野生型90β对热休克蛋白90β基因表达的调控作用

为了阐明野生型p53在热休克蛋白90β(hsp90β)基因表达调控中的作用,我们利用野生型p53的表达质粒转染Jurkat细胞,发现野生型p53可以剂量依赖方式抑制hsp90β基因的启动子活性,并且证实hsp90β基因的表达在mRNA和蛋白水平均明显减少.     

MHC Ⅱ类基因表达调控研究进展

目前认为ＭＨＣⅡ类基因的调节主要在转录水平上。已发现一系列作用于其启动子的转录因子,这些转录因子与染色体组蛋白及启动子保守序列交互作用影响ＭＨＣⅡ类基因的表达。其中,顺式作用元件与反式作用因子协同形成的蛋白—蛋白复合体起关键作用。本文对近年来在ＭＨＣⅡ类基因表达研究的长足进展作一综述。     

p53基因249M和273H突变在肝癌细胞系HepG2中与热休克蛋白70定位关系的研究

目的:定点突变合成p53基因突变子,构建绿色荧光蛋白表达载体,进而观察其在HepG2细胞中与内源性热休克蛋白70的共定位关系.方法:以野生型p53为模板,采用PCR体外定点突变技术通过重叠延伸法2次PCR扩增得到目的基因片段,进一步将其克隆到绿色荧光蛋白载体pEGFP-C3中.将构建好的载体转染到HepG2 细胞中,利用免疫荧光染色法检测内源性热休克蛋白70的表达,利用荧光显微镜观察hsp70与p53的共定位关系.结果:测序结果显示片段插入正确,在预期位点发生了点突变,249位氨基酸由AGG突变为AGC,273位氨基酸由CGT突变为CAT.载体成功构建.转染后观察到热休克蛋白70与273H p53共同定位于肝癌细胞系HepG2的胞质,而wt p53与249M p53均定位于细胞核.结论:热休克蛋白70与不同点突变的p53在肝癌细胞系HepG2中的共定位关系与之前我们在肝癌组织中发现的hsp70与p53共定位关系不同,这些提示在hsp70与p53的共定位关系和相互作用上存在某种尚未阐明的机制.     

p53的两种结合蛋白:53BP1和53BP2

p53基因是一种广谱的肿瘤抑制基因,其产物p53为一多功能的转录调节因子,可以发挥调节细胞生长、细胞凋亡和DNA修复的作用。在人类肿瘤已发现多种p53基因的点突变,但突变并不是p53蛋白质丧失功能的唯一途径。胞内蛋白可能影响其活性和功能。53BP1和53BP2是p53在胞浆中的两种结合蛋白。本文阐述了有关这两种蛋白质的研究进展。     

Myc-Max二聚体及其功能调控

Myc是癌基因myc编码的一族调控蛋白,均具有b-HLH-ZIP结构域,其功能依赖于Myc-Max二聚体的形成。Myc-Max二聚体在核内可与具有CACGTG核心序列的靶基因结合,反式激活靶基因的转录。Myc的功能受Myc、Max的相对浓度及其半衰期的影响,新近发现的Mxil、Mad具有Myc类似的结构特征,亦可与Max形成二聚体,但却具有与Myc相拮抗的功能。Max的功能还可被磷酸化所修饰。     

c-myc与细胞生长调控

原癌基因 c- m yc是 myc癌基因家族的重要一员 ,其产物通过 HL H/ L Z结构域与 DNA结合 ,或者直接与其它蛋白质互作 ,反式调控靶基因 ,进而调控细胞生长。细胞培养体系已呈现出一些与 c- m yc特异相关的生长表型。进一步寻找并确定c- myc的靶基因及其功能 ,会使我们更透彻地了解 c- myc在细胞生长调控及细胞增殖中的作用     

MHCⅡ类基因表达调控研究进展

目前认为ＭＨＣⅡ类基因的调节主要在转录水平上，已发现一系列作用于其启动子的转录因子，这些转录因子与染色体组蛋白及启动子保守序列交互作用影响ＭＨＣⅡ类基因的表达。其中，顺式作用元件与反式作用因子协同形成的蛋白－蛋白复合体起关键作用。本文对近年来在ＭＨＣⅡ类基因表达研究的长足进展作一综述。     

