MDR1基因多态性与晚期胃癌化疗敏感性的关系

目的研究多药耐药(MDR1)基因C3435T多态性与晚期胃癌患者对5-氟尿嘧啶(5-FU)/奥沙利铂(OXA)为基础的方案化疗敏感性的关系。方法病理学确诊晚期胃癌患者82例,化疗前采集外周静脉血,提取DNA,采用RT-PCR技术检测MDR1C3435T基因型。分析基因型与化疗疗效的关系。结果 82例晚期胃癌患者中,35例(42.68%)为MDR1C3435TC/C基因型,34例(41.46%)为C/T基因型,13例(15.85%)为T/T基因型。其中,2例完全缓解(CR),30例部分缓解(PR),25例稳定(SD),25例进展(PD);总有效率为39.02%(32/82)。C/C基因型患者的化疗有效率57.14%,高于C/T基因型的26.47%和T/T基因型的23.08%(P<0.05)。结论 MDR1基因C3435T多态性与晚期胃癌患者对5-FU/OXA为基础方案的化疗敏感性相关。     

地塞米松降低紫杉醇对肺癌细胞化疗作用的实验研究

目的研究地塞米松(dexamethasone,Dex)降低紫杉醇对肺癌细胞的化疗作用。方法 MTT法考察不同浓度的紫杉醇,以及地塞米松(10μmol·L~(-1))与不同浓度的紫杉醇联用,对肺癌细胞A549、Calu-1存活率的影响;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot检测地塞米松对糖皮质激素受体(GR)、P-糖蛋白(P-gP)、多药耐药蛋白1(MRP-1)表达的影响;裸鼠移植瘤实验考察地塞米松降低紫杉醇对肺癌细胞的化疗作用。结果与紫杉醇单独作用相比,地塞米松(10μmol·L~(-1))联合紫杉醇降低了紫杉醇对肺癌细胞A549、Calu-1的敏感性,使IC_(50)明显提高(A549细胞:IC_(50)由0.58μmol·L~(-1)提高到1.35μmol·L~(-1);Calu-1细胞:IC_(50)由1.10μmol·L~(-1)提高到2.10μmol·L~(-1));地塞米松使GR蛋白表达增高,同时使P-gP、MRP-1蛋白的表达明显升高;地塞米松联合紫杉醇明显降低紫杉醇对裸鼠移植瘤的抑瘤效果。结论地塞米松联合紫杉醇可能使肺癌细胞产生耐药性,降低紫杉醇的化疗效果。     

重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽对胆管癌细胞化疗的增敏作用

目的探讨重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽(rAGAP)对胆管癌细胞化疗的增敏作用及其机制。方法体外培养人胆管癌细胞株HuCC-T1、QBC939和胆管上皮细胞HIBepic,单独用药:不同浓度的rAGAP、顺铂(DDP)和5-氟尿嘧啶(5-FU)处理三株细胞,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞的增殖抑制率及半抑制浓度(IC50)。联合用药:选用rAGAP(5μg/ml)、DDP(4μg/ml)、5-FU(50μg/ml)处理三株细胞,分为对照(A)组、rAGAP(B)组、DDP(C)组、rAGAP与DDP联用(D)组、5-FU(E)组、rAGAP与5-FU联用(F)组。MTT法检测细胞存活率;荧光定量PCR方法检测细胞多药耐药基因1(MDR-1)及多药耐药相关蛋白1(MRP-1)的mRNA表达。结果单独用药结果显示rAGAP抑制细胞增殖呈时间剂量依赖性,且对癌细胞具有一定的选择性;rAGAP组的IC50值明显小于DDP组和5-FU组(P<0.01)。联合用药结果显示,胆管癌细胞株HuCC-T1和QBC939中,D组较B、C组以及F组较B、E组细胞存活减少;而且MDR-1和MRP-1表达下调(P<0.01)。而在胆管上皮细胞HIBepic细胞系里,联合用药并未表现明显的增加化疗药效果的作用。结论 rAGAP可选择性抑制胆管癌细胞,与化疗药DDP和5-FU联用可增强化疗敏感性。     

