p38丝裂素活化蛋白激酶信号转录对IL-1β诱导肾小管细胞转分化的影响

目的　探讨 p38MAPK信号转导途径对IL 1β诱导肾小管上皮细胞转分化的影响及其导致的功能改变。方法　以培养的人近端肾小管上皮细胞 (HK 2 )为研究对象 ,给予IL 1β(10ng/ml)刺激 2 4h ,在阻断实验中加入SB2 0 35 80阻断 p38通路。采用蛋白印记杂交法检测 p38MAPK的磷酸化程度 ;细胞表型特征检测包括细胞形态变化、标志蛋白 (角蛋白、α SMA)的表达及分布、细胞增殖、黏附和移行能力。结果　 (1)IL 1β刺激 6～ 4 8h可使α SMA表达上调 ,刺激 2 4h可使角蛋白表达减弱、α SMA分布紊乱 ,但细胞形态变化不明显 ;(2 )IL 1β在 5min时可使p38激活达高峰 ,较基础水平升高 2～ 3倍 (P <0 0 5 ) ;至 12 0min时 p38则呈持续激活状态 ;(3)p38阻断剂 (SB2 0 35 80 )对HK 2细胞α SMA的基础表达有抑制作用 ,抑制率 37 13% (P <0 0 1) ;同时可明显抑制IL 1β刺激的α SMA表达 ,抑制率 4 7 0 7% (P <0 0 0 1) ;(4)IL 1β及 p38阻断剂并不影响HK 2细胞之间的黏附能力 ,但IL 1β可使细胞的移行能力增强 (P <0 0 1) ,而 p38阻断剂可明显抑制其移行能力。IL 1β并不影响HK 2细胞增殖。结论　IL 1β可以激活肾小管上皮细胞p38/MAPK ,并可使其发生表型转化 ,这一作用部分通过 p38信号通路所介导。     

烧伤大鼠肾脏p38激酶活化和TNF-α含量变化

目的探讨严重烧伤大鼠休克期肾脏组织p38MAKP活化水平以及血浆和肾组织TNF-α含量水平变化。方法清洁级成年雄性Wistar大鼠88只,随机分为对照组,烫伤组和SB组(烫伤+SB203580组,SB203580为p38MAPK特异性抑制剂),正常对照组(0h)8只;烫伤组和SB两组各48只,后两组又分为1、3、6、12、24h五个时相点,用Westernblotting方法检测肾脏组织p38MAKP的活化水平,放射免疫法检测血浆及肾脏组织TNF-α的含量变化。结果烫伤组伤后1h肾组织p38活化水平明显增多,3h达峰值(与对照组比较,P<0.05),6h后活化量明显减少,血浆和肾脏组织TNF-α含量在伤后6h开始增加,12h达峰值(与对照组比较,P<0.05),24h仍较高、未恢复正常,SB组上述指标要比烫伤组显著减少(P<0.05)。结论大鼠严重烫伤后1h肾组织p38MAPK活化明显增加、3h活化水平达峰值,从伤后6h开始血浆和肾脏组织TNF-α的含量水平增加明显、12h为最高,说明p38的活化在肾脏损伤中起到十分重要的作用。     