乙型肝炎病毒X蛋白转录抑制抑癌基因p53表达的研究

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）X蛋白对抑癌基因p53基因表达的调节作用。方法 以寡核苷酸芯片技术筛选的HBx反式调节基因结果为基础，利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域（p53p），构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p；以该质粒单独及与pcDNA3．1（-）-X共转染HepG2细胞，用酶联免疫吸附法（ELISA）检测氯霉素乙酰转移酶（CAT）的表达活性。进一步采用半定量RT-PCR技术检测HBV X蛋白对p53基因表达的调节。结果 成功构建报告载体pCAT3-p53p，克隆的p53启动于有顺式激活下游基因的活性；pCAT3-p53p与pcDNA3＋1（-）-X共转染时CAT的表达活性明显下降，说明HBVX蛋白抑制p53基因启动子的转录。RT-PCR结果表明，转染了pcDNA3．1（-）-X的HepG2细胞中p53基因mRNA表达减少。结论 HBV X蛋白在转录水平上反式抑制抑癌基因p53的表达，本实验不仅验证了基因芯片的筛选结果．而且为HBx在致肝细胞癌发生中的作用提供分子基础。     

p53基因mdm_2基因在肿瘤细胞中的相互调控作用

mdm_2(murine double minute 2)最初是在一种可致瘤的小鼠成纤维细胞中发现的。该基因编码一种锌指蛋白,可与P53蛋白酸性活化区结合,仰制P53介导的转录活性和阻止P53诱导凋亡的作用。p53基因是一种重要的抑癌基因,该基因编码一种DNA结合磷蛋白,在调节细胞增殖和促进细胞凋亡过程中起着重要的作用。p53也可调节mdm_2基因的表达。p53蛋白水平的升高能相应刺激MDM_2蛋白水平的升高,以这种方式p53和mdm_2基因形成一相互调节反馈环。MDM_2蛋白与P53蛋白结合构成MDM_2-P53蛋白复合物,可以自动反馈调节mdm_2的表达和p53在细胞内的活性。     

热休克蛋白70在免疫中的作用及应用

热休克蛋白 (heatshockprotein ,hsp)是生物体在应激条件下产生的一组蛋白 ,在正常细胞中也广泛存在。其中hsp70具有多种功能 ,在免疫中机体对hsp70有 4种作用模式 ;hsp70不仅可作为免疫佐剂、抗原载体 ,而且在基因疫苗中也显示出诱人的前景。     

019热休克蛋白70在免疫中的作用及应用

热休克蛋白(heat shock protein,hsp)是生物体在应激条件下产生的一组蛋白,在正常细胞中也广泛存在.其中hsp70具有多种功能,在免疫中机体对hsp70有4种作用模式;hsp70不仅可作为免疫佐剂、抗原载体,而且在基因疫苗中也显示出诱人的前景.     

吐温80合并温热对B16黑色素瘤细胞hsp 70、c-fos、泛蛋白及S-100蛋白表达的影响

目的:研究吐温80与温热合并的协同抗肿瘤机理及与凋亡的关系.方法:用免疫组化方法.观察吐温80合并41℃温热作用后即时、4小时和72小时,B16肿瘤细胞热休克蛋白70(hsp 70)、c-fos、泛蛋白以及S-100蛋白表达的改变,并进行定量分析.结果:hsp70和C-fos蛋白呈中等阳性反应,分别位于B16细胞的胞质和胞核;泛蛋白为弱阳性、S-100蛋白呈强阳性,分布于胞质;41℃ 60分钟作用可增强hsp70表达.以4小时为显著.核亦呈阳性反应;对其它蛋白表达无明显影响;吐温80单独可轻度抑制hsp70表达;温热与吐温80合并作用能显著抑制hsp70表达,c-fos和泛蛋白表达则明显增加.S-100蛋白变化各组无显著意义.结论:吐温80增强温热抗肿瘤的效应可能与其抑制hsp70合成.影响细胞热耐受性的产生和诱导细胞调亡有关.     

白细胞介素6基因表达的转录和转录后调控

ＩＬ—６基因启动子上有许多顺式调控序列，已经鉴定出ＮＦ－ｋＢ、ＮＦ－ＩＬ６、糖皮质激素受体等反式调节因子也作用于启动子上相应的调控序列。许多诱导剂通过其可诱导的反式调节因子作用于ＩＬ－６启动子，或选择性控制ＩＬ－６ｍＲＮＡ的稳定性从而实现转录和转录后水平的基因调控。     

癌基因mdm2及其产物

mdm2 (murine double minute 2)基因定位于人染色体 12q13-14,转录产物为-5.5kb mR-NA,在人体正常组织中有广泛表达,其编码区为1476bp,MDM2蛋白定位在细胞核中,半寿期很短,利用单抗或多抗发现至少有5种与mdm2相关、但分子量不同的蛋白。MDM2蛋白在体内外都能与突变型或野生型p53蛋白结合,抑制p53蛋白介导的反式活化作用。mdm2可作为一种癌基因使p53失活。另外,mdm2也可能有直接的致癌倾向或MDM2-p53复合物有独特的功能。mdm2基因在许多肉瘤细胞中有扩增现象,恰好这类肿瘤中p53基因突变发生的频率很低。     

