咪唑啉受体抗血清选择性蛋白的表达、纯化及单克隆抗体制备

目的:表达和纯化咪唑啉受体抗血清选择性蛋白(imidazoline receptor antiserum-selected protein,IRAS protein),制备IRAS蛋白的单克隆抗体.方法:采用基因重组技术在大肠杆菌表达IRAS蛋白;金属镍螯合的Ni-NTA亲和层析柱进行蛋白纯化;杂交瘤技术建立分泌IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株;以间接ELISA方法筛选分泌特异性IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞;采用蛋白免疫印迹、间接免疫荧光方法鉴定单克隆抗体的特异性.结果:成功表达并纯化了IRAS重组蛋白,纯度达到95%.共筛选出5株分泌IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水并纯化了IRAS的单克隆抗体,腹水中单克隆抗体效价分别为1∶ 8×106,1∶ 2×106和1∶ 5×106,属于IgG1亚型.该抗体能与原核及真核系统表达的IRAS重组蛋白发生特异性反应,间接免疫荧光显示IRAS蛋白主要定位于细胞质中.结论:建立了稳定分泌IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,成功制备了特异性好的IRAS单克隆抗体,为研究IRAS的功能提供了有力的研究工具.     

EPO单克隆抗体的制备

目的：制备EPO单克隆抗体,为高原红细胞增多症的治疗研究提供材料。方法：用细胞融合技术制备能稳定分泌EPO单克隆抗体的细胞株,对该细胞株扩增培养,注射入BALB小鼠腹腔内,（7～10）天后搜集腹水并进行腹水抗体效价测定,提纯,浓缩,进行抗体浓度测定。结果：得到一株能稳定分泌EPO单克隆抗体的细胞株,并制备出高效价的EPO单克隆抗体。结论：该EPO单克隆抗体的制备成功为高原红细胞增多症的治疗的基础研究提供了原料。     

单克隆抗体的展望：过去、现在和将来

1975年，单克隆抗体制备方法的建立使肿瘤的探测和治疗方法发生了革命性的变化。但单纯依靠单克隆抗体并未能达到预期的目的。为了获得能被推广的临床结果，还要求配合如生物反应修饰剂等更复杂的技术。     

基孔肯亚病毒中和单克隆抗体的筛选与鉴定

目的 :建立抗基孔肯亚病毒单克隆抗体细胞株 ,筛选具有中和活性的特异性单克隆抗体。方法 :利用细胞融合技术建立抗基孔肯亚病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,用细胞培养中和试验初筛具有中和活性的单克隆抗体 ,用固定单克隆抗体稀释病毒方法进行乳鼠中和试验 ,进一步验证单克隆抗体的保护作用 ;用中和交叉试验鉴定中和单克隆抗体反应的特异性。结果 :用免疫荧光法检测建立了 9株能稳定分泌抗基孔肯亚病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,初筛出 4株具有中和活性的单克隆抗体 ,其中 1F1单克隆抗体稀释 2 0 0倍时可保护 50 %细胞不产生细胞病变 ;乳鼠中和试验1F1单克隆抗体中和指数为 10 3.3,对试验小鼠有较强的保护作用。中和交叉试验表明 ,1F1单克隆抗体只中和基孔肯亚病毒 ,与其他病毒无交叉反应 ,特异性较高。结论 :制备了 9株抗基孔肯亚病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,筛选得到了 1F1具有较强中和活性的特异性单克隆抗体 ,可望为基孔肯亚病毒病的诊断、紧急预防与治疗提供良好试剂     

EPO单克隆抗体抑制CFU-E研究

目的 探讨EPO单克隆抗体是否具有抑制红系集落形成单位（CFU-E）形成的功能.方法 对大鼠骨髓进行定向体外CFU-E培养,按以下条件进行分组培养：空白对照组（不加EPO）、常规组（加EPO,不加EPO单克隆抗体）、EPO单克隆抗体干预组（EPO＋EPO单克隆抗体）.培养168 h后,观察各组CFU-E数量.结果 空白对照组、常规组、EPO单克隆抗体干预组的CFU-E集数落分别为0.0±0.0、151.8±23.3和10.7±3.9.EPO单克隆抗体干预组与常规组比较,CFU-E集落数存在非常显著性差异（P＜0.01）.结论 该EPO单克隆抗体可明显抑制CFU-E形成,即抑制红细胞系的增殖,是治疗高原红细胞增多症的可能药物.     

抗PEA受体结合区单克隆抗体的制备及鉴定

目的探讨绿脓杆菌外毒素A(PEA)中和性单克隆抗体在预防和治疗绿脓杆菌感染中的免疫保护作用.方法以重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA方法筛选细胞培养上清,采用有限稀释法对阳性孔进行克隆,3次克隆后获得4株能稳定分泌抗PEA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1C4,1D4,2E12和3C6.结果细胞培养上清ELISA效价为4000～8000,腹水ELISA效价可达25600～51200,其中3C6抗体在细胞上的中和试验显示具有较高的中和效价,其亲和常数为8.93×108.结论获得的单克隆抗体可在抗烧伤绿脓杆菌感染中发挥重要作用.     

