应用聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌的研究

应用聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌的研究谭耀驹李一耕谭守勇我们选用分子量为３８０００片段长度为４１９ｂｐ（３８０００－４１９ｂｐ）系统，对患者的痰液、胸液、脑脊液、支气管冲洗液、淋巴分泌物等进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测，探讨其在实际应用中的可信性...     

AmpliSensor-聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌及临床应用

目的探讨Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ－聚合酶链反应（ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ）在结核病诊断中的价值。方法采用ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ对７８４例结核病患者及１６０例肺癌患者的标本进行检测，并与ＰＣＲ（凝胶电泳后，经溴化乙锭染色）、涂片、培养等法比较。结果ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ的敏感性显著高于涂片及培养（Ｐ＜０．０１）。特异性较ＰＣＲ法高。结论ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ可以通过标准曲线划定检出下限，并可换算出标本中原始的靶ＤＮＡ值，同时具有较高的特异性和敏感性，对肺结核尤其是肺外结核的诊断有一定的临床意义。     

应用多重聚合酶链反应法检测并鉴别结核分支杆菌与非结核分支杆菌DNA

OBJECTIVE: To improve the specificity and sensitivity of polymerase chain reaction (PCR) technique for detecting and identification of DNA of M. tuberculosis and M. nontuberculosis. METHOD: Three pairs of oligonucleotide primer were used in triplex-PCR. A 383 bp DNA fragment encoding part of the 65,000 mycobacterial surface antigen, a 123 bp fragment corresponding to a specific M. tuberculosis complex sequence which was the insertion sequence 6110 (IS 6110) and a 268 bp fragment for human beta-globin were amplified by triplex-PCR respectively. RESULT: The sensitivity of the triplex-PCR-electrophoresis for the DNA of mycobacterium was 0.6 pg. The specific bands of 383 bp and 123 bp among the amplified DNA from M. hominis, M. bovis, BCG and M. simiae were present in the agarose gel. By contrast, only a band of 383 bp was found among the M. nontuberculosis which contained M. avium, M. chelonae, M. scrofulaceum, M. xenopi, M. kansasii, M. intracellulare and M. smegmatis. Compared with the standard strains, there was an additional 268 bp band in simulated clinical samples infected by Mycobacterium. The above 3 specific bands were found neither in other 15 bacterial species tested nor in Mycoplasma pneumoniae. 182 clinical samples were examined by culture, smear and triplex-PCR. 72 nontuberculous clinical samples were all negative. In 110 tuberculosis clinical samples, the positive rates were 2.7%, 13.6% and 32.7%, respectively. CONCLUSION: The triplex-PCR possesses a high specificity and sensitivity. This method could detect and identify the DNA of M. tuberculosis and M. nontuberculosis except M. simiae. It is a valuable tool for early diagnosis and differentiation for infection of M. tuberculosis and M. nontuberculosis.     

结核病人外周血结核分支杆菌聚合酶链反应检测及临床意义

采用巢式聚合酶链反应 (ＰＣＲ)方法扩增结核病人外周血单核细胞 (ＰＢＭＣ)结核分支杆菌 (ＭＴＢ)ＩＳ6 110部分序列 ,并将其克隆与测序 ,结合临床资料分析探讨其临床意义。材料与方法　①对象 :我院 1999年住院的 77例活动性肺结核病人。另以同期住院的非结核病人 (10例肝炎 ,30例肺炎和慢性阻塞性肺疾病 )作对照。②ＰＣＲ引物 :根据Ｔｈｉｅｒｒｙ等[1] 报道的结核分支杆菌ＩＳ6 110序列 ,采用Ｇｏｌｄｋｅｙ软件 ,在其保守区设计两对套式引物 ,委托上海生工生物工程公司合成。引物序列为 :ＴＢ15′ＣＧＴＧＡＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＧＴ…     

TaqMan聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌DNA及其临？…

目的 探讨ＴａｑＭａｎ聚合酶链反应（ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ）技术在肺结构诊断中的价值。方法 对１６８例活动性肺结核、５７例肺癌患者的痰和外周血及３４－例健康对照外周血,同时应用ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ、ＰＣＲ检测,并与痰涂片法、ＢＡＣＴＥＣ法及改良罗氏培养法结果进行比较。结果 ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ检测痰和外周血总的阳性率分别为５３．０％和６１．３％,显著高于ＰＣＲ、痰涂片法、ＢＡＴＣＴＥＣ法及改良罗氏培     

