英研制出用基因扫描辨别胚胎中遗传疾病的新技术

英国科学家研制出了一种更迅速而有效地利用基因扫描辨别胚胎中遗传疾病的方法。这一新技术将使具有高遗传病基因的配偶双方,能够利用试管婴儿技术确保只生育健康的婴儿。现在,科学家们只需要从可能存在遗传病基因的父母双方、他们的其他孩子甚至亲属身上提取样品,依照已知的测     

人胚胎干细胞的培养条件与鉴别的方法学研究

目的：研究人胚肺成纤维细胞(human Embryonic Lung Fibroblast，HELF)饲养层对人胚胎干细胞(Human Embryonic Stem Cells，hES细胞)生长的作用，摸索适宜的hES细胞培养与识别方法。方法：以流产胎儿肺组织制备HELF饲养层，取生殖嵴或背肠系膜及其周围组织，获得由人原始生殖细胞(human Primordial Germ Cells，hPGCs)转化成的hES细胞。比较其在不同条件下的增殖行为，并通过生物学特性鉴别该细胞系。结果：HELF饲养层在LIF存在的条件下有利于支持hES细胞的体外生长；hES细胞碱性磷酸酶组织化学染色及端粒酶ELISA检测阳性；具有正常的核型；在体外发展为类胚体。结论：HELF饲养层和LIF的协同作用能支持hES细胞的生长；建立通过生物学特性鉴别hES细胞的方法。     

新的DNA指纹鉴别技术可以分离出大麻

印度大麻的纤维可用于织布且种子极具营养价值，而大麻则是美国滥用最严重的非法药物，2种都属于Cannabis satjva。印度大麻和大麻的四氢大麻酚（Tetrahydrocannabinol；THC）含量不同，四氢大麻酚是大麻类植物对于神经系统造成影响的主要物质，除此之外，这2种大麻难以区别。据美国BIOCOMPARE科技新闻网（2006／3／27）报道，2名明尼苏达大学的研究人员利用新的DNA指纹鉴别技术，以基因标记清晰地分离出印度大麻（Hemp）或大麻（Marijuana）。     

精液优化后置时间与受精时间对胚胎质量的作用评价

目的探讨精液优化后置时间与体外受精时间对胚胎质量评价。方法 61个IVF周期,共获卵610枚:实验组:200枚卵子,精液优化后2h制作精子微滴加入培养后卵子,待2h后将拆除部分颗粒细胞的受精卵转移至新鲜的受精微滴皿中,培养14h-16h;对照组:410枚卵子,常规精液优化后2h,制作精子微滴加入培养后卵子,培养受精16h-18h。两组均在次日拆蛋,观察原核及受精情况,受精66h-72h观察其卵裂,并进行胚胎评分,比较两组的受精率、卵裂率、可利用胚胎率、优质胚胎率。结果实验组的受精率、卵裂率、可利用胚胎率分别为:77%、96.1%、59.5%;对照组为:74.6%、94.1%、53.4%;两组受精率、卵裂率、可利用胚胎率比较结果无统计学差异,P0.05。但实验组中可利用胚胎率较高于对照组;实验组的优质胚胎率为:53.4%较对照组43.4%高,统计学比较有显著性差异P0.05。结论降低精液优化后置时间和缩短受精时间不仅不影响胚胎的受精率、卵裂率;且会提高胚胎的可利用胚胎率、优质率,延伸临床的种植潜能,增加患者周期妊娠率。     

第二极体排出时间早晚与受精率、胚胎质量的关系

目的探讨第二极体(PB2)排出时间早晚与受精率、胚胎质量的关系。方法选择2012年11月~2013年10月在广东省第二人民医院生殖医学科行常规体外受精周期的患者,于授精后的4h观察PB2排出情况,4h内排出PB2为A组,4h内未排出PB2为B组。比较两组间的受精率、卵裂率、可利用胚胎率和优胚率。结果 1A组的受精率、两原核(two pronuclear,2PN)率显著高于B组(P0.05);但两组间的异常受精率、多精受精率和卵裂率无明显差异。2A组的可利用胚胎率及优质胚胎率显著高于B组(P0.05)。结论受精4h内排出第二极体的卵子的总受精率、正常受精率、可利用胚胎率及优质胚胎率显著高于4h内未排出第二极体的卵子,第二极体排出有助于预测体外受精结局。第二极体排出时间与胚胎质量存在一定关系,有助于预测胚胎的发育潜能。     

