FTY720对小鼠异基因骨髓移植后急性GVHD的预防作用

目的 评估FTY720对小鼠异基因骨髓移植诱发急性移植物抗宿主病（aGVHD）的预防作用。方法36只受体BALB／c小鼠,接受直线加速器一次性全身照射后4～6h内,经尾静脉注射供体小鼠骨髓和脾脏细胞。受体小鼠分为移植方式对照组（A组）和异基因移植治疗组（B组）;同时A组分未移植组（A1）、同基因移植组（A2）和异基因移植对照组（A3）,B组分CsA5mg／kg组（B1）,FTY7200．3mg／kg组（B2）和FTY7201mg／kg组（B3）。移植后受体小鼠,根据生存时间、体重变化和病理组织学检查,评估各组aGVHD严重程度。结果 异基因移植各组在移植后第7d造血开始恢复,第14d流式细胞仪检测显示异基因骨髓细胞已植入,病理组织学检查A3组发生重度aGVHD;与B1和B2组比较,B3组aGVHD严重程度最低。结论小鼠异基因骨髓移植后给予FTY720具有预防aGVHD作用．以剂量为1mg／kg时作用显著。     

雷帕霉素抑制小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病作用的初步研究

目的:探讨新型免疫抑制药物雷帕霉素(RAPA)对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的抑制作用,并与传统免疫抑制药物比较作用效果。方法:用主要组织相容性抗原(MHC)完全不合的纯种近交系小鼠[供鼠为雄性C57BL/6 J(H-2b)鼠,受鼠为雌性BALB/c(H-2d)鼠]建立allo-BMT/aGVHD动物模型,随机分5组,第1、2和3组分别给予RAPA、环孢菌素A(CsA)加甲氨蝶呤(MTX)、RAPA加CsA加MTX联合用药作为aGVHD抑制方案,第4组为空白对照,第5组为未移植组。观察各组小鼠骨髓移植后aGVHD的出现情况。结果:移植小鼠出现典型的aGVHD症状,未用aGVHD预防方案的移植小鼠(第4组)死亡高峰在移植后第5~7天,死亡率达100%。用不同aGVHD预防方案的第1~3组小鼠aGVHD症状明显减轻,平均生存时间(MST)较第4组显著延长(分别延长3.5、1.9和6.0 d,P<0.05)。不同aGVHD预防方案的移植小鼠之间,移植后外周血常规变化差异无显著性。经用各预防方案后,移植小鼠aGVHD病理表现减轻,且RAPA、CsA和MTX联合用药组的病理分级轻于RAPA单药组或CsA加MTX标准方案组。结论:RAPA可以显著抑制体外T淋巴细胞增殖效应,增强小鼠对骨髓移植的免疫耐受,对小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)有明显抑制作用,可减轻GVHD症状和病理损害程度,延长平均生存时间。     

大鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立

目的建立较稳定的异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病动物模型,为异基因骨髓移植后的急性移植物抗宿主病(aGVHD)的相关研究提供实验参照。方法以雄性SD大鼠为供鼠,雌性Wistar大鼠为受鼠,受体大鼠随机分成A、B、C、D、E 5组,移植当天所有受鼠均接受8.5 GY的全身照射(TBI),于照射后4~6 h内,A组回输等量培养液,B组经尾静脉输注供鼠骨髓细胞(2×108个/kg),C、D、E组分别回输供鼠骨髓细胞(2×108个/kg) 不同比例的脾细胞。观察各组大鼠生存期、外周白细胞计数、及有无aGVHD的临床及病理表现。结果A组大鼠于15d内全部死亡,外周血白细胞计数明显减低,骨髓病理示造血组织减少,提示死于造血衰竭。B、C、D、E组大鼠外周血白细胞计数均有明显恢复,B组大鼠8只存活超过50 d,C、D、E组大鼠均于50 d观察期内死亡,并有aGVHD的临床表现及病理表现,但C组大鼠aGVHD的程度较轻且时间不集中,其中D、E组大鼠可于相对集中的时间内观察到典型aGVHD临床及病理。结论TBI预处理的方式是可行的,单纯输入异基因骨髓细胞不能引起明显的aGVHD,骨髓细胞与脾细胞1∶1及1∶1.5混合组均可作为异基因骨髓移植后理想的aGVHD动物模型。     

