骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究进展

无论是在体外实验还是在体内实验,骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)都可以向中枢神经系统(CNS)神经细胞分化,但争议颇多。因为功能性神经元不仅要具有典型神经元的形态、特异性标记,还要求具有可兴奋性、能和其他神经元形成突触联系、产生突触电位等,所以对骨髓间充质干细胞是否能诱导出真正具有功能的神经元存在很大分歧。在此对BMSCs向神经细胞诱导分化研究的现状、存在的问题及发展前景给予综述。     

骨髓间充质干细胞向神经细胞分化及移植研究进展

骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)又称骨髓基质细胞(bonemarrowstromal cells,BMSCs),是干细胞研究的又一新的发现,是目前干细胞研究的热点和前沿。MSCs具有方便获取、易于分离培养和扩增纯化,在体外培养条件下多代扩增后仍保持多向分化潜能的特点,且遗传背景稳定,     

成人骨髓间充质干细胞体外向视网膜细胞的诱导分化

目的研究取材于成人骨髓的间充质干细胞在一定诱导条件下向视网膜神经细胞的分化。方法成人骨髓经密度梯度离心得到的细胞,根据其高黏附特性体外培养获得间充质干细胞。利用流式细胞仪分析其细胞表型,在体外诱导使其向视网膜神经细胞分化并用免疫荧光法进行鉴定。结果从骨髓中分离培养的细胞具有成纤维细胞样形态,贴壁生长,表型相对均一,表面标志为CD90、CD44、CD147阳性;而CD34、CD38、CD45、CD14、HLA-DR阴性。体外诱导后可以得到表达nestin(神经干细胞标志物)、GFAP(神经胶质细胞标志物)和Rhodopsin(视网膜光感受器细胞标志物)阳性的细胞。结论从人骨髓中分离培养得到的间充质干细胞具有向视网膜神经细胞分化的潜能。     

促大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究

目的探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的体外培养和向神经元样细胞分化的方法。方法通过梯度分离获得成年大鼠MSCs,在细胞因子和氧化剂作用下对其诱导分化为神经元样细胞,免疫细胞化学方法检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经丝蛋白（NF）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经巢蛋白（Nestin）的表达情况,流式细胞仪检测分析诱导率。结果BMSCs被转化神经元样细胞并表达Nestin。应用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、叔丁基对羟基茴香醚（BHA）所获得的神经元样细胞诱导率高（49.7%）。结论bFGF、BHA能促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。     

骨髓间充质干细胞和骨髓单个核干细胞移植治疗大鼠心肌梗死的对比研究

目的观察髓间充质干细胞（MSCs）和骨髓单个核干细胞（BMMNCs）移植对急性心肌梗死后大鼠左心功能的影响及存活情况,比较两种干细胞移植的优劣性。方法雌性Lewis大鼠45只按随机抽签法分3组：对照组、MSCs组、BMMNCs组。结扎前降支制备心肌梗死模型,MSCs组和BMMNCs组均注射等数量（2×10^6）雄性MSCs和BMMNCs,对照组注射等体积的培养基。4周后超声检测左心功能、左心室前壁厚度,免疫原位杂交检测雄性鉴别基因sry片段的表达。结果MSCs组和BMMNCs组与对照组相比：左心室射血分数分别增加22．57％、24．09％（P=0．000）,MSCs组和BMMNCs组之间比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;左心室前壁厚度增加（2．6±0．5）mm和（2．5±0．3）mm对（1．8±0．4）mm（P=0．000）;免疫原位杂交显示MSCs组与BMMNCs组sry表达阳性,对照组阴性。阳性细胞的数量相比较,BMMNCs组高于MSCs组（66．50±6．59比46．67±4．64,P=0．000）。结论MSCs和BMMNCs移植均能改善大鼠急性心肌梗死后左心功能,减轻左心室重构;移植4周后在受体心肌内存活干细胞数量BMMNCs优于MSCs。     