英研制出用基因扫描辨别胚胎中遗传疾病的新技术

据BBC中文网报道,英国科学家说,他们研制出了一种更迅速而有效地利用基因扫描辨别胚胎中遗传疾病的方法。这一新技术将使具有高遗传病基因的配偶双方,能够利用试管婴儿技术确保只生育健康的婴儿。     

胚胎性横纹肌肉瘤的电镜及免疫组化和鉴别诊断

本文报道了经光镜,电镜及免疫组比观察而确诊的8例胚胎性横纹肌肉瘤(ERMS),对照观察了不同分化的ERMS在光镜与电镜下的形态特征。结果发现:分化较好的ERMS光镜下可找列明确的横纹,电镜下一般易找到明显的肌节结构;低分化或未分化的ERMS中,在光镜下仔细寻找向横纹肌分化迹象的细胞,特别是小圆形横纹肌母细胞尤为重要。其形态特征为圆形或卵圆形,细胞质稍多,嗜酸性,核染色质粗,核仁明显,核膜清,其对诊断有重要意义。电镜下见不到典型肌节,但有或多或少的粗细肌丝,呈涡轮状排列,可见少许或不典型Z样物质,仔细寻找粗细肌丝横断面的六角点排列,对诊断有确定意义。本文讨论了在组织学上容易混淆的圆形细胞肿瘤的诊断及鉴别诊断和免疫组化肌红蛋白对RMS的诊断及鉴别诊断上的意义。     

STR图谱分析方法扩大用于人源细胞的鉴别研究

目的 采用短串联重复序列(STR)图谱分析的方法,建立本所细胞库中所有人源细胞的鉴别图谱,并进行细胞交叉污染及细胞误判现状分析的研究.方法 采用16个位点的STR图谱分析方法,检测本所细胞库中所有收集保存的及其他单位来源的共计61株人源细胞,并将STR图谱检测结果与目前国际细胞库公布的数据进行比对,分析细胞的正确性及交叉污染情况.对未检出信号的细胞株,采用同工酶法对细胞的种属进行鉴别.结果 被检测的61株细胞中,41株细胞呈现特征性STR图谱,不存在与其他细胞的交叉污染现象,其中36株细胞与ATCC或JCRB保存的同一名称细胞在相应的9个STR位点的数据完全一致,5株细胞均仅在vWA位点与ATCC数据不完全相同,可判定为正确细胞;7株细胞尚无国际可比对数据,但STR图谱特异,可认定为新建细胞.11株细胞(占18.0%)被鉴定为错误的细胞,其中舌癌细胞Tca8113及肝癌细胞HHCC(现更名为FHCC98)的STR图谱数据分别与HeLa及HeLa S3细胞的数据完全一致;2株HuT-102的数据与ATCC的数据完全不同;4株细胞未检测到信号,同工酶结果显示均为鼠源细胞;同时还发现2株细胞为交叉污染细胞.结论 细胞误判及细胞交叉污染现象较为严重,正确鉴别细胞,特别是对国内自建细胞重新鉴定,对保证科学研究的可信性及可重复性极为重要.     

癌胚抗原阴性的结、直肠癌检测和结直肠癌预后相关生物标记

目的探讨结直肠癌的发生、发展过程中患者血清质谱多肽蛋白图谱的变化,筛选与结直肠癌预后及癌胚抗原(CEA)阴性检测相关的肿瘤标记分子。方法用蛋白指纹图谱技术检测结直肠癌,结直肠管状腺瘤患者和健康者血清质谱多肽蛋白图谱。结果初步筛选出对结直肠癌有代表性的7个差异蛋白;2个与其淋巴结转移相关的差异蛋白;4个与其远处转移相关的差异蛋白;3个在其根治性切除后表达下降的差异蛋白;而由3398·3u、5477·1u和8453·9u组成的诊断模型对CEA阴性表达结直肠癌的阳性检测率为100%。结论蛋白指纹图谱技术可筛选出有意义的生物标记差异蛋白,这对结直肠癌预后判断、CEA阴性的结直肠癌检测和改变结直肠癌的进程具有重要意义。     

极小胚胎样干细胞的研究进展

近年来随着干细胞研究的进展,一些具有多向分化潜能的细胞群相继在成体中得到分离鉴别,如骨髓间充质干细胞(mes-enchymal stem cell,MSCs)[1],成体多能祖细胞(multipotent a-dult progenitor cells, MAPCs)[2],成体骨髓多向诱导细胞(mar-row-isolated adult muhilineage inducible,MIAMI)[3],以及非限制性体干细胞(unrestricted somatic stem cells, USSC)[4]等.     

