眼底血管变化与RA调节系统的关系(附110例)

肾素——血管紧张素系统简称R(Renin)A(Angiotensin)调节系统.是属于内分泌范畴,维持人体正常血压、血管收缩、水盐代谢的重要环节.肾素是由肾小球旁器的颗粒细胞(G细胞)产生一种蛋白水解酶,这种颗粒细胞是一种特殊分化的平滑肌细胞.颗粒细胞中的颗粒数目与肾素分泌有平行关系,已通过化学染色方法证实.1972年Brunner和Laragh等人在血浆肾素活性(PRA)测定的基础上,根据肾素水平的高低进行了高血压病的分型和诊断.我国1977年开展PRA,血管紧张素Ⅱ(AT_Ⅱ)放射免疫测定并应用于临床和科研.但眼科尚未见报导.1980年为研究眼底血管变化与RA调节系统的关系,我们作了110例PRA、AT_Ⅱ的测定,其结果分析如下:     

UGTIA1 G71R基因突变对母乳性黄疸发病的影响

目的 探讨葡萄糖醛酸转移酶UGT1A1 G71R基因突变对母乳性黄疸发病的影响.方法 采用病例对照研究方法,收集母乳性黄疸56例（黄疸组）和对照40例（对照组）.用套式PCR后限制性片段长度多态性分析（RFLP）确定UGT1A1 G71R基因型.通过全自动生化分析仪测定胆红素水平.分析 UGT1A1 G71R突变与母乳性黄疸发病的关系.结果 黄疽组中,UGT1 A1 GT1R突变纯合子5例、杂合子24例、野生型27例,UGT1A1 G71R等位基因频率为30.36%.对照组中,UGT1A1 G71R突变纯合子1例、杂合子9例、野生型30例,UGT1A1 G71R等位基因频率为13.75%.等位基因频率前者明显高于后者,且有统计学意义（X2=7.17,P=0.01）.UGT1A1 G71R突变纯合子或杂合子组婴儿发生母乳性黄疸的OR（95%CI）为3.2（1.32,7.77）.结论 UGT1A1 G71R基因突变可能是晚发性母乳性黄疸发病的促发因素之一.     

沙林及梭曼在试管内的酶促合成

沙林及梭曼的水解产物在G类毒剂水解酶催化下有外加胆碱酯酶存在时,可以生成相应的毒剂,表现为对外加胆碱酯酶活性的深度抑制。G类毒剂水解酶不能催化V类毒剂的合成。     

梭曼的酶促合成

G类有机磷毒剂在水分子的参予下可以自发地水解,1摩尔毒剂生成1摩尔有机酸和1摩尔无机酸。G类毒剂水解酶是一类族专一性生物催化剂,可以大大加速上述反应。根据催化理论,酶可以同时催化正向及逆向两种反应的进行。本实验观察了G类毒剂水解酶存在条件下,梭曼水解产物在试管内合成梭曼的可能性及程度。这一合成的证实在理论上及梭曼中毒防治中都有一定的价值。材料与方法一、G类毒剂水解酶制品家兔经颈动脉放血,每ml全血加0.1mlACD溶液或10％柠檬酸钠抗凝。离心取血浆,-20℃冻结后在室温融化,如此反复3次,以破坏可能存在的V类毒剂氧化酶。而     

RET原癌基因C634R突变合并G691S、R982C多态性致多发内分泌腺瘤病2A型的家系研究并文献复习

目的 对一个多发内分泌腺瘤病2A型(MEN2A)家系患者的临床特点及RET原癌基因突变情况进行分析.方法 收集先证者及其家系成员相关临床资料,提取1名先证者及10名家系成员的外周血基因组DNA,对RET基因所有外显子进行PCR扩增,对扩增产物进行测序分析.结果 家系中3位已发病患者的临床表现不同,但其RET原癌基因均同时存在3个错义突变,分别是位于11号外显子的C634R、G691S和位于18号外显子的R982C,而家系中其他成员则不存在上述突变.结论 当C634R与G691S、R982C多态性同时存在时,临床上主要表现为与单纯C634R突变一致的PET蛋白功能异常激活性疾病.     

