siRNA对肺癌细胞株bcl-2基因表达的抑制

目的研究小干扰RNA(siRNA)对bcl-2基因表达的抑制作用。方法利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl-2基因为靶标的siRNA,通过脂质体将合成的siRNA转入A549和NCIH460细胞株,以未转染细胞和转染bcl2的反义药物G3139为对照,经MTT法检测siRNA对细胞生长的抑制,RTPCR检测bcl2mRNA水平,流式细胞仪检测细胞周期的改变和bcl-2蛋白表达,反应siRNA对bcl-2表达的抑制效应。结果siRNA组与对照组细胞存活率各时间点均有显著差异(P<0.05);与反义组在24、48h也有显著差异(P<0.05),而72h无差异(P>0.05)。转染12h后,siRNA组bcl-2mRNA与对照组和反义组有显著差异(P<0.05)。转染48h后,siRNA组bcl2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组和反义组细胞阻滞于S期。结论体外转录合成的siRNA可抑制A549和NCIH46细胞bcl2基因的表达,效率可达50%以上。     

SUMO-1基因沉默对肝癌细胞株SMMC-7721bcl-2及c-myc基因表达的影响

目的 探讨SUMO-1基因沉默后对肝癌细胞株SMMC-7721 bcl-2及c-myc表达的影响.方法 将人工合成的针对人SUMO-1基因的siRNA片段转染人肝癌细胞株SMMC-7721,采用RT-PCR、Western blot方法检测siRNA沉默SUMO-1基因的效果及SUMO-1基因沉默后对bcl-2及c-myc基因表达的影响.结果 人工合成的针对SUMO-1基因的siRNA片段能显著地抑制SMMC-7721 SUMO-1基因的表达,24、48、72 h沉默率分别为9.80%、73.43%、46.56%.SUMO-1基因表达下调后SMMC-7721 细胞内bcl-2及c-myc基因表达也明显下调,差异有统计学意义.结论 siRNA是一种理想的沉默SMMC-7721 SUMO-1基因表达的方法,SUMO-1基因沉默后SMMC-7721细胞内的bcl-2及c-myc基因表达均明显下调,说明SUMO-1基因控制癌基因bcl-2及c-myc的表达.     

联合应用以MRP和bcl-2为靶标的siRNA对肺癌细胞耐药和凋亡的影响

目的研究联合转染以MRP和bcl-2为靶标的siRNA,肺癌细胞株SW1573和SW1573／R20药物敏感性及凋亡的改变。方法以MRP和bcl-2为靶标的siRNA（均为100μmol／L）分别或联合转入柔红霉素处理的SW1573和SW1573／R20与单纯化疗处理组和未处理组对照。转染后24、48、72h MTT法检测各组生长抑制率,计算IC50值。RT-PCR检测转染12h各组相应靶基因mRNA表达水平,流式细胞仪检测转染48h各组MRP和bcl-2蛋白表达率和细胞凋亡率。结果细胞转染siRNA后,相应靶基因mRNA及蛋白表达明显减低,细胞的凋亡率升高,IC50均较单纯化疗组低,有统计学意义〈0．01）;联合应用两种siRNA后细胞IC50进一步下降,细胞凋亡率显著升高,与各组相比均有统计学差异俨〈0．05）。结论联合以MRP和bcl-2基因为靶标的siRNA,通过降低靶基因蛋白表达,产生协同作用,明显增加耐药和亲本肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率。     

P53siRNA对肺腺癌细胞A549中HMGN2表达的影响

目的 探讨P53基因调节人肺腺癌细胞A549中HMGN2蛋白表达情况.方法 采用小分子干扰RNA(P53-siRNA)真核细胞转染人肺腺癌细胞株A549作为实验组P53-si,转染无荧光RNA的A549细胞为空白对照组con-si,未转染任何载体的A549细胞为正常对照组con.Western blot检测HMGN2和P53表达的变化.结果转染P53-siRNA的实验组A549细胞株中HMGN2蛋白表达下调,空白对照组和正常对照组A549细胞中HMGN2的表达均无明显变化;相对于正常对照组,HMGN2的表达率分别为:实验组56％,空白对照组88％(P＜0.01).结论 P53基因能下调人肺腺癌细胞中HMGN2的活性,参与调控HMGN2蛋白的表达,从而为P53基因参与调节HMGN2在小鼠发育过程的机制研究提供实验基础.     

