野黄芩苷对人胎儿平滑肌细胞增殖的抑制作用

利用体外细胞培养技术 ,通过 MTT测定、细胞计数等方法 ,观察野黄芩苷对人胎儿平滑肌细胞的保护作用。结果表明 :野黄芩苷可呈浓度依赖性地抑制平滑肌细胞的增殖并可显著抑制高脂血清对平滑肌细胞 (SMC)的促增殖作用。提示 :野黄芩苷对动脉粥样硬化的防治可能具有一定的积极作用     

三七对高脂血清刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:考察三七对高脂血清刺激的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响,为评价三七的降血脂作用及其机制研究提供依据。方法:大鼠高脂血症模型给予不同剂量三七处理,2周后分离血清,分别以未处理组血清、各处理组血清刺激VSMC增殖,并采用MTT的测定A值,研究三七对高脂血清刺激的大鼠VSMC增殖的抑制作用。结果:与正常血清相比,高脂血清能显著促进VSMC的增殖(P<0.05),而含三七的高脂血清对VSMC增殖的促进作用与高脂血清相比其作用明显减弱(P<0.05)。结论:三七对高脂血清刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用,该法可为降脂药物体外研究提供借鉴。     

丹皮酚对动脉粥样硬化大鼠抗氧化作用研究

目的：研究丹皮酚对动脉粥样硬化（AS）大鼠的抗氧化作用。方法：用高脂饲料喂养和维生素D3腹腔注射的方法建立大鼠AS模型,然后分为正常组、模型组、阳性组（辛伐他汀10 mg/kg）、丹皮酚3个剂量组（20、10、5mg/kg）,每组10只。灌胃给药4周后各组取主动脉,在光镜下进行病变分级评分。取血清测定SOD活力和MDA含量。结果：丹皮酚能改善AS大鼠的主动脉病变,高剂量组与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较,丹皮酚各剂量组AS大鼠血清SOD活性显著升高（P＜0.01）,血清MDA含量降低（P＜0.05或P＜0.01）。结论：丹皮酚治疗AS作用可能与增强SOD活性、减少MDA含量、减轻氧自由基的损伤有关。     

丹皮酚对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响

目的探讨丹皮酚对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响。方法以氧化型低密度脂蛋白诱导RAW264.7巨噬细胞泡沫化为模型,油红O染色检测细胞内脂质,荧光探针Dil标记氧化低密度脂蛋白(oxidized low-densitylipoprotein,oxLDL)并结合高内涵筛选成像系统检测oxLDL摄取,实时荧光定量PCR检测CD36和清道夫受体A(scaven-ger receptor A,SR-A)表达。结果成功建立了RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞模型,经不同浓度丹皮酚作用后,细胞内脂质减少,oxLDL摄取下降,SR-A基因表达下降,但CD36基因表达无显著改变。结论丹皮酚可抑制RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞形成,其作用机制可能与下调SR-A表达有关。     

丹皮酚对动脉粥样硬化大鼠的防治作用及其机制

目的探讨丹皮酚对动脉粥样硬化大鼠的防治作用及其机制。方法 48只SD大鼠随机分成6组(正常对照组,模型组,辛伐他汀组,丹皮酚低、中、高剂量组),高脂饮食法制备动脉粥样硬化模型。实验8周后,测定全血黏度、血浆黏度等血液流变学指标;电镜下观察心肌组织超微结构;q RT-PCR法检测心肌组织粘附分子E-选择素m RNA的表达水平。结果与正常对照组比较,模型组的全血黏度、血浆黏度及红细胞压积均显著升高(P0.05,P0.01)。心肌粘附分子E-选择素m RNA的表达水平明显升高(P0.01)。与模型组比较,丹皮酚组能有效改善全血黏度(高切、低切),血浆黏度,红细胞压积多项血液流变学指标(P0.01),降低心肌粘附分子E-选择素m RNA的表达,使心肌细胞超微结构损伤程度减轻。结论丹皮酚可以干预大鼠动脉粥样硬化的形成,其作用机制可能与改善大鼠血液流变学异常及降低粘附分子的表达有关。     

丹皮酚对脂多糖诱导损伤的与平滑肌细胞共培养的大鼠血管内皮细胞黏附功能的影响

目的：观察脂多糖（LPS）诱导的与平滑肌细胞（SMC）共培养的内皮细胞（VEC）与大鼠单核细胞黏附功能的改变及丹皮酚（paeonal,Pae）的干预作用。方法：组织块预消化贴壁法原代培养大鼠血管内皮细胞和大鼠血管平滑肌细胞;采用Transwell小室建立VEC-SMC共培养模型;采用LPS诱导VEC的损伤;MTT法和LDH法检测VEC活力;ELISA法检测VEC分泌IL-1β和TNF-α的水平;免疫细胞化学法检测ICAM-1表达水平;孟加拉玫瑰红染色法检测VEC与单核细胞的黏附功能。结果：LPS诱导VEC损伤的质量浓度为100 μg·L^-1,时间为7 h;Pae（15,30,60 μmol·L^-1）对以上细胞模型作用24 h可有效抑制LPS诱导的VEC损伤,显著提高LPS导致的VEC存活率的下降;降低损伤VEC分泌IL-1β和TNF-α的水平,同时减少ICAM-1的表达;从而抑制LPS诱导的VEC与单核细胞的黏附。结论：Pae通过抑制IL-1β和TNF-α表达而保护VEC免受LPS的损伤,可以通过降低ICAM-1的表达水平达到抑制VEC与单核细胞的黏附的作用。     