p38MAPK在沙土鼠脑缺血再灌注海马神经元损伤中的作用

目的　探讨p38MAPK在沙土鼠脑缺血再灌注损伤海马神经元中的作用。方法　采用沙土鼠双侧颈动脉阻断前脑缺血模型 ,随机分成假手术组 (sham组 )、缺血再灌注组 (IR组 )、对照组 (control组 )、SB2 0 2 190组及P7935 0组 ,后 3组分别侧脑室注射 1%DMSO、p38MAPK特异性抑制剂SB2 0 2 190和激动剂P7935 0。每组根据再灌注时间不同再分为 1天、3天和 5天 3个亚组 ,每亚组 6只动物。在预定时间点行开阔法行为学检查 ,显微镜下计数海马CA1、CA3区存活神经元数目 ,TUNEL法检测CA1区凋亡细胞。结果　SB2 0 2 190可以显著减少沙土鼠再灌注 3天、5天的探索活动 ,增加存活海马神经元数目 ,减少CA1区神经元的凋亡 (P <0 .0 5 ,vsIR组 ) ;而P7935 0可以显著增加沙土鼠再灌注 1天、3天、5天的探索活动 ,减少海马CA1、CA3区存活神经元数量 ,增加海马CA1区神经元的凋亡 (P <0 .0 5 ,vsIR组 )。结论　抑制p38MAPK的激活可以减轻脑缺血再灌注引起的海马神经元损伤。     

高糖刺激人脐静脉内皮细胞丝裂素活化蛋白激酶P38的表达

目的：探讨丝裂素活化蛋白激酶P38（P38MAPK）在糖尿病血管并发症中的作用。方法：采用体外培养和Western-blot等方法，以不同浓度D－葡萄糖及不同时间刺人脐静脉内皮细胞系，分别检测人脐静脉内皮细胞系P38MAPK的蛋白表达。结果：随D－葡萄糖浓度增加，P38MAPK磷酸化蛋白表达量增加；延长刺激时间，P38MAPK磷酸化蛋白表达量亦随之增加。结论：高糖引发的P38MAPK表达异常，可能在糖尿病血管并发症的发生、发展中起关键作用。     

肾性高血压大鼠肥大心肌丝裂素活化蛋白激酶的表达

目的　探讨丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)在肾性高血压致心肌肥大中的作用。方法　制作肾性高血压大鼠动物模型为实验组 ,观察术后第 4周、8周动脉血压、心肌肥大指数及心肌组织MAPK表达的改变 ,并与对照组进行比较。结果　实验组大鼠术后第 4周、8周动脉血压持续升高、心肌肥大逐渐加重 ,第 4周、8周心肌MAPK表达分别显著高于对照组 (P<0 .0 5和P <0 .0 1)。结论　MAPK表达增强可能是肾性高血压时各种细胞外刺激因素介导心肌肥大发生的重要途径     

p38MAPK在细胞凋亡中的作用

丝裂素活化的蛋白激酶(mitogen-activated pro-tein kinase,MAPK)级联是细胞内重要的信号转导系统,参与细胞的生长、发育、分化和凋亡等一系列生理病理过程。在哺乳动物中,细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)亚族最先被发现和克隆,并已进行了比较详细的研究。近年来又鉴定了c—Jun氨基末端激酶(c—Jun N—ter-minal kinase,JNK),ERK5/大丝裂素活化蛋白激酶 l     

大鼠正常血糖脑缺血及高血糖脑缺血时p38MAPK的表达

目的探讨p38MAPK与脑缺血及高血糖脑缺血损害的关系。方法实验大鼠随机分为3组:(1)高血糖脑缺血组(简称高血糖组,20只),于脑缺血术前30min尾静脉注射25%葡萄糖(4g/kg);(2)正常血糖脑缺血组(简称正常血糖组,20只),于脑缺血术前30min尾静脉注射等量18%D-甘露醇;(3)手术非缺血性对照组(10只)。采用双侧颈动脉结扎和放血法在高血糖组和正常血糖组制造全脑缺血模型,通过免疫组织化学技术与Western blot免疫印迹技术对比检测缺血30min,再灌注1、3、6h各时间点脑组织p38MAPK表达。结果对照组海马CAI区、CAIII区,未见p38MAPK阳性神经元;免疫组化在CAI区和CAIII区,在缺血30min,再灌注13、、6 h不同时间点高血糖组阳性细胞数与正常血糖组比较差异无统计学意义(P>0.05);Western blot检测可见正常血糖组和高血糖组脑缺血30min,再灌注1、36、h时激活的p38MAPK蛋白明显增加,高血糖组灰度比值(分别为7.25±1.91、8.64±2.41、9.58±2.98、12.00±3.01)与正常血糖组(分别为6.68±1.51、7.92±1.75、8.34±2.00、9.02±2.27)比较,p38MAPK差异无统计学意义(P>0.05)。结论脑缺血再灌注时p38MAPK被激活,参与缺血性损伤的发生,但高血糖并不能明显增加p38MAPK的总量,故在高血糖加重脑缺血性损伤中p38MAPK可能不发挥主要作用。     

