癌症新策略-let-7microRNA家族

microRNA是近年发现的一类单链小分子RNA，对它的研究已成为一个新的热点。let-7基因编码的stR—NA则被认为是miRNA的代表，最近的研究发现，let-7miRNA在细胞内影响着基因的表达调控，在疾病发生中起着及极重要的作用，尤其是在肿瘤的发展过程中，let-7miRNA扮演着不可替代的角色。本文介绍let-7miRNA在肿瘤中作用机制的最新研究进展。     

microRNA let-7与肿瘤

微小RNA(miRNA)是一类长18～25个核苷酸的非编码小分子RNA,能与靶mRNA的3′UTR碱基配对,通过抑制mRNA的翻译或直接使mRNA降解,在转录后水平使基因沉默。miRNA调节的基因调控机制与肿瘤的发生、发展密切相关。Let-7是目前研究最为广泛的miRNA之一。在多种肿瘤中,let-7表达下调,提示let-7必然与肿瘤存在一些重要的联系。本文就对let-7的生物学特性、作用机制与肿瘤的关系及其在肿瘤治疗方面的潜在作用进行综述。     

胰腺癌组织miRNA let-7a与HMGA2的表达及血清miRNA let-7a水平对胰腺癌的诊断价值

  目的  探讨胰腺癌组织中miRNA let-7a、高迁移率族蛋白2（high mobility group A2,HMGA2）的表达情况及血清miRNA let-7a水平在胰腺癌中的诊断价值。  方法  回顾性收集我科2014年1月?2019月1月行手术治疗的60例胰腺癌患者术中获得的新鲜胰腺导管腺癌组织及癌旁正常胰腺组织,同时收集胰腺癌患者手术前后血清标本,并收集同期于我院体检的60例体检结果正常者的血清标本作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测健康体检者及患者血清标本miRNA let-7a表达,癌组织、癌旁正常组织miRNA let-7a和HMGA 2 mRNA表达,Western blot法检测患者癌组织、癌旁正常组织HMGA2蛋白的表达。分析血清miRNA let-7a水平,癌组织miRNA let-7a、HMGA2 mRNA 表达与胰腺癌临床病理特征的关联,并用受试者工作特征曲线分析术前血清miRNA let-7a水平对胰腺癌的诊断价值。  结果  与癌旁正常组织相比,胰腺癌组织中miRNA let-7a表达水平下降（t=20.291,P<0.01）,HMGA2 mRNA表达上升（t=46.681,P<0.01）;癌组织HMGA2蛋白表达较癌旁正常组织增高（t=22.973,P<0.01）。miRNA let-7a在胰腺癌患者血清中的表达较健康对照者降低（t=24.854,P<0.01）;在胰腺癌患者术后1周血清中miRNA let-7a相对表达量较术前下降（t=6.885,P<0.01）;癌组织与术前血清中miRNA let-7a表达量呈正相关（r=0.411,P=0.000）。胰腺癌中miRNA let-7a、HMGA2 mRNA水平在不同TNM分期及有无淋巴结转移间差异均有统计学意义(P<0.05)。以术前血清miRNA let-7a诊断胰腺癌的曲线下面积为0.823,95%置信区间为0.665~0.917,取0.614为最佳临界值,对应的灵敏度为82.3%,特异度为74.1%。  结论  胰腺癌组织和血清miRNA let-7a均出现下调,可能通过调控HMGA2的表达参与肿瘤的侵袭和转移;血清miRNA let-7a水平可为胰腺癌的诊断及术后病情监测提供一定的参考。     

喉癌相关miRNA的研究进展

喉癌是耳鼻咽喉头颈外科常见的肿瘤之一,其发病机制尚未完全明确.研究发现,微小RNA (miRNA)在喉癌的发生过程中发挥着重要的作用.miRNA的表达异常(如miR-106b-25和miR-21等的上调,miR-375和let-7a等的下调)与喉癌的发生有关.在喉癌组织中异常表达的miRNA为喉癌的诊断提供了新标志物,而相关miRNA更是为喉癌治疗提供了潜在的靶点.     

