皮下移植心钠素基因表达细胞胶囊对高血压大鼠的降血压效应

目的　研究微孔胶囊介导的心钠素基因表达细胞的皮下移植对幼龄自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响。方法　借助于逆转录病毒载体及其包装细胞系的作用 ,将人心钠素基因的逆转录病毒表达重组体和未携带目的基因的逆转录病毒空载体pLNCX分别导入SHR新生鼠的皮肤成纤维细胞中 ,制备可从孔中排出心钠素多肽的微孔胶囊 ,并将表达和不表达人心钠素的新生鼠皮肤成纤维细胞分别装入不同的胶囊中 ,封闭后分别植于实验组和对照组幼龄SHR(各 1 0只 )的皮下。移植后每周测定大鼠血浆心钠素水平、血压、尿量、尿液钾、钠浓度和体重 ,连续 7周。结果　在逆转录病毒载体的介导下 ,人心钠素基因既可在逆转录病毒载体的包装细胞系中表达 [(5 84± 0 0 7)ng·1 0 - 6 细胞·2 4h 1 ] ,也可在SHR新生鼠的皮肤成纤维细胞中表达 [(1 3 37± 2 36)ng·1 0 - 6 细胞·2 4h 1 ]。皮下移植胶囊后第 1周 ,实验组大鼠血浆中的心钠素浓度 (1 31pg/ml± 8pg/ml)明显高于对照组 (1 0 4pg/ml± 7pg/ml,t=8 62 ,P <0 0 1 )。 7周观察期间 ,两组大鼠的血压均随个体发育而逐渐升高 ,但实验组血压[(1 2 9± 9)～ (1 69± 9)mmHg]却始终明显低于对照组 [(1 4 5± 1 0 )～ (1 81± 9)mmHg ,P <0 0 5～0 0 1 ) ] ,其中第 2周时的血压差异达     

青光眼家兔及临床青光眼患者的房水与血浆心钠素水平研究

目的　为明确心钠素是否直接参与眼压的局部体液调节 ,并探讨房水中心钠素的来源。方法　对16例青光眼患者及 15只家兔青光眼模型用放射免疫方法进行房水和血浆心钠素含量的测定。结果　家兔 30眼房水心钠素平均含量 ,正常眼压时为 4 8 6 9± 2 1 5 3pg/ml,高眼压 2小时为 6 9 5 4± 32 98pg/ml,两者比较有显著差异(P <0 0 1) ;高眼压 4小时为 15 5 72± 72 34pg/ml,与正常眼压时比较差异显著 (P <0 0 1)。家兔血浆心钠素平均含量正常眼压时为 130 32± 4 7 5 4pg/ml,高眼压 2小时为 2 78 6 8± 5 4 4 4pg/ml,两者比较差异显著 (P <0 0 1) ;高眼压 4小时为 2 84 6 8± 6 3 78pg/ml,与正常眼压时比较差异显著 (P <0 0 1)。 16例青光眼患者眼压正常者房水心钠素含量为 72 31± 12 82pg/ml,而高眼压者房水心钠素含量为 180 4 4± 4 8 74pg/ml,两者比较差异显著 (P <0 0 1) ;眼压正常者血浆心钠素含量为 15 0 5 2± 4 5 0 7pg/ml,高眼压者血浆心钠素含量为 391 75± 92 37pg/ml,两者比较差异显著 (P<0 0 1)。结论　 1高眼压时血浆和房水的心钠素浓度均与眼压水平呈正相关 ,心钠素直接参与眼压的局部体液调节 ;2房水中的心钠素可能来源于血浆中的心钠素。     