竞争性PCR内参照菌的构建及应用

目的　建立一种构建竞争性PCR内参照菌的方法 ,并初步应用于铜绿假单胞菌 (Pseu domonasaeruginosa ,简称PA)的竞争性PCR定量检测。方法　通过整合载体pSX1 2和pUC19 attP tetr 将竞争模板插入大肠杆菌JM83染色体中 ,构建内参照菌JM83/16SN。以JM83/16SN作为内参照 ,建立PA竞争性PCR定量和半定量检测方法。结果　细菌质粒限制性酶切分析、药敏试验及染色体DNA指纹图谱分析证实竞争模板已插入到JM83/16SN染色体中。在竞争性PCR定量法中 ,得出定量回归方程y = 1 99x 14 0 5 (r= 0 97)。将 10倍系列稀释的PA标本作竞争性PCR半定量检测及定量培养 ,其结果存在良好的一致性。结论　通过整合载体可以将竞争模板插入大肠杆菌染色体中来构建内参照菌株。竞争性PCR半定量法可以简便、准确地测定标本中PA浓度范围     

STR图谱用于生物制品生产用人源细胞鉴别的研究

目的 研究短串联重复序列(STR)图谱鉴别方法在生物制品生产用人源细胞质量控制中的应用.方法 采用PCR-毛细管电泳分析方法,分别建立检测9个和16个人STR位点的方法鉴别人源细胞,并对来自不同生物制品生产单位、不同传代水平的病毒性疫苗生产用人二倍体细胞株及基因治疗制品生产用的293细胞进行STR图谱的检测和比较.结果 建立人源细胞株的STR图谱分析方法.13个单位提供的病毒疫苗生产用21株人二倍体细胞中,除1株细胞并非MRC-5细胞外,其他细胞均可认定为本细胞,且未发现交叉污染现象.而8个单位提供的12株基因治疗用293细胞的STR图谱则存在明显差异,提示该类细胞可能存在来源、基因修饰改造背景不清及传代过程中遗传特性不稳定的因素.结论 STR图谱分析灵敏度高、特异性强,可用于生产用人源细胞株/系间的鉴别.     

胚胎植入前遗传诊断技术的应用分析

过去20年间,胚胎植入前遗传检测(PGD)主要通过卵裂球活检结合聚合酶反应(PCR)或荧光原位杂交(FISH),对胚胎的单基因遗传异常,以及有限的染色体异常进行检测。近年来PGD的活检技术以及遗传检测技术都有巨大的提高。由于囊胚球分裂稳定性高,对胚胎干扰很小以及可提供的检测细胞多等特点,囊胚球活检在PGD中的应用逐渐受到重视。新兴的遗传检测方法,微阵列-比较基因组杂交(Array-CGH)以及单核苷酸多态性微阵列(SNP-array)技术使得同时检测24条染色体成为可能,并能以更高的精度检测小片段染色体的拷贝数变化、以及结构改变等。这使得PGD应用价值不仅在于可排除遗传异常胚胎,更可用于提高大龄生育、反复流产等不孕不育人群的受孕率。     

不同妊娠方式流产胚胎染色体异常发病率的调查

目的调查不同妊娠方式对胚胎染色体异常的发病率的影响。方法选择在同时期因自然流产而进行绒毛染色体检查患者标本42例,自然妊娠流产胚胎19例,染色体异常发病率（8／19）42．1％;辅助生殖技术治疗后流产23例,染色体异常发病率（12／23）52．1％。比较自然妊娠和辅助生殖技术治疗后流产绒毛染色体异常比率。结果经统计学处理,自然妊娠和辅助生殖技术治疗后流产绒毛染色体异常比率无显著差异。结论胚胎染色体非整倍体是造成自然流产的重要原因,不同妊娠方式流产胚胎染色体非整倍体发生率经统计学分析无显著差异。     

小鼠子宫内胚胎电转技术方法的改良

目的 优化小鼠子宫内胚胎电转技术,用于检测胎鼠大脑新生神经元的迁移和分化特征。 方法 通过选择异氟烷气体麻醉方式,改进毛细玻璃针的制备方法,减少手术中胚胎的暴露时间,优化电转参数等,对小鼠子宫内胚胎电转技术进行一系列优化。采用优化的子宫内胚胎电转技术给6只怀孕16.5 d的孕鼠进行了手术,共电转胚胎42只。 结果 电转后孕鼠和胚胎的存活率达到100%,其中大脑表达外源基因的胎鼠占85%±3%。 结论 优化的小鼠子宫内胚胎电转技术可以获得令人满意的胎鼠存活率和基因电转效率。     

