他扎罗汀体外诱导Colo-16细胞凋亡的研究

目的:研究他扎罗汀诱导体外培养的皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞的凋亡.方法:用不同浓度的他扎罗汀处理Colo-16细胞,流式细胞术检测Colo-16细胞早期凋亡率;Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡细胞的形态学变化;印迹杂交法测定caspase 3蛋白表达水平;半定量逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)测定caspase 3 mRNA的表达.结果:他扎罗汀显著增加Colo-16细胞的早期凋亡,且Colo-16细胞早期凋亡率与他扎罗汀呈浓度依赖性(P<0.05);荧光染色可见细胞核染色质固缩、核破碎;活化的caspase 3表达显著增强,caspase 3 mRNA表达显著增强.结论:他扎罗汀在体外可诱导Colo-16细胞凋亡,caspase 3的活化参与此凋亡过程.     

西罗莫司体外诱导Colo-16细胞凋亡的研究

目的 研究西罗莫司对体外培养的皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞凋亡的影响。方法 用不同浓度的西罗莫司处理Colo-16细胞,以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测西罗莫司对Colo-16细胞体外增殖的影响;AnnexinV-FITC和PI双染检测Colo-16细胞凋亡率;Hoechst33258荧光染色法观察凋亡细胞的形态学变化;半定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）测定Bcl-2、Bax mRNA的表达。结果 不同浓度的西罗莫司对Colo-16细胞体外增殖均具有抑制作用,这种抑制作用与西罗莫司的作用时间和剂量呈明显的依赖关系（P < 0.05）。西罗莫司显著增加Colo-16细胞的早期凋亡,西罗莫司（50,100,150, 200 nmol/L）作用48 h后诱导Colo-16细胞的早期凋亡率分别为7.26% ± 0.26%、8.34% ± 0.19%、9.86% ± 0.14%、11.92% ± 0.15%,与对照组1.53% ± 0.09%比较,差异有统计学意义（P < 0.05）,且Colo-16细胞早期凋亡率与西罗莫司浓度呈剂量依赖关系（r = 0.955,P = 0.000）。荧光染色可见细胞核染色质凝聚、边集、核裂解的形态学改变;Bcl-2 mRNA表达显著下调而Bax mRNA的表达显著增强。结论 西罗莫司在体外能诱导Colo-16细胞凋亡,其发生机制可能与其调节Bcl-2、Bax等凋亡调控基因的表达有关。     

环氧合酶-2反义寡核苷酸对Colo-16细胞增殖及环氧合酶-2表达的影响

目的　研究环氧合酶（COX）-2反义寡核苷酸（AsODN）对人皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞体外增殖的抑制作用及COX-2表达的影响。方法　人工合成COX-2 AsODN,利用脂质体将不同浓度（50,100,200,400 nmol/L）反义寡核苷酸转染入Colo-16细胞,免疫荧光显微镜观察转染情况;采用噻唑蓝（MTT）法检测Colo-16细胞的增殖情况;Western印迹及半定量逆转录PCR检测Colo-16细胞COX-2蛋白和mRNA表达水平。结果 不同浓度的COX-2 AsODN对Colo-16细胞体外增殖均具有抑制作用（P < 0.05）,400 nmol/L反义组在48 h抑制率最高,达60.3%;COX-2 AsODN转染Colo-16细胞后,COX-2蛋白和mRNA表达明显下调,50、100、200、400 nmol/L组COX-2蛋白灰度值分别为0.763 ± 0.070、0.600 ± 0.065、0.430 ± 0.074、0.251 ± 0.045,与阴性对照组相比差异均有统计学意义（P < 0.05）;COX-2 mRNA表达量随COX-2 AsODN浓度的增加而减少,50、100、200、400 nmol/L组COX-2 mRNA灰度值分别是0.778 ± 0.025、0.602 ± 0.041、0.417 ± 0.031、0.297 ± 0.051,各组间COX-2 mRNA表达差异有统计学意义（F = 132.48,P < 0.01）。结论 COX-2 AsODN对Colo-16细胞的体外增殖有抑制作用,并能下调COX-2蛋白及其mRNA在Colo-16细胞中的表达,提示COX-2 AsODN有潜在治疗皮肤鳞状细胞癌的作用。     

