雷公藤甲素增强5-FU对肝癌细胞SMMC7721诱导凋亡作用的实验研究

目的 观察雷公藤甲素(triptolide,TPL)、5-FU对肝癌细胞SMMC 7721增殖及凋亡的影响;探讨TPL能否增强5-FU对SMMC 7721细胞的诱导凋亡作用.方法 SMMC 7721细胞置于RPMI-1640培养液+10%胎牛血清中培养;MTT法测定5-FU、TPL对SMMC 7721细胞的增殖抑制效果...     

雷公藤内酯醇对肝癌H22细胞增殖凋亡及COX-2表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇(TPL)对肝癌H22细胞增殖、凋亡及环氧合酶-2(COX-2)表达水平的影响. 方法 以体外培养的鼠源性H22细胞株为研究对象,实验分对照组和不同浓度的TPL处理组.MTT比色法测定TPL对H22细胞株增殖抑制情况;TPL处理48 h后,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,流式细胞术间接免疫荧光双标记法检测COX-2表达变化情况. 结果 随着药物浓度的增加及时间的延长,TPL能明显抑制H22细胞增殖.TPL诱导细胞凋亡及下调COX-2的表达具有浓度依赖性,不同浓度组比较,差别具有统计学意义(P<0.05). 结论 TPL可能通过诱导肝癌H22细胞凋亡及抑制COX-2表达发挥抗肿瘤作用.     

雷公藤内酯醇抑制胰腺癌细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的：探讨雷公藤内酯醇（TL）对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法：胰腺癌细胞SW1990与TL共同孵育,采用MTT法观察TL对胰腺癌细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪AnnexinⅤ/碘化丙啶（PI）双染法检测TL对SW1990细胞的凋亡的诱导作用和对细胞周期的干预作用。结果：TL抑制SW1990细胞增殖和促进细胞凋亡,呈现为浓度和时间依赖性,TL阻滞胰腺癌细胞周期于G0/G1期。结论：TL能抑制胰腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡及干预胰腺癌细胞周期,TL具有潜在的肿瘤治疗作用。     

单用雷公藤内酯醇及联合硼替佐米对霍奇金淋巴瘤细胞株作用的对照研究

目的 观察单用雷公藤内酯醇（TPL）及联合硼替佐米（PS-341）对霍奇金淋巴瘤细胞株L428的作用及机制探讨.方法 采用MTT比色法检测TPL、PS-341对L428细胞株体外生长的抑制作用;并予Annexin V和PI双染色,周期分析检测细胞凋亡;同时采用Western-blot法检测PS-341、TPL对L428细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3、9及PARP蛋白表达水平的影响.结果 TPL可明显抑制L428细胞增殖,且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关,以PS-341（80 ng/m1）联合TPL5～500 ng/ml处理L428细胞24h时的抑制作用优于单用TPL的作用;PI的DNA染色及AnnexinV-PI双标记法结果显示：细胞凋亡率与TPL作用浓度呈正相关;TPL作用L428细胞后,随浓度的增加,Bcl-2蛋白表达下调,而Bax蛋白表达上调;Caspase-3、Caspase-9和PARP蛋白均可出现明显的剪切带.结论 （1）TPL可能通过线粒体途径和改变Bcl-2家族抗凋亡因子和促凋亡因子的蛋白表达比例,诱导L428细胞凋亡;（2）PS-341能增强TPL诱导L428细胞凋亡的作用.     

TPL与5-FU联合作用对人结肠癌HT-29细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究雷公藤内酯醇(TPL)与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响。方法:常规培养HT-29细胞,MTT比色法检测不同浓度TPL与5-FU单独或联合应用对HT-29细胞的增殖抑制率,透射电镜在亚细胞结构形态上证实凋亡细胞,流式细胞学定量分析凋亡细胞比例,免疫细胞化学分析突变型P53、bcl-2蛋白表达的变化。结果:①TPL与5-FU单独应用均能抑制HT-29细胞的增殖,且在一定范围内存在浓度依赖性。两药联合作用最高增殖抑制率最高达到(94.92±2.76)%,48 h凋亡率达(41.71±1.38)%。②TPL与5-FU在低剂量联合应用时对HT-29细胞增殖抑制作用有协同效应(CI<1),其机制可能为促进细胞凋亡。③与对照组比较,TPL与5-FU单独应用及联合应用后HT-29细胞突变型P53蛋白表达率均有显著降低,而bcl-2蛋白表达没有明显变化。结论:TPL与5-FU在小剂量联合应用时为协同效应,可能通过下调突变型P53蛋白诱导凋亡从而抑制细胞生长。本结果对于结肠癌的治疗具有一定的临床意义。     