IL-2与化疗同期应用对非小细胞肺癌化疗耐药影响的临床观察

目的评价标准化疗方案无效时同期应用化疗和IL-2治疗晚期非小细胞肺癌患者的近期疗效和不良反应。方法 96例经4～6周期标准方案化疗无效的晚期非小细胞肺癌患者(单纯化疗组),按病理类型、性别、年龄、体质状况等配成48对,随机分入生物化疗组(A组)和单纯IL-2组(B组)。A组维持原化疗方案不变,按标准周期进行,并同期应用IL-2,100万IU,皮下注射,每周3次,连用8周,8周评价疗效。B组单独应用IL-2,100万IU皮下注射,每周3次,连用8周,8周评价疗效。结果 A组总有效率(CR+PR)为18.7%。治疗前后差异有显著性(P<0.05)。B组总有效率(CR+PR)为4.2%。两组间差异显著(P<0.05)。主要不良反应为发热、骨髓抑制、消化道反应,两组间差异无显著性。结论晚期非小细胞肺癌患者在标准化疗方案治疗无效时,保持原化疗方案不变同期应用IL-2可进一步提高疗效,不良反应无明显加大,且可耐受。     

靶向survivin基因的小干扰RNA对食管癌细胞Eca-109 化疗敏感性的影响

目的 利用RNAi (RNA interference, RNAi) 技术抑制食管癌Eca-109细胞survivin基因表达,观察survivin基因沉默后对Eca-109细胞化疗敏感性的影响。方法 构建靶向survivin基因特定序列的小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)真核表达载体并转染Eca-109细胞,筛选得到稳定转染的survivin干扰组细胞Eca-109 /si-survivin,同时设转染无关干扰质粒的Eca-109细胞为阴性对照组,未转染的Eca-109细胞为空白对照组;通过Western Blot法检测干扰前后survivin基因沉默抑制效果;随后将各组细胞与不同浓度的氟尿嘧啶(5-Fu)作用,MTT法检测各组细胞对5-Fu的半数抑制浓度(IC₅₀),流式细胞仪分析各组细胞的凋亡率。结果 干扰组Eca-109 /si-survivin细胞survivin蛋白表达水平(18.75±3.12)较阴性对照组Eca-109 /si-control(44.17±3.15)及空白对照组Eca-109 (46.20±2.62)明显下调(P<0.05);联合应用5-Fu的Eca-109 /si-survivin干扰组细胞IC₅₀为(18.75±1.53)mg·L-1,显著低于空白对照组(39.65±1.75)mg·L-1和阴性对照组(38.95±1.34)mg·L-1,差异具有统计学意义(P<0.05);联合应用5-Fu的Eca-109 /si-survivin干扰组细胞凋亡率为(37.35±1.52)%,明显高于空白对照组(11.26±1.21)%和阴性对照组(12.34±1.32)%,差异具有显著性(P<0. 05)。 结论 靶向survivin的siRNA能特异性沉默survivin基因表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,并增强人食管癌Eca-109细胞对5-Fu的化疗敏感性。     

肺癌化疗耐药分子标志及其逆转研究

目的:探讨肺癌化疗耐药分子标志及其逆转的临床与基础应用评价。方法:采用国内外相关文献,结合我们在这一领域长期研究,深入归纳与分析。结果与结论:肺癌化疗耐药主要分子标志有多药耐药基因(MDR1)表达增加,多药耐药相关蛋白(MRP)基因表达增加,谷胱甘肽解毒酶系统活性增强和线粒体凋亡途径异常,综合采用逆转耐药分子,耐药基因siRNA和中医药结合的逆转耐药策略,为彻底攻克肺癌耐药奠定坚实研究基础。     

硒对化疗敏感性及副作用影响的研究进展

硒是人体必需的微量元素,在恶性肿瘤的预防和治疗方面的潜在价值已引起越来越广泛的关注。化疗是恶性肿瘤的主要治疗手段之一。近年来,许多研究证实硒具有化疗增敏及减轻化疗毒副反应的作用,硒与化疗联合将具有广阔的应用前景。本文主要从基础研究和临床试验方面对硒与化疗的研究进展进行综述。     