他扎罗汀对角质形成细胞增殖周期蛋白Cyclin D1/CDK4/CDK6表达水平的影响

目的:探讨他扎罗汀(Tazarotene)对角质形成细胞增殖周期蛋白Cyclin D1、CDK4和CDK6表达水平的影响。方法:分别以不同浓度的他扎罗汀作用于HaCaT细胞,用CCK-8比色法检测每组细胞在12、24、48和72 h的增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化,western blot检测周期相关蛋白水平变化。结果:他扎罗汀对HaCaT细胞具有明显的增殖抑制作用(F=21.23,P0.05),并使G0/G1期细胞比例增加(F=19.83,P0.05),周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK6的表达水平明显下调。结论:他扎罗汀对HaCaT细胞具有明显的增殖抑制和周期阻滞作用,其作用机制可能与下调Cyclin D1/CDK4/CDK6蛋白复合物的表达有关。     

COX-2反义寡核苷酸对Colo-16细胞生长能力及VEGF表达的影响

目的:评估脂质体介导环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸(AsODN)对皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:将COX-2无义寡核苷酸(NsODN)和AsODN用脂质体分别导入Colo-16细胞中,克隆并观察COX-2 AsODN对细胞的生长抑制作用.Hoechst33258荧光染色法和流式细胞仪观察Colo-16细胞凋亡形态学变化及凋亡率.Western blot检测VEGF表达水平.结果:COX-2 AsODN作用于Colo-16细胞后,增殖能力受到抑制,克隆形成率下降(P<0.05),细胞出现明显凋亡,COX-2 AsODN组细胞早期凋亡率显著高于对照组(P<0.05);VEGF表达明显下调.结论:COX-2AsODN能够抑制Colo-16细胞体外生长,诱导其凋亡,并能显著下调VEGF表达.     

环氧合酶-2反义寡核苷酸对鳞状细胞癌Colo-16细胞基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的:研究环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,AsODN)对人皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞基质金属蛋白酶-2(metalloproteinase-2,MMP-2)表达的影响。方法:免疫细胞化学法检测Colo-16细胞中COX-2蛋白表达;免疫荧光显微镜观察转染情况;蛋白免疫印迹(Western blot)及半定量反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测Colo-16细胞MMP-2蛋白和MMP-2mRNA表达水平。结果:Colo-16细胞中COX-2蛋白阳性表达,并分布在胞质、胞核;Colo-16细胞胞质和胞核可见荧光标记的COX-2无义寡核苷酸、反义寡核苷酸;Western blot及RT-PCR检测结果显不COX-2反义寡核苷酸作用Colo-16细胞48 h后,MMP-2表达显著下调(P0.05)。结论:COX-2反义寡核苷酸能有效下调Colo-16细胞MMP-2表达,提示COX-2反义寡核苷酸可能通过抑制MMP-2表达来阻断皮肤鳞状细胞癌的浸润、转移。     

雷帕霉素对Colo-16细胞系Stat3表达的影响

目的研究雷帕霉素对皮肤鳞状细胞癌Colo-16细胞系Stat3表达的影响。方法用不同浓度的雷帕霉素处理Colo-16细胞,Hoechst33258荧光染色法观察凋亡细胞的形态学变化;Western-blotting法检测Colo-16细胞Stat3,P-Stat3蛋白表达水平。结果雷帕霉素能够诱导Colo-16细胞凋亡,荧光染色可见细胞核染色质凝聚、核裂解的形态学改变;在雷帕霉素作用后Colo-16细胞Stat3,P-Stat3表达显著下调。结论雷帕霉素能诱导Colo-16细胞凋亡,其作用机制可能与Stat3表达下调有关。     

COX-2反义寡核苷酸对Colo-16细胞生长及c-myc基因表达的影响

目的探讨脂质体介导环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,AsODN)对皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞生长及对c-myc表达的影响。方法将COX-2无义(Nonsense oligodeoxynucleotide,NsODN)、反义寡核苷酸用脂质体分别导入Colo-16细胞中。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察COX-2反义寡核苷酸对Colo-16细胞体生长曲线的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测c-myc蛋白表达的变化。结果COX-2反义寡核苷酸作用于Colo-16细胞后,细胞增殖能力受到抑制,荧光染色可见细胞核染色质边集、固缩、核碎裂的凋亡形态学改变;c-myc表达明显下调。结论COX-2反义寡核苷核酸能够抑制Colo-16细胞体外增殖,诱导Colo-16细胞凋亡,并能显著下调c-myc表达。     

