酒精对小鼠NIT-1细胞氧化损伤及凋亡的影响

目的　研究酒精能否诱导小鼠胰岛素瘤细胞(NIT -1)凋亡,初步探讨凋亡发生机制。方法　体外培养的小鼠NIT- 1细胞用不同浓度酒精处理后,采用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察酒精对小鼠NIT- 1细胞凋亡的影响;测定细胞丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH- Px ,GPX)的活性以判断细胞氧化程度;采用比色法测定Caspase 3酶活性。结果　酒精导致NIT 1细胞琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯状凋亡条带。与对照组比,剂量组MDA生成增多,SOD、GSH -Px活性下降,GSH含量下降。酒精作用后NIT 1细胞caspase- 3活性升高,升高程度与作用时间及剂量有关。结论　提示高浓度酒精可导致体外培养的小鼠NIT- 1胰岛β细胞氧化抗氧化失衡,氧化应激诱导细胞发生凋亡,凋亡的发生很可能与Caspase- 3激活有关。     

酒精对NIT-1细胞葡萄糖激酶基因表达的影响

目的观察酒精对NIT-1细胞葡萄糖刺激后胰岛素分泌功能及葡萄糖激酶(Glucokinase)基因表达的影响。方法体外培养NIT-1细胞，使用不同浓度的酒精(0，50，100，200，400mmol／L)作用不同时间后(6，12．24h)，用放射免疫法测定NIT-1细胞分泌胰岛素的量，用噻唑蓝(MTT)法检测NIT-1细胞代谢活性，用RT—PCR方法检测葡萄糖激酶基因mRNA的表达。结果酒精对NIT-1细胞代谢活性的抑制与酒精剂量和作用时间有关。酒精作用6h，NIT-1细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌增加；作用12，24h，葡萄糖刺激的胰岛素分泌降低。酒精作用6h．各剂量组葡萄糖激酶mRNA表达升高；酒精作用12，24h，各剂量组葡萄糖激酶mRNA表达均降低。结论酒精对NIT-1细胞葡萄糖刺激后胰岛素分泌及葡萄糖激酶mRNA表达的影响与作用时间、剂量有关。而葡萄糖激酶mRNA表达水平的改变可能是酒精影响NIT-1细胞胰岛素分泌的重要机制之一。     

酒精对大鼠胰岛素受体及底物-1基因表达影响

目的 研究慢性酒精摄入对雄性大鼠脂肪组织胰岛素受体(insulin receptor,IR)、胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)mRNA表达的影响,探讨酒精与胰岛素敏感性的关系及相关分子机制.方法 清洁级雄性Wistar大鼠40只,按体重随机分为对照组和低、中、高酒精剂量组,每天分别给予0,0.8,1.6和2.4g/(kg·bw)的酒精灌胃.第19周末,断头处死大鼠,测定空腹血糖和血胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).提取脂肪组织总RNA,通过半定量聚合酶链式反应方法测定IR、IRS-1mRNA表达水平.结果 与对照组相比,中、高剂量组空腹血糖(葡萄糖)浓度升高,差异有统计学意义(P<0.05);低、中剂量组胰岛素浓度升高,差异有统计学意义(P<0.05);各剂量组胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的升高差异均有统计学意义(P<0.05).低、中、高酒精剂量组IR、IRS-1mRNA表达水平分别为(0.588±0.039),(0.504±0.070);(2.678±0.031),(1.178±0.177);(0.761±0.137),(0.515±0.037).与对照组相比,各酒精剂量组IR、IRS-1mRNA表达水平均增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 慢性酒精摄入可以引起雄性大鼠胰岛素抵抗,酒精造成脂肪组织IR、IRS-1mRNA表达的改变可能是引起胰岛素抵抗的分子机制之一.     