单克隆抗体肿瘤显象

近来出现的杂交瘤技术引出了另一种运用抗肿瘤抗体进行肿瘤显像和治疗的方法。由于免疫特异性和体外杂交技术能产生单克隆抗体的优点,这种方法比常规的多克隆抗体的方法更合乎需要和令人满意。单克隆抗体比常规抗血清容易纯化和生产,尤其是不象常规抗血清为了去掉其中的不相关免疫球蛋白需要进行繁琐的广泛纯化。虽然至今尚未能阐明单克隆抗体用于肿瘤显像和治疗的规律,但是这个问题引起了这个领域中研究人员的极大兴趣。在特定肿瘤模型或癌中产生一种或一组特定的单克隆抗体,其结果可能推测出同种类的其他肿瘤,将激励着人们作更深入的研究。把这种研究结果移用到临床中去,将是又一种富有意义的挑战。     

白念珠菌烯醇化酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备并鉴定抗白念珠菌烯醇化酶单克隆抗体杂交瘤细胞株。方法：提取白念珠菌标准株ATCC-9002胞内烯醇化酶做抗原,再用细胞融合技术制备单克隆抗体,采用间接ELISA法对单克隆抗体进行筛选和鉴定。结果：建立了1株持续分泌抗白念珠菌烯醇化酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中Mab07．4G6-F3-C7小鼠腹水单克隆抗体的最高稀释度达1：12800,单克隆抗体的重链属IgG1亚类,轻链属K型;Western blot证实单抗能与自念珠菌烯醇化酶抗原特异性地结合。结论：本研究建立了抗白念珠菌烯醇化酶杂交瘤细胞株单克隆抗体,为快速诊断白念珠菌感染奠定了实验基础。     

静电吸附法制备抗αvβ3靶向脂质微泡及体外寻靶实验

 目的 探讨静电吸附方法制备携带抗αvβ3单克隆抗体的靶向微泡的可能性,并初步评价该靶向微泡在体外的寻靶能力.方法 将适量的负电荷脂质微泡造影剂与抗αvβ3单克隆抗体混合,利用静电吸附方法,制备亲黑色素瘤的靶向超声造影剂,并通过观察与黑色素瘤细胞的结合情况,验证该靶向微泡的靶向性.结果 静电吸附方法能够使抗体与微泡结合.携带抗αvβ3单克隆抗体的靶向微泡粘附在黑色素瘤细胞表面的靶向微泡数目明显多于普通对照微泡.结论 静电吸附法能够制备脂质靶向超声微泡,体外亲肿瘤细胞的寻靶试验验证了携带抗αvβ3单克隆抗体的靶向超声微泡具有一定的寻靶能力.     

森林脑炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

用森林脑炎病毒森张株免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞在融合剂PEG-1000的作用下进行融合,用间接免疫荧光法筛选,获得了6株分泌抗森林脑炎病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株.通过免疫荧光交叉鉴定,6份单克隆抗体均与黄病毒属的登革4型病毒、流行性乙型脑炎病毒无属间交叉.与森林脑炎病毒COφ株、国内的森候株、森董株有交叉反应,属森林脑炎病毒种特异.6份单克隆抗体均无血凝抑制活性和补体结合活性.3株杂交瘤细胞培养上清浓缩物经抗鼠Ig免疫血清双扩鉴定为IgM.染色体数的检查为89～110条.6株杂交瘤细胞连续传代3～6个月,冻存复苏后仍能稳定地分泌特异的单克隆抗体.     

抗PSMA7单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的制备抗蛋白酶体α7亚基(PSMA7)的单克隆抗体,为PSMA7的功能研究奠定基础。方法以纯化的重组蛋白PSMA7为抗原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备PSMA7单克隆抗体,并用间接ELISA法和Western blot法对单克隆抗体的特性进行鉴定。结果成功建立两株稳定分泌抗PSMA7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为B013和B001。检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1∶128和1∶256,腹水效价为1∶25600和1∶32000。两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。Westernblot及免疫组化实验证实,两株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性PSMA7蛋白。结论成功建立了两株效价高、特异性好的抗PSMA7单克隆抗体杂交瘤细胞,制备的单克隆抗体可用于PSMA7蛋白的鉴定,为其生物学功能研究奠定了基础。     

放射性核素标记单克隆抗体

目前,分子医学中一个最迫切的问题是运送为能中和或修补分子缺陷而专门设计的药物到达指定的靶组织,以加强疗效,减少药物对其它组织的毒性反应.单克隆抗体作为一种分子载体,正日益受到人们的重视.适当的放射性核素和使用更简便、更好的标记方法是达到这一目的的重要步骤.     