雷公藤内酯醇抗肿瘤作用研究进展

雷公藤内酯醇是从卫矛科植物雷公藤中分离出的环氧化二萜内酯化合物，对多种肿瘤细胞均有很好的杀伤作用，其主要作用机制是通过抑制细胞增殖、干预细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制核因子NF-κB、抑制基质金属蛋白酶（MMP）的表达、影响血管形成等多种途径来诱导肿瘤细胞凋亡。     

化疗药物不同配伍诱导人胰腺癌细胞株细胞凋亡

目的通过对临床常用化疗药物５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）、丝裂霉毒（ＭＭＣ）、卡铂（ＣＢＰ）、阿霉素（ＡＤＭ）和表阿霉素（Ｅ－ＡＤＭ）相互配伍诱导人胰腺癌细胞株细胞凋亡的观察,探讨化疗药物抑制胰腺癌细胞生长的作用机制,为临床制定合理的化疗方案提供理论依据。方法不同配伍的化疗药物作用于胰腺癌细胞后,以倒置显微镜和荧光显微镜观察其形态变化;以流式细胞仪检测细胞ＤＮＡ含量的变化,计算出凋亡细胞的比例;提取细胞ＤＮＡ,进行凝胶电泳确定细胞凋亡的发生。结果联合化疗可以诱导胰腺癌细胞凋亡,与引起细胞坏死相比,诱导肿瘤细胞凋亡的化疗药物剂量小、作用时间短;随作用时间的延长和药物剂量的增加,凋亡细胞的比例也增加;不同配伍的化疗药物诱导不同胰腺癌细胞株细胞发生凋亡的情况是不完全相同的。结论诱导肿瘤细胞凋亡是化疗药物抑制胰腺癌细胞生长的主要机制,能否诱导胰腺癌细胞发生凋亡可作为判断不同配伍的化疗药物抑制胰腺癌细胞生长能力的重要指标之一。     

雷公藤内酯醇体内外抗肿瘤作用

目的 研究雷公藤内酯醇(TPL)的体内外抗肿瘤作用.方法 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测TPL对多种肿瘤细胞生长的抑制作用;不同浓度TPL(25,50及100 ng/mL)处理HL-60细胞24 h后,Annexinv-FITC/PI荧光染色法检测凋亡率,分光光度法检测细胞caspase-3酶活化程度;建立S180、U14、B16小鼠移植肿瘤模型进行体内实验,观察TPL体内抗肿瘤活性.结果 TPL对MCF-7、HI-60、MGC-803、HepG-2、U266、Ca-46、Hela等多种人肿瘤细胞均有很强的生长抑制作用,其IC50分别为34.37,5.51,31.95,6.31,9.74,26.96及9.75ng/mL;TPL实验组凋亡细胞百分率显著上升,caspase-3酶活化程度明显升高;对S180、U14、B16等小鼠肿瘤均有明显抑制作用,抑制率分别达到61.0%,41.8%及58.0%.结论 TPL体内体外均有较强抗肿瘤作用,其机制与激活caspase-3诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

雷公藤甲素对糖尿病脑大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察雷公藤甲素（Triptolide,TPL）对糖尿病脑缺血再灌注大鼠脑组织细胞凋亡的影响。方法通过HE染色、TUNEL、RT-PCR、免疫组化等方法,观察TPL对糖尿病脑缺血再灌注大鼠脑组织形态学改变、细胞凋亡及survivin基因mRNA和蛋白的表达。结果 TPL可以明显改善糖尿病大鼠脑组织病理形态改变。与模型组相比,TPL可显著减少大鼠脑组织凋亡细胞,survivin基因的表达明显增加。结论 TPL对糖尿病脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与调控survivin基因的表达有关。     

