人胎黑质细胞的冷冻保存

采用台盼蓝染色法，观察了第３～６月人胎黑质细胞冷冻保存的细胞存活率，结果：①胎龄３～６月人胎黑质细胞冷冻保存后均可存活，但以胎龄３和４月细胞存活率较高。②液氮保存的细胞存活率不受保存时间的影响，而４℃保存的细胞存活率随保存时间的延长而逐渐降低。结果提示，液氮保存人胎黑质细胞的保存条件以胎龄３和４月为宜。     

人胎黑质细胞的冷冻保存

采用台盼蓝染色法，观察了第３￣６月人胎黑质细胞冷冻保存的细胞存活率，结果：①胎龄３￣６月人胎黑质细胞冷冻保存后均可存活，但以胎龄３和４月细胞存活率较高。②液氮保存的细胞存活率不受保存时间的影响，而４℃保存的细胞存活率随保存时间的延长而逐渐降低。结果提示，液氮保存人胎黑质细胞的保存条件以胎龄３和４月为宜。     

人胎蓝斑生长抑素神经元免疫组化研究

目的：探讨人胎蓝斑生长抑素（ＳＯＭ）免疫反应神经元的胚胎发育，为蓝斑脊髓移植挑选适宜胎龄提供形态学基础。方法：用免疫组织化学法系统地观察人胎蓝斑生长抑素免疫反应神经元的发育。结果：（１）蓝斑ＳＯＭ神经元在胎龄４ｍｏｎ已经出现。（２）蓝斑ＳＯＭ神经元随胎龄增长逐渐增多，以５ｍｏｎ时增加显著。（３）ＳＯＭ神经元主要分布在蓝斑的背侧部。（４）ＳＯＭ神经元开始出现时呈圆形或卵圆形，５ｍｏｎ－６ｍｏｎ时呈锥     

人胎胰腺的胰岛分离与胰岛细胞培养质量的实验研究

取水囊引产的４例胎龄为１８～２８周的人胎胰腺，用胶原酶消化分离胰岛，分别对３，５，７，９，１１，１３ｄ培养的胰岛细胞进行形态学观察，并采用放射性核素１２５Ⅰ标记抗原作放射免疫测定（ＲＩＡ）其培养上清液中胰岛素及Ｃ－肽的含量．结果：经５～９ｄ培养的胰岛细胞，生长良好，细胞活率为９０％左右，其中大多数为β细胞．５，７，９ｄ培养液上清液中胰岛素的含量依次为６４７５，７２３及７２７０ＩＵ／Ｌ；Ｃ－肽的含量依次为６０５，６２及＞６ｍｇ／Ｌ．分别高于正常血清的两倍、一倍以上．经以同样方法培养的兔胰岛细胞用于四氧嘧啶实验性兔糖尿病模型治疗，兔糖尿病模型的血糖均值由（４７９７９±０９２３３）ｇ／Ｌ下降为（３３１９３±０４１１０）ｇ／Ｌ（Ｐ＜００１）；胰岛素由（２６５±１４）ＩＵ／Ｌ上升为（１３３８±１５）ＩＵ／Ｌ（Ｐ＜００５）．结果说明本法培养的胰岛细胞用于移植以５～９ｄ为宜     

人胎胰组织细胞冷冻保存方法研究

本实验主要以水囊引产１４～３０周人胎胰对材料，对１０６份胎胰组织进行了冷冻保存方法研究。应用培养加深低温冻贮法比较了在冷冻过程中不同浓度冷冻保护剂二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）及其渗透平衡温度和时间，不同降温速率和冻贮时间等因素对胎胰岛组织细胞功能与成活性的影响，选择出较为适宜的冻贮条件，胎胰小组织块以１．５ｍｏｌ／ＬＤＭＳＯ保护，４℃渗透平衡６０分钟，以０．３℃／分缓解降温，液氮保存，４０℃水浴快速复温     

新生儿低钠血症21例

新生儿低钠血症２１例刘良民１９９４～１９９５年３月，收治新生儿低钠血症２１例。现就其病因及诊疗情况作一分析。１临床资料男９例，女１２例；胎龄≤３７周６例，～４２周１５例。发病日龄≤４ｄ１４例，～７ｄ２例，≥７ｄ５例。原发病：窒息５例，硬肿症６例，颅内...     