Lin28基因功能的研究进展

Lin28是一种高度保守的RNA结合蛋白,可以与miRNA家族中let-7家族的前体RNA的终末环相结合,并阻断let-7的成熟过程。Lin28/let-7通路参与了干细胞的功能及肿瘤的发生。将Lin28、OCT4、SOX2、NANOG转入成人的体细胞中,可以将其逆分化为多能干细胞。Lin28/Lin28B高表达的肿瘤多呈现低分化,预后较差。     

创伤性脑损伤患者脑组织中miRNA let-7i水平变化及其临床意义

目的 探讨创伤性脑损伤患者脑组织中miRNA let-7i水平变化及其临床意义。方法 选取金华市人民医院收治的创伤性脑损伤患者105例为病例组,分为轻度组35例、中度组56例、重度组14例; <24h组20例、≥24h且≤72h组45例、>72h组40例以及死亡组20例、存活组85例;同期选择于金华市人民医院行脑血管瘤切除术的患者76例为对照组。测定创伤性脑损伤脑组织及正常脑组织miRNA let-7i水平以及IL-4、IL-8、IL-12、IFN-γ、TNF-α、hs-CRP水平。结果 病例组miRNA let-7i水平高于对照组(P<0.05);随着脑损伤严重程度的增加,miRNA let-7i水平逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);随着脑损伤时间段的延长,miRNA let-7i水平逐渐增加(P<0.05);死亡组miRNA let-7i水平高于存活组(P<0.05);病例组血清 IL-4、IL-8、IL-12水平高于对照组(P<0.05);病例组血清中TNF-α、hs-CRP均高于对照组,IFN-γ低于对照组(P<0.05);miRNA let-7i与IL-4、IL-8、IL-10、TNF-α、hs-CRP正相关关系明显(P<0.05);高水平的miRNA let-7i、GCS、TNF-α均为创伤性脑损伤患者发生死亡的危险因素(P＜0.05)。结论 创伤性脑损伤患者脑组织中miRNA let-7i水平升高,其与脑损伤严重程度及脑部炎症反应密切相关;高水平的miRNA let-7i为创伤性脑损伤患者发生死亡的危险因素。     

let-7与尤文肉瘤关系的研究进展

尤文肉瘤是儿童及青少年最为常见的恶性骨肿瘤之一,也是尤文肉瘤家族肿瘤(Ewing's sarcoma family of tumors,ESFT)中的重要一员.好发于四肢长骨的骨干,以股骨、胫骨及肱骨最多见,少数发生在干骺端及骨骺.儿童及青少年时期是发病的高峰期,早期症状主要是病变局部的疼痛和肿胀,该病具有恶性程度高、病程短、转移率高、复发快的特点.随着现代诊疗技术的进步,病灶较小的患者,其生存率虽然可以达到70％左右,但高达30％的复发率仍然制约了治疗效果[1],如何进一步提高疗效是目前亟待解决的问题.肿瘤的生物治疗是目前研究的热点,了解尤文肉瘤的发生、发展机制是生物治疗有效实施的前提.let-7是microRNA (miRNA)中的一个大家族,在哺乳动物的细胞分化过程中发挥重要的作用,且具有高度保守性.有研究[2]发现,let-7在多种肿瘤组织中出现不同程度的表达降低,且与肿瘤的恶性生物学特性密切相关,参与调控肿瘤的发生、发展.本文就let-7与尤文肉瘤相关性的研究进展作一综述.     