RNAi抑制胰腺癌细胞survivin表达并诱导细胞凋亡的实验研究

目的构建RNAi表达载体,并分析其对胰腺癌细胞PANC-1 survivin表达的抑制作用。方法用免疫荧光技术和RT-PCR检测胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达,并把survivin基因克隆到T载体进行测序,构建针对survivin基因的干扰载体,用脂质体转染胰腺癌细胞PANC-1,RT-PCR、western-blot分析干扰载体对survivin表达的抑制情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果survivin在胰腺癌细胞PANC-1中高表达,其基因序列与GenBank中公布的一致,干扰载体pTZU6＋1-svv2可以有效的抑制survivin的表达,抑制率约为74％,并诱导了肿瘤细胞的凋亡。结论用RNAi表达载体可以有效抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达并诱导胰腺癌细胞凋亡。     

雷公藤甲素对裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用及其机制

目的：观察雷公藤甲素对人胰腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用,探讨其作用的分子机制。方法：选择健康BALB/c裸鼠于右后肢皮肤移植人胰腺癌SW1990细胞,建立裸鼠荷瘤模型,将建模成功的裸鼠分为模型组、吉西他滨组和雷公藤甲素组,每组10只,另选10只健康裸鼠作为对照组。测量各组SW1990胰腺癌荷瘤裸鼠体质量,取肿瘤组织称质量,计算肿瘤抑制率;采用免疫组织化学法检测各组裸鼠胰腺组织中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况;采用Western blotting法检测各组裸鼠胰腺组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-9和Caspase-3表达水平。结果：与吉西他滨组比较,雷公藤甲素组SW1990胰腺癌的肿瘤抑制率明显升高（P<0.05）。HE染色观察,与模型组比较,雷公藤甲素组裸鼠胰腺癌肿瘤细胞增殖受到抑制。免疫组织化学检测,与模型组比较,雷公藤甲素组裸鼠胰腺组织中Bcl-2表达水平和Bcl-2/Bax比值明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测,与模型组比较,雷公藤甲素组裸鼠胰腺组织中Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,而Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：雷公藤甲素能抑制裸鼠肿瘤组织的生长,其机制可能与抑制胰腺肿瘤组织中Bcl-2的激活、促进Bax的表达、降低Bcl-2/Bax的比值、促使Caspase-9和Caspase-3激活及诱导胰腺癌移植瘤细胞凋亡有关。     

雷公藤甲素对大肠癌细胞细胞周期的调控作用

目的:观察雷公藤甲素对大肠癌SW480细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:体外培养大肠癌SW480细胞,分别给予不同浓度的雷公藤甲素进行干预,采用四甲基耦氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度药物对SW480细胞生长的抑制率,流式细胞术(FCM)测定SW480细胞周期及凋亡率变化。结果:MTT实验结果显示当药物浓度在20～100 mol/L之间时,体外雷公藤甲素可明显抑制SW480细胞的生长;FCM检测显示药物作用后,细胞凋亡率没有明显变化,但是S期细胞数目显著增多,细胞周期受到明显阻滞。结论:雷公藤甲素对细胞生长有明显的抑制作用,呈现时效-量效关系,其机制可能是使细胞周期发生阻滞。     

Re-expression of cell adhesion molecule inhibits growth and induces apoptosis of human pancreatic cancer cell line PANC-1

This study examined the expression of cell adhesion molecule 1 (CADM1) in pancreatic cancer and the possible mechanism.The expression of CADM1 was detected by immunohistochemistry in tissues of pancrea...     