聚合酶链反应试剂对检测痰结核分支杆菌的影响

目的观察聚合酶链反应（ＰＣＲ）的试剂对检测痰结核分支杆菌的敏感性和特异性的影响。方法对结核病组２０５例和非结核病组１０５例的痰标本同时进行三个厂家生产的ＰＣＲ试剂检测、普通细菌培养和抗酸染色法涂片检测。再对ＰＣＲ假阳性的痰普通细菌培养结果进行分析，试找出ＰＣＲ假阳性的其它因素。结果三种不同引物序列和扩增产物片段长度的ＰＣＲ试剂对结核性痰标本的阳性率分别为８２．４％、７１．７％和６１．０％，组间差异有非常显著意义（Ｐ＜０．００５）。结论ＰＣＲ试剂的引物序列和扩增产物长度对检测痰结核分支杆菌的阳性率和假阳性率有很大的影响     

结核分支杆菌DNA的单管巢式聚合酶链反应检测

目的探讨单管巢式聚合酶链反应（ＳＮＰＣＲ）检测石蜡包埋组织结核分支杆菌ＤＮＡ的特异性和敏感性。方法应用普通ＰＣＲ（ＧＰＣＲ）、双管巢式ＰＣＲ（ＤＮＰＣＲ）和ＳＮＰＣＲ对结核分支杆菌ＢＣＧ和３０例结核性淋巴结炎石蜡包埋组织进行结核分支杆菌复合群ＩＳ６１１０特异插入序列片段ＤＮＡ检测。结果ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测ＢＣＧＤＮＡ均于１５ｆｇ以上呈现阳性结果，其敏感性明显优于ＧＰＣＲ（４８０ｆｇ）。ＧＰＣＲ、ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测３０例结核性淋巴结炎阳性率分别为４３％、１００％和１００％，抗酸染色阳性率（１０％）与３种ＰＣＲ法相比差异有非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＧＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ相比差异亦具非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＳＮＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ相同。结论巢式ＰＣＲ检测淋巴结石蜡包埋组织结核分支杆菌的敏感性显著高于ＧＰＣＲ，其中ＳＮＰＣＲ具有与ＤＮＰＣＲ相同的特异性和敏感性，并具有更大的实用价值。     

标本处理方法对聚合酶链反应检测结核分支杆菌结果的影响

目的探讨应用十二烷基硫酸钠（SDS）处理标本在结核分支杆菌聚合酶链反应（PCR）中的价值。方法从186例活动性结核病人收集痰、胸腹水、脑脊液、尿、血液等标本266份,标本分别用SDS和常规方法进行处理。两种方法处理的标本同时用PCR-反相膜杂交试验检测结核分支杆菌,并将结果进行比较。结果用SDS和常规方法处理的标本,PCR-反相膜杂交试验结核分支杆菌的检出率分别为65.0%（173/266）和51.5%（136/266）。通过配对计数资料卡方检验,SDS法和常规法之间的差异具有非常显著性意义（χ     

荧光定量聚合酶链反应技术检测结节病肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA

目的探讨结核分枝杆菌感染在结节病发病中的作用;方法荧光定量聚合酶链反应技术检测22例结节病肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA;结果22例肺泡灌洗液中9例检出结核分枝杆菌;结论结核分枝杆菌感染可能是结节病病因之一。     

应用多重聚合酶链反应法检测并鉴别结核分支杆菌与非结 …

目的 提高聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测分支杆菌ＤＮＡ的特异性和敏感性、以检测和鉴别结核分支杆菌与非结核分支杆菌ＤＮＡ。方法 应用三对具有特异性的寡核苷酸引物，进行多重ＰＣＲ扩增。这三对引物分别对应于分支杆菌６５０００表面抗原、结核分支杆菌插入序列ＩＳ６１１０及人类β－珠蛋白基因的部分序列，其扩增产物分别为３８３ｂｐ、１２３ｂｐ和２６８ｂｐ。结果 此多重ＰＣＲ电泳检测的灵敏度为０．６ｐｇ。经多重ＰＣＲ     

Amplisensor—聚合酶反应定量检测脑脊液中结核分支杆菌DNA的研究

目的 探讨Amplisensor-聚合酶反应（Amplisensor-PCR)定量检测脑脊液中结核分支杆菌DNA（TB－DNA）对结核性脑膜炎的诊断价值。方法 采用Amplisensor-PCR对117例结核性脑膜炎患者及36例非结核性脑膜炎患者的脑脊液标本进行检测,并与PCR（凝胶电泳后,经溴化乙锭染色）、涂片、培养法比较。结果 Amplisensor-PCR的敏感性显著高于涂片及培养,阳性率分别为57．13％、1．7％、6．7％（P＜0．001）。结论 Amplisensor-PCR可以通过标准曲线划定检出下限,并可换算出标本中原始的靶DNA值,同时具有较高的特异性和敏感性,对结核性脑膜炎的诊断有一定的临床意义。     