家兔正常眼压和高眼压时房水与血浆心钠素水平的实验研究

目的明确高眼压时房水和血浆中心钠素的浓度是否与眼压呈正相关，并探讨房水中心钠素的来源。方法15例家兔青光眼模型，用放射免疫方法测定房水和血浆心钠素含量。结果家兔30眼房水心钠素平均含量，正常眼压时为48.69±21.53pg／ml，高眼压Zh时为69.54±32.98pg／ml，高眼压4h时为155．72±72.34pg／ml，后者与正常眼压l时相比P＜0．01（t=5．34）；家兔血浆心钠素平均含量，正常眼压时为130.32±47.54pg/ml，高眼压2h时为278.68±54.44pg/ml,高眼压4h时为284.68±63.78p8／ml，与正常眼压时相比P＜0.01（t分别为5.41和5.48）。结论高服压时血浆和和房水的心钠素浓度与眼压呈正相关；房水中的心钠素来源于血浆中的心钠素。     

生长抑素对急性胰腺炎免疫异常的双向调节作用

目的　观察急性胰腺炎时炎症性细胞因子和抗炎症性细胞因子的分泌变化 ,并探讨生长抑素(思他宁 )对急性胰腺炎的治疗机理。方法　实验选用 SD大鼠 ,分为正常对照组 (n=6 )、急性胰腺炎组 (采用开腹胰管注射 5 %牛黄胆酸钠 1.0 m l/ kg诱导急性胰腺炎 ,不治疗 )和生长抑素治疗组 (胰腺炎诱导成功后 0 .5小时静脉注射思他宁 2 0μg/ kg)。后两组动物分别在术后 2小时 (n=6 )、6小时 (n=6 )和 2 4小时 (n=8)处死抽血 ,用 Bioassay法检测血中炎症性细胞因子 IL - 1、TNFα和 IL - 6 ;用 EL ISA检测血中抗炎症性细胞因子 IL - 10和 TGF-β;作血清淀粉酶及胰腺湿重测定。结果　对照组血中 IL - 1为 0 .5 6± 0 .0 6 ng/ m l,TNFα为 2 3.5 0± 1.871IU / m l,IL - 6为 6 9.0±6 .40 IU/ m l,IL- 10为 32 .0 5± 14.87pg/ ml,TGF- β为 6 6 .4± 13.2 0 pg/ ml。急性胰腺炎组成模后 2 4小时其血中 IL-1为 1.15± 0 .13ng/ m l,TNFα为 5 5 .33± 12 .79IU/ m l,IL- 6为 12 7.17± 13.91IU/ ml,IL- 10为 6 8.13± 19.90 pg/ml,TGF- β为 10 3.77± 2 8.95 pg/ m l,与正常对照组比较明显升高 (P<0 .0 5 )。生长抑素治疗组在生长抑素治疗后2 4小时 ,其血中 IL- 1为 0 .83± 0 .12 ng/ m l,TNFα为 33.0 0± 7.40 I     

降钙素基因相关肽对实验性急性心肌梗塞大鼠心钠素释放影响

应用大鼠急性心肌梗塞模型并结合心钠素的放射免疫测定,观察了降钙素基因相关肽对心钠素释放的影响。结果发现,对照组心钠素的释放量为174.1±154.4pg/ml,实验性急性心肌梗塞组心钠素释放量上升至1117.1±746.2pg/ml,与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01),实验性急性心肌梗塞后即刻给予降钙素基因相关肽组心钠素的释放量上升至1595.2±462.5pg/ml,与对照组及实验性急性心肌梗塞组比较均有极显著性差异(p<0.01)。提示在急性心肌梗塞病程中,心钠素的释放受降钙素基因相关肽的调节;心血管组织分泌的心钠素,降钙素基因相关肽等活性物质在急性心肌梗塞发病过程中相互作用,共同参与心血管系统功能的调节。     