雷公藤内酯醇联用甘草次酸的药代动力学研究

目的 探讨甘草次酸对雷公藤内酯醇在大鼠体内的药代动力学行为的影响. 方法 将SD大鼠随机分为雷公藤内酯醇单独给药组和雷公藤内酯醇与甘草次酸联合给药组,分别通过尾静脉注射雷公藤内酯醇0.2 mg/kg,采用液相色谱-质谱法(LC-MS),选择离子检测(SIM)的方式测定2组大鼠不同时间血浆中的雷公藤内酯醇浓度,比较2组在大鼠体内的药代动力学行为. 结果 在0.2～250 ng/mL质量浓度范围内,血浆中雷公藤内酯醇线性良好.定量下限为0.2 ng/mL,日内和日间精密度RSD均<12.0％,准确度为90％～105％,绝对回收率>80％,基质效应>90％,血浆样品的稳定性良好.药代动力学数据显示,联合给药组的最大血药浓度(cmax)、消除半衰期(t1/2)、平均滞留时间(MRT0～180 min)、血药浓度|时间曲线下面积(AUC0～180 min)分别是单独给药组的0.75,2.51,1.15及1.39倍,其中t1/2、MRT0～180 min在2组间的差别有统计学意义(P<0.05). 结论 甘草次酸与雷公藤内酯醇联用可降低雷公藤内酯醇的峰浓度,延长其体内滞留时间,从而提高其大鼠体内的生物利用度;该测定方法简便、效率高、重复性好,符合生物样品分析的基本要求.     

莫诺苷通过抗氧化应激保护雷公藤甲素所致肝细胞凋亡

目的观察具有抗氧化应激活性的环烯醚萜苷化合物莫诺苷对雷公藤甲素（TP）诱导的肝损伤的保护作用及其分子机制。 方法雷公藤甲素,莫诺苷分别单独及联合给药小鼠及人肝癌HepG2细胞后,血清学法测定各组小鼠肝生化指标的变化;MTT 法检测各实验组对HepG2细胞生长抑制率的影响;激光共聚焦显微镜观察各组细胞形态的变化;流式细胞术检测各组细胞凋亡 率;WB法检测氧化应激通路中关键蛋白的表达。结果动物实验表明雷公藤甲素具有很明显的肝脏损伤作用,小鼠血清中肝 生化指标及肝脏指数的水平显著升高（P<0.05）;细胞实验则表明其抑制了HepG2 细胞的生长,24 h 细胞的生长活性仅为 72.83%,并随时间增长而降低。细胞凋亡明显,细胞核破裂皱缩,24 h细胞凋亡率高达43.1%。此外,氧化应激通路相关蛋白 Nrf2,HO-1 的表达明显降低。而莫诺苷联合用药后逆转了以上实验指标,使得小鼠中肝生化指标及肝脏指数显著下降（P< 0.05）,肝细胞的凋亡率,细胞形态及氧化应激相关通路蛋白的表达都得到了明显改善（P<0.05）。结论莫诺苷可保护雷公藤甲 素诱导的肝损伤,其机制可能与抗氧化应激有关。     

雷公藤内酯醇对小鼠H22腹水瘤细胞凋亡及PD\|L1表达的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇诱导H22腹水瘤细胞凋亡以及作用机制。 方法 采用腹腔注射肝癌H22细胞建立小鼠腹水瘤模型,80只成模小鼠随机分为对照组、雷公藤内酯醇低、中、高剂量(0.05, 0.1, 0.2 mg/kg)组,每组20只。观察小鼠体质量变化、生存期; 计量腹水体积及计数腹水内肿瘤细胞数; 流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡及程序性死亡受体-配体1(PD-L1)表达的变化。 结果 与对照组比较,雷公藤内酯醇3个剂量组小鼠的体质量增长缓慢,生存期中位数均有显著延长(P<0.01); 雷公藤内酯醇低、中、高3个剂量组的腹水体积以及每毫升中的肿瘤细胞数均显著低于对照组(P<0.05); 流式细胞术检测结果显示,不同剂量的雷公藤内酯醇可以显著诱导H22细胞凋亡并下调H22细胞PD-L1的表达(P<0.05,P<0.01)。 结论 雷公藤内酯醇可能通过诱导肝癌H22细胞凋亡及抑制PD-L1表达,发挥抗肝肿瘤的作用。