乙醇对胰岛β细胞功能及胰岛素基因表达影响

目的 观察乙醇对原代培养的大鼠胰岛细胞及小鼠胰岛瘤细胞（NIT-1细胞）胰岛素分泌功能的影响并探讨其机制。方法 体外培养的大鼠胰岛细胞及NIT-1细胞，不同剂量乙醇作用不同时间后，用放免法测定胰岛素分泌情况，RT-PCR方法检测胰岛素mRNA的表达。结果 （1）乙醇对NIT-1细胞胰岛素分泌及胰岛素mRNA表达影响：作用6h，胰岛素分泌增加，各剂量组（除400mmol／L）胰岛素mRNA表达升高；作用12，24h，胰岛素分泌降低，胰岛素mRNA表达均降低。（2）乙醇对原代培养的大鼠胰岛细胞的胰岛素分泌及胰岛素mRNA表达影响：作用12h，低剂量组胰岛素分泌升高，胰岛素mRNA表达升高，高剂量组胰岛素分泌下降；胰岛素mRNA表达下降；随乙醇作用时间延长，胰岛素分泌先升高（6h），然后下降（24h），胰岛素mRNA表达短时间（6h）上升，作用24h表达下降。结论乙醇对胰岛β细胞胰岛素分泌及胰岛素mRNA表达的影响与作用时间、剂量有关，胰岛素mRNA表达水平的改变可能是乙醇影响胰岛β细胞胰岛素分泌的机制之一。     

长期酒精摄入对大鼠胰岛素分泌功能的影响

目的:研究长期酒精摄入对大鼠血糖、血清胰岛素及胰岛素基因表达影响。方法:清洁级Wistar大鼠80只,雌雄各半,随机分为对照组和低、中、高剂量组,摄入酒精剂量分别为0、0.8、1.6和2.4g/(kgbw?d)。给予酒精18w后,进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),第19w末,断头处死,测定空腹血糖和血胰岛素水平,计算Homa-β功能指数(HBCI)。提取胰腺总RNA,半定量RT-PCR测定胰岛素mRNA表达水平。结果:雌性大鼠高剂量组空腹血糖升高、空腹血清胰岛素下降,中、高剂量组HBCI及胰岛素基因表达均降低;雄性大鼠OGTT高剂量组0和1.5h血糖升高,空腹血糖高剂量组升高,低、中剂量组空腹血胰岛素升高,随着剂量增加,HBCI及胰岛素基因表达先升高后降低。结论:长期高剂量酒精摄入可导致胰岛素mRNA基因表达改变,胰岛β细胞功能受损。     

细胞色素P4502E1诱导和抑制对丙烯腈染毒小鼠急性毒性的影响研究

目的探讨细胞色素P4502E1(CYP2E1)诱导和抑制对丙烯腈小鼠急性毒性的影响及可能机制。方法雄性小鼠30只,随机分成5组,每组6只,三组先给予1%丙酮饮水一周,第1组作为丙酮对照组,第2组腹腔注射20mg/kg丙烯腈(即丙酮+丙烯腈组),第3组小鼠先注射100mg/kg反式-1,2-二氯乙烯(DCE),2.5h后再给予同等剂量的丙烯腈(即丙酮+DCE+丙烯腈组),未用丙酮预处理的两组其中一组小鼠直接给予20mg/kg丙烯腈(即丙烯腈组),另一组小鼠不做任何处理(即空白对照组);观察丙烯腈染毒后1小时内动物的行为变化和死亡情况,测定组织中CYP2E1活性、丙烯腈代谢产物CN-含量以及细胞色素C氧化酶活性。结果丙烯腈染毒后丙酮+丙烯腈组所有小鼠发生抽搐现象,其中2只出现死亡征兆,单纯丙烯腈组有2只小鼠发生抽搐,未见死亡。丙酮对照组及丙酮+丙烯腈组小鼠肝脏CYP2E1活性显著高于空白对照组,DCE处理后CYP2E1活性明显降低,是空白对照组及丙酮+丙烯腈组的40%和34%左右。CN-含量测定结果显示丙酮+丙烯腈组小鼠肝脏和脑组织中CN-含量显著高于丙烯腈组及DCE预处理组;丙酮+丙烯腈组小鼠组织中细胞色素C氧化酶活性显著低于丙烯腈组等4组水平。结论 CYP2E1活性变化可改变丙烯腈所致小鼠的急性毒性,其机制可能与CYP2E1活性影响丙烯腈氧化代谢所生成的CN-浓度及其所致的细胞色素C氧化酶活性抑制有关。     