bcl-2反义寡核苷酸增强NCI-H460细胞对紫杉特尔和放射线的敏感性

目的:研究bcl-2反义寡核苷酸作用于非小细胞肺癌细胞株NCI-H460后,细胞对紫杉特尔、放射线敏感性的变化.方法:紫杉特尔与bcl-2反义寡核苷酸或无义寡核苷酸联合作用NCI-H460细胞后,MTT法测紫杉特尔半数抑制率(IC50);NCI-H460经bcl-2反义寡核苷酸或无义寡核苷酸作用后,再用放射线照射,MTT法测定细胞生长抑制率;免疫荧光标记观测细胞Bcl-2蛋白水平.结果:靶向bcl-2 mRNA蛋白编码区反义寡核苷酸与紫杉特尔联合作用于NCI-H460细胞后紫杉特尔的IC50值为(0.101±0.009) μmol/L,与不加寡核苷酸组紫杉特尔的IC50值[(0.183±0.018) μmol/L]或无义寡核苷酸联用紫杉特尔的IC50值[(0.179±0.016) μmol/L]相比,统计学上具有显著性差异(P＜0.05).bcl-2反义寡核苷酸与放射线联合作用NCI-H460细胞,显著抑制细胞的生长,并呈时间依赖性,分别与单用放射线及bcl-2无义寡核苷酸联合放射线组相比,统计学上有显著性差异(P＜0.05).bcl-2反义寡核苷酸分别与紫杉特尔、放射线作用于NCI-H460细胞后显著抑制Bcl-2蛋白表达,分别与单用紫杉特尔、放射线或无义寡核苷酸联用紫杉特尔、放射线相比,统计学上具有显著性差异(P＜0.05).结论:靶向bcl-2 mRNA的反义寡核苷酸能增强NCI-H460细胞对紫杉特尔、放射线的敏感性.     

干蟾皮醇提物对A549和NCI-H460肺癌细胞活性的影响

目的:观察干蟾皮醇提物抗肺癌细胞生长和促凋亡的作用。方法:将A549、NCI-H460肺癌细胞悬液分别接种于96孔培养板中,细胞贴壁后依次加入不同浓度的含干蟾皮醇提物培养液干预,并设RPMI-1640培养液空白对照组。实验结束,用MTT法测定药物对细胞增殖的影响,Hoechst荧光染色法检测对细胞凋亡的影响。结果:与空白对照组比较,干蟾皮醇提物在不同浓度下对A549和NCI-H460细胞的生长均有抑制作用(P0.05~0.001),且呈浓度依赖性;对两种细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为15μg/ml和1.5μg/ml。不同浓度的干蟾皮醇提物作用于A549、NCI-H460细胞后,随着药物浓度梯度的增加,凋亡细胞数目明显增加,伴随出现细胞的坏死,细胞轮廓不清,甚至细胞解体。结论:干蟾皮醇提物可显著降低A549和NCI-H460细胞的活性及促进其凋亡,且呈剂量依赖性。     

急性白血病bcl-2基因表达的研究

目的观察凋亡调控基因bcl-2在急性白血病（AL）患者中的表达。方法体外模拟常规用药的血药浓度最大值进行研究。首先应用流式细胞仪（FCM）技术检测凋亡调控基因bcl-2在各种急性白血病中的表达;然后检测体外药物作用后bel-2表达水平。结果bcl-2表达在AML中无显著性差异,而在ALL中表达明显低于AML。bcl-2蛋白在化疗药物作用一定时间后明显下调,与对照组有显著性差异（P〈0．05）。结论bcl-2蛋白在诱导AL原代细胞凋亡中有相应作用。     