Cloning of bile salt hydrolase in Bifidobacterium longum NCC2705 and description of its characteristics

目的 克隆并过表达胆盐水解酶基因,研究胆盐水解酶对菌体胆盐耐受性和胆固醇降解率的影响等特性.方法 采用常规原核表达方法在大肠杆菌BL21(DE3)和长双歧杆菌NCC2705中过表达胆盐水解酶基因,并进行长双歧杆菌NCC2705和pMgap-bsh/NCC2705的胆盐耐受性和降胆固醇实验.结果 在大肠杆菌中成功表达了NCC2705的胆盐水解酶基因,经纯化的GST空标签和GST融合蛋白的SDS-PAGE电泳结果显示,胆盐水解酶的相对分子质量约为35×103;构建的过表达bah的菌株pMgap-bsh/NCC2705比标准菌株NCC2705表现出了略高的胆盐耐受性和胆固醇降解率.结论 所构建的高效表达胆盐水解酶菌株可能有利于提高菌体的胆盐耐受性和降胆固醇能力,益生菌的降胆固醇途径不是单一的,培养基中是否含有胆盐对胆固醇的降解率影响较大.     

含有海肾萤光素酶报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子的构建

目的:构建含有海肾萤光素酶(Renilla luciferase, R.luc)报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子,为探讨病毒基因组中保守序列和元件在复制和翻译调控机制中的作用提供新的手段.方法:利用定点诱变PCR技术构建prM-E基因缺失的登革4型病毒亚基因组复制子(DENRP),用顺式水解酶元件(cis-acting hydrolase element,CHYSEL)技术将R.luc报告基因插入到DENRP缺失的结构基因区,构建含有R.luc报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP).将构建的复制子线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光、RT-PCR和R.luc检测技术对复制子进行鉴定.结果:所构建的prM-E基因缺失的复制子和含有海肾萤光素酶报告基因的复制子,均可在BHK-21细胞中自主复制并稳定表达病毒特异蛋白.DEN-R.luc2A-RP可持续表达外源R.luc报告基因21 d,在转染后24~96 h R.luc荧光信号呈线性增强.在该区间进行实时检测可显示复制子复制和翻译水平的变化.结论:获得了两株可在BHK-21细胞中稳定表达的复制子,为进一步研究登革4型病毒复制和翻译机制奠定了基础.     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体基因对肝细胞癌生物学行为的影响

目的研究胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-ⅠR)对肝细胞癌生物学行为的影响. 方法应用免疫组化SP法检测肝细胞癌、癌旁和正常肝组织IGF-ⅠR的表达.构建IGF-ⅠR正、反义基因真核表达载体,经脂质体介导转入SMMC-7721肝癌细胞株,观测IGF-ⅠR正、反义基因对肝癌细胞生物学行为的影响. 结果 (1)在肝癌组织中IGF-ⅠR呈过度表达(90.3%),以膜、胞浆混合型表达为主,显著高于正常肝组织.肝癌多发结节组高于单发结节组(P<0.05).(2)IGF-ⅠR反义基因能明显下调内源性IGF-ⅠR的表达,与7721细胞、正义细胞有显著性差异(P<0.01).(3)电镜下反义细胞内可见微腺腔、灶性坏死、髓鞘样结构.4反义细胞G0/G1期明显增加(63.9%),S期减少(19.3%),细胞凋亡增加(5.89%),与7721细胞、正义细胞有显著性差异(P<0.01).5.反义细胞不能在软琼脂中生长. 结论 (1)IGF-ⅠR高表达与肝癌的发生及侵袭性行为有密切关系.(2)IGF-ⅠR反义基因下调7721细胞内源性IGF-ⅠR的表达,对肝癌细胞的增殖有明显抑制作用.     

