原发和转移性肝癌中Smad4,TGF—β1及TGF—βR1的表达及意义

目的：研究原发和转移性肝癌Smad4,TGF-βR1的表达及意义。方法：常规石蜡包埋切片，切片行Smad4原位杂交染色和TGF－β1，TGF－βR1 ABC免疫组化染色。结果：38例原发性肝癌（PHC）中Smad4,TGF-β1及TGF－βR1阳性率分别为42％，63％和53％，10例转移性肝癌（MHC）中阳性率分别为40％，40％和50％，PHC与MHC比较，差异无显著性，高分化，肿块最大径＜5厘米和不伴癌栓的PHC病例，Smad4,TGF-β1,TGF-βR1阳性率明显高于低分化，肿块最大径≥5cm和伴癌栓病例；MHC中表达分布情况与PHC相似，Smad4,TGF-β1和TGF－βR1在PHC在表达存在相互密切关系。结果：Smad4,TGF-β1,TGF-βR1表达与提示肝癌预后的主要临床指标相关，可能预示它们与肝癌预后有关。     

原发和转移性肝癌中Smad4、TGF-β1及TGF-βR1的表达及意义

目的研究原发和转移性肝癌Smad4、TGF-β1和TGF-βR1的表达及意义。方法常规石蜡包埋切片,切片行Smad4原位杂交染色和TGF-β1、TGF-βR1ABC免疫组化染色。结果38例原发性肝癌(PHC)中Smad4、TGF-β1及TGF-βR1阳性率分别为42％、63％和53％,10例转移性肝癌(MHC)中阳性率分别为40％、40％和50％,PHC与MHC比较,差异无显著性。高分化、肿块最大径＜5cm和不伴癌栓的PHC病例,Smad4、TGF-β1、TGF-βR1阳性率明显高于低分化、肿块最大径≥5cm和伴癌栓病例;MHC中表达分布情况与PHC相似。Smad4、TGF-β1和TGF-βR1在PHC在表达存在相互密切关系。结论Smad4、TGF-β1、TGF-βR1表达与提示肝癌预后的主要临床指标相关,可能预示它们与肝癌预后有关。     

肝、胆

人肝癌移植瘸多药耐药模型的建立及耐药机制的探讨//肝细胞癌患者B和C基因型乙型肝炎病毒X蛋白的变异特点//甲基化寡核苷酸抑制MRP2表达逆转人肝癌细胞HepG2多药耐药的研究//nm23-H1对肝癌细胞株SMMC7721转移特性的抑制//靶向性溶瘸腺病毒对肝癌细胞的特异性研究//外周血GGT mRNA-H亚型表达与原发性肝癌转移的关系     

肝癌细胞系中Oct4与Wnt/β-catenin 和TGF-β信号通路的相互影响

 目的 探讨干细胞相关基因Oct4与Wnt/β-catenin 及TGF-β信号通路在肝癌细胞系中的相互作用。方法 应用RT PCR法检测Oct4、Wnt/β-catenin及TGF-β信号通路相关基因β-catenin、Wnt10b、TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4在肝癌组织及细胞系中的表达;使用siRNA 沉默人肝癌HepG2细胞Oct4和TCF3的表达,实时荧光定量RT PCR法检测Wnt10b、β-catenin、 TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4等基因的表达变化。结果 Oct4和β catenin、Wnt10b、TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4在肝癌组织及细胞系中同时表达; siRNA-Oct4 沉默人肝癌HepG2细胞Oct4后,Oct4表达明显下调,β-catenin、Wnt10b随之下调达40%~50%左右,而TCF3表达升高到3倍左右;同时ELF、Smad3和 Smad4均下降到原来的1%以下;而siRNA-TCF3 沉默TCF3后,Oct4的表达也升高2~3倍;ELF升高亦达2~3倍,Smad3和 Smad4也略有升高。结论 Oct4和β-catenin、Wnt10b、TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4在肝癌组织及细胞系中同时表达提示彼此之间有相互作用。RNAi实验证明Oct4对Wnt/β-catenin及TGF-β信号通路的成员有调控作用;Oct4 与TCF3之间的负反馈作用值得深入研究。     