细胞周期蛋白25A在非小细胞肺癌中的表达及与Let-7关系

目的 明确细胞周期蛋白25A（CDC25A）在NSCLC组织中的表达及与临床病理特征的关系,并探讨其与miRNA let-7a1、let-7c表达的相关性。方法 收集53例肺组织手术标本,其中包括NSCLC组织44例,收集其癌组织和癌旁正常组织（病理证实）,和良性肺疾病组织9例。免疫组化Elivision法检测CDC25A蛋白的表达;用Trizol法提取总RNA,采用荧光定量RT-PCR检测CDC25A mRNA的表达,加尾法荧光定量RT-PCR检测let-7a1和let-7c mRNA的表达。结果 CDC25A蛋白表达的阳性率在NSCLC组织明显高于癌旁正常组织和良性肺疾病组织（P<0.05）。NSCLC组织中CDC25A蛋白的表达与年龄、性别、病理类型、肿瘤分化程度、临床分期无关（P>0.05）,与吸烟、淋巴结转移相关（P<0.05）。CDC25A mRNA在NSCLC组织中的表达量明显高于癌旁正常组织和良性肺疾病组织（F=6.33,P<0.05）,在癌旁正常组织和良性肺疾病组织中表达无明显差异（P>0.05）。Pearson 相关分析显示CDC25A与let-7c在NSCLC组织和癌旁正常组织中表达均呈明显负相关（r 癌组织=-0.42,r 癌旁正常组织=-0.40）,与let-7a1之间无明显相关。结论 CDC25A在NSCLC组织表达水平明显增高,且与let-7c表达呈明显负相关,推测CDC25A可能是let-7c的下游靶基因。     

MicroRNA let-7i对脂多糖诱导的树突状细胞及亚群功能的影响

目的探讨miRNA let-7i对脂多糖诱导的树突状细胞及亚群功能的影响。方法在LPS诱导DC成熟过程中,用miRNA let-7i抑制剂进行干预,然后用RT-PCR检测miRNA let-7i的表达水平;流式细胞仪分析DC的表型;用免疫磁珠将let-7i抑制剂处理的DCs分成两组:CD86+DC和CD86-DC,分别与T细胞共培养,观察CD86+DC和CD86-DC对T细胞增殖的影响;通过ELISA检测CD86+DC和CD86-DC分泌的细胞因子IL-10,IL-12和TNF-α的水平。结果转染miRNA let-7i抑制剂明显降低了LPS刺激的DC表面CD80和CD86的表达。LPS刺激的DCs伴随let-7i下调可分为两个亚群:CD86+DC和CD86-DC,且CD86-DC能更有效地诱导调节性T细胞的增多和抗炎症细胞因子的增多,并使促炎症细胞因子减少。结论抑制miRNA let-7i可以诱导DCs中CD86-DCs的表达,进而导致免疫耐受。     

let-7a1和let-7c在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨人类微小RNA let-7a1和let-7c在肺癌组织中的表达及与临床病理特征之间的关系。方法收集53例肺组织手术标本及临床资料,其中包括肺癌组织44例（收集其癌组织和癌旁正常组织）和良性肺疾病组织9例。并收集病人吸烟史、肿瘤TNM分期、病理分化程度及有无淋巴结转移等。采用Trizol法提取总RNA,采用荧光定量PCR检测let-7a1和let-7c的表达,分析其在肺癌组织、癌旁正常组织及良性肺疾病组织中的表达差异及与临床特征的关系。结果肺癌组织中let-7a1和let-7c的相对表达量均低于癌旁正常组织和良性肺疾病组织（P < 0.05）;癌旁正常组织中let-7a1和let-7c的相对表达量均低于良性肺疾病组织（P < 0.05）。let-7a1表达与分化程度、吸烟和TNM分期有关（P < 0.05~P < 0.01）,与淋巴结有无转移无关（P>0.05）。let-7c表达与淋巴结转移、分化程度有关（P < 0.01）,与吸烟、TNM分期无关（P>0.05）。结论let-7a1和let-7c基因在肺癌组织中相对表达量降低,并且随临床分期进展、淋巴结转移呈明显下降趋势,提示两者与肺癌的发生、发展及转移密切相关,let-7a1和let-7c可能成为肺癌早期诊断生物标志因子,并可能成为肺癌的靶向治疗新的靶点,为高危人群的早期干预提供实验依据。     