反义金属蛋白酶组织抑制剂-1对大鼠肾小管间质损害的治疗作用

目的　探讨金属蛋白酶组织抑制剂 1(TIMP 1)参与肾小管间质损害的机制及防治措施。方法　分 3组通过输尿管逆行注射将等体积生理盐水、空载体、反义TIMP 1基因全长逆转录病毒载体分别导入单侧输尿管梗阻大鼠的肾脏 ,检测肾外源基因的表达 ,观察肾小管间质损害的变化。结果　反义TIMP 1基因可以在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质细胞表达。反义TIMP 1组单侧输尿管梗阻术后较盐水组和空载体组大鼠梗阻肾组织内TIMP 1蛋白质表达明显减少 (3d :0 75± 0 0 7vs1 18± 0 12、1 14± 0 14 ,P <0 0 5 ;7d :2 0 2± 0 16vs 4 0 7± 0 5 7、4 13± 0 6 0 ,P <0 0 1)。免疫组化显示反义TIMP 1组肾小管间质的增殖细胞核抗原和α 平滑肌肌动蛋白抗原表达下调。与两对照组相比 ,反义TIMP 1组肾间质相对面积明显下降 (3d :6 0± 0 7vs8 2± 1 2、8 2± 1 3,P <0 0 1;7d :16 2±1 1vs 2 1 2± 2 6、2 1 0± 2 4 ,P <0 0 1)。结论　反义TIMP 1可能通过抑制肾间质TIMP 1的过度表达减轻肾小管间质病变     

腺病毒介导CTLA4-FasL基因转移诱导大鼠心脏移植物长期存活的作用

目的　探讨腺病毒介导细胞毒T淋巴细胞相关抗原 (CTLA4 ) FasL基因转移延长异基因大鼠心脏移植物存活的作用及其相关机制。方法　供体DA大鼠心脏移植给受体LEW大鼠后 ,经门静脉注入 5× 10 9空斑形成单位 /毫升 (pfu/ml)CTLA4 FasL腺病毒 (AdCTLA4 FasL) ;随后 ,通过每天触摸受体大鼠腹壁 ,记录心脏移植物存活时间。受体大鼠尾静脉取血 ,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定CTLA4 FasL融合蛋白的体内表达 ;通过过继性转移试验、混合淋巴细胞反应 (MLR)及白细胞介素 (IL) 2逆转实验、细胞毒T细胞 (CTL)活性测定、辅助性T淋巴细胞前体 (HTLp)和细胞毒T淋巴细胞前体 (CTLp)频数测定及辅助性T细胞 (TH) 1/ 2型细胞因子检测 ,探讨耐受机制。结果　经AdCTLA4 FasL处理的受体大鼠 ,异基因心脏移植物平均存活时间达 (71 0± 2 3 7)d(n =6 ) ,而对照的未处理组、绿色荧光蛋白 (EGFP)腺病毒处理组和细胞毒T淋巴细胞相关抗原 4免疫球蛋白 (CTLA4Ig)腺病毒处理组平均存活时间分别为 (5 7± 0 5 )d(n =6 )、(5 2± 0 4 )d(n =6 )和 (4 5 7± 12 4 )d(n =6 ) ,差异具有显著意义 (均P <0 0 5 )。心脏移植物长期存活的受体大鼠对供体抗原的低应答可以被过继转移 ;MLR活性特异性降低 ,且不被外源性IL 2逆转 ;CTL活     