丹皮酚对大鼠心肌缺血再灌注损伤的线粒体膜脂的保护作用

丹皮酚每天腹腔注射６０ｍｇ／ｋｇ，连续１５ｄ，每天２次，然后结扎大鼠左降技冠状动脉４５ｍｉｎ，解除结扎恢复血流灌注６０ｍｉｎ，复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。观察丹皮酚对心肌细胞线粒体膜胆固醇／磷的比值、膜Ｃａ＾＋＋－ＡＴＰ酶活性、膜脂流动性及心肌细胞游离脂肪酸的影响。结果丹皮酚能降低线粒体膜胆固醇／磷脂的比值，减少心肌细胞游离脂肪酸含量，改善Ｃａ＾＋＋－ＡＴＰ酶活性，改善和调节线粒体膜脂的流动性     

丹皮酚抑制培养主动脉平滑肌细胞的增殖及抗自由基作用

用结晶紫染色法及~3H—TdR参入法研究丹皮酚对培养兔主动脉SMC增殖的影响,结果表明,细胞生长第6天加入不同剂量的丹皮酚(10～160μg/ml)能显著抑制细胞增殖及DNA合成,量效关系明显。用黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶—鲁米诺(luminol)发光体系探讨丹皮酚的抗O_2自由基作用,结果显示丹皮酚能抑制细胞内_2自由基的产生。     

沙棘对高脂血清培养平滑肌细胞的保护作用

首次从亚细胞水平证实沙棘与维生素E相似,对高脂血清损伤的干滑肌细胞有如下的保护作用:1.降低细胞内脂质过氧化物含量;2.减轻细胞膜的损伤;3.保护细胞健康生长并促其增生。     

沙棘对高脂血清培养平滑肌细胞的保护作用

首次从亚细胞水平证实沙棘与维生素E相似,对高脂血清损伤的干滑肌细胞有如下的保护作用:1.降低细胞内脂质过氧化物含量;2.减轻细胞膜的损伤;3.保护细胞健康生长并促其增生。     

雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及作用机制。方法　体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,通过3 H -TdR掺入试验 ,观察雷公藤内酯醇对血清诱导的细胞增殖的影响 ;采用流式细胞技术 ,观察该药对细胞增殖周期的影响。结果　雷公藤内酯醇在 (0 .5～ 4 )× 10 -5g/L的浓度范围内 ,以一种剂量依赖性的方式抑制了血清诱导的VSMC增殖 ;雷公藤内酯醇可显著增加细胞周期中G0 /G1期细胞百分含量 ,减少S期细胞的百分含量 ,阻断细胞由G0 /G1期向DNA合成的S期转化 ,作用呈剂量依赖性。结论　雷公藤内酯醇可能通过影响细胞周期的转化而抑制VSMC的增殖。     

一氧化氮对培养的兔动脉平滑肌细胞c-fos及c-jun基因表达的影响

目的：研究一氧化氮对动脉平滑肌细胞ｃｆｏｓ及ｃｊｕｎ基因表达的影响及其机制。方法：①用贴块法培养兔动脉平滑肌细胞。②细胞计数判定一氧化氮,ＦｅＳＯ４,亚甲蓝有无细胞毒作用。③用异硫氰酸胍一步法提取ＲＮＡ。④用地高辛标记检测试剂盒进行ＲＮＡＤＮＡ斑点杂交。结果：在没有细胞毒作用的前提下,一氧化氮明显抑制兔动脉平滑肌细胞的ｃｆｏｓ及ｃｊｕｎ基因表达,而ＦｅＳＯ４和亚甲蓝均对抗这种作用。结论：一氧化氮通过ｃＧＭＰ途径抑制动脉平滑肌细胞ｃｆｏｓ及ｃｊｕｎ基因表达,很可能是它抑制动脉平滑肌细胞增殖的重要机制之一。     

一氧化氮对培养的兔动脉平滑肌细胞c-fos及c-jun基因表达的影响

 目的:研究一氧化氮对动脉平滑肌细胞c-fos及c-jun基因表达的影响及其机制。方法:①用贴块法培养兔动脉平滑肌细胞。②细胞计数判定一氧化氮,FeSO₄,亚甲蓝有无细胞毒作用。③用异硫氰酸胍一步法提取RNA。④用地高辛标记 检测试剂盒进行RNA-DNA斑点杂交。结果:在没有细胞毒作用的前提下,一氧化氮明显抑制兔动脉平滑肌细胞的c-fos及c-jun基因表达,而FeSO₄和亚甲蓝均对抗这种作用。结论:一氧化氮通过cGMP途径抑制动脉平滑肌细胞c-fos及c-jun基因表达,很可能是它抑制动脉平滑肌细胞增殖的重要机制之一。     

