单克隆抗体制备技术及临床应用的研究进展

1975年Kohler和Milstein建立了杂交瘤技术,将小鼠骨髓瘤细胞与产生绵羊红细胞抗体的小鼠脾细胞融合,形成的杂交瘤细胞既能产生抗体又能进行分裂繁殖,且产生的抗体只能识别一种抗原决定簇,称为单克隆抗体,单克隆抗体经历了鼠源性、人源性和全人化抗体三个阶段。     

利用转基因技术制备人抗体及其临床应用

1975年Ｋ ｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ首次成功制备了单克隆抗体 (简称单抗 ) [1 ] ,随后这一新技术迅速地被应用于医学等生命科学的各个领域。在临床医学中的应用主要见于炎症 ,肿瘤 ,移植 ,多器官衰竭等多种疾病的检测、诊断与治疗[2 ] 。迄今单抗用于疾病的诊断已经比较成熟 ,然而由于单抗的鼠源性问题使得其在疾病治疗方面受到一定限制 ,没有大的突破。近年随着基因工程技术的发展 ,利用该技术改造鼠源单抗或制备人抗体 ,已取得一定进展。本文对此作一简述。一、单克隆抗体研究概况在基因工程人源化单抗或人抗体的研制中有三条技术路线 …     

在使用杂交瘤技术制备纯化单克隆抗体中应用BALB/c小鼠的几点体会

自 1975年英国剑桥大学分子生物学研究室的Kohler和Milstein创立杂交瘤单克隆抗体技术以来 ,该技术的应用和推广为所有制备和使用特异性抗体的研究提供了全新的手段和制剂[1] 。采用何品系的动物进行免疫 ,是获得高质量单克隆抗体的一个关键。我们在使用杂交瘤技术制备纯化的单克隆抗体过程中 ,多次应用了BALB c品系的小鼠 ,并对不同周龄和性别的小鼠产生单克隆抗体的能力进行了对比观察 ,现将体会介绍如下。1　材料与方法1.1　实验动物　北京种 7～ 13周龄BALB c小鼠 ,按 7～ 8周龄、9～ 10周龄、11～ 13周龄分组。1.2　试剂　降植烷pr…     

抗钙调素单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备及鉴定抗钙调素单克隆抗体。方法 以碳化二亚胺法将钙调素—卵清蛋白偶联物作为免疫原，采用常规免疫方法免疫BALB／C小鼠，杂交瘤技术制备抗牛脑钙调素单克隆抗体。酶联免疫吸附法(ELISA)检测，应用硫酸铵盐析法和离子交换层析法进行抗体纯化。分别采用免疫印迹、免疫酶斑点法鉴定抗钙调素单克隆抗体的性质。结果 脾细胞与骨髓瘤细胞的融合率为85％。阳性克隆率为0．35％，获得两株动物钙调素单克隆抗体，抗体效价为1：1000，对钙调素有较强的专一性。结论 此研究制备出了高特异性、高亲和力及高效价的抗牛脑钙调素单克隆抗体。     

人脑肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

用事故死亡者脑组织中提纯的人脑肌酸激酶（ＣＫ－ＢＢ）对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行免疫，应用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞分别与２种骨髓瘤细胞（ＮＳ－１，６５３）融合，筛选得到８株能稳定分泌ＩｇＭ抗体的杂交瘤细胞。对分泌抗体经酶联免疫电泳转移试验（Ｗｅｓｔ－Ｂｌｏｔ）进行了鉴定，其中４种抗体能特异地与ＣＫ－ＢＢ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳带结合。提示这些单克隆抗体有可能应用于肌酸激酶的结构功能研究和临床检查中。     

风疹病毒单克隆抗体的制备

目的 制备用于研究风疹病毒（ＲＶ）生物学特性及血清学应用的特异性ＭｃＡｂ。方法 ＨＶ抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,无菌取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合建立杂交瘤细胞,并对杂交瘤细胞产生抗体特性及相应ＭｃＡｂ进行了分析。结果 成功建立了三株稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞５Ｄ５、５Ｇ５、２Ｆ７,染色体数目均大于９８条;相应ＭｃＡｂｓ均属ＩｇＧ１。与纯化ＲＶ抗原有强阳性反应。结论 该法可产出高特异性、高亲和力ＲＶ特异性ＭｃＡｂ。     