高压氧对兔感染性脑水肿的作用

目的 :通过感染性脑水肿时 β -endophin(β -EP)含量的变化以观察高压氧对兔百日咳菌液感染性脑水肿的作用。方法 :采用百日咳菌液诱发兔感染性脑水肿模型 ,观察生理盐水组 (NSn =7)、百日咳菌液组 (PBn =7)、高压氧治疗组 (HBOn =7)皮层、海马、血浆及脑脊液中 β -EP含量的变化。结果 :百日咳菌液组注菌侧脑组织含水量 (watercontentWC) (82 .6 5± 0 .76 % )明显高于盐水组WC(79.4 7± 0 .96 % ) (P <0 .0 1) ;百日咳菌液组 β-EP含量 :(皮层 :5 6 .2 8± 11.6 6 pg/mg ,海马 :85 .97± 33.76 pg/mg) ,分别较盐水组相应区域 (皮层 :18.5 0± 2 .0 1pg/mg ,海马 :2 2 .5 2± 6 .0 9pg/mg)明显增高 (P <0 .0 1) ;注菌后 4h血浆 β -EP含量 (10 6 .33±2 4 .96ng/ml)和脑脊液中 β-EP含量 (2 .4 9± 0 .6 6ng/ml)分别比注菌前 (血浆 :4 3.80± 19.6 3ng/ml,脑脊液 :1.14± 0 .39ng/ml)明显上升 ,差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。HBO组 :WC :81.38± 0 .30较菌液组明显下降(P <0 .0 5 ) ;血浆、脑脊液 β -EP含量 (6 3.5 0± 2 2 .4 8ng/ml、1.5 2e0 .30ng/ml)较菌液组下降 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;皮层、海马 β -EP含量 (2 9.5 4± 5 .2 1pg/mg、38.5 7± 10 .90 pg/mg)与菌液组注菌侧比较明显下降     

钠摄入量对心力衰竭大鼠心脏肾素-血管紧张素系统与心钠素的影响

目的　观察钠摄入量对心力衰竭大鼠心脏局部肾素-血管紧张素系统与心钠素的影响 .方法　经动 -静脉分流术造成大鼠充血性心衰模型 ,分为心衰组、心衰限钠组、心衰补钠组 ,假手术大鼠为对照组 ,用放射免疫分析法和原位杂交技术分别测定各组血浆和心肌血管紧张素 、心钠素含量及心肌血管紧张素原 m RNA表达水平 (吸光度 A值 ) ,同时检测心功能 .结果　心衰限钠组心房和心室血管紧张素 含量(2 0 .1± 4 .5 )和 (2 7.3± 5 .9) ng· g- 1、血管紧张素原 m RNA表达 (6 .4± 1.2 )和 (12 .6± 2 .3)显著高于心衰组 (17.5± 3.6 )和 (2 0 .1± 3.7) ng· g- 1 ,(6 .2± 1.9)和 (8.6± 1.7) (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1) ,心室心钠素 (42 3± 6 8) ng· g- 1 也显著高于心衰组 (337± 86 ) ng· g- 1 (P<0 .0 5 ) ,心房心钠素 (6 7± 19)μg· g- 1显著低于心衰组 (85± 15 ) μg· g- 1 (P<0 .0 5 ) ;心衰补钠组心房和心室血管紧张素原 m RNA表达水平、心室血管紧张素 和心钠素与心衰组无显著差别 ,心房血管紧张素 与对照组无显著差别 ,心房心钠素 (10 1± 17) μg· g- 1 显著高于心衰组 (P<0 .0 1) .结论　心衰时不同钠摄入量可通过改变心脏局部肾素 -血管紧张素系统与心钠素的平衡状态在心衰发展进程中发挥作用     

TEAS预处理对运动性疲劳大鼠脑钠素、尾加压素Ⅱ的影响

目的 观察经皮穴位电刺激(TEAS)“足三里”穴对运动性疲劳大鼠心脏内分泌激素的影响,探讨其对运动性疲劳的心肌保护作用机制。方法 大鼠随机分为正常组、模型组、TEAS组,每组7只。采用跑台运动法建立运动性疲劳模型,采用TEAS“足三里”穴预处理30min(连续波、频率2 Hz、强度5 mA)。通过大鼠力竭运动时间评价大鼠运动能力的变化,ELISA法检测脑钠素、尾加压素Ⅱ水平的变化。结果 模型组力竭运动时间（112.54±15.36）min,尾加压素Ⅱ含量（30.67±4.10）ng/ml,低于正常组（158.17±18.93）min、（45.82±6.31）ng/ml,P＜0.01,模型组脑钠素含量（45.73±6.82）pg/ml,高于正常组（29.45±4.60）pg/ml,P＜0.01;TEAS组力竭运动时间（146.53±16.42）min,尾加压素Ⅱ含量（38.49±5.16）ng/ml,高于模型组（112.54±15.36）min、（30.67±4.10）ng/ml,P＜0.05,TEAS组脑钠素含量（32.46±5.39）pg/ml,低于模型组（45.73±6.82）pg/ml,P＜0.05。结论 经皮穴位电刺激“足三里”穴对运动性疲劳大鼠有一定的保护作用,可消除或延缓运动性疲劳的产生,同时能升高脑钠素、尾加压素含量,对心肌疲劳有一定的保护作用。     