丹参注射液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的:探讨丹参注射液在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的作用。方法:采用差速贴壁法体外分离培养大鼠MSCs,流式细胞仪检测其表面标志,经碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h,采用含丹参注射液的无血清L-DMEM培养液诱导MSCs,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,免疫荧光细胞化学检测巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:体外培养的大鼠MSCs表达CD29、CD44、CD105、CD166。丹参注射液诱导后MSCs胞体收缩,突起伸出,较密的部分神经元拉成网状,免疫细胞化学显示巢蛋白、NSE、NF-M表达阳性,阳性率分别为(58.68±4.50)%、(61.23±5.72)%、(63.47±6.38)%,GFAP阳性细胞率(1.47±0.23)%。结论:丹参注射液在体外可以将大鼠MSCs诱导分化为神经元样细胞。     

自体脑脊液定向诱导骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞

目的 探讨自体脑脊液定向诱导骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞的可行性.方法 采用自体脑脊液为诱导剂,体外诱导骨髓源性间充质干细胞.从形态学、免疫组化法、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对诱导后细胞进行鉴定.结果 自体脑脊液诱导后的间充质干细胞呈现神经干细胞改变,可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,并表现相应的特征结构和生物学特性.结论 白体脑脊液能定向诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞转化.     

骨髓间充质干细胞对与平滑肌细胞共培养体系中细胞增殖和自身分化的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells,MSCs）对联合培养细胞增殖及自身表达平滑肌肌动蛋白（smooth muscle alpha—aetin,α-actin SM）的影响。方法建立MSCs与平滑肌细胞（smooth muscle cells,SMCs）直接共培养体系,对MSCs与SMCs直接共培养组和单纯SMCs组及MSCs组在不同时间点细胞计数。对共培养组和单纯MSCs组行4’6’－二乙酰基－2－苯基吲哚（DAPI）（5ng／ml）标记,利用抗α—actin SM荧光抗体,检测2组MSCs胞浆内-aetin SM表达。结果共培养组细胞计数较单独SMCs培养组明显减少,以第4天为著（P〈0．01）,与SMCs共培养5d,MSCs在共培养组较单纯MSCs组表达α-actin SM阳性率明显降低（P〈0．05）。结论在无干预因素情况下,MSCs与SMCs直接共培养明显抑制共培养体系中细胞增殖,且抑制MSCs表达仪-α ctin SM。     

诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的探讨人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向成骨细胞诱导分化的能力。方法选用不同代次的MSCs,使用条件培养基,观察细胞的形态变化,采用细胞化学和免疫组化的方法检测碱性磷酸酶、钙盐沉积及Ⅰ型胶原的表达。结果MSCs在条件培养基中,15d后可见细胞变为多边形,碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原染色阳性,形成钙结节,表现成骨细胞分化特点。结论在一定培养条件下成功诱导人MSCs向成骨细胞分化。在骨组织工程学方面MSCs作为种子细胞具有潜在的应用价值。     

骨髓间充质干细胞生物学特性及在造血干细胞移植中的应用

干细胞的研究和应用是21世纪生命科学研究的热点之一。干细胞可分为胚胎干细胞和组织干细胞或成体干细胞。骨髓(bone marrow,BM)中至少含有两种组织干细胞：造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)和问充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)。HSC移植已广泛应用于临床治疗各种恶性血液病、重型再生障碍性贫血、遗传性血液。     

人骨髓间充质干细胞的分离和培养及向软骨细胞分化的实验研究

目的分离培养人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）,探讨其向软骨细胞分化的潜能。方法贴壁筛选法结合密度梯度离心法分离hBMSCs,据其生物学特征、定向分化潜能、表面标志物及流式细胞仪鉴定。在软骨细胞诱导液中诱导,通过甲苯胺蓝染色定性蛋白聚糖（PG）,Ⅱ型胶原免疫组化定性Ⅱ型胶原。结果密度梯度离心结合贴壁细胞筛选法,最终能成获得纯度较高的hBMSCs,但传到第8代时,hBMSCs出现老化现象,因此hBMSCs不具有无限增殖的能力。hBMSCs诱导一定时间后,测得细胞分泌了大量的蛋白聚糖（PG）和Ⅱ型胶原。结论本实验分离方法可获得纯度较高的hBMSCs,在特定条件下能够向软骨细胞分化。     