肝、胆

丙型肝炎病毒NS4B对肝细胞c-myc和ras蛋白表达的研究；放射与抗VEGF抗体对人肝癌移植瘤生长的抑制作用；ki-67反义寡核苷酸抑制人肝癌细胞株HEPG-7402生长的体外试验；NS-398对肝细胞VEGF、MMP-9表达的调节；β-catenin、cyclin D1及c—myc在肝细胞癌中的表达.[编者按]     

肝、胆（081409～081448）

食生鱼与HBV感染和饮酒在原发性肝癌发生中的协同作用；GDF15在大鼠早期肝癌和人小肝癌组织中的表达；表皮生长因子受体抑制剂AG1478影响HuH7细胞黏附、迁移和侵袭的研究；hTERT—TKIGCV对肝癌细胞生长及凋亡的靶向性影响；TSGl01-siRNA对肝癌耐药细胞株QGY／CDDP的逆转作用     

肝、胆

蝎毒对耐药肝癌细胞株Bei-7404／ADM逆转作用的研究，反义端粒酶RNA基因对肝癌细胞的抑制作用，表皮生长因子受体信号通路调控人肝细胞癌细胞增殖分子机制的研究，凋亡抑制聋白Livin在人原发性肝癌细胞系HEPG-2中的表达情况，靶向肿瘤血管内皮细胞抑制人肝癌移植瘤生长的功能性抗体的研制，肝癌树突状细胞瘤苗诱导抗肿瘤作用的研究，     

人胰腺癌组织中DPC4/Smad4、p21wafI、p16蛋白表达的检测

背景与目的：近一半的胰腺癌存在DPC4／Smad4失活,使肿瘤细胞增殖的抑制作用丧失;p21^warI是Smad4调控的下游靶基因,而PC4和p16基因在胰腺癌的发生中可能有协同作用。本研究拟通过研究DPC4／Smad4、p21^wafI、p16蛋白在人胰腺癌中的表达情况,探讨三者之间的关系及它们的胰腺癌中的可能作用机制。方法：用免疫组化技术检测56例石蜡包埋人胰腺癌组织Smad4,p21^wafI,p16的蛋白表达情况。结果;用石蜡包埋人胰腺癌组织免疫组化显示Smad4,p21^wafI和p16阳性率分别为58．93％,48．21％和42．86％,对应癌旁非癌胰腺组织阳性率分别为89．29％,87．55和76．79％;P3,P4,P7人胰腺腺癌细胞系DPC4／Smad4的原位杂交,免疫组化及Western blot均为阳性,而1,P2均为阴性。统计学分析显示胰腺癌及癌旁非癌胰腺之间3种蛋白表达均有显著性差异（P＜0．05）,胰腺癌中Smad4与p21^wafI表达之间有一定相关性（P＜0．05）,Smad4与p16表达之间有一定相关性（P＜0．05）,但p21^wafI与p16表达之间无显著相关（P＞0．05）。结论：胰腺癌与正常胰腺相比,Smad14,p21^wafI,p16蛋白表达明显下降,其改变在胰腺癌的发生发展中可能起重要作用。     

TEC酪氨酸蛋白激酶在肝癌组织中高表达并参与肝癌耐药

目的 研究TEC酪氨酸蛋白激酶在肝癌组织中的表达及其与肝癌耐药之间的关系,为肝癌临床治疗提供线索。方法 Real-time PCR、Western blot及免疫组织化学法检测癌旁、肝癌组织及肝癌细胞系中TEC mRNA、TEC蛋白表达水平;狭线杂交法检测肝癌组织中TEC mRNA表达水平;MTT检测细胞存活率。构建TEC真核表达载体,经脂质体介导法转染肝癌细胞;RNA干扰技术敲低肝癌细胞中TEC。免疫共沉淀技术检测TEC磷酸化活化水平。结果 18例肝癌组织中,TEC mRNA和蛋白水平显著高于癌旁组织（P<0.001）;48例肝癌组织中,TEC高表达组对化疗药物的耐受能力明显高于TEC低表达组;上调TEC表达水平后,HepG2细胞对化疗药物的耐受性增加;用化疗药物处理肝癌细胞株HepG2,其TEC表达水平增加,并伴随有ERK磷酸化水平升高。 结论 TEC在肝癌组织中的高表达促进了肝癌的耐药,且可能与ERK磷酸化水平升高有关。     