血吸虫重组卡介苗—Sj20GTST疫苗的构建及免疫原性的研究

目的 构建含日本血吸虫相对分子质量为２６０００的抗原（Ｓｊ２６ＧＳＴ）基因的 且卡介菌（ＲＢＣＧ）疫苗,观察其对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的免疫保护作用。方法 采用分子生物学技术,将Ｓｊ２６ＧＳＴ ｃＤＮＡ克隆到人结核杆菌热休克蛋蛋白（ＳＨＰ）７０启动子下游,构成融合基因,再将事基因亚克隆到Ｅ,ｃｏｎｌｉＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ（ｒＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ）疫苗,经热诱导,在ＢＣＧ中Ｓｊ２６ＧＳＴ抗原。用ｒＢＣ     

替普瑞酮对类固醇致胃黏膜损伤的保护作用

目的研究替普瑞酮对类固醇激素所致胃黏膜损伤的保护作用及其机制。方法50只雄性SD大鼠随机分为空白组、实验对照组、低剂量替普瑞酮组、中剂量替普瑞酮组和高剂量替普瑞酮组,每组10只。采用泼尼松龙皮下注射制备大鼠胃黏膜损伤模型,低、中、高剂量组替普瑞酮的剂量分别为50、100、200mg/kg,给药7d,每天1次。观察胃黏膜的病理变化,计算溃疡指数、胃黏膜组织学损伤指数,放射免疫法检测血浆内皮素1和胃黏膜前列腺素E2(PGE2)水平,Griess法检测血清NO含量。结果类固醇激素能引起胃黏膜显著出血性损伤,实验对照组大鼠溃疡指数中位数为44.5,组织学损伤指数中位数为5.5,明显高于空白组(均为0,均P<0.01);实验组大鼠血浆内皮素1水平为399pg/ml±74pg/ml,高于空白组(279pg/ml±56pg/ml,P<0.01);血浆NO水平(27μmol/L±5μmol/L)低于空白组(36μmol/L±5μmol/L,P<0.01);胃黏膜PGE2水平(154pg/mg±83pg/mg)低于空白组(337pg/mg±112pg/mg,P<0.01)。低、中、高剂量替普瑞酮组的溃疡指数中位数分别为32.5,23.0,23.0,均明显低于实验组(均P<0.01);组织学损伤指数中位数分别为3.0,3.0,1.5,均明显低于实验组(均P<0.01),内皮素1水平分别为299pg/ml±99pg/ml,284pg/ml±85pg/ml,189pg/ml±32pg/ml,均明显低于实验对照组(P<0.05,P<0.01,P<0.01);NO水平分别为56μmol/L±16μmol/L,62μmol/L±12μmol/L,83μmol/L±9μmol/L,均明显高于实验对照组(均P<0.01),高剂量替普瑞酮组胃黏膜PGE2水平为241pg/mg±65pg/mg,明显高于实验组154pg/mg±83pg/mg(P<0.05)。溃疡指数、组织学损伤指数和内皮素1水平随替普瑞酮剂量的增大而降低,血清NO、胃黏膜PGE2水平随替普瑞酮剂量的增大而升高。结论替普瑞酮对类固醇致胃黏膜损伤具有一定的保护作用,其机制可能与降低内皮素1水平和增加NO和PGE2生成有关。     