他扎罗汀联合干扰素γ对角质形成细胞HLA-DR表达的影响

目的探讨他扎罗汀对角质形成细胞(KC)增殖及他扎罗汀、干扰素(IFN)-γ及二者联合对HLA-DR在KC上表达的影响,为他扎罗汀的抗增殖作用及其对炎症的影响进行初探。方法①体外培养正常人KC;②用MTT法检测他扎罗汀对KC增殖的影响;③用免疫组化的方法,分别观察他扎罗汀组、IFN-γ组及二者联合组对HLA-DR在KC上表达的影响。结果①10-7~10-5mol/L他扎罗汀作用KC24h、48h后,处理组的细胞增殖较对照组显著降低且呈剂量依赖性;②正常人KC基本不表达HLA-DR;③10-6mol/L他扎罗汀作用24h后,不能诱导KC表达HLA-DR;④500U/mLIFN-γ处理24h后可明显诱导KC表达HLA-DR;⑤10-7~10-5mol/L他扎罗汀联合IFN-γ组作用24h后,KC上HLA-DR的表达诱导作用较单独IFN-γ组显著增强(P<0.005),且呈剂量依赖性。结论他扎罗汀对体外培养的KC增殖有抑制作用;他扎罗汀对IFN-γ诱导KC表达HLA-DR有增强作用。     

他扎罗汀对培养角质形成细胞表达RAR和RXR mRNA的影响

目的了解他扎罗汀对对数生长期角质形成细胞表达RAR和RXR mRNA的影响,探讨他扎罗汀治疗银屑病的可能机制。方法用原位杂交法对他扎罗汀干预不同时间段培养的角质形成细胞进行RAR和RXR mRNA染色,然后对各实验组测定数据进行统计学分析。结果他扎罗汀能在24,48,72h三个时间段显著降低RAR和RXR mR-NA的表达。结论他扎罗汀在治疗银屑病过程中可能不仅仅是通过抑制角质形成细胞的增殖达到疗效。     

miR-384靶向HTRA1影响瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡

目的:明确miR-384对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFBs)增殖和凋亡的影响.方法:RT-qPCR和Western Blot检测miR-384和靶向高温需求因子A1(HTRA1)在KFBs和人瘢痕疙瘩皮肤组织中的表达.CCK-8细胞计数试剂盒检测KFBs增殖活力;流式细胞术检测KFBs细胞凋亡;Western Blot检测...     

他扎罗汀诱导前后角质形成细胞TIG 3 mRNA表达

目的研究他扎罗汀对培养的正常人角质形成细胞增殖和他扎罗汀诱导基因3(TIG3)mRNA表达的影响。方法用0.1和1.0μmol/L他扎罗汀处理正常人角质形成细胞24h后,用MTT法、RT-PCR和实时定量RT-PCR(TaqMan探针)法分别检测细胞增殖和TIG3mRNA表达的改变。结果他扎罗汀可抑制角质形成的增殖和诱导TIG3mRNA的表达。0.1和1.0μmol/L他扎罗汀处理角质形成细胞后,分别使角质形成细胞增殖抑制5.0%和11.1%,使TIG3mRNA增加到正常对照组的2.1倍和2.8倍。结论他扎罗汀可抑制角质形成细胞的增殖和上调TIG3mRNA的表达。     

外源性信号通路JAK/STAT在ALA-光动力诱导人SCC细胞凋亡中的作用

目的：明确外源性凋亡机制(JAK/STAT信号通路)在5-ALA-PDT诱导人鳞状细胞癌细胞(SCC)凋亡中的作用。方法：体外培养鳞状细胞癌细胞系A431和COLO-16,分为空白对照组、转染阴性对照组、光动力组、转染阴性+光动力组、STAT3高表达载体组、STAT3-siRNA组、STAT3高表达载体+光动力组,STAT3-siRNA组+光动力组。CCK-8,流式细胞术（FCM）法分别检测各组细胞的存活率和凋亡率,qRT-PCR和Western Blot检测STAT3及其下游基因Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白水平。结果：5-ALA-PDT组A431和COLO-16凋亡率为24%和22%高于STAT3高表达载体+光动力组(11%和10.5%),低于 STAT3-siRNA+光动力组（36%和39%）;5-ALA-PDT组STAT3和Bcl-2 mRNA水平和蛋白水平低于高表达载体+光动力组,高于STAT3-siRNA组。5-ALA-PDT组Bax mRNA和蛋白的水平高于高表达载体+光动力组,低于STAT3-siRNA组。结论：外源性凋亡通路JAK-STAT3可能参与5-ALA-PDT诱导的上皮鳞癌细胞的凋亡过程。     