Amplisensor-聚合酶反应定量检测脑脊液中结核分支杆菌DNA的研究

目的　探讨Amplisensor-聚合酶反应 (Amplisensor-PCR)定量检测脑脊液中结核分支杆菌DNA(TB-DNA)对结核性脑膜炎的诊断价值。方法 采用Amplisensor-PCR对117例结核性脑膜炎患者及36例非结核性脑膜炎患者的脑脊液标本进行检测,并与PCR(凝胶电泳后,经溴化乙锭染色)、涂片、培养法比较。结果 Amplisensor-PCR的敏感性显著高于涂片及培养,阳性率分别为57.13%、1.7%、6.7% (P＜0.001)。结论 Amplisensor-PCR可以通过标准曲线划定检出下限,并可换算出标本中原始的靶DNA值,同时具有较高的特异性和敏感性,对结核性脑膜炎的诊断有一定的临床意义。     

聚合酶链反应—冷单链构象多态性快速检测结核分支杆菌r…

评估ｒｐｏＢ基因突变检测在结核分支杆菌利福平耐药性测定中的应用价值。     

聚合酶链反应检测肺结核患者外周血单个核细胞中结核分支杆菌DNA的临床价值

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术配对检测９２例肺结核患者外周血单个核细胞内和痰标本中结核分支杆菌ＤＮＡ，同时检测３０例非结核患者外周血。结果显示：外周血和痰标本ＰＣＲ阳性率分别为７１７％和５５４％，前者明显高于后者（Ｐ＜００５）；各型肺结核外周血和痰标本ＰＣＲ阳性率不尽相同；３０例非结核患者外周血ＰＣＲ阳性３例（１０％）。认为ＰＣＲ检测肺结核患者外周血单个核细胞内结核分支杆菌ＤＮＡ是一种快速、敏感的方法，可用于肺结核早期诊断与鉴别诊断     

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核分支杆菌的价值

目的　评价聚合酶链反应(PCR)荧光探针杂交技术(TaqMan技术)检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法 应用细菌学方法(涂片镜检和培养)及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本,53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36.1%,TaqMan法阳性率为61.7%,高于细菌学检测法,经统计学处理,两者有显著性差异(P<0.05),用TaqMan法检测临床标本特异性为96.2%。结论 TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性较高等优点,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核人支杆菌的价值

目的：评价聚合酶链反应（PCR）荧光探针杂交技术（TaqMan技术）检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法：应用细菌学方法（涂片镜检和培养）及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本，53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果：细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36．1％，TaqMan法阳性率为61．7％，高于细菌学检测法，经统计学处理，两者有显著性差异（P＜0．05），用TaqMan法检测临床标本特异性为96．2％，结论：TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化，在单一管内完成，具有简便，快速、防污染，敏感性及特异性较高等优点，是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

定量聚合酶链反应技术研究进展

自Ｍｕｌｌｉｓ等于 1985年创建了聚合酶链反应(ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ ,ＰＣＲ)技术以来 ,该技术经过十几年的发展与完善 ,已在基础研究领域得到了广泛的应用 ,并在临床疾病的诊断方面进行了一些探索性研究。根据ＰＣＲ扩增策略和检测产物手段的不同 ,可分为定性ＰＣＲ(ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ ,以下简称ＰＣＲ)和定量ＰＣＲ(ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ ,Ｑ ＰＣＲ)。一、ＰＣＲ在结核分支杆菌检测中的研究现状1989年Ｈａｎｃｅ等[1] 将ＰＣＲ用于结核分支杆菌的检测 ,1990年我国引进该项技术 ,从而在…     

聚合酶链反应—单链构象多态性用于耐利福平结核分支杆…

研究结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变及其与利福平耐药性的关系。     

应用多重聚合酶链反应技术快速鉴定牛分支杆菌卡介苗株

目的 建立快速鉴定牛分支杆菌卡介苗(BCG)菌株的方法。方法 依据最近研究发现的牛分支杆菌BCG菌株不存在命名为缺失区1(deleted region 1，RD1)的基因区，而其他牛分支杆菌菌株和其他结核分支杆菌复合群(MTC)菌种(结核分支杆菌、非洲分支杆菌和田鼠分支杆菌)存在RD1基因区的遗传学信息，应用多重聚合酶链反应(PCR)检测RD1基因区存在与否，以鉴别BCG菌株与其他牛分支杆菌菌株及其他MTC菌种。结果 所试5株BCG疫苗生产用标准菌株和近期国内发生的1例小儿BCG接种后全身播散性感染致死病例的2株BCG分离菌株，均缺失RD1基因区；其他牛分支杆菌菌株，包括3株牛分支杆菌标准菌株、5株分别从结核病牛或鹿分离的牛分支杆菌菌株，1株从结核病患痰标本分离的牛分支杆菌菌株，以及其他MTC菌种，包括结核分支杆菌H37Rv和H37Ra标准菌株、48株从结核病患痰标本分离的结核分支杆菌菌株、3株非洲分支杆菌标准菌株，均存在RD1区。结论子多重PCR技术用于牛分支杆菌BCG菌株的鉴定简便、快速、特异，适于在临床实验室应用。