白脉软膏对脑缺血大鼠脑组织p38 MAPK及GAP-43蛋白表达影响的实验研究

目的通过观察脑缺血后白脉软膏对大鼠脑组织p38MAPK及GAP-43蛋白表达的影响,探讨白脉软膏对脑组织的神经保护作用。方法60只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、缺血组、白脉干预组,大脑中动脉线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型,分别于1、3、7、14d处死动物,采用免疫组织化学法观察各组脑组织p38MAPK和GAP-43蛋白的表达。结果p38MAPK缺血组的表达在7、14d分别为178．2±18．7、164．8±21．5,显著高于白脉组的153．2±21．9、120．2±18．6（P〈0．01）;GAP-43白脉组的表达在7、14d分别为62．2±6．4、55．0±7．6,也显著高于缺血组的35．7±4．0、33．0±3．7（P〈0．01）。结论白脉软膏可调节脑缺血后p38MAPK和GAP-43的表达,并与损伤时间的变化有一定相关性,提示白脉软膏可能与损伤后神经元的再生、修复有关,有进一步研究的价值。     

卡托普利对大鼠心肌组织丝裂素活化蛋白激酶表达的影响

目的　探讨卡托普利对肾性高血压大鼠心肌组织丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)表达的影响。方法　复制二肾一夹高血压动物模型作为实验组 ,术后 4周开始给予卡托普利者作为治疗组 ,以未进行二肾一夹者为对照组。术后 8周测定动脉血压、心肌肥大指数及心肌组织MAPK的表达。结果　与对照组相比 ,实验组动脉血压及心肌肥大指数显著升高 ,MAPK表达显著增强 (P <0 .0 1) ;卡托普利显著降低心肌MAPK的表达。结论　心肌MAPK表达增强可能是血管紧张素II介导的心肌肥大信号转导通路中的重要环节。     

IgA肾病患者肾组织中丝裂素活化蛋白活化与肾小管上皮细胞转分化的关系

目的　检测IgA肾病患者肾小管上皮细胞中丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)不同亚类蛋白质表达及磷酸化水平的变化 ,初步探讨MAPK各亚类在体内对肾小管上皮细胞转分化的调控作用。方法　 36例住院IgA肾病患者的肾活检标本 ,分为轻度系膜增生组、局灶增生组和增生硬化组。采用普通病理染色和免疫组织化学技术 ,观察各组肾组织中肾小管和间质的病理改变、肾小管间质损伤指数、增殖细胞核抗原 (PCNA)和纤连蛋白 (FN)在肾小管、α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)在肾小管和间质表达的变化 ,并应用非磷酸化和磷酸化激酶的特异抗体检测肾组织内MAPK(包括ERK、JNK和p38)的表达及活化情况。结果　随着肾小球病变程度的加重 ,肾小管间质损伤指数增加。肾小管上皮细胞的PCNA阳性率逐渐增高 ;其中增生硬化组的PCNA阳性率是正常对照组的 2 38倍 (P <0 0 1) ,α SMA表达阳性的肾小管上皮细胞明显增多 ,局灶增生组和增生硬化组的肾小管α SMA表达阳性率均显著增高 (P <0 0 5 )。FN在肾间质的表达增加 ,α SMA表达阳性率与FN表达阳性率和肾间质纤维化程度呈正相关。正常人肾组织中MAPK各亚类均有基础表达 ,IgA肾病患者肾组织中MAPK各亚类的表达部位与正常人相似 ,肾小管ERK和JNK活化程度随肾小球病变程度的加重而逐渐增加 ,以增生     