抗人生长激素单克隆抗体的制备及特点分析

人生长激素(hGH)是垂体前叶分泌的重要激素,但有关其结构与功能的关系、抗原决定簇的数目及位置、受体结合位点以及不均一性的来源和意义等问题至今尚未解决。抗hGH单克隆抗体(McAb)不仅是研究上述问题的有用工具,而且还可用于建立更为快速、灵敏,特异和准确的GH新免疫分析法,以提高有关疾患的诊治水平。本实验用微量免疫法获得四种抗整分子hGH McAb,并对其特性进行了较详细的研究。     

HCG特异的10株单克隆抗体的研制

用杂交瘤技术获得１０株ＨＣＧ特异的单克隆抗体（简称单抗）。其中，２６ＡＧ只与全ＨＣＧ反应而不与ＨＣＧ－α或ＨＣＧ－β反应，其余９株与全ＨＣＧ和ＨＣＧ－β反应而不与ＨＣＧ－α反应。放射免疫试验（ＲＩＡ）表明这１０株单抗与ＬＨ及ＦＳＨ无显的交叉反应。３０ＡＧ及３４ＡＧ与＾１２５Ｉ－ＨＣＧ的结合可被标准ＨＣＧ抑制，这两株单抗与ＨＣＧ的亲和力均约２×１０＾９Ｌ／Ｍ。１０株单抗均而反复６次冻融，除３３ＡＧ     

McAb制备及其表达系统的研究进展

现介绍5种常用的单克隆抗体(McAb)制备技术,即杂交瘤技术、嵌合抗体制备技术、噬菌体抗体库技术、转基因小鼠制备抗体技术和核糖体展示技术,并对这5种技术的优缺点进行分析。阐述并比较了McAb制备所依赖的表达系统,其中包括细菌表达系统、酵母和丝状真菌表达系统、昆虫杆状病毒表达系统、植物表达系统和哺乳动物表达系统。最后,展望了McAb未来的发展前景及其在生物技术和疾病诊断方面上的应用。     

治疗性单克隆抗体研究新进展

治疗性单克隆抗体的快速发展在人类以肿瘤为主的多种疾病的治疗方面发挥至关重要的作用。为了降低鼠源抗体引起的超敏反应,治疗性单克隆抗体已由改型抗体,人源化抗体发展到全人抗体。随着生物技术的不断发展,相信人源化单克隆抗体的前景会越来越广泛。     

抗乳腺癌单抗的制备及应用

目的：制备抗人乳腺癌单克隆抗体（McAb),用于临床肿瘤的免疫病理诊断与分型研究,为药物导向诊断和治疗奠定基础。方法：以乳腺癌细胞系ZR75免疫Balb/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。用免疫荧光、免疫组化和免疫印迹法研究其识别抗原特性。结果：获得恒定分泌抗ZR75的杂交瘤细胞系BM109。单抗BM109属IgC1类型,其识别抗原是分子量为37KD的蛋白性抗原,主要表达在靶细胞膜上。在乳腺癌的免疫反应率为86.7%（26/30）,与胃癌、食管癌、卵巢癌等6种肿瘤的免疫反应率为9.5%（4/42）,而对乳腺纤维瘤、囊性增生症和周围正常乳腺组织未见阳性反应。结论：获得1株较特异的抗乳腺癌单克隆抗体,该McAb对乳腺癌特异性高,对其他肿瘤交叉反应较小,可望进一步用于乳癌的诊断治疗以及发生发展的研究。     

血吸虫单克隆抗体的研究进展

Verwaerde等(1979年)采用感染的大鼠脾脏作为免疫细胞的来源,制备了抗血吸虫抗原的单克隆抗体,用免疫荧光法显示这些抗体能与血吸虫童虫表膜起强烈反应。在2份培养的上清液中测得IgE抗体,该种IgE抗体显示高滴度(1/256)的被动皮肤过敏反应活性。在5份培养上清液中测得对童虫有补体依赖的细胞毒作用的抗体。在4份标本中测出IgG2a抗体,此种抗体对童虫有明显的嗜酸性粒细胞依赖的细胞毒作用,与感染35 d鼠免疫血清的细胞毒水平一致。Taylor等(1982年)用小鼠骨髓癌细胞(NS-1)与血吸虫慢性感染或注射照射尾蚴免疫的小鼠脾细胞融合,建立了41株克…     