地西他滨对肺腺癌细胞生长的影响

目的 探讨甲基转移酶抑制剂地西他滨(5-Aza-CdR)对肺腺癌A549细胞增殖及抑癌基因XAF1表达水平的影响.方法 用不同浓度地西他滨干预24、36和48 h后,采用MTT法检测肺腺癌A549细胞增殖的变化,半定量RT-PCR检测细胞中XAF1 mRNA的表达水平变化.结果 地西他滨浓度为1.0、5.0和10.0 μmol/L干预48 h后,细胞增殖抑制率分别为(35.1±3.2)％、(53.3±3.2)％和(64.3±2.1)％,均明显高于对照组的(3.3±1.4)％(P＜0.01),XAF1 mRNA表达水平分别为2.11±0.86、3.19±0.71和3.96±0.78,亦均明显高于对照组的1.41±0.24(P＜0.05).其作用随药物浓度增加和作用时间延长而增强(P＜0.05).结论 甲基转移酶抑制剂地西他滨抑制肺腺癌A549细胞增殖,可能与其上调细胞中抑癌基因XAF1表达有关.     

原发性肝癌的体外化疗药物敏感性探析

目的探究原发性肝癌对体外化疗药物的敏感性。方法选取我院2005年1月至2010年12月间确诊的原发性肝癌患者50例,选用MTT比色法,分别测定原发性肝癌对7种化疗药物的体外敏感性,包括阿霉素(ADM)、5-氟脲嘧啶(5-Fu)、顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、长春新碱(VCR)、羟基喜树碱、甲氨蝶呤(MTX)。结果肝癌患者对化疗药物的敏感率由高到低的顺序为羟基喜树碱>5-氟脲嘧啶>丝裂霉素>顺铂>阿霉素>甲氨蝶呤>长春新碱,各组敏感性具有明显的差异(P<0.05)。结论原发性肝癌对化疗药物的敏感性不同,临床治疗应该根据药敏试验的结果进行个体化综合治疗。     

食管癌细胞对肿瘤化疗药物体外敏感性的测定

目的：测定食管癌细胞对肿瘤化疗药物的体外敏感性，寻找最佳化疗方案。方法：采用四氮唑盐（MTT）法，取18种化疗方案所用的药物对45例食管癌细胞进行体外敏感性测定。结果：不同个体的食管癌细胞对化疗药物的敏感性差异较大，联合用药较单一用药的平均抑制率高。结论：MTT法是一种简便而快速的测定肿瘤体外药物敏感性的试验方法，测定结果可用于食管癌临床个体化化疗方案的选择。     

雷公藤甲素增加乳腺癌细胞对阿霉素敏感性的实验研究

目的探索雷公藤甲素对于人耐药乳腺癌细胞的抑制作用及其对阿霉素化疗敏感性的影响。方法体外培养阿霉素耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR细胞株,采用不同浓度的雷公藤甲素和阿霉素单药或联合用药处理。利用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测各组细胞的增殖活性,利用流式细胞术检测各组细胞凋亡及细胞周期。结果雷公藤甲素可抑制阿霉素耐药乳腺癌癌细胞的增殖,且存在着明显的剂量-效应关系。与单独使用雷公藤甲素或者阿霉素相比,雷公藤甲素联合阿霉素组的细胞凋亡率明显增高。结论雷公藤甲素不仅能对耐药乳腺癌细胞的增殖产生抑制作用,同时也可以增强乳腺癌细胞对阿霉素化疗的敏感性。     

Metabolism of nicotine in rat lung microvascular endothelial cells

The aim of this study was to examine whether cultured rat lung microvascular endothelial cells (LMECs), which constitute the gas-blood barrier, have the ability to metabolize nicotine. Nicotine was biotransformed to cotinine and nicotine N'-oxide by cytochrome 450 (CYP) and flavin-containing monooxyganase (FMO), respectively, in rat LMECs. The intrinsic clearance (Vmax1/Km1) for the cotinine formation was about 20 times as high as that for the trans-nicotine N'-oxide formation in the low-Km phase, indicating that oxidation by CYP was much higher than that by FMO. On the other hand, as shown in Eadie-Hofstee plots, the formation of cis-nicotine N'-oxide was monophasic, whereas the plot for the trans-nicotine N'-oxide formation was clearly biphasic. These results suggest that nicotine N'-oxide was stereoselectively metabolized to cis and trans forms. However, in the high-Km phase there was no significant difference in N'-oxidation between the cis and trans forms. Moreover, we suggest that CYP2C11 and CYP3A2 are key players in the metabolism to cotinine of nicotine in rat LMECs using the respective enzyme inhibitors (tranylcypromine and troleandomycine). On the other hand, methimazole (5 microM) caused 73 and 45% decreases in the formation of N'-oxides of cis- and trans- enantiomers, respectively, demonstrating the presence of FMO in rat LMECs. These results suggest that rat LMEC enzymes can convert substrates of exogenous origin such as nicotine for detoxication, indicating LMECs are an important barrier for metabolic products, besides hepatic cells.     