黄芪对哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶表达的影响

目的 探讨支气管哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶（p38 MAPK）表达的变化以及黄芪注射液对其影响。方法 应用鸡卵清蛋白（OVA）腹腔注射致敏和反复超声雾化吸入刺激复制大鼠哮喘模型。随机分成3组：正常对照组、哮喘模型组和黄芪干预组。分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液（BALF）IL-5含量和肺组织磷酸化p38MAPK表达的变化,并观察BALF中EOS计数以及肺组织病理学变化。结果哮喘模型组大鼠肺组织磷酸化p38MAPK表达水平及BALF中IL-5含量和EOS计数均较正常对照组显著增加（P〈0．01）;黄芪干预组的上述改变较哮喘模型组显著降低（P〈0．01）,肺组织病理学损伤程度明显减轻。肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平与BALF中IL-5含量和EOS计数之间分别呈显著正相关（r=0．73,0．65,P〈0．01）。结论 p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程,黄芪对哮喘的治疗作用可能部分与抑制磷酸化p38 MAPK的表达有关。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在糖尿病肾脏疾病中的研究进展

p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)是MAPK信号通路中重要的信号转导分子,是细胞信号传递的交汇点或共同通路,可被磷酸化为p-p38MAPK而激活,参与细胞增殖、生长、分化及凋亡等多种细胞行为的调控。最近的研究显示,p38MAPK信号转导通路可能通过调节转化生长因子β1的转录与合成,调节炎性因子的表达,活化环腺苷酸反应原件结合蛋白等转录因子,加重肾脏的炎症和纤维化进程,从而加速糖尿病肾病进程。     

p38丝裂原活化蛋白激酶与骨代谢

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)是机体广泛表达的丝氨酸/酪氨酸激酶,在哺乳动物细胞多种信号转导通路中起重要作用。p38MAPK信号通路是MAPK通路的一个重要分支,在细胞增殖、分化、凋亡和细胞周期调控等多种生理和病理过程中发挥重要作用。近年来,有关p38MAPK信号通路在与骨代谢相关的破骨细胞、成骨细胞、软骨细胞生长、代谢及功能方面的研究倍受关注。本文就 p38MAPK与骨代谢相关研究进展进行综述,旨在探讨p38MAPK在骨代谢相关疾病中的作用机制。     

地塞米松对哮喘患者外周血单个核细胞p38MAPK表达的影响

目的探讨支气管哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs)p38MAPK表达的变化及地塞米松(DEX)对其的影响。方法分离培养哮喘患者和正常健康者的PBMCs。分别采用蛋白质印迹和ELISA方法检测PBMCs核蛋白p38MAPK的表达及细胞上清液中IL -4、IL- 5的蛋白质浓度。结果哮喘对照组PBMCs核蛋白p38MAPK表达及细胞上清液中IL -4、IL- 5的蛋白质浓度较正常对照组显著升高(P<0. 001),DEX处理组核蛋白p38MAPK表达及细胞上清液中IL- 4、IL- 5的蛋白质浓度较哮喘对照组显著降低(P<0. 01)。通过直线相关分析发现,PB MCs核蛋白p38MAPK表达与培养上清液中IL- 4、IL- 5蛋白质含量之间均呈显著正相关(r分别=0. 71、0. 64,P均<0. 01)。结论p38MAPK可能参与支气管哮喘的病理生理过程。DEX可能通过作用于p38MAPK这一靶点发挥其抗炎效应。     