针对Toll样受体4基因的小发夹结构RNA对RAW264.7细胞炎症因子分泌的抑制作用

目的构建针对Toll样受体(TLR)4 mRNA的小发夹结构RNA(shRNA)真核表达载体pEGFP-siRNA/TLR4,检测该shRNA诱导的RNA干扰(RNAi)对脂多糖刺激RAW264.7细胞分泌炎症因子的抑制作用,以探讨针对TLR4基因的RNAi对RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用.方法构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)及shRNA克隆位点的质粒pEGFP-H1/siRNA,运用网络工具siRNA Wizard(http//www.simawizard.com/)设计针对TLR4 mRNA的寡核苷酸片段.将其克隆入pEGFP-H1/siRNA,构建表达EGFP及TLR4-shRNA的真核表达质粒pEGFP-H1/TLR4-siRNA.运用脂质体转染技术将pEGFP-H1/TLR4-siRNA转染至培养的小鼠巨噬细胞系RAW264.7,观察细胞系中荧光蛋白的表达强度;再运用脂多糖刺激转染的RAW264.7细胞,运用ELISA方法检测该细胞系分泌炎症因子水平的变化.结果质粒pEGFP-H1/siRNA及pEGFP-H1/TLR4-siRNA分别用Bbs Ⅰ和MluⅠ酶切电泳后,前者出现4.9 kb和340 bp的的条带,后者出现5.0 kb和220 bp的条带,与实验设计的质粒长度一致,且测序证实克隆序列正确.将pEGFP-H1/TLR4-siRNA转染至RAW264.7细胞后,EGFP的表达率为50%±8%.用脂多糖刺激后,TLR4-SiRNA转染组细胞培养液TNF-α水平(2 h825 pg/ml±136 pg/ml;8 h2190 pg/ml±359 pg/ml)明显低于对照siRNA转染组(2 h1179 pg/ml±240 pg/ml;8 h4720 pg/ml±227 pg/ml,均P＜0.01).结论针对TLR4 mRNA的shRNA可能通过RNAi机制对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子的分泌有明显的抑制作用.     

心脏瓣膜置换术病人体外循环期间血浆内皮素、房钠利尿多肽和血流动力学变化

目的 了解体外循环（CPB）期间血浆内皮素（ET）、房钠利尿多肽（ANP）与血流动力学指标变化及其相互之间的关系。方法 用放射免疫法测定16例心脏瓣膜置换手术病人的术前及CPB期间血浆内皮素、房钠利尿多肽水平。结果 诱导前血浆ET为（2.68±1.8）pg/ml，与对照组[（2.22±0.7）pg/ml]相比无显著差异（P>0.05），而血浆ANP为（738±559）pg/ml，明显高于对照组[（72.7±14.5）pg/ml，P<0.001]。CPB期间血浆ET无明显变化，而血浆ANP在体外循环初期明显下降，停CPB时恢复至CPB前水平。CPB期间及停CPB时SVRI明显降低，血球压积（Hct）与血管阻力指数（SVRI）关系密切。结论 CPB期间血浆ET无明显变化，而血浆ANP下降为血液稀释所致，SVRI降低主要在于血液稀释。     

融合快速培养的树突细胞体外诱导特异性抗肝癌免疫反应

目的用培养健康志愿者外周血CD14+单核细胞获得的成熟树突细胞与肝癌细胞系HCCLM3细胞构建融合细胞,在体外观察和评价这类融合细胞的功能。方法从HLA-A2阳性的健康人外周血中分离出CD14+细胞,在树突细胞完全培养基中经过48h培养及促成熟获得成熟的树突细胞(称之为FastDC)。以50%聚乙二醇和10%二甲基亚砜为融合剂融合树突细胞与肝癌细胞系HCCLM3细胞,细胞融合成功后进行融合细胞刺激自体T细胞增殖及CD8+T细胞特异性杀伤实验,并与树突细胞组、HCCLM3组及树突细胞和HCCLM3混合组进行比较。结果用48h培养获得的树突细胞与肝癌细胞系HCCLM3细胞所构建的融合细胞能有效刺激自体T细胞的增殖反应,所活化的CD8+T细胞分泌IFN-γ的水平(3d为400pg/ml±60pg/ml,5d为1030pg/ml±160pg/ml,7d为1260pg/L±180pg/L)高于其他组,而且能以MHC-Ⅰ类分子途径特异性杀伤HCCLM3细胞。结论从外周血CD14+细胞48h培养所获树突细胞与肝癌细胞系HCCLM3细胞构建的融合细胞体外能有效诱导特异性杀伤HCCLM3细胞的免疫反应。     