基底细胞癌中hTERT、Bcl-2的表达

目的:观察hTERT、Bcl-2在基底细胞癌中的表达,探讨其意义及关系。方法:运用免疫组织化学(SABC)方法检测41例基底细胞癌、21例正常皮肤组织中hTERT蛋白和Bcl-2蛋白的表达,并用图象分析系统加以定量分析。结果:hTERT蛋白和Bcl-2蛋白在基底细胞癌中的表达量均明显高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(P<0.01),相关分析发现两者表达呈负相关(P<0.05)。结论:hTERT、Bcl-2与基底细胞癌的发生、发展密切相关,可作为基底细胞癌诊断的重要形态学指标,端粒酶有望成为恶性肿瘤治疗的新靶点。     

龙胆泻肝汤激活Bax/Caspase-3通路并诱导人角质形成细胞凋亡

目的：明确龙胆泻肝汤对人角质形成细胞株HaCaT细胞凋亡的影响。方法：Tunel法检测龙胆泻肝汤对HaCaT细胞凋亡的影响; DAPI染色后荧光显微镜观察HaCaT细胞凋亡形态变化; Western blot检测分析HaCaT细胞凋亡相关蛋白表达。结果：龙胆泻肝汤处理组HaCaT细胞形态发生了明显变化，凋亡比例明显高于未处理细胞组。龙胆泻肝汤作用于HaCaT细胞后活化的caspase-3和Bax的表达明显上调， Bcl-2蛋白表达下降。caspase-3特异性抑制剂Z-DEVD-FMK预处理后可降低龙胆泻肝汤诱导的细胞凋亡。结论：龙胆泻肝汤能明显诱导人角质形成细胞的凋亡，其机制可能与下调Bcl-2的表达，增高Bax和caspase-3的表达有关。     

他扎罗汀和窄谱中波紫外线对银屑病基质金属蛋白酶13表达的影响

【摘要】 目的 检测基质金属蛋白酶13（MMP13）在银屑病患者中的表达,评估他扎罗汀和窄谱中波紫外线（NB-UVB）对银屑病样皮炎小鼠MMP13表达的影响。方法 收集2019年5 - 8月就诊于天津医科大学总医院的18例银屑病患者皮损组织和10例健康人正常皮肤组织及所有受试者血清。将25只SPF级BALB/c雄性小鼠随机分成对照组、咪喹莫特组、咪喹莫特 + NB-UVB组、咪喹莫特 + 他扎罗汀组和咪喹莫特 + 他扎罗汀 + NB-UVB组,每组5只。分别给予小鼠背部皮肤不同处理,除对照组外,其余各组进行银屑病样皮炎造模处理,造模时间为7 d,造模成功后,第8天早上取小鼠眼球血,并使用脱颈法处死后,切取背部皮损组织。HE染色观察皮损处表皮厚度和病理变化,免疫组化检测表皮MMP13表达水平,ELISA检测血清MMP13含量。两组比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较用LSD检验,计数资料采用χ2检验比较。结果 银屑病患者皮损处MMP13呈强阳性表达,表皮和血清MMP13水平［84.11 ± 17.16、（13.29 ± 3.95） μg/L］显著高于健康对照组［11.98 ± 4.08、（7.46 ± 1.58） μg/L,均P < 0.01］。与对照组表皮厚度［（1.26 ± 0.04） μm］、表皮和血清MMP13水平［25.40 ± 2.34、（185.76 ± 7.22） μg/L］比较,咪喹莫特组表皮厚度［（7.93 ± 0.59） μm］明显增加,表皮和血清中MMP13水平［147.14 ± 5.53、（215.98 ± 15.17） μg/L］也显著增加（均P < 0.01）。与咪喹莫特组比较,咪喹莫特 + 他扎罗汀组、咪喹莫特 + NB-UVB组、咪喹莫特 + 他扎罗汀 + NB-UVB组表皮厚度均下降［分别为（3.56 ± 0.37）、（3.83 ± 0.39）、（2.14 ± 0.34） μm,均P < 0.05］,表皮中MMP13表达减弱（分别为120.42 ± 3.23、91.08 ± 0.46、71.12 ± 7.11,均P < 0.05）,且血清MMP13含量下降［分别为（197.39 ± 3.92）、（196.13 ± 11.76）、（183.21 ± 14.99） μg/L,均P < 0.05］。结论 MMP13蛋白表达水平在银屑病患者皮损及血清中增高;他扎罗汀和NB-UVB治疗后银屑病样皮炎小鼠皮损和血清中MMP13下降。MMP13可能参与银屑病的发展,他扎罗汀和NB-UVB可能通过减少MMP13的表达而抑制银屑病发展。