p38 丝裂原活化蛋白激酶在炎症微环境作用下对牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在慢性牙周炎组织来源的牙周膜干细胞中的表达及其对炎症微环境作用下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法 2012年10月至2013年5月收集中国人民解放军总医院口腔科因治疗需要拔除的无龋前磨牙及慢性牙周炎牙齿,培养正常及炎症微环境下的牙周膜干细胞(H-PDLSCs,P-PDLSCs)。采用酶联免疫吸附试验及实时定量PCR检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的分泌及基因表达量,免疫荧光检测p38在细胞内的表达,Western blot法检测两种细胞成骨诱导7 d后p38及磷酸化p38(p-p38)的表达。使用p38 MAPK特异性抑制剂SB-203580干扰后体外成骨诱导7 d,实时定量PCR检测细胞成骨关键基因Runx2和碱性磷酸酶(ALP)的基因表达水平,成骨诱导21 d后茜素红染色检测PDLSCs的矿化结节形成情况。结果 P-PDLSCs的TNF-α和IL-1β分泌量均显著高于 H-PDLSCs(68.80±6.70比34.10±3.07,P=0.001;57.10±4.23比26.90±2.58,P=0.000)。P-PDLSCs中TNF-α的基因表达水平较H-PDLSCs上升1.4倍(P=0.011),IL-1β的基因表达水平也上升1.7倍(P=0.009)。P-PDLSCs的p38表达量高于H-PDLSCs;成骨诱导后两种PDLSCs 中的p-p38表达均升高,但p38表达水平有所降低。SB-203580干扰后PDLSCs 的Runx2和ALP表达水平显著降低(H-PDLSCs:P=0.044、0.036;P-PDLSCs:P=0.017、0.004),矿化结节形成数量减少。结论 在慢性炎症微环境中,p38 MAPK参与细胞的炎性反应,抑制p38后炎症微环境作用下PDLSCs的成骨分化能力也被显著抑制。     

p38MAPK信号通路与心脏重构关系的研究进展

心脏重构是一种常见的病理生理状态,包括心肌肥厚及间质纤维化,是各种心血管疾病发展为慢性心功能不全、心力衰竭的重要环节,由多种体内外刺激因素通过启动细胞内共同信号转导通路而促发/激活。有研究表明,p38丝裂原蛋白活化激酶(MAPK)激活参与心脏重构并在其中起着重要作用,用特异性抑制剂阻断该信号通路可明显减轻心脏重构。该文就p38MAPK对心脏重构重要环节影响的研究进展予以综述。     

Electroacupuncture Attenuates Spinal Nerve Ligation-Induced Microglial Activation Mediated by p38 Mitogen-Activated Protein Kinase

Objective

To investigate whether analgesic effect of electroacupuncture (EA) is affected by p38 mitogen-activated protein kinase (p38 MAPK) on microglia.

Methods

There were two experiments. The experiment 1: 40 male Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into the normal, surgery, EA and sham EA groups, and the L5 spinal nerve ligation (SNL) on the right side was used to establish neuropathic pain model. EA was applied to bilateral Zusanli (ST36) and Kunlun (BL60) at 24, 48 and 72 h after SNL for 30 min, once per day. The paw withdrawal thresholds (PWTs) were measured before surgery (as base) and at 24, 25, 49 and 73 h after surgery. Phospho-p38 MAPK (p-p38 MAPK), oxycocin-42 (OX-42, marker of microglia), and glial fibrillary acidic protein (GFAP, marker of astrocyte) in bilateral spinal cord dorsal horn (SCDH) were detected by immunofluorescence, respectively. The experiment 2: 40 male SD rats were cannulated for SNL-induced neuropathic pain, and then were randomly divided into the dimethyl sulfoxide (DMSO), EA plus DMSO, 4-(4-fluorophenyl)-2-(4-methylsulfonylpheny)-5-(4-pyridyl)-1H-imidazole (SB203580) and EA plus SB203580 groups. SB203580 (30 nmol/L) was administered 5 min prior to EA treatment. The PWTs and OX-42 in bilateral SCDH were measured as mentioned above.