骨髓间充质干细胞的研究及进展

间充质干细胞(MSCs)是中胚层来源具有多向分化能力的干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富，在一定的诱导条件下能分化为成骨细胞、成软骨细胞、神经细胞、骨骼肌细胞及心肌细胞。因其比较容易贴壁和形成成纤维样的克隆，也称为贴壁细胞或者成纤维细胞集落形成单位(CFU—F)、骨髓基质细胞(MSC)或间充质干细胞或间充质祖细胞(MPC)。由于骨髓是其主要来源，因此统称为骨髓MSCs。     

全骨髓法分离培养骨髓间充质干细胞及向神经样细胞分化的研究

目的 目前尚缺乏标准的骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离方法 ,实验通过全骨髓培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,并诱导分化为神经样细胞,以寻找一种简便、实用的分离方法 .方法 取大鼠骨髓.全骨髓培养法结合差速贴壁法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,传代扩增.倒置相差显微镜下观察骨髓间充质干细胞形态及生物学特点,免疫组化染色鉴定细胞.用MTT法间接测定不同代数细胞活力.诱导分化.先用碱性成纤维细胞生长冈子(bFGF)预诱导24h,然后加入丁羟基茴香醚诱导(BHA)和二甲基亚砜(DMSO)诱导.观察诱导过程中细胞的形态变化,并用免疫组化染色法鉴定细胞.结果 全骨髓培养法成功分离培养BMSCs,免疫荧光染色示CD90、CD71、CD106表达阳性.CD45阴性.MTT法检测细胞活力示2、4、6代细胞于酶标仪490 nm波长处吸光度值均高于第8、10代细胞.细胞经诱导后,细胞呈神经样细胞形态,并且神经元特异性表面标志β微管蛋白(β-Ⅲ-Tubulin)、巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达阳性.结论 采用全骨髓培养法可获得较纯化的骨髓间充质干细胞,其在适宜的诱导分化条件下可诱导分化为神经样细胞.     

人骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究

目的：研究人骨髓间充质干细胞（hMSCs）在体外分离纯化、培养扩增和向心肌样细胞诱导分化的条件。方法：体外分离培养hMSCs,纯化传代至第三、四代,加入不同浓度5-氮杂胞苷（5-Aza）进行不同时间的孵育,用MTT测定细胞的生长活性,确定最佳的浓度和孵育时间。4周后行电镜,免疫组化染色及逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测。结果：诱导后细胞呈心肌样细胞改变,电镜下可见肌丝形成,免疫组化显示部分细胞胞浆α-横纹肌肌动蛋白（α-sarcomeric actin）、肌钙蛋白-T（troponin-T）阳性。RT-PCR检测显示心肌特异转录因子GATA-4、Nkx2.5有表达。结论：hMSCs是骨髓来源的具有多向分化潜能的干细胞,在5-Aza的诱导下可向心肌样细胞分化,可成为心肌损伤移植治疗的理想细胞材料。     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗兔缺血后肢的研究

目的研究自体骨髓间充质干细胞移植治疗兔缺血后肢的作用。方法16只新西兰大白兔随机分为2组：注射干细胞培养液组（对照组）;移植自体骨髓间充质干细胞组（移植组）。抽取自体骨髓行干细胞体外培养,移植到兔缺血后肢,以ECT检测其血流变化。结果骨髓间充质干细胞成功移植到兔缺血后肢,ECT检测显示在2周后移植组兔后肢血流明显高于对照组。结论自体骨髓间充质干细胞移植能有效改善兔缺血后肢血供。     

体外诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的 探讨体外成骨诱导的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的形态和功能特征.方法 体外培养获取生长状态良好的兔BMSCs,进行成骨诱导,观察并检测成骨细胞的生物学特性.结果 BMSCs可在成骨条件培养液下诱导为成骨细胞.经鉴定,碱性磷酸酶和矿化结节染色阳性,激光共聚焦显微镜下成骨细胞鬼笔环肽显示骨架F-actin为红色荧光.结论 BMSCs在体外可定向诱导为成骨细胞,有希望成为理想的种子细胞应用于临床.     