TGFβ1与Smad4基因在肝细胞癌中的表达及意义

目的 探讨TGFβ-Smad信号通路中TGFβ1与Co- Smad(Smad 4)与肝细胞癌的发生、发展的关系.方法 采用免疫组化ABC法及原位杂交法(ISH),检测41例肝细胞癌组织与癌旁组织中TGFβ1、Smad 4蛋白、Smad 4 mRNA的表达,以5例外伤性肝破裂手术切除标本作为正常对照.比较HCC组与时照组及HCC癌旁中TGFβ1与Smad 4蛋白、Smad4 mRNA表达的差异,并进行图像分析.结果 正常对照组中TGFβ1呈阴性表达,Smad 4蛋白、Smad 4 mRNA均呈阳性表达;HCC组织中TGFβ1阳性表达率为78.0%(32/41),癌旁组织中为95.1%(39/41),两者比较差异显著(P<0.05);Smad 4蛋白在HCC组织中阳性表达率为48.8%(20/41),在癌旁组织中为78.0%(32/41),两者比较有显著性差异(P<0.01);Smad 4 m RNA在HCC组织中阳性表达率为51.2%(21/41),在癌旁组织中为73.1%(30/41),两者比较有显著性差异(P<0.05);与正常肝组织比较,HCC组织中Smad 4蛋白和Smad 4 mRNA阳性表达率均显著降低(P<0.05);Ⅰ、Ⅱ级HCC组织与Ⅲ、Ⅳ级HCC组织Smad 4 m RNA阳性表达存在显著差异(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ级阳性表达率较Ⅰ、Ⅱ级降低;Smad 4蛋白的阳性面积百分比、光密度及Smad 4 m RNA的阳性面积百分比癌旁组织均显著高于HCC组织(P均<0.05).HCC组织中Smad 4蛋白、Smad 4 m RNA表达与TGF-β1表达比较均存在显著差异(P<0.05),但均无显著相关性(P>0.05).结论 TGFβ1过表达、Smad4表达缺失可能在肝细胞癌的发生、发展中发挥重要作用.     

肝、胆

肝细胞肝癌相关新基因FP248的功能研究；肝细胞癌NY-ESO-1基因／蛋白表达与临床病理特征及肿瘤转移的关系；茶多酚在树鼩肝癌形成中的化学预防作用；维生素K2对人肝癌细胞的抗黏附和抗侵袭作用；褪黑素对小鼠肝癌细胞增殖及p27^kipl、cyclin D1基因表达的影响；体外联合应用NS-398与5-Fu抑制肝癌HepG2细胞生长的研究；生长抑素受体亚型介导入肝癌细胞凋亡的实验研究。[编者按]     

肝、胆（071425～071461）

071425 抗肝癌重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作有；071426 肝细胞癌中潜伏膜蛋白-1的表达及意义；071427 微囊藻毒素LR促肝癌过程p53、P16基因mRNA的表达；071428 TTV感染及复制与原发性肝癌家庭聚集性关系的研究；071429 肝癌组织中雌激素受体基因启动子甲基化及临床研究……[第一段]     

肝癌多药耐药细胞株的建立及其多药耐药机理的研究

 为建立人肝癌多药耐药细胞株并研究其多药耐药的机理，本文应用BEL－7402细胞株，通过不断提高培养液中阿霉素（Doxorubicin）的浓度，长期筛选培养，得到肝癌多药耐药株BEL7402/DoX。经MTT法检测BEL－7402对长春新碱（VCR）等8种抗癌药的抗性提高了27－1100倍不等。以流式细胞技术检测了此细胞株表面MDR1蛋白P－gp、多药耐药相关蛋白MRP及谷胱甘肽硫转移系统（GSH/GST）的表达；用RT－PCR方法检测了MDR及MRP基因表达水平。发现BEL7402/Dox细胞表面P－gp表达为93.5～97.4％；MRP的表达为84.7～90.2％；RT－PCR证实此细胞株中有MDR及MRPmRNA的高表达；未发现GSH/GST的表达升高。     