来氟米特预防小鼠异基因骨髓移植后aGVHD的实验研究

目的 评估来氟米特（LEF）对小鼠异基因骨髓移植（allo-BMT）术后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的预防作用.方法 以SPF级雄性C57BL/6（H-2b）为供鼠,雌性BALB/C（H-2d）为受鼠,建立allo-BMT/aGVHD动物模型,并将大鼠随机分为：A组（模型对照组）、B组（环孢菌素A组,剂量为10 mg·kg^-1·d^-1）、C组（LEF组,剂量为10 mg·kg^-1·d^-1）,同时根据临床表现、病理组织学检查、平均生存时间评估各组aGVHD的严重程度.结果 B组和C组受鼠平均生存时间均较A组显著延长（均P〈0.01）,B组和C组间平均生存时间的差异均无统计学意义（均P〉0.05）;B组和C组受鼠的aGVHD临床表现和病理改变均较A组明显减轻.结论 LEF可有效预防小鼠allo-BMT术后出现的aGVHD,并可减轻其症状和病理损害程度,同时显著延长平均生存时间.     

骨化三醇及复方丹参对大鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病的影响

目的 观察骨化三醇及丹参对异基因骨髓移植(Allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响.方法 以雄性SD大鼠为供鼠,雌性Wistar大鼠为受鼠,受体大鼠随机分成A、B、C、D组,移植当天所有受鼠均接受8.5Gy的全身照射(TBI),于照射后4～6h,A组,为骨髓细胞与脾细胞1:1.5联合输注组:输注供鼠的骨髓细胞2×108个/kg+脾细胞3×108个/kg,即GVHD模型组.B、C、D组除建立GVHD模型外,B组为骨化三醇组;C组为中药制剂复方丹参组;D组为骨化三醇和中药制剂复方丹参联合组.观察各组大鼠生存期及有无aGVHD的临床及病理表现.结果 A、B、C、D组大鼠均于50d观察期内死亡,并有aGVHD的临床及病理表现,但是B、C、D组大鼠aGVHD的发病时间较A纽延迟,临床aGVHD评分亦较A组大鼠低(P<0.05),平均生存时间较A组大鼠明显延长(P<0.05),病理表现较A组大鼠轻.结论 骨髓细胞与脾细胞混合榆注可以引起明显的aGVHD,骨化三醇及丹参能够减轻Allo-BMT后aGVHD的发生.     

非清髓性骨髓移植的动物实验研究

目的　建立非清髓性骨髓移植的小鼠动物模型 ,探讨非清髓预处理条件下能否实现异基因造血细胞的植活 ,探讨输入的异基因造血细胞数量和移植植活的关系。方法　以雌性C5 7BL/ 6小鼠为异基因骨髓移植的受者 ,雄性BALB/c小鼠为异基因骨髓移植的供者 ,采用非致死剂量的环磷酰胺腹腔注射 (2 0 0mg/kg)加γ射线全身照射(5Gy)为非清髓性预处理方案 ,将移植受鼠分为A、B、C 3组 ,每组 10只 ,分别给予 2× 10 7、8× 10 6和 2× 10 6个供鼠骨髓细胞 ,移植后第 36天用聚合酶链式反应检测受鼠骨髓细胞内Y染色体特异性基因检测移植物植活。结果　在移植A、B和C组中分别有 8、3和 0只小鼠检测到了异基因造血细胞的植活 ,经过统计学检验发现A组小鼠的植活比例高于其余两组。结论　非清髓的预处理条件下可以实现异基因骨髓移植的成功植入 ;加大移植物中造血前体细胞的数量有助于克服移植供、受者间主要组织相容性 (MHC)间的差异和促进移植物植活     

FTY720对百草枯中毒小鼠肺损伤的保护作用

目的:探讨新型免疫抑制剂FTY720对急性百草枯(PQ)中毒小鼠肺损伤的保护机制。方法:8周龄C57BL/6j小鼠随机分为百草枯40mg/kg染毒对照组(PQ组)、百草枯40mg/kg染毒+FTY720 0.5mg/kg/d干预组(PQ+FTY720组)、生理盐水对照组(Control组)。PQ组和PQ+FTY720组分别经腹腔注射PQ40mg/kg,PQ+FTY720组于2小时后腹腔注射FTY720 0.5mg/kg,每日一次,连续14天;Control组腹腔注射等量生理盐水。各组分别于第3、第28天处死,观察28天生存率,留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。HE染色观察各组肺组织病理变化。BCA法测定BALF中总蛋白含量。ELISA法检测BALF中IL-6水平。Real-time PCR法测定肺组织中alpha-smooth muscle actin(α-SMA)、type I col1agen、type Ⅲcollagen mRNA的表达水平,免疫组化法观察肺组织中α-SMA的表达。结果:28天生存率PQ组与PQ+FTY720组分别为50%和70%。 HE染色显示FTY720干预后小鼠肺损伤程度较PQ组减轻。PQ+FTY720组在急性期BALF总蛋白含量、IL-6水平明显低于PQ组,慢性期肺组织中α-SMA、type I col1agen、type Ⅲcollagen在mRNA水平上表达较PQ组下调,且均具统计学意义。肺组织α-SMA阳性表达颗粒较PQ组减少。结论: FTY720可抑制部分肺损伤/纤维化相关因子的表达,对百草枯中毒肺损伤有治疗保护作用。     