Inhibitory effects of emodin on the proliferation of cultured rat vascular smooth muscle cell-induced by angiotensin II

Rhubarb, used as a traditional Chinese medicine for centuries, offers therapeutic potential for cardiovascular and other diseases. Emodin, extracted from the root extract of rhubarb has sparked increasing interest for therapeutic application. The main objective was to study the effect of emodin on cultured vascular smooth muscle cells (VSMCs) proliferation induced by angiotensin II (Ang II) and the expression of proto-oncogene c-myc. VSMCs were cultured by the explant method, then incubated for 24, 48 and 72 h with emodin (10-80 microm) and Ang II, or were left untreated (control). Cell proliferation was measured by MTT assay and immunohistochemical staining for proliferating cell nuclear antigen (PCNA), respectively. The expression of c-myc was measured by immunohistochemical staining and image analysis technique. Ang II increased the cell proliferation compared with the control group (p < 0.01). The expression of PCNA and c-myc was increased compared with the control group (p < 0.01). After pretreatment with emodin, the above indexes were obviously reduced compared with the Ang II group (p < 0.01). These findings suggested that emodin inhibited VSMCs proliferation induced by Ang II. Inhibition of the expression of c-myc might be correlated with the inhibitory effects.     

川芎嗪抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的研究川芎嗪对大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖和凋亡的影响。方法采用改良组织块和胰酶消化联合培养原代ASMCs,以血小板源生长因子(PDGF)诱导ASMCs增殖建立模型。采用MTT法检测不同浓度川芎嗪作用不同时间对ASMCs增殖的抑制,Hoechst33342染色检测细胞凋亡,Western blot检测ERK1/2蛋白表达情况。结果 MTT检测川芎嗪处理(6,12,24,36和48 h)后,与对照组比较,12.5μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组和100μmol/L组的细胞平均抑制率均显著增加(P均<0.05)。Hoechst 33342染色观察到50μmol/L组、100μmol/L组和200μmol/L组川芎嗪中强荧光细胞比例随川芎嗪剂量增大而增多,细胞核内多个不均一蓝染现象。川芎嗪(200μmol/L组)和PDGF(20 pg/L)共同处理后,随作用时间增加,ERK1/2蛋白表达水平显著降低。结论川芎嗪对ASMCs增殖有抑制作用,同时高浓度的川芎嗪可促进ASMCs凋亡,可能与下调ERK1/2的表达有关。     

Effects of Panax notoginseng saponins on proliferation and apoptosis of vascular smooth muscle cells

Aim of the study

Atherosclerosis is a common cardiovascular disease, and linked with the development of many cardiovascular complications, such as myocardial ischemia and stroke. Although pathogenesis of atherosclerosis is not completely elucidated, increasing evidence has demonstrated that abnormal proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) plays an important role in formation of atherosclerosis. Previous studies showed that saponins from Panax notoginseng (PNS) possess anti-atherosclerotic properties. However, the mechanism of PNS against atherosclerosis is not well understood. Therefore, the present study observed the effects of PNS on proliferation and apoptosis of VSMCs.

Materials and methods

Rat VSMCs were cultured, and platelet-derived growth factor (PDGF) was used to stimulate cell proliferation. The viability of VSMCs was assessed with the MTT method. VSMCs apoptosis was detected by flow cytometry. Expressions of apoptosis related protein p53, Bax, caspase-3 and Bcl-2 were determined using Western blot.

Results

Pretreatment of the cells with PNS (200, 400, 800 μg/mL) significantly inhibited proliferation of PDGF-stimulated VSMCs, and induced apoptosis of the proliferated VSMCs in a concentration-dependent way. Western blot analysis showed that PNS upregulated expressions of pro-apoptotic protein p53, Bax and caspase-3, downregulated expression of anti-apoptotic protein Bcl-2, and enlarged Bax/Bcl-2 ratio in the proliferated VSMCs induced by PDGF.

Conclusions

This study demonstrates that PNS both inhibits VSMCs proliferation and induces VSMCs apoptosis through upregulating p53, Bax, caspase-3 expressions and downregulating Bcl-2 expression, which constitute the pharmacological basis of its anti-atherosclerotic action.     

茶多酚对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨茶多酚对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法　体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,应用不同剂量的茶多酚作用 2 4 h后 ,采用 MTS/ PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,茶多酚对血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用 (P<0 .0 0 1)。流式细胞术检测结果表明 ,茶多酚可以使血管平滑肌细胞大部分处于 G0 / G1 期 ,与对照组相比有明显差异 (P<0 .0 5 ) ,并且可以诱导其凋亡。结论　茶多酚可明显抑制离体大鼠血管平滑肌细胞的增殖。