原花青素上调let-7a抑制胰腺癌AsPC-1细胞生长及迁移

目的探讨原花青素是否通过上调let-7a表达而抑制胰腺癌细胞生长及迁移。方法体外培养人胰腺癌AsPC-1细胞,原花
青素处理细胞后,分别用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染及Transwell迁移等实验检测细胞增殖率、细胞凋亡率及细胞迁移能
力的改变;利用miRNA实时逆转录PCR检测细胞内let-7a表达变化。AsPC-1细胞转染let-7a mimics后,MTT法、Transwell迁
移实验分别检测细胞增殖率及细胞迁移能力的改变。结果与对照组相比,原花青素处理AsPC-1细胞后,细胞增殖率、细胞迁
移能力随着原花青素浓度升高而下降,而细胞凋亡率随着药物浓度升高而逐渐升高。与对照组相比,原花青素处理细胞后,
let-7a的表达升高。通过脂质体转染let-7a mimics后,细胞的增殖率及迁移能力均低于对照组,且let-7a mimics 与原花青素共
同作用后,细胞增殖及迁移明显低于let-7a mimics和原花青素单独作用组。结论原花青素具有抑制胰腺癌细胞生长、迁移,及
诱导细胞凋亡的作用。原花青素可能是通过上调let-7a表达,从而抑制胰腺癌细胞的生长及迁移。
     

没食子鞣质,1,3,4-三-O-没食子酰基-6-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖,抑制人肝癌HepG2细胞的增殖和调控miRNA的表达（英文）

目的 miRNA在细胞的增殖,分化和凋亡中起重要作用。1,3,4-三-O-没食子酰基-6-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖(BJA32515)是从日本蛇菰中分离的天然多酚化合物,该化合物对肿瘤细胞的增殖和miRNA的影响未见报道。本文旨在研究BJA32515对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用以及对miRNA表达的影响。方法采用CCK-8的方法检测HepG2细胞的增殖;用流式细胞法检测HepG2细胞的凋亡;采用miRNA芯片分析方法测定HepG2细胞的miRNA表达以及用RT-PCR的方法验证miRNA的表达。结果 BJA32515以时间和剂量依赖的方式抑制HepG2细胞的增殖,并促进细胞的凋亡。miRNA芯片结果显示,BJA32515能诱导HepG2细胞33个miRNA的表达上调以及59个miRNA的下调。RT-PCR结果也证实BJA32515可诱导let-7a和miR-29a的上调以及miR-373和miR-197的下调,与芯片分析的结果一致。结论BJA32515抑制HepG2细胞增殖的作用机制与miRNA的表达调控有关。     

当归挥发油对自发性高血压大鼠心肌组织中微小RNA差异表达谱的影响

目的：探讨当归挥发油对自发性高血压大鼠（SHRs）心肌组织中微小RNA（miRNA）表达谱的影响,阐明当归挥发油发挥作用的可能机制。方法：将SHRs分为模型组、卡托普利组和当归组,取同周龄的正常Wistar大鼠作为对照组,采用无创套尾法测定大鼠尾动脉收缩压,给药4周后,采用Affymetrix miRNA 4.0 芯片测定心肌组织中miRNA表达谱,采用京东基因与基因组百科全书（KEGG）富集法分析差异表达的miRNA靶基因。结果：给药前模型组大鼠收缩压明显高于对照组（P < 0.05）,连续服药1~4周后,卡托普利组和当归组大鼠收缩压明显低于模型组（P < 0.05）。与模型组比较,当归组大鼠差异表达的miRNA29个,其中表达上调的miRNA13个（Ratio>2.0,P < 0.05）,表达下调的miRNA16个（Ratio<0.5,P < 0.05）。KEGG富集分析,miR-19a、 let-7i和miR-181c与胰岛素信号通路有关联（P < 0.05）,let-7i 、miR-181a和miR-455与血管内皮生长因子（VEGF）信号通路调控有关联（P < 0.05）,miR-122、miR-181a、miR-200b、miR-181c、let-7i和miR-19a与细胞凋亡有关联（P < 0.05）。结论：当归挥发油可降低SHRs血压 ,对SHRs心肌组织中miRNA表达谱产生影响,可能通过调节胰岛素信号通路及VEGF信号通路相关miRNA发挥血压调节作用。     