氯喹与拓扑替康联用协同抑制A549肺癌细胞株的增殖

目的观察氯喹(CQ)与拓扑替康(TPT)联用对A549肺癌细胞株的影响,为增敏化疗及氯喹在抗肿瘤方面的研究、开发和临床应用提供理论支持和实验依据。方法 MTT法检测细胞抑制率,取对数生长期的肺癌细胞A549种于96孔板内6,×103个/孔2,00μL/孔。实验分为对照组(注射用水)和实验组,实验组加入0.05～25.6μg/mL的TPT,分别培养48 h和72 h;实验组加入不同浓度的单药或以固定比例(TPT∶CQ=1∶10)联合药物,TPT/CQ为0.39/3.90、.78/7.8、1.56/15.6、3.13/31.3和6.25/62.5μg/mL;37℃放置4 h后,弃上清液,加入100μLDMSO,摇床上摇匀使紫色结晶充分溶解。用酶标仪测定波长为570 nm处的吸光度(OD)值,计算细胞生长抑制率。细胞生长抑制率=(1-实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100%。每组实验重复3次。结果应用浓度为0～25μg/mL TPT处理A549细胞48 h和72 h,通过MTT检测可发现TPT对A549细胞的生长抑制呈现时间及浓度依赖性,在72 hI,C50值为(1.769±0.288)μg/mL,CQ(0.39～6.25μg/mL)与TPT(3.9～62.5μg/mL)联用对A549细胞的增殖抑制作用,通过软件分析在上述浓度范围内,两药的联合指数(CI)均<1。结论 CQ能增强TPT对A549细胞的增殖抑制作用。     

siRNA干扰Pokemon基因影响A549细胞增殖的实验研究

目的 研究siRNA干扰Pokemon基因对肺腺癌A549细胞增殖抑制效应的变化.方法 专业设计合成3条针对Pokemon的siRNA,分别转染A549细胞后,RT-PCR检测转录水平Pokemon mRNA表达的变化,筛选出其中最高效的1条siRNA;用MTT法检测该siRNA干扰Pokemon对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞技术检测该siRNA干扰Pokemon对A549细胞凋亡的影响.结果 3条siRNA均成功转染A549细胞,倒置荧光显微镜下观察细胞呈圆绿色.RT-PCR结果显示有2条siRNA使细胞中Pokemon的mRNA表达降低(P＜0.05).MTT法结果显示siRNA干扰Pokemon后对A549细胞增殖有抑制作用(P＜0.05),其中48 h抑制效率达(24.14±1.39)％.流式细胞技术检测结果显示该siRNA干扰Pokemon可增加A549细胞的凋亡,凋亡率为14.05％.结论 应用RNA干扰Pokemon基因能够抑制A549细胞的增殖,促进A549细胞的凋亡.Pokemon基因有可能成为肺癌治疗中的一个新靶点.     

蚌肉提取物LX01对肺癌细胞株A549的抑制作用

OBJECTIVE: To explore the inhibition effect of river clam extract LX01 on human lung epithelial carcinoma (A549) in mice. METHODS: The inhibition ratio of LX01 on A549 was detected by MTT method. A549 was inoculated into BALB/c mice, and 2 days later, LX01 (50, 100, 200 mg/kg.d) or cytoxan (0.02 mg/kg.d) were administrated for 15 days. Tumor weight, survival time and leukocyte count were measured. RESULTS: Tumor growth was markedly inhibited by LX01 in a dose- dependent manner. LX01 could significantly extend the survival time compared with the control group (P<0.01), but LX01 did not reduce leukocyte count of mice transplanted with A549. CONCLUSION: LX01 could efficiently inhibit the growth of A549 transplanted into mice and maintain the normal immunological function.     