单克隆抗体在狂犬病预防治疗中的研究进展

体液免疫是机体对抗病毒感染的自然选择之一,抗狂犬病毒(RV)抗体在狂犬病的预防和治疗中都发挥着重要作用。现在,抗RV抗体已由传统的多克隆免疫球蛋白过渡到各种单克隆抗体(mAb)、基因工程抗体,抗RV糖蛋白mAb主要应用于RV接触后预防及治疗中,其辅助狂犬病早期诊断,抗RV糖蛋白不同表位的mAb联合应用比多克隆免疫球蛋白更具优越性。目前,抗RV糖蛋白mAb在狂犬病治疗中还面临着很多困难,如血脑屏障的生理性阻隔、难以清除寄生在神经元细胞内部的病毒等。现就mAb在狂犬病预防治疗中的研究进展予以综述。     

抗旋毛虫单克隆抗体竞争酶联免疫吸附试验的建立及初步应用

作者选用1株高特异性抗旋毛虫单克隆抗体2G_8B_(10)H_2,建立了单克隆抗体竞争酶联免疫吸附试验(competitive ELISA,简称cELISA),并进行了初步应用。结果表明:20只日本大耳兔在感染旋毛虫后17天有35％呈现阳性,31天全部阳性.对其中5只感染兔的血清终点滴度观察了142天,了解特异性抗体的变化规律.该规律为病程估计提供了线索。另外,其他蠕虫感染兔血清29份无1例假阳性发生。可以认为,单克隆抗体cELISA是一种灵敏、特异的旋毛虫病免疫诊断方法。     

抗hnRNP B1单克隆抗体的制备与鉴定

目的　建立分泌抗不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hn RNP) B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对分泌的单克隆抗体进行免疫学鉴定。方法　用人工合成的19肽hn RNP B1作为免疫原,采用皮下多点注射及腹腔注射方法免疫BAL B/ c小鼠,取其脾细胞与SP2 / 0小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞采用间接EL ISA法筛选。结果　获得稳定分泌抗hn RNP B1单克隆抗体的杂交瘤细胞2株。EL ISA法检测腹水效价为1∶1.8×10 5,免疫组织化学染色法显示该单克隆抗体特异性强。结论　成功构建hn RNP B1单克隆抗体抗体杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体对肺癌的诊断具有较好的特异性。     

影响大鼠单克隆抗体生产的因素

通过筛选的抗肝癌3A5抗体的杂交瘤细胞,在不同周龄、不同性别的Lou/c-Igk-1b大鼠腹腔接种,生产单克隆抗体,结果表明,在20周龄腹水生产量达到最大值,性别之间差异不显著。本实骑证实单抗腹水生产量与动物的性别及个体太小有相关关系。这一结果表明对于最有效地利用实验动物最大量的生产单克隆抗体提供了依据。     

单抗药物组织交叉反应中不同免疫组织化学方法的比较性研究

目的通过两种不同类型的单克隆抗体药物贝伐单抗和美罗华,探讨免疫组织化学常规二步法和直接法在人体组织交叉反应中的应用。方法免疫组织化学常规二步法采用相应二抗,通过底物酶显色,显示单克隆抗体药物与相应组织的结合情况。直接法采用标记后的单克隆抗体药物,通过生物素-链霉卵白素系统放大后显色,显示单克隆抗体药物与相应组织的结合情况。结果贝伐单抗采用直接法,其结果特异性和敏感性均高于常规二步法。美罗华直接法不能有效地显示该抗体与相应组织的结合,而常规二步法的结果特异性和敏感性均表现良好。结论不同类型单克隆抗体适合不同的免疫组织化学方法,最佳的实验方法是在尽可能减少背景性染色的同时,采用最低的浓度即能显示单克隆抗体与人体组织的特异性结合。