Results

SNL-induced neuropathic pain reduced PWTs and increased the expression of p-p38 MAPK and OX-42 in bilateral lumbar SCDH of rats (P<0.01). Spinal p-p38 MAPK was only co-localized with OX-42 in our study. EA treatment significantly alleviated SNL-mediated mechanical hyperalgesia, and suppressed the expression of p-p38 MAPK and OX-42 in lumbar SCDH (P<0.05 or P<0.01). Intrathecal injection of low dose SB203580 had no influence on PWTs (P>0.05), but significantly inhibited the expression of OX-42 positive cells in bilateral SCDH (P<0.01 or P<0.05). EA plus SB203580 synergistically increased PWTs, and reduced the expression of bilateral spinal OX-42 (P<0.01 or P<0.05).

Conclusions

The central mechanism of EA-induced anti-hyperalgesia may be partially associated with the reduced expression of p-p38 MAPK, and subsequently reducing the activation of OX-42 in neuropathic pain. Therefore, EA may be a new complementary and alternative therapy for neuropathic pain.

     

脊髓p38丝裂原活化蛋白激酶对神经痛大鼠热痛觉过敏影响的研究

目的:观察脊髓p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的激活对神经病理性疼痛大鼠热痛觉过敏的影响,探讨神经痛的机制。方法:40只雄性SD大鼠,建立坐骨神经结扎性损伤(CCI)疼痛模型,随机分成五组,对照组、SB 0.1μg组、SB0.5μg组、SB2.5μg组和SB5μg组,(n=8),CCI后7 d,鞘内注射5%二甲基亚砜或不同剂量的p38 MAPK抑制剂SB203580(0.1μg、0.5μg、2.5μg、5μg)10μL,在给药前和给药后0.5 h、3 h、6 h、12 h、24 h,用热辐射刺激仪测定大鼠术侧后爪热缩足反射潜伏期(TWL)。另24只大鼠随机分为假手术组、CCI组、溶媒对照组和SB203580组(n=6),分别于假手术后7d、CCI后7 d、CCI后7 d鞘内注射5%二甲基亚砜后第6 h或SB203580 5μg后第6 h取材脊髓,用免疫组织化学方法观察脊髓背角磷酸化p38 MAPK表达的变化。结果:鞘内注射SB203580剂量依赖性地延长了TWL(P<0.05或P<0.01),SB203580同时抑制脊髓背角磷酸化p38 MAPK的表达。结论:脊髓p38 MAPK的激活参与了CCI...     

The Relationship between p38MAPK and Apoptosis during Paclitaxel Resistance of Ovarian Cancer Cells

To investigate the relationship between p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) and cell apoptosis during the paclitaxel resistance of ovarian carcinoma cell lines, flow cytometry (FCM) and PI staining were employed to determine the effect of p38MAPK inhibitor SB203580 on the apoptosis of A2780/Taxol cells, a drug-resistant human ovarian carcinoma cell line. p38MAPK protein expression in SB203580-treated cells was immunochemically measured. The 50% inhibition concentration (IC50) of paclitaxel on A2780/Taxol cells was determined by MTT assay. MDR-1 mRNA, and expression of p38MAPK and phospho-p53 protein were detected by RT-PCR and West- ern blotting, respectively. The apoptosis rate of A2780/Taxol cells was (19.7±1.04)% 24 h after SB203580 treatment. A significant difference in apoptosis rate was found among experiment group, control group and untreated group (P<0.05). The relative reversal rate of A2780/Taxol cells to pacli- taxel was (57.18±2.01)%. As compared with the control group and the untreated group, p38MAPK protein and MDR-1 mRNA in SB203580-treated cells was substantially decreased. The expression of p53 protein was significantly increased. It is concluded that p38MAPK pathway is related to pacli- taxel resistance of ovarian carcinoma, and blockade of this pathway can promote the apoptosis of the drug-resistant cells and reverse the drug-resistance. Moreover, p38MAPK-mediated apoptosis in pa- clitaxel-resistant ovarian carcinoma cells depends on the activation of p53.