揭示LSDl在胚胎干细胞分化中起关键作用的机制

据Whyte WA2012年2月1日（Nature,2012Feb1．doi：10．1038,naturel0805）报道,一种赖氨酸特异性去甲基酶1（1ysine-spec-ific demethylase 1,LSDl）在胚胎干细胞分化为其他细胞类型时发挥着关键性作用。 LSDl是一种组蛋白去甲基酶,作用在组蛋白H3特异性赖氨酸残基上,从而改变染色体DNA上基因转录。     

缺氧再灌注斑马鱼胚胎脑部细胞凋亡及c-fos基因的表达

背景：国外已经有学者使用斑马鱼胚胎开始进行缺氧再灌注的研究,但还没有关于c-fos基因在斑马鱼脑缺氧再灌注过程中的表达及其作用机制的报道。 目的：观察缺氧再灌注后斑马鱼胚胎脑部细胞凋亡及脑组织中c-fos基因的表达情况。 方法：取48 hpf的斑马鱼胚胎进行缺氧实验,模拟新生儿缺氧再灌注损伤环境,通过向水中通入99.999%高纯氮气制造缺氧环境,分别经过6,12,24 h的缺氧处理后,在正常氧体积分数下进行6 h恢复。对照组为正常通气组(溶解氧浓度在7.0 mg/L左右)。采用吖啶橙染色方法,观察不同缺氧时间对斑马鱼神经细胞凋亡的影响,同时采用实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR),对c-fos基因表达情况进行定量分析,比较缺氧再灌注前后c-fos基因表达水平的变化。 结果与结论：对照组脑部能检测到微量细胞凋亡,c-fos基因呈低水平表达;实验组经过6,12,24 h缺氧后,脑部凋亡细胞逐渐增多,缺氧24 h组凋亡细胞增幅最大(P < 0. 05),c-fos基因表达有不同程度升高(P < 0.05),尤其是缺氧6 h后,该基因的表达上调幅度最高。结果表明缺氧会导致斑马鱼脑细胞内c-fos基因表达上调,可能是导致缺氧后期脑细胞凋亡激增的机制之一。     

EZH2在胚胎干细胞和肿瘤方面的研究进展

PcG蛋白家族成员EZH2是PCR2复合物的催化活性亚单位,通过甲基化核小体组蛋白H3的27位赖氨酸残基,沉默下游基因。这些下游靶基因大部分具有抑制肿瘤发生和调控干细胞分化的作用,它们的沉默将导致肿瘤的发生和干细胞多向分化潜能障碍。EZH2介导的基因沉默机制和DNA甲基转移酶(DNMTs)以及组蛋白脱乙酰酶(HDACs)之间存在密切的联系。现就EZH2在胚胎干细胞、肿瘤研究和临床应用前景作一综述。     

反复胚胎种植失败患者的生育生活质量及相关因素

目的:探讨反复胚胎种植失败患者生育生活质量及相关因素。方法:选取江西省某三甲医院反复胚胎种植失败患者200例,采用生育生活质量量表(FertiQoL)、不孕症病耻感量表(ISS)、心理弹性量表(CD-RISC)进行调查。结果:FertiQoL总分为59.0 (25.0,88.1)分。多元逐步线性回归结果分析显示,无子女、不孕时长、ISS得分与Ferti QoL得分负向关联(β=-3.20、-2.44、-0.28),CD-RISC得分与Ferti QoL得分正向关联(β=0.24)。结论:反复胚胎种植失败患者生育生活质量与病耻感及心理弹性密切相关,病耻感水平越高、心理弹性水平越低患者生育生活质量水平越差。     

FISH应用于植入前遗传学诊断对高风险胚胎检测的研究

目的对固定好的单卵裂球进行FISH检测,在最短的时间内获得清晰可靠的信号,进行临床分析.方法选取发育不良的高风险胚胎分别进行分开变性和共变性后杂交的单细胞FISH,统计并分析其信号结果.结果共变性法信号获得率较分开变性法为高,并且信号获得率与变性方法相关(P=0.0486);共有9枚胚胎,42个卵裂球固定良好,其中二倍体信号36个,单倍体信号2个,21号染色体异常的胚胎为4︰9.结论初探分析人IVF废弃胚胎21号染色体异常几率较高.