5-杂氮-2＇-脱氧胞苷对肺癌细胞小分子RNA let-7a-2表达的影响

目的：观察去甲基化药物对人肺癌A549和H1299细胞增殖、凋亡以及小分子RNA let-7a-2表达的影响.方法：以不同浓度的5-杂氮-2＇-脱氧胞苷（DAC）对肺癌细胞进行处理后,CCK-8检测对细胞增殖的影响,AnnexinV-PI双染法检测对细胞凋亡的影响,qRT-PCR对let-7a-2的表达进行检测.结果：A549和H1299细胞经不同浓度DAC处理后细胞增殖受到明显抑制,以60μM浓度DAC处理后d5抑制率分别为（40.80±6.50）％和（47.24±4.95）％（均P＜0.05）,同时细胞呈现显著性早期凋亡,凋亡百分比分别达（64.58±4.21）和（59.61±5.69）（均P＜0.05）.20μM、40μM、60μM DAC处理后let-7a-2的表达量在A549中分别为（10.86±0.30）、（5.02±2.83）、（17.79±1.95）,比对照组（1.12±0.24）显著上调;在H1299中分别为（55.13±5.69）、（35.67±4.13）、（14.94±2.46）,比对照组（1.31±0.56）显著上调.结论：DAC处理可抑制肺癌A549和H1299细胞增殖、促进细胞凋亡,上调let-7a-2的表达,let-7a-2基因调控区域超甲基化可能是其在肺癌细胞中表达异常的机制之一.     

Lin28的功能研究进展

Lin28是一种高度保守的RNA结合蛋白,在let-7的转录调节过程中起重要的负性调控作用,可以抑制let-7的 加工合成。Lin28促进胚胎干细胞的快速增长,参与干细胞的增殖,在肿瘤干细胞的形成中发挥重要作用。Lin28在多 种肿瘤组织或肿瘤细胞系中高表达,可以促进肿瘤细胞的增殖和肿瘤的进展,与患者预后不良有关。另外Lin28能够 促进组织修复。     

miRNA let-7a靶向抑制ACVR1B表达

目的：探讨miRNA let-7a对ACVR1B表达的影响。方法：生物信息学分析表明activin receptor type 1B（ACVR1B）是一个let-7a的潜在靶基因。构建ACVR1B 3’UTR野生型（ACVR1B 3’UTR-WT）和ACVR1B 3’UTR突变型（ACVR1B 3’UTR-MUT）双荧光素酶报告载体,分别与let-7a模拟物（let-7a mimic）或let-7a阴性对照（let-7a NC）共同转染HEK293T细胞,通过双荧光素酶报告系统检测各组细胞的荧光素酶活性。分别转染let-7a mimic、let-7a inhibitor和let-7a NC至HEK293T细胞,采用qRT-PCR和Western blot分别检测ACVR1B的mRNA和蛋白表达水平。结果：ACVR1B 3’UTR含有let-7a潜在的高度保守的结合靶点（77～83位点）。在HEK293T细胞中共转染ACVR1B 3’UTR-WT报告载体的let-7a mimic组比let-7a NC组荧光素酶活性组明显降低（P＜0.05）;而共转染ACVR1B 3’UTR-MUT报告载体的let-7a mimic与let-7a NC组其荧光素酶活性差异无统计学意义（P＞0.05）。在HEK293T细胞中let-7a mimic转染组中ACVR1B的mRNA和蛋白水平均低于let-7a NC组和let-7a inhibitor组（P＜0.05）。结论：ACVR1B是let-7a潜在调控的靶基因,miRNA let-7a可以直接抑制HEK293T细胞中ACVR1B基因的表达。