Effect of Oct-4 on chemosensitivity of cisplatin against gastric cancer cells

目的:建立胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株,研究Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用.方法:使用顺铂逐步增加剂量法诱导胃癌BGC-823细胞,以建立其多药耐药细胞株BGC-823/DDP; MTT细胞毒实验检测顺铂对肿瘤细胞的细胞毒作用;半定量RT-PCR检测Oct-4基因的表达;基因转染干扰Oct-4表达;Western blot实验检测Oct-4蛋白的表达改变.结果:经过30～34周的诱导我们建立了胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对BGC-823和BGC-823/DDP细胞的IC50值分别为(2.33±0.12)和(21.46±0.97)μmol/L(P＜0.01),与BGC-823细胞比较,BGC-823/DDP细胞对顺铂耐药是其9.21倍;半定量RT-PCR检测显示胃癌耐药株BGC-823/DDP高表达Oct-4基因;Western blot结果显示化学合成的siRNA可以靶向下调Oct-4蛋白的表达;siRNA干扰BGC-823/DDP细胞Oct-4基因的表达后,BGC-823/DDP细胞对顺铂的的IC50值从(22.04±1.84) μmol/L减小到(6.15±0.53)μmol/L,二者差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:研究结果表明,Oct-4基因的高表达在胃癌顺铂的耐药中起着重要的作用.     

Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用

目的:建立胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株,研究Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用。方法:使用顺铂逐步增加剂量法诱导胃癌BGC-823细胞,以建立其多药耐药细胞株BGC-823/DDP;MTT细胞毒实验检测顺铂对肿瘤细胞的细胞毒作用;半定量RT-PCR检测Oct-4基因的表达;基因转染干扰Oct-4表达;Western blot实验检测Oct-4蛋白的表达改变。结果:经过30～34周的诱导我们建立了胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对BGC-823和BGC-823/DDP细胞的IC50值分别为(2.33±0.12)和(21.46±0.97)μmol/L(P<0.01),与BGC-823细胞比较,BGC-823/DDP细胞对顺铂耐药是其9.21倍;半定量RT-PCR检测显示胃癌耐药株BGC-823/DDP高表达Oct-4基因;Western blot结果显示化学合成的siRNA可以靶向下调Oct-4蛋白的表达;siRNA干扰BGC-823/DDP细胞Oct-4基因的表达后,BGC-823/DDP细胞对顺铂的的IC50值从(22.04±1.84)μmol/L减小到(6.15±0.53)μmol/L,二者差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:研究结果表明,Oct-4基因的高表达在胃癌顺铂的耐药中起着重要的作用。     

尼古丁对人外周血内皮干细胞数量和活性的影响

目的　观察尼古丁影响出生后的血管新生是否与其影响外周血内皮干细胞(EPC)的数量和活性有关。方法　采用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板,培养7d后,收集贴壁细胞,加入不同浓度尼古丁(分别为10 - 12 ,10 - 10 ,10 - 8,10 - 6 及10 - 4mol·L- 1)培养一定的时间(12 ,18,2 4 ,32及4 8h)。激光共聚焦显微镜鉴定FITC UEA Ⅰ和DiI acLDL双染色阳性细胞被认为是正在分化的EPC ,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPC ,倒置荧光显微镜下计数。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、体外血管生成试剂盒和粘附能力检测实验,观察EPC的增殖能力、迁移能力、体外血管生成能力和粘附能力。结果　尼古丁在浓度为10 - 12 ～10 - 8mol·L- 1范围内显著增加外周血EPC数量,改善外周血EPC的粘附能力、迁移能力、增殖能力和体外血管生成能力,并且EPC数量随尼古丁浓度增加而增加,10 - 8mol·L- 1浓度尼古丁EPC影响最为显著(P <0 .0 1,n =6 )。另外,10 - 8mol·L- 1尼古丁呈时间依赖地增加外周血EPC数量,改善外周血EPC功能。而尼古丁在浓度>10 - 6 mol·L- 1却减少外周血EPC数量,损害外周血EPC功能。结论　尼古丁可增加EPC数量并改善其功能,然而高浓度尼古丁或许对EPC具有毒性     