肺鳞癌组织中TβRⅡ、Smad7的表达及其相关性

[目的]评价转化生长因子βⅡ型受体（TβRⅡ）及Smad7在肺鳞癌组织中表达及其相关性。[方法]用Western blot法检测18例肺鳞癌癌组织及癌旁组织中TβRⅡ和Smad7的表达。[结果]TβRⅡ在癌组织的表达为癌旁组织的0.73倍（P〈0.05）,Smad7在癌组织表达是癌旁组织的3.6倍（P〈0.05）。肺鳞癌组织Smad7和TβRⅡ表达呈负相关（r=-0.9173,P〈0.05）。[结论]TβRⅡ低表达及Smad7过表达与肺鳞癌的发生密切相关。     

肝癌耐药细胞株的建立及癌干细胞的特性

目的建立肝癌耐药细胞株,并观察耐药细胞株癌干细胞的相关生物学特性。方法采用阿霉素（ADM）浓度梯度递增法诱导建立耐药BEL-7404人肝癌细胞株,并对亲代与耐药肝癌细胞株进行癌细胞基本特性、癌于细胞相关细胞学特性进行检测,用计数法检测癌细胞生长曲线、倍增时间与MTT法测耐药倍数;单个细胞成株培养、平板克隆形成实验、“球囊”细胞培养实验。结果耐药BEL-7404人肝癌细胞与亲本细胞相似,呈上皮样生长方式,但其中梭状细胞略多,耐药倍数为292倍;生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本BEL-7404人肝癌细胞,且倍增时间增加;耐药BEL-7404肝癌细胞克隆形成率、“球囊”细胞形成率均明显低于其亲本BEL-7404人肝癌细胞。结论低浓度阿霉素持续增量法可诱导形成耐药肝癌细胞株,但耐药肝癌细胞株的癌干细胞特征并不明显。     

HOXB7基因敲除对人肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的 研究同源异型盒基因HOXB7（Homebox7）对人肝癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及部分机制。方法 采用荧光定量PCR法选取HOXB7 mRNA高表达的人肝癌SMMC-7721细胞和HepG2细胞;设计靶向HOXB7的shRNA,瞬时转染肝癌SMMC-7721细胞,荧光定量PCR和Westernblot法检测shRNA靶向沉默的效果,CCK8、Transwell和划痕实验分别用于检测细胞增殖、侵袭和迁移能力;Western blot法测量肝癌SMMC-7721细胞中Smad3、p-Smad3表达水平。结果 HOXB7 shRNA转染的肝癌SMMC-7721细胞中HOXB7基因mRNA和蛋白表达水平均显著降低,同时细胞增殖、侵袭和迁移能力随之下降,且TGF-β通路中p-Smad3蛋白表达水平下调。结论 HOXB7可促进肝癌细胞增殖、侵袭以及迁移能力,其机制可能与调节Smad3磷酸化水平有关。     

结肠直肠癌Smad4、MMP-9基因表达的相关研究

目的研究结肠直肠癌组织中Smad4、MMP-9的表达与血管生成、侵袭转移之间的关系,探讨Smad4和MMP-9之间的相关性。方法采用Max Vision快捷免疫组化法,对47例人结肠直肠癌组织和23例癌旁正常组织做Smad4、MMP-9、CD34的抗原标记,并以CD34标记血管内皮细胞,计数微血管密度（MVD）。结果结肠直肠癌组织中的Smad4阳性率（46,81％）明显低于癌旁正常组织（86．96％）,MMP-9的阳性率（57．45％）明显高于癌旁正常组织（17．39％）;Smad4表达阳性的结肠直肠癌组织MVD值（24．95±4．53）明显低于表达阴性者（31．22±6．39）,MMP-9表达阳性的结肠直肠癌组织MVD值（30．52±7．08）明显高于表达阴性者（25．25±3．63）;Smad4、MMP-9的表达及MVD与结肠直肠癌的组织学分级、淋巴结转移、Duke’s分期密切相关,而与性别、年龄和肿瘤的部位无关;Smad4、MMP-9在结肠直肠癌中的表达呈负相关。结论Smad4、MMP-9的表达及MVD值与结肠直肠癌的侵袭转移密切相关,可作为重要的生物学标志;MMP-9可能是抑癌基因Smad4调控的下游目的基因。     