雷帕霉素对人肺癌细胞株增殖抑制的研究

目的：探讨雷帕霉素对人肺癌细胞株的生长影响及磷酸化核糖体蛋白S6激酶（P-S6K1）的表达在雷帕霉素抑制肺癌细胞增长中的意义。方法：用不同浓度（0、0.1、1.0、10.0、100.0 nmol/L）的雷帕霉素处理人肺癌细胞株,药物敏感试验判断雷帕霉素的敏感株和不敏感株,MTT法检测其对人肺癌细胞增殖的影响。Western blotting观察人肺癌细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路上下游蛋白分子及其磷酸化蛋白的表达,比较P-S6K1在用药前后的表达。结果：4个浓度（0.1、1.0、10.0、100.0 nmol/L）的雷帕霉素持续作用72 h,除H1299细胞株外,对HLAMP、A549和PAa细胞株的抑制率相应增加（P〈0.05）,100.0 nmol/L时的抑制率达到最大（P〈0.05）,A值的变化与抑制率一致。位于mTOR上下游的AKT、S6K1、4E-BP1、eIF4E蛋白在所有细胞株中均有表达,P-S6K1在敏感株中呈高表达,在不敏感株中未检测到。在HLAMP和A549中P-S6K1用药后6、12、18和24 h较用药前有所降低。结论：雷帕霉素能抑制人肺癌细胞生长,P-S6K1在一定程度上可代表肺癌细胞株对雷帕霉素的敏感性。     

肺癌细胞系内皮蛋白C受体的表达及其意义

目的 从细胞、蛋白和基因三个水平分析内皮蛋白C受体（endothelial protein C receptor，EPCR）在肺癌细胞系的表达。方法 以EA．hy926内皮细胞作阳性对照，人胚肺W138细胞作阴性对照，通过流式细胞术、West-ern．blot及半定量逆转录-聚合酶链反应分析EPCR在6种肺癌细胞系的表达水平。结果 6株肺癌细胞系均有EPCR的表达。高转移肺癌95D细胞表达最高。结论 EPCR的表达是肺癌细胞的重要特征，可能与肺癌增殖及转移有关。     

JMJD2B在人卵巢癌中的定位表达

目的：研究JMJD2B在人卵巢癌细胞株SKOV3中的定位和表达.方法：人卵巢癌细胞株SKOV3进行核浆分离,蛋白免疫印迹法检测细胞核和细胞浆中JMJD2B表达,PARP为细胞核标志物,β-tubulin为细胞浆标志物.激光共聚焦扫描显微镜检测内源JMJD2B在SKOV3细胞中的定位.结果：核浆分离的蛋白免疫印迹和激光共聚焦扫描纤维镜证实JM-JD2B主要定位于细胞核内,细胞浆仅有少量表达.结论：JMJD2B主要定位于卵巢癌细胞株SKOV3核内,可能是参与肿瘤细胞基因转录调控和蛋白表达的重要蛋白之一.     

耐药肺癌细胞caspase8、bcl-2、细胞色素C及bcl-2 mRNA的异常表达

目的探讨肺癌细胞耐药性与凋亡蛋白caspase8、bcl-2、细胞色素C及bcl-2 mRNA异常表达的关系。方法培养肺癌A 549耐药株(A 549R)和敏感株(A 549S),采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)对两株细胞bcl-2 mRNA进行扩增并作琼脂糖电泳,设-βactin为内对照比较其表达水平;W estern B lot法检测caspase8、bcl-2、细胞色素C蛋白表达并比较两株细胞中上述蛋白质表达水平。结果A 549S凋亡启动蛋白caspase8及细胞色素C的表达高于A 549R(P<0.05),而bcl-2蛋白表达低于后者(P<0.05);bcl-2 mRNA表达相对丰度分别为:A 549S 8.74±1.81,A 549R 10.29±2.92,差异无统计学意义(P>0.05)。结论bcl-2的过度表达可能使caspase8和细胞色素C蛋白表达降低从而造成细胞耐药,但bcl-2的这种过度表达可能是在转录或其后的过程而非基因水平发生。     