胰岛素样生长因子I型受体基因对肝细胞癌生物学行为的影响

目的　研究胰岛素样生长因子 型受体 (IGF- R)对肝细胞癌生物学行为的影响。　方法　应用免疫组化 SP法检测肝细胞癌、癌旁和正常肝组织 IGF- R的表达。构建 IGF- R正、反义基因真核表达载体 ,经脂质体介导转入 SMMC- 772 1肝癌细胞株 ,观测 IGF- R正、反义基因对肝癌细胞生物学行为的影响。　结果　 (1)在肝癌组织中 IGF- R呈过度表达(90 .3% ) ,以膜、胞浆混合型表达为主 ,显著高于正常肝组织。肝癌多发结节组高于单发结节组 (P<0 .0 5 )。 (2 ) IGF- R反义基因能明显下调内源性 IGF- R的表达 ,与 772 1细胞、正义细胞有显著性差异 (P<0 .0 1)。 (3)电镜下反义细胞内可见微腺腔、灶性坏死、髓鞘样结构。 4反义细胞 G0 /G1期明显增加 (6 3.9% ) ,S期减少 (19.3% ) ,细胞凋亡增加 (5 .89% ) ,与 772 1细胞、正义细胞有显著性差异 (P<0 .0 1)。 5 .反义细胞不能在软琼脂中生长。　结论　 (1) IGF- R高表达与肝癌的发生及侵袭性行为有密切关系。 (2 ) IGF- R反义基因下调 772 1细胞内源性 IGF- R的表达 ,对肝癌细胞的增殖有明显抑制作用。     

白癜风患者黑素刺激素受体1单核苷酸多念性分析

目的 检测白癜风患者黑素刺激素受体1(MC1R)基因编码区的单核苷酸多态性(SNP),探讨其在白癜风发病中的作用.方法 选取40例寻常型白癜风患者作为白癜风组,38例健康体检者为对照组,另取NCBI数据库最新公布的亚洲人群(包括85例正常亚洲人)MC1R的单核苷酸多态性数据作为文献组.提取白癜风组和对照组血细胞基因组,PCR扩增MC1R基因,用直接测序法检测PCR产物.采用X~2检验分析比较三组间MC1R基因SNP的发生、分布及频率差异.结果 白癜风组和对照组MC1R基因共发现5个SNP化点,分别为G274A(Va192Met)、T359C(His120His)、G488A(Gln163Arg)、C491A(Ala164GIn)、A942G(Thr312Thr),其中多态性较高的两个位点是G274A(Va192Met)和G488A(Gln163Arg);白癜风组Va192Met位点和Gln163Arg位点的多态性频率分别为26.25%和81.25%,对照组分别为22.37 0A和57.89%.Gln163Arg多态性在白癜风组与对照组间有显著差异(X~2=9.966,P<0.01),在白癜风组与文献组之间亦有显著差异(X~2=6.214,P<0.05),而对照组与文献组间均无显著差异(P>0.05).Va192Met位点多态性在三组间无显著性差异(P>0.05).新发现了一个变异位点C491A(Ala164Gln).结论 Gln163Arg的多态性可能与白癜风发病有关,Va192Met与白癜风发病无明显相关性.     

上调mir-7表达后肺腺癌细胞对吉非替尼敏感性的变化及其机制研究

目的 观察上调人肺腺癌A549细胞中mir-7的表达水平后,细胞对吉非替尼敏感性的变化及其可能机制.方法 取对数生长期A549细胞,随机分为对照组(NC组)、转染组(mir-7组)、吉非替尼组(吉非替尼处理细胞,G组)、联合组(转染mir-7后用吉非替尼处理细胞,G+mir-7组).MTT法检测吉非替尼对A549细胞的半数抑制浓度(IC50),Realtime PCR及Western blotting检测表皮生长因子受体(EGFR)、胰岛素样生长因子受体1(IGF-1R)、Raf1、细胞外信号调节激酶(ERK)的mRNA和蛋白表达水平.结果 G+mir-7组吉非替尼对A549细胞的IC50(8.57±0.61μmol/L)明显低于G组(15.63±0.82μmol/L,P＜0.01).Real-time PCR及Western blotting检测结果显示,G+mir-7组EGFR、IGF-1R、Rafl、ERK的mRNA及蛋白表达水平明显低于mir-7组、G组和NC组(P＜0.05).结论 上调mir-7表达可增加肺腺癌细胞对吉非替尼的敏感性,其机制可能与mir-7抑制EGFR及IGF-1R通路有关.     