LRP16基因对胰岛素分泌和胰岛素抵抗的影响

本课题通过研究LRP16基因在MIN6（小鼠胰岛素瘤细胞）中的功能以及在3T3-L1（脂肪细胞）、C2-C12（肌肉细胞）、HepG2（肝细胞）中对胰岛素抵抗的影响发现,LRP16在MIN6中具有多种作用,如可通过调节胰岛素基因及其转录因子来调节胰岛素含量;     

长期摄入酒精对大鼠血糖和胰岛素的影响

为探讨长期摄入酒精对大鼠血糖，胰岛素及糖耐量（GTT）的影响，以不同学的酒精溶液对大鼠灌胃60天，结果显示：大鼠摄入30％，50％酒精60天后，与对照组比较，空腹血糖明显升高，1h,2h,3h糖耐量异常（P＜0．05），并且雌雄大鼠之间也存在明显差异，随着剂量的增加，各组血胰岛素水平逐渐降低，50％酒精摄入组与对照组存在着明显差异（P＜0．05），结果提示：长期饮酒可导致大鼠空腹血糖升高，糖耐量异常，提示长期饮酒有可能导致糖尿病，并且胰岛素水平降低可能是导致糖尿病的机制之一。     

长期酒精摄入对雄性大鼠胰岛素敏感性及肝脏IR、IRS-1、IRS-2 mRNA表达的影响

目的从基因表达水平探讨长期酒精摄入影响肝脏胰岛素敏感性的分子机制。方法清洁级Wistar雄性大鼠40只,随机分为对照组和低、中、高剂量酒精组,每天摄入酒精剂量分别为0、0·8、1·6和2·4g/kg bw。给予酒精19周后,测定空腹血糖、血胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。提取肝脏总RNA,通过RT-PCR测定胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物1(IRS-1)、胰岛素受体底物2(IRS-2)的mRNA表达水平。结果与对照组相比,高剂量组血糖升高(P<0·05);各剂量组血胰岛素浓度均升高,低、中剂量组升高有显著性差异(P<0·05);各剂量组HOMA-IR均显著高于对照组(P<0·05)。各剂量组IR mRNA表达均降低;IRS-1及IRS-2mRNA表达在低、中剂量组升高,高剂量组降低。结论长期过量酒精摄入可以引起雄性大鼠胰岛素抵抗,肝脏IR、IRS-1、IRS-2mRNA表达降低是酒精影响胰岛素敏感性的分子机制之一。     

酒精对鼠胚胎神经胶质细胞c-fos基因表达的影响

目的 探讨酒精致脑发育异常机制。方法 从孕19d鼠胚胎脑组织分离培养星形、少突胶质细胞体外分别施不同剂量酒精及其代谢产物乙醛,应用免疫细胞化学技术研究二作用不同时间对星形、少突胶质细胞原癌基因c-fos表达影响。结果 酒精对星形、少突胶质细胞c-fos表达与时间和剂量有关。各剂量酒精、乙醛作用lh既可影响两种细胞c-fos基因表达,2h表达至峰值,72h恢复正常呈现特异时相性。结论酒精、乙醛均可致星形、少突胶质细胞c-fos表达增强。c-fos异常表达很可能在酒精所致脑发育异常担当重要作用。     