非外科手术治疗脑脓肿

我院自１９９３年以来非外科手术治疗１０例脑脓肿,其中男７例,女３例。年龄１０～５８岁,平均年龄２１．２岁。１０～１５岁 ６例,１６～３０岁 ３例,３１～５８岁１例。病程 １ｄ～１月,＜７ ｄ ５例,７～３０ ｄ ５例。先天性心脏病法乐氏四联症１例,风湿性心脏病二尖辨狭窄合并关闭不全１例,慢性中耳炎１例,慢性右股骨骨髓炎１例,不明原因６例。临床表现：发热９例,头痛８例,神志改变５例,抽搐４例,呕吐３例。神经系统检查：眼底水肿４例,面瘫２例,肢体偏瘫５例,脑膜刺激征阳性６例,共济失调１例。辅助检查;６例作…     

兔胎脑皮层组织4℃保存的细胞活性变化

本实验取胎龄为２３－２４ｄ的胎兔大脑皮层组织，分别以ｉｌｏｐｒｏｓｔ液及生理盐水为保存液，在４℃保存前后制成细胞悬液，不同浓度磺化丙啶染色反经式细胞分析和台盼蓝排斥试验测定细胞活性。     

子宫颈腺肌瘤2例

子宫颈腺肌瘤２例例１，１７岁，未婚。因下腹坠胀、发现阴道肿物伴排尿不畅１＋年，不能解尿４ｄ，临床疑诊宜颈肉瘤于１９９１年１１月１日入院。月经史：初潮１５岁，４～５／２８～３０ｄ．量中等，无痛经，ＬＭＰＩ９９１年１０月２日。平时白带偏多，无血性分泌物。...     

玩具枪弹致眼球钝挫伤45例报告

近年来市售一种玩具枪,其射程４～６ｍ,子弹为塑料材质,平均重０．１２ｇ。儿童用此枪相互向面部射击,致眼球钝挫伤,本文所见为５～１５岁儿童。１　临床资料１．１　一般资料　共４５例,其中男４１例,女４例;年龄５～１５岁,平均９岁;自伤６例（为射于墙上或地上反弹所致）,他伤３９例;就诊时间：当天１８例,伤后１ｄ１５例,２ｄ８例,３ｄ３例,４ｄ１例。射击距离１ｍ以内３０例,１ｍ以上１５例。１．２　临床表现　前房出血３２例,其中发生继发性出血１２例,角膜水肿增厚１５例,角膜上皮擦伤３３例,继发性青光眼８例…     

﹣80°C冰箱长期冻存外周血造血干细胞研究

目的对外周血造血干细胞活性在深低温（-80℃）下保存3年的效果进行评价。方法对30例经MCS＋血细胞分离机采集所得的外周血造血干细胞加入细胞冻存保护剂分别予以-196℃液氮冻存和-80℃冰箱深低温冻存,并检测和比较冻存前后单个核细胞（mononuclear cells,MNC）、CD34＋细胞的计数及细胞回收率,细胞活性。结果 -80℃冰箱冻存组MNC、CD34＋细胞冻存3年与冻存前比较差异均无统计学意义冻存3年后MNC回收率与冻存1年后比较差异无统计学意义。3年后-80℃冰箱冻存组干细胞与-196℃液氮冻存组比较,差异无统计学意义。结论 -80℃冰箱深低温保存法快速、简便、安全、费用低廉,可有效用于外周血造血干细胞长期保存。     

低温冻存对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响

目的比较人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)冻存前与复苏后的生物学特性,为规模化储备UC-MSCs提供试验支持。方法采用胶原酶消化法从脐带中分离UC-MSCs,贴壁培养传代,将第3代UC-MSCs利用程控降温仪冷冻,置于-196℃液氮中冻存6个月后复苏,比较冻存前和复苏后UC-MSCs的细胞形态、生长曲线、免疫表型及多向分化潜能等生物学特性。结果复苏后UC-MSCs仍呈成纤维样形态生长,生长曲线与冻存前相似;免疫表型仍高表达CD73、CD90、CD105,不表达CD34、CD45、CD40、CD80、CD86、CD154、HLA-DR;在特定的体外诱导条件下,仍可以向骨、脂肪、软骨分化。结论冻存复苏后UC-MSCs的生物学特性仍保持稳定。     

Cryopreservation and culture of the human fetal brain tissues

Summary Human embryos after 3–4.5 months of gestation were obtained with abortion. The brain tissue of the bodies was scissored up to obtain 1–3 mm³ pieces, and 7% dymethyl sulfoxide (DMSO), as a cryoprotectant, was added, and then stored at −70°C for 1–30 days or at −196°C for 1–84 days. The survival rate of stored cells was 64%–88%. During 6 days of storage with neuron culture medium, the survival rate of cells at 4°C is over 50% each day, but, as time goes on, the count of the cells is getting less and less. The cells washed out DMSO after cryopreservation and the planting fresh cells can adhere to the wall of the culture bottle, grow, display various forms of neurons and gliacytes. From the above findings, it was suggested that: 1) The fetal human brain tissue, handled properly, can endure cryopreservation with7% DMSO as a cryoprotective agent; 2) The storage time was related insignificantly to the survival rate of the tissues stored; 3)It is available for a short proservation at 4°C and 4) It is possible to set up a bank of fetal human brain tissue.     