西妥昔单抗对人食管癌放射抗拒性细胞株KYSE-150R放射敏感性的研究

Objective To determine the effect of cetuximab(C225)on the radioresistant human esophageal squamous carcinoma eell line KYSE-150R.Methods A radioresistant human esophageal squamous carcinoma cell line KYSE-150R was established by fractionated irradiation.Morphological changes from KYSE-150 to KYSE-150R were observed by phase-contrast microscopy.Karyotype analysis was performed by G-banding.The radiosensitivities were analyzed by colony formation assays.Results The population doubling time of KYSE-150 and KYSE-150R were(23.6±0.2)h and(25.9±0.6)h (t=6.6,P<0.01),respectively.The chromosome number of KYSE-150R was increased and chromosome aberrations were observed from(69.3±1.9)h to(73.7±1.2)h(t=-8.83,P<0.01).The SF2,D0,Dq and N values of KYSE-150R were all higher than those of KYSE-150.After 5μg/ml of C225 added,the SF2,D0,Dq and N values were significantly decreased as compared to the control.After C225 treatment,the G0/G1 and G2/M phase cells were increased,while S-phase cells decreased(t=-4.478-4.308,P<0.05).Conclusion Cetuximab can enhance the radiosensitivity of radioresistant human esophageal squamous carcinoma cell line KYSE-150R.     

西妥昔单抗对人食管癌放射抗拒性细胞株KYSE-150R放射敏感性的研究

Objective To determine the effect of cetuximab(C225)on the radioresistant human esophageal squamous carcinoma eell line KYSE-150R.Methods A radioresistant human esophageal squamous carcinoma cell line KYSE-150R was established by fractionated irradiation.Morphological changes from KYSE-150 to KYSE-150R were observed by phase-contrast microscopy.Karyotype analysis was performed by G-banding.The radiosensitivities were analyzed by colony formation assays.Results The population doubling time of KYSE-150 and KYSE-150R were(23.6±0.2)h and(25.9±0.6)h (t=6.6,P<0.01),respectively.The chromosome number of KYSE-150R was increased and chromosome aberrations were observed from(69.3±1.9)h to(73.7±1.2)h(t=-8.83,P<0.01).The SF2,D0,Dq and N values of KYSE-150R were all higher than those of KYSE-150.After 5μg/ml of C225 added,the SF2,D0,Dq and N values were significantly decreased as compared to the control.After C225 treatment,the G0/G1 and G2/M phase cells were increased,while S-phase cells decreased(t=-4.478-4.308,P<0.05).Conclusion Cetuximab can enhance the radiosensitivity of radioresistant human esophageal squamous carcinoma cell line KYSE-150R.     

胶原网状系统的完整性对以钆为基础的磁共振对比剂在关节软骨上的积聚的影响

目的：软骨的钆剂延时增强MR成像,已被用来定量评价早期骨关节炎的蛋白多糖的丢失。假定在注射Gd-DTPA后接近平衡状态时的T1WI可以反映软骨中选择性的蛋白多糖的减少。建立一个很好的骨性关节炎的模型,在注射对比剂后,通过对比驰豫率ΔR1和ΔR2来调查胶原网状系统完整性对对比剂在软骨上积聚的影响。方法：在健康的牛的膝盖软骨上通过使用蛋白水解酶、木瓜酶和胶原蛋白酶来诱导胶原或蛋白多糖的缺失。使用专一的MRI序列,T1和T2maps在注射Gd-DT-PA前或者是11h后同时获得。计算健康的和胶原或蛋白多糖的缺失的关节软骨的ΔR1和ΔR2的值,软骨的不同层次的平均值使用曼-惠特尼U检验。     