Plasma atrial natriuretic peptide levels and their clinical importance in infant with pneumonia associated with congestive heart failure

Plasma atrial natriuretic peptide (ANP) Levels were measured by radioimmunoassay both in 38 infants with pneumonia and 20 infants with pneumonia associated with congestive heart failure (CHF). 10 of the 20 infants with CHF were examined with echocardiography during CHF and recovery period. The plasma ANP Levels in the pneumonia group was 424.3 +/- 214.4 pg/ml (mean +/- SD). Which was significantly higher than that of the control group (P less than 0.01). The plasma ANP levels in pneumonia with CHF group was 684.4 +/- 366.9 pg/ml, which was significantly higher than that in the group of pneumonia without CHF (P less than 0.01). Positive linear correlation was found between the mean pulmonary artery pressure and plasma ANP content (r = 0.717, P less than 0.05). The results of this study suggest that plasma ANP concentration may give useful information on the indication of using vasodilators in infant with pneumonia. It may also be taken as a practical diagnostic indicator in pneumonia associated with CHF.     

高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放细胞因子的作用及其与脂多糖对白细胞介素6释放的协同效应

目的观察高迁移率族蛋白1(HMGB1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)释放细胞因子的影响及其对脂多糖(LPS)诱导细胞因子白细胞介素6(IL-6)表达的作用。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测重组HMGB1蛋白(15ng/ml)诱导HUVEC11种细胞因子/趋化因子的水平变化;检测不同浓度HMGB1(0~75ng/ml)刺激后不同时间点(0、1、3、6、12和24h)HUVEC分泌IL-6的水平以及HMGB1(15ng/ml)与LPS(10ng/ml)共同刺激对HUVEC分泌IL-6的影响。结果HMGB1刺激后HUVEC分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干扰素γ(IFN-γ)、IL-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平明显升高(均P<0.01),分别是对照(未加刺激)的5.7、4.2、27.8、12.8和5.4倍;HMGB1蛋白以时间和剂量依赖方式诱导IL-6的分泌,在刺激后3~6h,IL-6水平开始增加,在6h时IL-6由对照的32pg/ml±21pg/ml增加到75pg/ml±22pg/ml(P<0.01),12h(453pg/ml±78pg/ml)~24h(901pg/ml±184pg/ml)持续升高(P<0.01);随着HMGB1浓度的增加,IL-6的水平也明显增加,当HMGB1浓度为3、15、75ng/ml时,IL-6分别是155pg/ml±33pg/ml、901pg/ml±184pg/ml、1508pg/ml±378pg/ml,与基础值32pg/ml±21pg/ml相比,差异有统计学意义(P<0.01)。分别用LPS(10ng/ml)和HMGB1(15ng/ml)单独刺激HUVEC时,IL-6的含量从基础的32pg/ml±22pg/ml分别增加至289pg/ml±42pg/ml和901pg/ml±184pg/ml(均P<0.01);如果用二者共同刺激HUVEC,IL-6的生成量大大增加(2361pg/ml±299pg/ml),二者存在协同作用(F=69.405,P<0.01)。结论HMGB1蛋白可诱导HUVEC释放多种炎性细胞因子;HMGB1诱导IL-6的上调具有时效性和量效性关系,并可协同LPS刺激HUVEC释放IL-6,在脓毒症的发生和发展中起重要作用。     