老年肺癌患者肿瘤细胞和外周血淋巴细胞体外化疗药敏试验的相关性

目的 探讨老年非小细胞肺癌患者体外肿瘤细胞和外周血淋巴细胞对化疗药物敏感性的关系.方法 选取52例老年非小细胞肺癌患者,采用MTT法体外药敏试验,检测外周血淋巴细胞和肿瘤细胞对13种化疗药物的敏感性.结果 老年非小细胞肺癌患者外周血淋巴细胞对顺铂(CDDP)、卡铂(CBP)、奥沙利铂(LO HP)、紫杉醇(PTX)、环磷酰胺(CTX)、异环磷酰胺(ICTX)、吡喃阿霉素(THP)、依托泊苷(VP-16)、吉西他滨(GEM)、长春新碱(VCR)、长春瑞滨(NVB)等11种化疗药物的敏感性与非小细胞肺癌肿瘤细胞的药敏结果有相关性.而对阿霉素、羟基喜树碱这2种化疗药物的敏感结果无相关性.结论 老年非小细胞肺癌患者可以应用外周血淋巴细胞代替肿瘤细胞进行体外化疗药物敏感试验.     

益气除痰方增强肺癌化疗药物敏感性的作用机制

目的 从内质网应激反应的角度,研究益气除痰方增强化疗药物敏感性的作用机制.方法 取40只BALB/c裸鼠接种人肺腺癌细胞A549,建立裸鼠移植瘤模型,随机均分为模型组、顺铂组、益气除痰方低、高剂量组及联合用药组,造模后第8天,ig给予益气除痰方低、高剂量组及联合用药组小鼠相应剂量的益气除痰方,qd,连续14d,第17天,ip给予顺铂组和联合用药组小鼠顺铂注射液,qd,连续5d,第22天,检测裸鼠移植瘤的体积与瘤重,计算抑瘤率,并采用免疫组化法、RTQ-PCR法及Western blot法检测肿瘤组织中ATF6、XBP1的表达.结论 益气除痰方能抑制裸鼠肺癌A549细胞的生长,与化疗药物顺铂联用能起到增效作用,其机制可能与下调内质网应激反应相关蛋白ATF6、XBP1的表达而抑制肿瘤生长有关.     

Effect of chronic nicotine administration on the rat lung and liver: beneficial role of melatonin

Cigarette smoking is common in societies worldwide and has been identified as injurious to human health. The current study was designed to investigate the protective effect of melatonin, a radical scavenger and antioxidant, on nicotine-induced oxidative stress and morphological changes in the lung and liver of the rats. Three groups of male rats (controls, nicotine-treated [0.5 mg/kg], and nicotine plus melatonin [10 mg/kg] were used in this study. Levels of lipid peroxidation (LPO) products, superoxide dismutase (SOD) and glutathione (GSH) activity were measured in the tissue homogenates. Immunohistochemical and histological changes were also examined. The results revealed an increase in LPO and decrease in both SOD and GSH activity in the lung and liver homogenates on nicotine-treated rats. Melatonin administration to nicotine-treated rats attenuated the increase in LPO products and restored the SOD activity and GSH levels. The immunohistochemical and histological examination demonstrated marked increase in the immunoreactivity of nitrotyrosine, a specific "footprint" of peroxynitrite, and tissue damage in the lung and liver of nicotine-administered animals. Again, melatonin treatment reduced both nitrotyrosine reactivity and tissue damage associated with nicotine administration. These results, along with previous observations, suggest that melatonin may be useful in combating free radical-induced oxidative stress and tissue injury that is a result of nicotine toxicity.     

Effect of urinary pH and nicotine excretion rate on plasma nicotine during cigarette smoking and chewing nicotine gum

1 Plasma nicotine levels produced by chewing nicotine gum were compared with those obtained by cigarette smoking under conditions of controlled urinary pH.

2 Although absorption was slower, plasma levels comparable to cigarette smoking were built up on 4 mg (but not 2 mg) nicotine gum.

3 Urinary excretion of nicotine was influenced markedly by pH and the rate of urine flow.

4 Plasma nicotine was higher under alkaline compared to acidic conditions (P < 0.001) but the rate of urinary nicotine excretion appeared to have little effect on the plasma level.