沙芥预防非酒精性脂肪肝及对肝CYPⅡE1表达的影响

[目的]观察沙芥预防非酒精性脂肪肝作用效果并探究其作用机制。[方法]64只Wistar大鼠,雌雄各半分别饲养,并随机分为空白对照组、脂肪肝模型组、血脂康组和高中低沙芥浓度组,除空白对照组给予普通饲料外,其余各组均饲喂高脂饲料,同时血脂康组和沙芥组分别以血脂康混悬液(0.3g/kg)、沙芥(10.38g/kg、5.19g/kg、2.60g/kg)进行灌胃,空白、模型组灌等容积蒸馏水,每天1次,连续8周后处死,检测大鼠肝指数、血清各生化指标、肝细胞内细胞色素P450ⅡE1(Cytochrome P450ⅡE1,CYPⅡE1)的表达并观察肝组织病理学变化。[结果]通过8周试验,脂肪肝模型组脂肪肝模型形成。与空白对照组比较,模型组、血脂康组和高、中低沙芥组大鼠肝组织中CYPⅡE1表达、血清MDA显著提高,模型组、中低沙芥组血清SOD显著降低,模型组血清FFA显著升高;与模型组比较,血脂康组和沙芥各组SOD活力略有升高(差异无统计学意义),血脂康组和高中沙芥组肝组织中CYPⅡE1表达显著降低,血脂康组和高中低沙芥组血清MDA、FFA显著降低。[结论]沙芥具有降低大鼠血清FFA、MDA含量,明显减弱肝细胞CYPⅡE1表达的作用,有提高血清SOD的趋势,具有预防非酒精性脂肪肝的作用。     

胰岛素生长因子Ⅱ促进人早孕滋养细胞的迁移和侵袭

目的:探讨胰岛素生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)对人早孕滋养细胞的迁移和侵袭力的影响。方法:采用原代培养人早孕滋养细胞,划痕实验检测不同IGF-Ⅱ浓度(0μg/L,10.5μg/L,26.5μg/L,52.5μg/L,112.5μg/L)对滋养细胞迁移力的影响,Ma-trigel侵袭试验分析不同浓度IGF-Ⅱ对滋养细胞的侵袭力的影响。结果:IGF-Ⅱ可以明显促进原代培养的人早孕滋养细胞的迁移和侵袭力,并随着药物浓度和时间的增加而增强,各组间有显著性差异。结论:IGF-Ⅱ可明显促进人早孕滋养细胞的迁移和侵袭能力,可能在绒毛外滋养细胞的入侵和胚胎着床过程中具有重要作用。     

高糖对乳鼠体外心肌细胞TGF-β1分泌的影响及胰岛素干预作用

目的观察高糖对心肌细胞分泌转化生长因子TGF-β1(TGF-β1)的影响和胰岛素的干预作用。方法在乳鼠心肌细胞培养基中，加入高糖，用ELISA法检测培养液中TGF-β1的含量，在高糖刺激的同时分别加入不同浓度胰岛素再次检测。结果高糖刺激后TGF-β1分泌增加，加入低浓度的胰岛素后分泌量减少，加入高浓度胰岛素后分泌进一步增加。结论高糖刺激心肌细胞TGF-β1分泌增加，低浓度的胰岛素可拮抗此作用，而高浓度胰岛素与高糖协同作用则增加TGF-β1分泌。     

过量酒精摄入对大鼠细胞因子及胰岛的影响

目的研究长期酒精摄入对大鼠胰岛功能的影响,以及白细胞介素Iβ(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介索6(IL-6)在其中的作用.方法清洁级Wistar大鼠80只(雌雄各半)给予不同浓度的酒精溶液(10%,30%,50%)灌胃.于实验第13周末,断头处死大鼠,分离血清和胰腺分别检测血清中血糖、胰岛素、IL-1β、TNF-α和IL-6以及胰腺组织中IL-1β、TNF-α和IL-6水平.结果50%酒精雌雄大鼠组血清胰岛素水平降低,空腹血糖升高,血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平升高,与正常对照组相比均有显著性差异(P＜0.05);胰腺组织中,50%酒精雌性大鼠组IL-1β、TNF-α、IL-6和雄性大鼠IL-1β、TNF-α水平升高.雄性大鼠IL-6在各组间无显著性差异.结论IL-1β、TNF-α、IL-6可能参与了长期过量酒精摄入而引起的胰岛β细胞功能障碍.长期过量饮酒有可能与糖尿病发生相关.     