Atrial natriuretic peptide attenuates inflammatory responses on oleic acid-induced acute lung injury model in rats

Background  An inflammatory response leading to organ dysfunction and failure continues to be a major problem after injury in many clinical conditions such as sepsis, severe burns, and trauma. It is increasingly recognized that atrial natriuretic peptide (ANP) possesses a broad range of biological activities, including effects on endothelial function and inflammation. A recent study has revealed that ANP exerts anti-inflammatory effects. In this study we tested the effects of human ANP (hANP) on lung injury in a model of oleic acid (OA)-induced acute lung injury (ALI) in rats.

Methods  Rats were randomly assigned to three groups (n=6 in each group). Rats in the control group received a 0.9% solution of NaCl (1 ml∙kg^-1∙h^-1) by continuous intravenous infusion, after 30 minutes a 0.9% solution of NaCl (1 ml/kg) was injected intravenously, and then the 0.9% NaCl infusion was restarted. Rats in the ALI group received a 0.9% NaCl solution (1 ml∙kg^-1∙h^-1) intravenous infusion, after 30 minutes OA was injected intravenously (0.1 ml/kg), and then the 0.9% NaCl infusion was restarted. Rats in the hANP-treated ALI group received a hANP (0.1 µg∙kg^-1∙min^-1) infusion, after 30 minutes OA was injected intravenously (0.1 ml/kg), and then the hANP infusion was restarted. The anti-inflammation effects of hANP were evaluated by histological examination and determination of serum cytokine levels.

Results  Serum interleukin (IL)-1β, IL-6, IL-10 and tumor necrosis factor (TNF) α were increased in the ALI group at six hours. The levels of all factors were significantly lower in the hANP treated rats (P <0.005). Similarly, levels of IL-1β, IL-6, IL-10 and TNF-α were higher in the lung tissue in the ALI group at six hours. hANP treatment significantly reduced the levels of these factors in the lungs (P <0.005). Histological examination revealed marked reduction in interstitial congestion, edema, and inflammation.

Conclusion  hANP can attenuate inflammation in an OA-induced lung injury in rat model.

     

Her-2/neu小分子干扰RNA对肺腺癌细胞周期和凋亡机制的影响

目的研究人类表皮生长因子受体2(Her2/neu)小分子干扰RNA(siRNA)对Her2/neu过表达的肺腺癌细胞的细胞周期和凋亡机制的影响。方法用化学合成的靶向Her2/neusiRNA转染肺腺癌calu3细胞,转染前后通过逆转录聚合酶链反应(RTPCR)测定细胞中Her2/neu、细胞周期蛋白(Cyclin)D1mRNA水平;流式细胞术检测Her2/neu蛋白水平和细胞周期的变化;AnnexinⅤ异硫氢酸荧光素(FITC)试剂盒检测肺癌细胞的凋亡情况;荧光分光光度法测定Caspase3活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测培养液上清中血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果Her2/neusiRNA能在mRNA和蛋白水平下调肺癌细胞株calu3中Her2/neu基因的表达。calu3细胞转染Her2/neusiRNA48h后处于G0/G1期的细胞增多,同时S期的细胞比例减少,与未转染对照组、空载体组和非特异性siRNA组比较差异有统计学意义(F=6.1,P<0.01)。转染Her2/neusiRNA后CyclinD1mRNA水平下降,同时培养上清液中的VEGF含量为176pg/ml±6pg/ml(F=24.7,P<0.01),Caspase3活性为135%±4%(F=8.9,P<0.01),细胞凋亡率为25.1%±1.2%(F=10.3,P<0.01)。结论化学合成的靶向Her2/neusiRNA能够下调Her2/neu基因表达,继而降低CyclinD1和VEGF水平,激活Caspase3途径,从而阻滞细胞周期于G0/G1期和诱导凋亡。