤细胞杀伤功能和细胞因子分泌功能的影响。方法：通过碳粒廓清实验观察YSL对小鼠M(?)吞噬功能的影响,采用MTT法观察YSL对腹腔M(?)杀伤人肝癌细胞BEL-7402和小鼠黑色素瘤细胞B16-F10作用的影响,用ELISA法观察YSL对M(?)株RAW264．7分泌细胞因子IL-1β和NO功能的影响。结果：YSL 80,160,320μg·kg~(-1)·d~(-1)均能够明显增强小鼠M(?)的吞噬功能(P＜0．01),YSL各浓度(0．1,1,10,100 mg·L~(-1))在体外明显增强小鼠腹腔M(?)对肿瘤细胞BEL-7402和B16-F10的杀伤作用(P＜0．01)。YSL可以促进细胞毒效应分子IL- 1β和NO的分泌合成,NO和IL-1β水平分别在YSL作用12 h,24 h时达到高峰。结论：YSL可以增强M(?)吞噬功能,增强对肿瘤细胞的杀伤作用,促进细胞因子IL-1β和NO分泌。     

蚯蚓纤溶酶的抗肿瘤作用

目的　观察蚯蚓纤溶酶 (EFE)对体外人癌细胞株及体内人癌裸鼠移植性肿瘤生长的影响 ,对该药进行临床前抗肿瘤药效学评价。方法　采用MTT法观察蚯蚓纤溶酶对体外人癌细胞的生长抑制作用 ;用人胃癌BGC82 3和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤模型对蚯蚓纤溶酶进行体内抗肿瘤药效学观察。结果　蚯蚓纤溶酶在体外对人癌细胞的生长无抑制作用 ;灌胃给予蚯蚓纤溶酶 2 0 0～ 10 0 0mg·kg-1,可明显抑制人胃癌BGC82 3和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤的生长。结论　蚯蚓纤溶酶具有抗肿瘤作用。     

nobiliside A隐形纳米脂质体对小鼠RM-1前列腺癌的抑制作用

目的比较nobiliside A隐形纳米脂质体(NASNL)和nobiliside A普通脂质体(NACL)对小鼠RM-1前列腺癌的抑制作用。方法 RM-1前列腺癌荷瘤小鼠随机分为6组(均n=10):阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(环磷酰胺20 mg·kg~(-1)·d~(-1))、NACL低、高剂量组(1 mg·kg~(-1)·d~(-1)、2 mg·kg~(-1)·d~(-1))和NASNL低、高剂量组(1 mg·kg~(-1)·d~(-1)、2 mg·kg~(-1)·d~(-1)),均尾静脉注射给予相应药物,连续7 d。通过比较各组小鼠的肿瘤生长曲线、抑瘤率、肿瘤组织的病理变化等考察2种脂质体的抑瘤效果。结果 NASNL两剂量组的肿瘤生长速度均低于相应剂量的NACL组(P<0.05)。NASNL两剂量组的抑瘤率均高于相应的NACL组,其中NASNL高剂量组的抑瘤率是NACL高剂量组的2倍。NASNL各组肿瘤细胞坏死程度高于NACL各组。结论 NASNL的肿瘤抑制作用明显优于NACL。     

CDA-Ⅱ诱导人胶质瘤细胞分化与抑瘤的作用

目的研究人尿萃取物CDA-Ⅱ(cell d ifferentiation a-gent-Ⅱ,又名尿多酸肽)对人胶质瘤细胞SWO-38抑制增殖及诱导分化作用。方法应用MTT法、集落形成试验检测CDA-Ⅱ对SWO-38细胞增殖的影响;通过光镜观察和免疫组化鉴定细胞分化;利用裸鼠抑瘤实验观察CDA-Ⅱ抗胶质瘤生长的作用。结果一定浓度的CDA-Ⅱ可使SWO-38细胞增殖与集落形成均明显受抑,并呈剂量依赖性。经1 g.L-1CDA-Ⅱ处理后,光镜观察发现SWO-38细胞胞体变大,核浆比减小,突起增多,表现出向成熟的星形细胞分化现象。免疫组化显示胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary ac id ic prote in,GFAP)表达增强。体内抑瘤试验见高、低剂量CDA-Ⅱ均可抑制裸鼠移植瘤生长,抑瘤率为79.94%、42.77%(P<0.05,n=10)。结论CDA-Ⅱ不仅能够抑制人胶质瘤SWO-38细胞的生长,而且能诱导SWO-38细胞分化,是一种很有应用前景的诱导分化剂。     

艾迪粉针剂的抗肿瘤作用

目的通过体内外抗肿瘤实验观察艾迪粉针剂的抗肿瘤作用。方法抗肿瘤体内实验:建立小鼠移植性肉瘤S180和小鼠肝癌H22的实体瘤模型,艾迪粉针剂对小鼠尾静脉给药,连续处理7 d,第8天剥离瘤块称质量,计算抑瘤率,与化疗药合并用药考察减毒增效作用;建立小鼠L1210白血病模型,阳性对照组为顺铂,考察生命延长率。体外实验:常规传代培养人肝癌BEL7402、人宫颈癌HeLa细胞、人黑色素瘤A375 S2细胞、人胃癌SGC 7901和小鼠纤维肉瘤L929细胞,用MTT法检测活细胞数和生长抑制率。结果艾迪粉针剂连续7 d每日1次静脉注射对小鼠肉瘤S180和小鼠肝癌H22具有明显的抑瘤作用,本品与化疗药合并用药有增效作用;艾迪粉针剂体外对多种人肿瘤细胞具有体外抗肿瘤活性,且具有较低的IC50值。结论艾迪粉针剂具有体内和体外抗肿瘤活性。     