苦参碱对肺腺癌细胞生长抑制的实验研究

目的：研究分化诱导剂苦参碱（Matrine）在体外对人肺腺癌SPC-A-1细胞生长抑制的影响。方法：用不同浓度的苦参碱分别处理肺腺癌SPC-A-1细胞后,镜下观察癌细胞的生长情况;测定软琼脂克隆形成率;MTT（噻唑蓝）法测定生长抑制率。结果：不同浓度苦参碱处理后肺腺癌SPC-A-1细胞的生长明显受到抑制,细胞生长抑制率随苦参碱的浓度增加而增强。结论：苦参碱对肺腺癌SPC-A-1细胞的生长有明显的抑制作用。     

APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株的表达

目的探讨APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化;取第1代培养后1 d、5 d的细胞,用免疫组化检测APC和NeuN在肺腺癌细胞株A549的表达及计处阳性染色细胞的变化.结果 APC和NeuN在体外传代培养的肺腺癌A549细胞株中有表达,且随着细胞的生长,APC的表达减少,NeuN的表达增多.结论 APC可能在其早期形成中就发挥一定的作用;A549、NeuN的表达增A549肺腺癌细胞可能存在向神经细胞分化的潜力.在肺腺癌A549细胞表达减少.     

人部分正常与肿瘤细胞株中neuritin表达的检测

目的:筛选neuritin高表达及低表达细胞株,为进一步探讨neuritin在不同组织细胞生长发育过程中的作用奠定基础.方法和结果:分别利用RT-PCR与免疫组化技术在mRNA水平及蛋白水平,检测了11种人类细胞株中neuritin的表达情况,发现不仅在多种正常细胞中有表达,而且在部分肿瘤细胞中也有表达.结论:成功筛选出了neuritin高表达及低表达细胞株.     

人非小细胞肺癌组织中环氧化酶-2 mRNA的表达及临床意义

目的 检测环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA在人非小细胞肺癌、癌旁及正常肺组织中的表达情况,探讨COX-2 mRNA的表达在非小细胞肺癌发生、发展中的意义.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测20例非小细胞肺癌、癌旁及正常肺组织中COX-2mRNA表达水平.结果 COX-2 mRNA在非小细胞肺癌组织中的表达水平为(1.412±0.375),高于其在癌旁组织中的(0.595±0.296)和正常肺组织中的(0.477±0.105),差异具有显著性(P＜0.01);COX-2 mRNA表达与患者性别、年龄及肿瘤大小、生长部位均无显著性相关(P＞0.05),而与肿瘤组织学分型、分化程度、临床分期及是否淋巴结转移密切相关(P＜0.01或P＜0.05).结论 COX-2mRNA表达水平在人非小细胞肺癌组织中增高,并与非小细胞肺癌淋巴结转移、远处转移、临床分期等临床病理特征密切相关,COX-2 mRNA表达在非小细胞肺癌发生、发展、转移过程中发挥重要作用.     

c-erbB-2,bcl-2和nm23-H1在原发性肺癌组织中的表达

目的：探讨癌基因c-erbB-2、凋亡抑制基因bcl-2及转移抑制基因nm23-H1蛋白在原发性肺癌组织中的表达及其与淋巴结转移的关系。方法：采用免疫组化S-P法检测59例原发性肺癌组织中c-erbB-2，bcl-2和nm23-H1蛋白的表达。结果：c-erbB-2蛋白的阳性表达在肺腺癌、腺鳞癌与鳞癌组间比较差异有显著性(P＜0．05)，与肺癌组织分化程度无明显关系(P＞0．05)，与淋巴结的转移呈正相关(P＜0．05)。bcl-2蛋白的阳性表达在高、中分化肺癌组和低分化肺癌组间比较，差异有显著性(P＜0．05)，与肺癌组织学类型及淋巴结转移无明显关系(P＞0．05)．nm23-H1蛋白在淋巴结无转移肺癌组中显著高于转移组(P＜0．05)，且与伴淋巴结转移组中c-erbB-2的表达呈负相关．结论：c-erbB-2，bcl-2及nm23-H1在肺癌的组织发生上起着重要作用，检测三种基因蛋白可作为判断肺癌病人预后的有效指标之一。