60Coγ射线诱导L02人正常肝细胞COXⅡ基因表达、ATP水平和细胞活力改变

目的 探讨照射剂量和照射时间对电离辐射诱导L02人正常肝细胞(简称“L02细胞”)的线粒体编码基因细胞色素c氧化酶(COX)Ⅱ基因表达、三磷酸腺苷(ATP)水平和细胞活力变化的影响.方法 采用2×7析因设计方法.0、1、3、5、8、10、15 Gy剂量60Coγ射线分别照射L02细胞24、48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量PCR法检测COXⅡmRNA表达水平,蛋白质印迹法检测COXⅡ蛋白表达水平,ATP发光检测试剂盒和CCK-8试剂盒检测细胞内ATP水平和细胞活力.结果 照射时间与照射剂量对L02细胞的COXⅡmRNA及蛋白表达水平上调、ATP水平升高和细胞活力下降的影响存在交互作用(F值分别为92.43、267.40、6.99、116.11,P＜0.05或P＜0.001).在一定照射剂量范围内,照射后24 h COXⅡ蛋白表达水平、照射后24、48 h ATP水平和细胞活力分别与照射剂量存在剂量-效应关系(P＜0.05或P＜0.01).结论 照射剂量和照射时间的交互作用影响60Coγ照射诱导的L02细胞COXⅡ基因表达和细胞内ATP水平与细胞活力.     

酒精对高脂喂养大鼠肝脏胰岛素抵抗的影响

目的探讨长期高脂饮食状态下不同剂量酒精摄入对大鼠胰岛素抵抗的影响及可能机制。方法清洁级Wistar大鼠,随机分为正常对照、高脂对照、高脂+5%、10%、20%、30%、40%酒精共7组。13w后,断头取血,测空腹血糖(FPG)及血胰岛素(FINS)浓度,计算胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment,HOMA-IR)及HOMA-β功能指数(HOMAβ-cellindex,HBCI)。RT-PCR法测定肝脏胰岛素受体底物-1(IRS-1),磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)、葡萄糖转运体-2(GLUT-2)的mRNA表达水平。Westernblotting测定肝脏PI-3K(p85α)、GLUT-2的蛋白表达水平。结果高脂对照组与正常对照组比,血胰岛素、HOMA-IR、HBCI明显升高(P0.05),肝脏胰岛素信号传导关键分子没有显著差异。与高脂对照组比,高脂+酒精组空腹血糖、胰岛素抵抗指数明显升高(P0.05),血胰岛素、胰岛β细胞功能指数明显下降(P0.05);肝脏胰岛素信号传导关键分子mRNA、蛋白表达水平随酒精剂量的增加而逐渐下降。结论长期高脂饮食联合酒精摄入导致胰岛素抵抗;同时抑制肝脏胰岛素信号传导关键分子表达水平,在高剂量酒精组更明显,这可能是其导致胰岛素抵抗的分子机制。     

碳酸缓冲液对光气损伤大鼠AT-Ⅱ细胞基因表达的影响

目的观察碳酸缓冲液干预对光气染毒后大鼠AT-Ⅱ细胞基因表达的影响,以深入探讨其作用的分子机制.方法分别抽提正常组、损伤组及干预组AT-Ⅱ细胞总RNA,通过逆转录方法,进行荧光标记后,制备成cDNA探针,与表达谱芯片进行杂交及扫描测定,通过计算机进行数据处理、基因库对比并筛选出差异表达基因.结果经碳酸缓冲液干预后,筛选出的差异表达基因数由单纯损伤组的161条降低到了115条,且大部分与肺损伤相关基因的异常表达均得到了抑制,并出现了新的差异基因.结论碳酸缓冲液在干预光气中毒中具有一定的保护作用,为探讨光气中毒和临床治疗机制提供了新的思路.     