癌基因c-erbB2、c-myc和抑癌基因p16、p53在口腔鳞癌中的蛋白表达及其协同作用

目的：探讨癌基因c—erbB2、c-myc和抑癌基因p16、p53在口腔鳞癌(OSOC)中的蛋白表达及其协同作用。方法：用免疫组化结合图像分析对口腔鳞癌中4种基因的蛋白表达进行定性、定位、定量研究。结果：口腔鳞癌中c—erbB2、c—myc、p16和p53的蛋白表达阳性率依次为46．67％、60％、86．67％和63。33％。肿瘤部位不同，erbB2蛋白表达有显著性差异；腭癌和口底癌中的erbB2蛋白表达都明显高于唇癌和牙龈癌中的erbB2表达。c-myc蛋白表达与p16蛋白表达之间具有显著性相关。结论：以上4种基因的蛋白表达增高在口腔鳞癌发生发展中具有重要作用，c—erbB2蛋白过表达在腭癌和牙龈癌中具有更重要的意义；c—myc和p16蛋白表达间具有一定的内在联系。     

P53对涎腺腺样囊性癌细胞端粒酶活性的抑制作用

目的为了探讨P53基因对腺样囊性癌细胞端粒酶活性的抑制作用及机制。方法构建携带人野生型P53基因的腺病毒表达载体，以脂质体法瞬时转染腺样囊性癌SACC-83细胞，RT-PCR检测转染细胞P53基因mRNA的表达，TRAP-PCR-ELISA法检测转染细胞端粒酶活性的改变。并将P53基因与含有hTERT启动子核心调控区的荧光素酶报告基因pGL2—630共转染SACC-83细胞，测定转染细胞荧光素酶报告基因活性。结果1．瞬时转染含人野生型P53基因的重组腺病毒表达载体p△E1-P53于腺样囊性癌SACC-83细胞后，其P53基因mRNA的表达明显增强；2．基因转染后，SACC-83细胞内源性端粒酶活性显著降低。3．P53基因与含有hTERT启动子核心调控区的荧光素酶报告基因pGL2-630共转染SACC-83细胞后，其荧光素酶活性显著下降。结论外源性表达P53基因可以降低腺样囊性癌细胞SACC-83细胞端粒酶活性，并可能通过抑制端粒酶hTERT基因启动子的转录活性实现。     

转录因子MAZ对c1orf109基因转录表达调控的体外研究

目的:本文旨在研究转录因子Myc相关锌指蛋白(MAZ)在体外对人类1号染色体开放阅读框109(c1orf109)基因的转录表达调控。方法:体外条件下,采用凝胶电泳迁移实验筛选c1orf109基因启动子区MAZ的结合位点,并利用本室构建的由c1orf109启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白报告载体与MAZ和转录因子特化蛋白1(Sp1)的表达质粒共转染He La细胞,24 h后,用激光共聚焦显微镜和流式细胞术检测c1orf109基因的转录表达情况。结果:c1orf109启动子区可与MAZ结合,且有与Sp1共享的结合位点;MAZ与Sp1皆可抑制c1orf109的转录表达,且Sp1的抑制作用大于MAZ(P0.05)。结论:MAZ与Sp1两个转录因子共同调控c1orf109基因在生理及病理条件的表达,且调控方向一致。这种冗余机制调控方式的存在提示该基因的精确表达调控对于细胞行使其生物学功能可能具有重要意义     

P53基因的生化功能和失活机理

本文综述了肿瘤抑制基因P53研究的最新进展。P53基因产物具有反式激活作用,能与特异DNA顺序结合,可能参与负调控细胞生长。P53的失活作用有多种途径,是迄今发现的与人类肿瘤相关性最高的基因。     

NUMB控制肿瘤抑制因子p53的活性

NUMB蛋白是一个细胞命运决定子，它通过不对称有丝分裂，拮抗NOTCH家族的胞质膜受体而控制细胞的结局。NUMB是一个内吞蛋白，NOTCH—NUMB的对抗作用与其作用有关。过去认为NUMB蛋白能抑制乳腺癌。现在研究发现NUMB是肿瘤抑制因子p53的调节因子。NUMB进入E3泛素连接酶HDM2和p53的复合体中，通过抑制遍在蛋白化防止p53的降解，增加P53蛋白的含量和活性，从而发挥肿瘤抑制因子作用。