骨髓间充质干细胞移植到心肌梗死大鼠对心肝功能的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)移植到心肌梗死大鼠后在心肝脏器的分布及对其功能的影响.方法 建立心肌梗死大鼠模型,1周后将标记的MSCs通过大鼠舌下静脉注射至体内,细胞移植4周后通过组织学观察其在心肝脏器的分布,并通过心脏超声及血生化检查观察两脏器的功能情况.结果 移植细胞主要集中于心肌梗死区域,且少量迁移至肝脏组织.实验组的心功能指标LVEDD、LVESD、左心室EF、左室FS均明显优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).实验组肝功能指标ALT、AST、ALP明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),而2组之间ALB及TBIL并无明显差异(P>0.05).结论 MSCs经静脉注射可顺利分布于心肌梗死组织改善心脏功能,且可迁移至肝脏组织,可能对肝功能也具有一定的改善作用.     

骨髓间充质干细胞移植在治疗肝硬化中的临床疗效研究

目的探讨骨髓间充质干细胞移植在肝硬化治疗中的临床应用价值。方法将我院收治的58例肝硬化患者,随机分为治疗组和对照组,每组29例。比较术后两组肝功能指标及凝血指标、腹水等客观指标及食欲、体力、腹胀等主观指标的差异。结果术后治疗组血浆白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)以及凝血酶原时间(PT)与对照组比较差异有统计学意义。术后治疗组腹胀改善、食欲改善、体力改善等情况均优于对照组(P<0.05)。结论采用自体骨髓源性干细胞移植术治疗肝硬化可对患者肝功能、主观感受有一定程度改善作用。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后再修复作用的研究

目的探讨间充质干细胞（MSCS）移植对大鼠脊髓损伤后脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。方法选取SD大鼠4只作骨髓间充质细胞的分离与培养，提取MSCS；制做脊髓横断损伤模型，细胞移植组24只，PBS（磷酸盐缓冲液）液组24只，空白对照组12只。于脊髓损伤后第7天，无菌条件下，细胞移植组以微量注射器缓慢注入含MSCS的培养液5μl，磷酸盐缓冲液组5μl，对照组未加任何干预因素。分别于术后7d、14d、28d麻醉下行心脏灌流固定取T10节段脊髓，细胞移植组与磷酸盐缓冲组取出损伤节段的脊髓，空白对照组于同一节段取出相应脊髓。应用免疫组化法观察MSCS移植后大鼠脊髓损伤区BDNF的表达变化。结果脑源性神经营养因子在正常大鼠脊髓组织中有一定表达，间充质干细胞移植术后7d、14d及28d，细胞移植组脑源性神经营养因子均高水平表达，与缓冲液组相比较差别明显，具有统计学意义。结论间充质干细胞在移植后通过上调脑源性神经营养因子的表达从而促进轴突的再生，可能是治疗脊髓损伤的重要机制。     

骨髓间充质干细胞移植对急性心肌梗死中血管内皮功能及心功能的影响

目的：探讨骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的安全性和有效性,为临床应用提供些理论依据。方法收集40例急性心肌梗死的患者的临床资料,分为BMMSC移植组（ n ＝20）和PCI组（ n ＝20）,同时于本院健康体检者中选取20例为正常组（ n ＝20）。分别于干细胞移植术前、干细胞移植术后24 h、1月、3月、6月测定血管内皮功能激活的标志物ISCAM-1、SVCAM-1、SE-selection来评价内皮功能,用彩色多普勒超声仪器及6 min步行实验评定心功能。结果移植组和PCI组SICAM-1、SVCAM-1、SE-selection水平显著高于正常组（ P ＜0．05）,6个月后移植组SICAM-1、SVCAM-1、SE-selection水平显著低于PCI组（ P ＜0．05）,且2组均显著低于术前（ P ＜0．05）,高于正常组（ P ＜0．05）。6个月后移植组EF和6 min行走试验显著高于PCI组（ P ＜0．05）,且均低于正常组（ P＜0．05）。结论骨髓间充质干细胞移植对于患者心功能的恢复效果较为理想,表明骨髓间充质干细胞移植能够对心肌梗死患者的心室重构有促进作用,且显著优于冠状动脉介入方式。