过量酒精对大鼠生精细胞凋亡的影响

目的　研究酒精致生精细胞凋亡发生的机制及酒精凋亡相关基因Bcl- 2、Bax在睾丸及生精细胞表达的影响。方法　利用人类饮用白酒制备大鼠的酒精毒性模型 ,采用组织学技术和免疫组织化学技术检测酒精对生精细胞凋亡及其相关基因Bcl- 2、Bax表达的影响。用 2种剂量的酒精作用于大鼠的 2个生精周期 ,检测睾丸生精小管中Bcl- 2、Bax蛋白表达的阳性细胞数和表达强度。结果　每个生精小管中Bcl- 2蛋白表达的阳性细胞数在高剂量组为 96± 3 3 74,低剂量组为 15 6 6± 2 8 5 2 ,均显著低于正常对照组 (2 2 2 6± 5 6 86) (P <0 0 1) ;每个细胞中Bcl- 2蛋白表达强度 (OD值 )在高剂量组 (0 142± 0 0 3 5 )、低剂量组 (0 15 1± 0 0 2 6) ,都明显低于对照组 (0 196± 0 0 3 2 ) (P <0 0 1) ;Bax蛋白表达的阳性细胞数在高剂量组为 (412 4± 96 75 ) ,低剂量组为 (3 3 7 5± 94 3 9) ,均明显高于对照组(2 14± 82 5 7) (P <0 0 1) ,Bax蛋白的表达强度 (OD值 )也有同样的变化 ,高剂量组 (0 113± 0 0 3 6)和低剂量组 (0 0 82± 0 0 17) ,均明显高于对照组 (0 0 5± 0 0 2 4) (P <0 0 1)。凋亡细胞增多 ,平均每个生精小管中的凋亡细胞数目在高剂量组为 15 5 3± 3 75 ,显著高于正常对照组 (2 2     

高压氧中毒对小鼠肺毛细血管细胞色素氧化酶活性的影响

采用超微结构细胞化学和计算机图象定量分析方法，测量计算了高压下氧中毒小鼠肺毛细血管线粒体、线粒体细胞色素氧化酶二维形态学和三维立体学参数。结果表明，小鼠暴露于０．５ＭＰａ高压氧后，肺毛细血管线粒体二维形态学和三维立体学参数的值没有发生变化，但线粒体细胞色素氧化酶的活性明显降低。     

溴氰菊酯对大鼠脑组织线粒体膜通透性和细胞色素C表达的影响

目的研究溴氰菊酯(DM)对大鼠脑组织线粒体膜通透性及细胞色素C表达的影响。方法Wistar大鼠随机分为实验组(4个不同染毒时间)和对照组,每组5只。实验组按12．5 mg/kg DM一次腹腔注射,5、24、48、72 h后处死；对照组一次腹腔注射5 mg/kg的色拉油,分别提取大鼠大脑皮层和海马的线粒体,测定线粒体膜通透性、细胞色素C氧化酶,并测定大鼠大脑皮层、海马CA1、CA2、CA3、CA4区细胞色素C的表达。结果实验组与对照组相比,5、24、48、72 h组的线粒体膜通透性增大；皮层和海马CA1区、CA2区5、24、48 h组(0．57±．04、0．67±0．09、0．58±0．04)、CA4区24 h组(0．81±0．18)细胞色素C表达增强,吸光度值的差异有统计学意义(P＜0．05或P＜0．01)；CA2区72 h组、CA3区及CA4区5、48、72 h组细胞色素C表达,吸光度值的差异则无统计学意义(P＞0．05)；细胞色素C氧化酶的活力则受到抑制,差异有统计学意义(P＜0．01)。结论DM能明显增加大鼠脑组织线粒体膜通透性,促使细胞色素C表达增强。