白介素-11对小鼠异基因骨髓移植后aGVHD的预防作用

目的 评估白介素-11(Interleukin-11,IL-11)对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT) 后急性移植物抗宿主病(aGVHD) 的预防作用. 方法 用主要组织相容性抗原(MHC) 完全不合的纯种近交系SPF级小鼠,雄C57BL/6(H-2b)为供鼠,雌性BALB/C(H-2d)为受鼠,建立allo-BMT/aGVHD 动物模型,随机分3组:模型对照组、IL-11组(剂量为500μg/(kg·d)、环孢菌素A(CsA)组(剂量为10mg/(kg·d),观察其对aGVHD 的预防作用. 结果 IL-11组、CsA组受鼠生存时间均长于模型对照组(P<0.01);IL-11组、CsA组受鼠aGVHD临床表现和病理改变均较模型对照组明显轻.IL-11组、CsA组之间平均生存时间比较无统计学差异(P=0.901). 结论 IL-11可有效预防小鼠allo-BMT后aGVHD,减轻其症状和病理损害程度,显著延长平均生存时间.     

雷帕霉素抑制小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病作用的初步研究

目的：探讨新型免疫抑制药物雷帕霉素（RAPA）对小鼠异基因骨髓移植（allo-BMT）后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的抑制作用，并与传统免疫抑制药物比较作用效果。方法：用主要组织相容性抗原（MHC）完全不合的纯种近交系小鼠[供鼠为雄性c57BL／6J（H-2“）鼠，受鼠为雌性BALB／c（H-2^d）鼠]建立allo-BMT／aGVHD动物模型，随机分5组，第1、2和3组分别给予RAPA、环孢菌素A（CsA）加甲氨蝶呤（MTX）、RAPA加CsA加MTX联合用药作为aGVHD抑制方案，第4组为空白对照，第5组为未移植组。观察各组小鼠骨髓移植后aGVHD的出现情况。结果：移植小鼠出现典型的aGVHD症状，未用aGVHD预防方案的移植小鼠（第4组）死亡高峰在移植后第5～7天，死亡率达100％。用不同aGVHD预防方案的第1～3组小鼠aGVHD症状明显减轻，平均生存时间（MST）较第4组显著延长（分别延长3．5、1．9和6．0d，P〈0．05）。不同aGVHD预防方案的移植小鼠之间，移植后外周血常规变化差异无显著性。经用各预防方案后，移植小鼠aGVHD病理表现减轻，且RAPA、CsA和MTX联合用药组的病理分级轻于RAPA单药组或CsA加MTX标准方案组。结论：RAPA可以显著抑制体外T淋巴细胞增殖效应，增强小鼠对骨髓移植的免疫耐受，对小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病（GVHD）有明显抑制作用，可减轻GVHD症状和病理损害程度，延长平均生存时间。     

抗CD25单克隆抗体治疗异基因造血干细胞移植后激素耐药的Ⅳ度急性移植物抗宿主病

急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植后常见并发症.在人类白细胞抗原(HLA)全相合的非亲缘异基因骨髓移植中Ⅱ～Ⅳ度aGVHD的发生率为78%,Ⅲ～Ⅳ度aGVHD的发生率为36%[1].尽管多种免疫抑制剂如环孢霉素A(CsA)、霉酚酸酯(MMF)、甲氨蝶呤(MTX)、糖皮质激素、他克莫司(FK506)等已用于防治aGVHD,仍有一部分aGVHD不能控制,尤其是甲基强的松龙日剂量大于2mg/kg仍无法获得临床缓解者大多预后不良.本中心共进行异基因造血干细胞移植术180例,其中8例发生糖皮质激素耐药的Ⅳ度aGVHD,予以人源化抗CD25(白介素2受体α链)单克隆抗体(商品名赛尼派)治疗,取得较好效果,现报道如下.