三肽化合物酪丝亮肽(YSL)对腹水型肝癌H_(22)小鼠免疫调节作用实验研究

目的观察三肽化合物酪丝亮肽(tyroserleutide,YSL)对腹水型肝癌H22小鼠的抗肿瘤作用,观察YSL对荷瘤小鼠T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性的影响。方法建立腹水型肝癌H22小鼠动物模型,观察YSL对腹水型肝癌H22小鼠生存时间的影响;以MTT法检测YSL对荷瘤小鼠T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性的影响。结果YSL能够明显延长腹水型肝癌H22小鼠生存时间;YSL在5μg.kg-1和50μg.kg-1时可以促进腹水型肝癌H22小鼠T淋巴细胞的转化;YSL在0.5、5和50μg.kg-1时增强荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性。结论YSL可以延长腹水型肝癌H22小鼠的生存时间;促进荷瘤鼠的T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性。     

胞嘧啶脱氨酶基因与前体药物5-氟胞嘧啶联合应用对人乳腺癌裸鼠模型的实验治疗

探讨胞嘧啶脱氨酶（CD）基因与前体药物5-氟胞嘧啶（5-FC）对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用. 应用细胞克隆形成实验及裸鼠移植瘤模型研究CD/5-FC体系的抗肿瘤作用. 5-FC 0.5和1.0 g·L^-1对转基因人乳腺癌细胞的克隆形成抑制率分别为90%和95%,显著高于未转基因的人乳腺癌细胞;5-FC (0.5 g·kg^-1·d^-1 ip, 14 d)治疗组的转基因人乳腺癌裸鼠移植瘤的瘤重和生长速度均显著低于未转基因的移植瘤. 结果表明CD/5-FC体系对人乳腺癌裸鼠移植瘤有显著的的抗肿瘤作用.     

三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞分化和凋亡的影响

目的探讨三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞BEL-7402的诱导分化和凋亡作用。方法用不同剂量的3-吡啶-3-基-4-[(4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-37)与BEL-7402细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖和LH-37对细胞增殖的抑制作用;RT-PCR方法检测细胞甲胎蛋白(α-FP)和白蛋白(Alb)mRNA表达;ELISA法测定细胞α-FP含量;免疫组织化学检测细胞内激活型Caspase-3表达;Western blot检测Caspase-3和Caspase-9蛋白表达;可见光法测定超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力;荧光显微镜观察凋亡细胞形态;Annexin-Ⅴ和PI双染流式细胞术测定凋亡细胞数。结果LH-37在10μmol·L-1~1mmol·L-1的浓度范围能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度的增加而增高(P<0·05或P<0·01),10μmol·L-1和1·0μmol·L-1的LH-37使细胞Alb mRNA表达量增高,α-FP mRNA和蛋白质表达量明显下降,Caspase-3和Caspase-9表达量明显增加,Caspase-3阳性细胞明显增加;药物浓度达100μmol·L-1作用48h后,BEL-7402细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,细胞凋亡率高于对照组(P<0·05)。结论三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌BEL-7402细胞具有抗增殖、促分化和凋亡作用,作用可能与过氧化氢的氧化损伤作用有关。     

姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中HIF-1α表达的影响

目的探讨姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中H IF-1α表达的影响以及蛋白酶体在其中的作用。方法以0、2.5、5、10、15、20μmol.L-1的姜黄素处理人肝癌细胞BEL-7402缺氧环境中培养6 h,W ST-8法和台盼蓝染色法分析细胞增殖和活力,采用RT-PCR和W estern B lot方法检测肝癌细胞中H IF-1α的表达;以0、10μmol.L-1姜黄素、10μmol.L-1MG-132、10μmol.L-1姜黄素+10μmol.L-1MG-132处理人肝癌细胞BEL-7402缺氧环境中培养6 h,采用W esternB lot方法检测肝癌细胞中H IF-1α的蛋白表达。结果①不同剂量的姜黄素对肝癌细胞活力和增殖率的影响与对照组相比差异无显著性;②随着姜黄素浓度的增加,H IF-1α蛋白表达逐渐降低;③不同剂量的姜黄素对H IF-1αmRNA表达的影响与对照组相比差异无显著性;④MG-132能够逆转姜黄素对H IF-1α蛋白的减少。结论姜黄素抑制人肝癌细胞BEL-7402中H IF-1α蛋白表达是通过转录后机制和蛋白酶体途径。     

野木瓜果实总皂苷体外抗肿瘤作用研究

目的 研究野木瓜果实总皂苷对人肺癌细胞A549、人肝癌细胞BEL-7402和人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响.方法 将生长状态良好的A549细胞、BEL-7402细胞和SGC-7901细胞分为7组:阴性对照组,野木瓜果实总皂苷组(40、80、160、320、640 mg·L-1)组和丝裂霉素组(10 mg·L-1),药物作用12、24、48 h后,MTT法测定细胞增殖抑制率.结果 野木瓜果实总皂苷能显著抑制A549细胞、BEL-7402细胞和SGC-7901细胞的增殖,呈一定剂量和时间依赖关系,作用A549细胞12、24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为492.38、293.43、141.84 mg·L-1;作用BEL-7402细胞12、24、48 h的IC50分别为427.74、243.91、101.79 mg·L-1;作用SGC-7901细胞12、24、48 h的IC50分别为463.35、256.77、113.22 mg·L-1.结论 野木瓜果实总皂苷有明显抑制A549细胞、BEL-7402细胞和SGC-7901细胞体外增殖的作用,其中BEL-7402细胞对野木瓜果实总皂苷最为敏感.