九个苯丙氨酸羟化酶基因单点突变重组质粒的构建和鉴定

目的构建Y154H、R157I、Y206C、G247R、D282G、G346R、S349A、A389G、R400K9个PAH基因突变型重组质粒,为下一步研究这些PAH突变体在哺乳动物细胞中表达蛋白功能奠定基础。方法①选择错义突变位点。结合突变位点所在酶蛋白的结构域(如催化结构域或与辅因子BH4结合位点)及患儿相关临床表型进行了9个突变位点的选择。②构建PAH基因突变型重组质粒。以野生型PAH真核表达载体pcDNA3.0-PAH-wt为模板,应用PrimerPremier5.0软件自行设计了9对突变引物,并在Platin-iumTaqDNA高保真聚合酶的作用下直接利用体外PCR定点突变法构建PAH基因突变型重组质粒。③初筛PAH基因突变型重组质粒。氨苄抗性初步筛选:利用重组基因含氨苄青霉素抗性基因的特点,可筛选出阳性克隆;PCR及酶切技术筛选:根据野生型与突变型靶序列酶切片段的差异进行筛选,其中S349A、D282G、G247R、Y206C、Y154H这5种突变存在MvaⅠ、MvaⅠ、HindⅢ、RsaⅠ、RsaⅠ的天然酶切位点,而R157I、G346R、A389G、R400K与其相应的野生型所在位点周围并不存在天然的酶切位点,需要在目的位点的上/下游设计引物,即人工构建DdeⅠ、HindⅢ、PstⅠ、MvaⅠ酶切位点,然后利用上述限制性内切酶进行突变体的酶切鉴定。④验证PAH基因突变型重组质粒,突变体最终由DNA测序加以验证。结果这9个突变型PAHcDNA序列除特定碱基位点被突变的碱基替换外,其他序列和野生型的完全保持一致。结论成功构建了9个PAH基因突变型重组质粒。体外定点突变技术准确、实用。     

血管紧张素Ⅱ2型受体重组腺病毒的扩增及其在INS－1细胞中的转染

目的：利用人胚肾（HEK）293A细胞株扩增含有大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体（AT2R）基因的重组腺病毒,并在大鼠胰岛素瘤细胞INS－1细胞株中进行转染,构建AT2R高表达的胰岛β细胞模型。方法利用293A细胞株扩增重组腺病毒Ad－G－AT2R－EGFP和对照病毒Ad－CMV－EGFP,并测定病毒滴度。在INS－1细胞中瞬时转染后利用实时PCR、Western 印迹以及免疫荧光和激光共聚焦技术检测细胞中AT2R与AT1R的表达。结果扩增后得到重组腺病毒Ad－G－AT2R－EGFP和Ad－CMV－EGFP的滴度分别为9×109和8×109 pfu／ml。在INS－1细胞中转染Ad－G－AT2R－EGFP后,AT2R mRNA的表达随病毒感染复数（multiplicity of infection,MOI）值的增加呈剂量依赖性增加。当MOI值为10时,AT2R mRNA的表达达到峰值（P＜0．05）,同时AT2R蛋白的表达明显高于转染了Ad－CMV－EG－FP的细胞和未转染细胞,但AT1R的表达无显著变化。结论成功扩增并得到高滴度且携带有AT2R基因的重组腺病毒载体,并将其转染入INS－1细胞中构建出AT2R高表达的胰岛β细胞模型,为下一步探讨AT2R在胰岛β细胞中的作用奠定了基础。     

植物中水解酶Ch分布及农药对其活力的影响

作者在1976年发现所有植物各部位中均含有可能是一种水解酶(暂定名为水解酶Ch),它能水解2,6-二氯乙酰靛酚,使水溶液由浅黄色变为深蓝色.酶活力能被有机磷农药抑制,但不能水解溴化乙酰胆硷.本文研究了水解酶Ch在植物各部位中的分布情况,发现酶活力大小顺序为;种子>茎>根;新根>旧根>败叶>叶,块根>通常根,即更多地存在于植物生命力旺盛的部位,它可能在植物生理学方面起重要作用.     