家蝇胚胎细胞系MDEC-07114的储存方法

目的探讨家蝇胚胎细胞系(MDEC~07114)的储存方法。方法采用不同的冻存方法储存MDEC~07114,复苏后观察细胞贴壁及生长情况。结果4℃保存1~2个月内,细胞复苏后能贴壁生长。其他4种方法处理后液氮冻存的细胞,复苏后细胞生长状态均较好。结论短期储存可选用4℃保存法;长期保存细胞,用90%胎牛血清冻存液改良液氮冻存法。     

气相冷冻法和液相冷冻法对人类精子运动能力、形态学及超微结构的影响

目的研究液氮蒸汽熏蒸法(简称气相冷冻法)和直接投入液氮冷冻法(简称液相冷冻法)对人类精子冷冻复苏后运动能力、形态学及超微结构的影响。方法选择25例捐精者的精液标本,按照1∶1的比例添加改良甘油-卵黄-枸橼酸钠(GYC)作为冷冻保护剂。每份精液标本等分为2份,分别进行气相法冷冻和液相法冷冻。复苏后,利用IVOS精子分析仪测定精子总活动率、前向运动精子百分率、运动参数,巴氏染色观察精子形态并计算形态正常率,透射电子显微镜观察精子超微结构。结果气相法冷冻从28℃降温到-185℃用时468 s,再经过1 h后降温到-196℃;液相法冷冻从30℃降温到-196℃用时90 s。两种方法冷冻复苏后精子总活动率、前向运动精子百分率、运动参数、形态正常率与冷冻前比较均明显降低(P<0.05)。气相法冷冻复苏后精子的复苏率、总活动率、前向运动精子百分率均高于液相法,差异有统计学意义(P<0.05);两种冷冻方法复苏后精子形态正常率、运动参数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。通过透射电子显微镜观察,使用GYC作为冷冻保护剂,两种方法冷冻复苏后,精子头部质膜和顶体膜超微结构未出现明显的损伤。结论改良GYC保护剂对精子超微结构具有保护作用;气相冷冻法冷冻人类精子的复苏结果优于液相法。     

-80℃冰箱降温-液氮冻存脐血造血干细胞

为脐血造血干细胞 (CBHSC)的冻存建立简便有效的方法 ,采用 5 %二甲基亚砜 (DMSO)加 6 %羟乙基淀粉 (HES)为冷冻保护剂 ,不用程控降温装置 ,直接置CBHSC于 -80℃冰箱中降温 ,次日移至液氮液中保存 1周、1个月、3个月、6个月。结果冻存 6个月后 ,单个核细胞 (MNC)、粒 -单系造血祖细胞 (CFU -GM )和CD+34 细胞的回收率及MNC的台盼蓝拒染率分别为 90 .5± 1.7% ,87.6± 19.5 % ,91.9± 2 .9% ,75 .8± 1.8%。认为这一简便的方法能很好地保存CBHSC的造血潜能 ,因此它能为脐血移植冻存CBHSC。     

Quantitative analysis of host cells growing into canine homograft valved aortic and pulmonary artery

Background  Cryopreserved conduit valved homografts (CVH) have been widely used in surgical treatment of cardiac disease. This study aimed to determine the extent of host cell ingrowth and the durability and immunogenicity of CVH, and to compare the performance of CVH stored at 4°C and CVH cryopreserved in liquid nitrogen at –196°C.

Methods  Heterotopic transplants of canine CVH stored at 4°C (n=14) and cryopreserved in liquid nitrogen (n=14) were made onto the abdominal aorta of recipient dogs. Animals were sacrificed at 7 and 15 days and at 1, 3, 6, 9, and 12 months after transplantation to excise the implanted CVHs. Tissue DNA extraction and quantitative polymerase chain reaction (PCR) were performed to calculate the ratio of donor cells and host cells in the CVH. The tissue viability of CVH after implantation was analyzed by detecting alkaline fibroblast growth factor 2 (FGF-2) using immunohistochemical staining and by observation under transmission electron microscope and scanning electron microscope.

Results  All the animals survived and recovered well. There were few repopulating host cells (0.04%–0.83%) in the implanted CVH at 7 or 15 days. The ratio of ingrowing host cells into the CVH continued rising after implantation and reached 40%–47% in the 12th month postoperation. Histology, transmission electron microscopy and FGF-2 immunohistochemical staining indicated that fibroblasts and the host’s endothelial cells were the main cellular elements invading the CVH. There were no significant differences in results between CVH stored at 4°C and CVH cryopreserved in liquid nitrogen.