肝细胞癌中耐药相关基因的表达及其临床研究

目的　探讨肝癌组织中 ,多项耐药相关基因 (P gp、GST π ,TOPOⅡ )的表达水平及其临床意义。方法　应用免疫组化S P法对术前未使用过化疗、放疗及免疫治疗的 60例肝癌组织及 3 5例肝癌旁组织 ,行P gp ,GST π ,TOPOⅡ检测。结果　肝癌组织中三者表达阳性率均高于癌旁肝组织 ,且有统计学意义 (P <0 .0 1)。癌旁的不典型增生组织中P gp、GST π ,TOPOⅡ表达阳性率高于相对正常或增生组织中 (P >0 .0 5 )。单因素表达中P gp、GST π与癌分化程度和转移有关 (P <0 .0 5 ) ,TOPOⅡ则与癌分化程度和转移无关 (P >0 .0 5 )。多因素联合表达中 ,P gp与GST π共表达与癌分化程度和转移有关 (P <0 .0 1) ,P gp、GST π和TOPOⅡ三者共表达与转移有关 (P <0 .0 5 )。P gp与GST π在肝癌中的表达明显相关 (P <0 .0 1)。结论　肝癌中耐药相关基因的单个或联合表达是癌的发生、分化程度及转移行为的生物学表现。临床上对 3种以上耐药相关基因的综合检测意义重大 ,有助于指导临床肝癌的化疗     

TC21/R-Ras 2在肝癌中的表达、亚细胞定位及意义

目的:探讨TC21基因在肝癌细胞、肝癌及癌旁组织中的表达、亚细胞定位及意义。方法:用RT-PCR检测TC 21在肝癌细胞系及人肝癌及癌旁组织中mRNA水平的表达,用免疫组化及Western印迹检测TC21蛋白在肝癌相关组织中的表达差异,用组织芯片技术结合免疫组化检测TC21蛋白的亚细胞定位。结果:RT-PCR检测结果表明TC21 mRNA在SMMC-7721、BEL-7402、Huh-7、Hep3B、HepG2、MHCC-97L、MHCC-LM3 7个肝癌细胞系及L-02和Chang liver 2株永生化人肝细胞系、7对肝癌及对应癌旁肝组织中均有较高表达;Western印迹结果表明上述细胞系中TC21蛋白表达与mRNA表达一致,TC21在4对肝癌及癌旁组织中均呈较高水平的表达;免疫组化检测结果表明TC21在人原发性肝癌、癌旁组织、硬化肝组织与正常肝组织中的表达阳性率分别为84.2%、77.2%、41.7%、0%,肝癌与肝硬化、正常肝相比显著高表达(P<0.05,P<0.01),与癌旁组织比无统计学意义(P>0.05);统计学分析结果表明TC21蛋白表达与肿瘤大小呈正相关(P<0.05),与是否肝硬化呈负相关(P<0.05);肝癌组织中TC21主要定位于肝癌细胞核,部分定位于胞质,膜定位不明显,TC21蛋白在肝癌细胞中的核定位显著高于癌旁肝细胞(P<0.001)。结论:本研究首次揭示TC21蛋白在肝癌组织中的高表达及核定位预示其在肝细胞恶性转化及肝癌发生发展中发挥重要作用。     

人肝癌组织糖调节蛋白94的表达及其意义

目的：探讨人肝癌组织糖调节蛋白94(glucose-regulated protein-94，GRP94)的表达及意义。方法：采用SABC法检测人肝癌组织GRP94的表达．镜下观察GRP94在癌组织中的表达特点。结果：免疫组化显示，40例肝癌组织中38例(95．0%）存在GRP94的表达．不同癌组织存在胞质、胞膜和胞核表达强度及部位的差异：癌旁组织亦存在较弱的表达。结论：人肝癌组织存在GRP94的表达异质性．呈现了胞质、胞膜和胞核的表达差异．GRP94在人肝癌组织的表达特点为以后肿瘤抗原肽瘤苗的提取和实验研究作了铺垫。