长双歧杆菌NCC2705中胆盐水解酶基因的克隆表达及其特性的研究

目的克隆并过表达胆盐水解酶基因,研究胆盐水解酶对茵体胆盐耐受性和胆固醇降解率的影响等特性。方法采用常规原核表达方法在大肠杆菌BL21（DE3）和长双歧杆菌NCC2705中过表达胆盐水解酶基因,并进行长双歧杆菌NCC2705和pMgap—bsh／NCC2705的胆盐耐受性和降胆固醇实验。结果在大肠杆菌中成功表达了NCC2705的胆盐水解酶基因,经纯化的GST空标签和GST融合蛋白的SDS—PAGE电泳结果显示,胆盐水解酶的相对分子质量约为35×103;构建的过表达bsh的菌株pMgap—bsh／NCC2705比标准菌株NCC2705表现出了略高的胆盐耐受性和胆固醇降解率。结论所构建的高效表达胆盐水解酶菌株可能有利于提高茵体的胆盐耐受性和降胆固醇能力,益生菌的降胆固醇途径不是单一的,培养基中是否含有胆盐对胆固醇的降解率影响较大。     

Effect of restraint stress on rats′ immune system

目的 探讨束缚应激对大鼠免疫功能的影响.方法 大鼠随机分为4组:正常对照组(Ctr)、束缚1周组(R1)、束缚2周组(R2)和束缚4周组(R4).取大鼠血清用ELISA方法检测糖皮质激素(GC)、白介素-6(IL-6)和白介素-17(IL-17)水平,单向免疫扩散法检测免疫球蛋白G(IgG)水平.分离外周血中单核细胞,用吞噬中性红法检测大鼠单核巨噬细胞(Mo/Mφ)的吞噬能力.结果 束缚组大鼠GC、IL-6水平显著高于Ctr组,IL-17、IgG含量和外周血单核巨噬细胞吞噬能力显著低于Ctr组.结论 束缚应激可以使大鼠免疫功能显著降低.     

复制蛋白A在食管癌细胞株辐射抗性中的作用及其机制

目的 研究抑制复制蛋白A(RPA)基因表达对辐射抗性食管癌细胞株TE-1R辐射敏感性的影响,并探讨其潜在的作用机制.方法 以TE-1为亲代构建辐射抗性模型TE-1R细胞株,通过siRNA敲低TE-1R细胞株RPA1和RPA2基因表达,并以未转染(Con)组和无意序列(NC)组作对照,应用克隆形成实验绘制细胞存活曲线,采用流式细胞仪测定细胞周期,观察TE-1R细胞株的辐射敏感性变化.结果 siRNA转染48 h后,RPA1及RPA2蛋白表达较Con和NC组降低.与NC组比较,RPA1 siRNA转染组及RPA2 siRNA转染组细胞的D0、Dq、SF2值由2.09、1.70、0.85分别降至1.67、0.71、0.44及1.82、0.89、0.51,放射增敏比SERDq.分别为2.39和1.91.抑制RPA1或RPA2表达后可观察到G2/M期阻滞现象,与NC组比较,G2/M期细胞比例由(18.70±3.14)％增至(26.95±3.96)％及(25.28±2.74)％(t=2.83、2.85,P＜0.05).结论 通过抑制RPA1或RPA2表达,可以提高辐射抗性食管癌细胞株TE-1R的辐射敏感性.其潜在的作用机制可能是改变细胞周期分布,减少了受照射细胞亚致死损伤的修复.