Conclusions  Host cells growing into CVH are very important for maintaining the long-term structure and function of the implanted CVH. There is no significant difference between CVH storing at 4°C or in liquid nitrogen in regard to the ingrowth of host cells or of morphologic features after CVH allografting.

     

冷冻预处理温度对胎兔许旺细胞免疫原性的影响

目的探讨不同维持温度冷冻预处理超深低温保存对胎兔许旺细胞免疫原性的影响。方法设未冷冻处理细胞为对照组,实验组细胞设计冷冻维持温度为-30℃,-35℃,-40℃,-45℃,-50℃,-55℃,-60℃,-65℃,-70℃,10%二甲基亚砜（DMSO）为低温保护剂,对胎兔许旺细胞进行冷冻预处理,液氮中保存48h,复温,培养48h后培养液中加入IFN-γ（100U/ml）继续培养72h,流式细胞仪检测许旺细胞MHC-Ⅱ分子的表达率。结果流式细胞仪检测显示各实验组-30℃至-70℃许旺细胞MHC-Ⅱ分子的表达率依次分别是：7.59±0.91,10.43±0.90,14.35±0.73,16.80±0.73,15.41±0.71,14.50±0.73,10.92±0.89,8.36±0.68和5.26±0.76,对照组为35.98±1.06,统计学显示实验组MHC-Ⅱ表达率和对照组之间有显著性差异（P〈0.01）。结论不同维持温度冷冻预处理超深低温保存能降低胎兔许旺细胞的免疫原性。     

液氮保存对人主动脉瓣组织细胞活力的影响

目的　主要观察液氮 (- 196℃ )保存 1～ 2 4mo不同时间段的瓣膜组织细胞活力及组织培养细胞生长情况的变化 ,为临床适用的人同种主动脉瓣的适宜保存期限提供实验依据 .方法　选取 (18～ 35 )岁健康成年男性脑死亡 30 min内取材的主动脉瓣膜 2 0个 .依据保存时间分为 10组 , 组为新鲜对照组 ,取材后直接供实验用 , ～ 组为冷冻保存组 ,分别为冷冻保存 1,3,6 ,9,12 ,15 ,18,2 1,2 4m o的瓣膜 ,每组 2个瓣膜共 6个瓣叶 .冷冻保存组各组瓣膜缓慢降温 (1℃·min- 1 ) ,液氮中保存 ,实验时进行快速复温 .瓣叶剪为细小组织块 ,一半置入培养瓶中做组织培养 ,相差显微镜下观察其组织细胞生长情况 ;另一半组织块用胰酶消化 ,光镜下做细胞计数并计算其细胞活力 .结果　 组的组织细胞活力最高(93.8% ) , ～ 组细胞活力均较 组明显减低 (6 7.3% vs93.8% P<0 .0 5 ) ; , , 组细胞活力较 ～ 组瓣膜各组明显减低 (5 2 .4% vs76 .5 % P<0 .0 5 ) . 组组织细胞 1wk镜下可见 ,生长较快 ,4wk时镜下细胞数较多 ; ～ 组组织细胞 2 wk镜下可见 ,生长较 组稍缓慢 ,4wk时镜下细胞数减少 ; , , 组细胞 3wk镜下可见 ,生长较慢 ,4wk时镜下细胞数较 组明显减少 .结论　液氮保存对人同种瓣膜组织细胞活力有显著影响 ,其程度     

低温冻存对人脂肪间充质干细胞生物学特性的影响

目的: 比较人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs)冻存前和复苏后的生物学特性,为今后建立低温干细胞库提供实验支持。方法： 采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化法从腹部大网膜脂肪组织中分离hADSCs,体外培养扩增,将处于均一稳定生长状态的第3代hADSCs置于液氮中分别冻存1、3和6个月,复苏后台盼蓝染色检测细胞存活率,采用MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面抗原,成脂成骨诱导后鉴定多向分化能力,RT PCR检测成脂特异性基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ-2(peroxisome proliferator activated receptorγ-2,PPARγ-2)和成骨特异性基因骨钙素(osteocalcin,OC)的表达情况。结果： 随冻存时间的延长细胞存活率略有下降,但差异无统计学意义(P＞0.05)。MTT结果显示冻存前后细胞增殖能力均很强。流式细胞检测结果显示冻存前后细胞均高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和CD166,低表达CD45和HLA-DR。冻存前后hADSCs均具有向脂肪细胞和骨细胞分化潜能,且RT-PCR结果显示,PPARγ-2和骨钙素mRNA的表达冻存前后差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论： 经液氮冻存后的hADSCs具有高存活率,生物学特性保持稳定且仍具有多向分化潜能。