癌细胞表面抗原CA19-9放射免疫测定

使用杂交瘤技术产生单克隆抗体(1975,köhler 与Milstein)[1]为临床免疫诊断与治疗开辟了广阔的前景。自70年代后期以来,不少作者以杂交瘤技术产生单克隆抗体,试图能找到针对癌细胞表面特异抗原(tumour speci-fic antigen)的单克隆抗体,以利于肿瘤早期诊断与治疗。然而迄今为止成功的例子尚为数不多。1979年,Koprowski[2] 等用杂交瘤技术产生了针对结肠癌细胞的单克隆抗体。     

抗大鼠HSP70蛋白单克隆抗体的制备及特性研究

目的制备大鼠HSP70蛋白单克隆抗体并对其性质进行研究。方法利用PCR技术扩增大鼠全长hsp70,插入表达质粒pET-28a,pMAL-c2x,诱导表达,采用亲和层析纯化融合蛋白;用HIS-HSP70融合蛋白免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备大鼠HSP70单克隆抗体;采用Western印迹和免疫组化方法对抗体性质进行鉴定,ELISA方法确定抗体的表型。结果亲和层析纯化HIS-HSP70蛋白纯度在97.6%,获得6株可稳定分泌抗HSP70mAb的杂交瘤细胞系;抗体的亚类均是IgG1类κ链的。Western印迹结果显示6株单抗均能识别天然的大鼠HSP70蛋白;免疫组化结果显示3株抗体可以识别组织的HSP70蛋白。结论成功获得6株有活性HSP70单克隆抗体,可以识别HSP70蛋白不同表位,为进一步研究HSP70单克隆抗体在疾病中的作用奠定基础。     

肿瘤M2型-丙酮酸激酶单克隆抗体的制备及免疫放射分析方法的建立

目的 制备肿瘤M2型-丙酮酸激酶(M2-PK)单克隆抗体,并建立免疫放射分析的检测方法.方法 用肿瘤M2-PK抗原免疫小鼠,经细胞融合及筛选后得到一对单克隆抗体,建立免疫放射分析的方法,并评价该检测方法的灵敏度、特异度及精密度.结果 获得了1A6和3F8两株效价高、特异度好的单克隆抗体,建立了双抗体夹心免疫放射分析方法.该检测方法的分析灵敏度为2 U/ml,临床灵敏度和特异度分别为70.5％和89.0％,提供的M2-PK的正常参考值范围是＜14.8 U/ml,批内不精密度＜5％,批间不精密度＜10％.结论 建立的双抗体夹心免疫放射分析法可用于体检筛查及肿瘤患者的早期诊断,做到尽早治疗,提高患者的生存质量.     

抗Erbin特异性单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗Erbin单克隆抗体.方法:应用基因工程技术构建含Erbin PDZ序列的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)以获得重组蛋白的表达;采用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白;通过质谱鉴定重组蛋白;利用纯化的重组蛋白免疫小鼠,通过细胞融合技术制备单克隆抗体.结果:构建了原核表达载体pET-28a(+)-Erbin PDZ,获得了重组蛋白在工程菌中的高效表达.通过对以包涵体形式存在的重组蛋白进行洗涤、溶解、复性和纯化,获得了纯度在90%以上的重组蛋白.经质谱鉴定确证表达的重组蛋白为Erbin PDZ.用重组蛋白免疫小鼠后,经细胞融合、筛选及鉴定,获得了高效价的单克隆抗体.讨论:该抗体可识别天然状态下的Erbin蛋白,可用于ELISA、免疫荧光和免疫沉淀实验.抗Erbin单克隆抗体的制备为研究Erbin的功能奠定了基础.     

免疫闪烁显像的现状和将来

自1975年Kohler和Milstein用细胞融合法开发制备单克隆抗体以来,发现了多种肿瘤相关抗原并制成单克隆抗体,这些单克隆抗体具有识别肿瘤相关的特定物质的性质,不仅可用于检出肿瘤,并可检出心肌损害部位和血栓部位.一、关于单克隆抗体单克隆抗体是免疫球蛋白,有多种类型.在免疫球蛋白中,产生量最多的是IgG,现以IgG为例,来探讨它的结构:它是用二硫键结合的两条长重链基础,形成不能改变的区域;每个重链的一端各自结上短的轻链,     

Gd-DTPA标记单克隆抗体对荷人肝癌裸鼠的MR成像研究

目的评价特异性MR对比剂Gd-DTPA-单克隆抗体HAb18对肿瘤的强化效果.材料与方法制备Gd-DTPA标记的单克隆抗体,并测定每分子抗体所结合的Gd 3数目及其免疫活性.12只荷人肝癌裸鼠分为两组,分别给予Gd-DTPA-McAb和Gd-DTPA后进行MR扫描,测量SE T1WI平扫及增强后10 min、30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h图像内肿瘤的信号强度,绘制信号强度-时间曲线,并计算肿瘤强化率及对比度噪声比.结果 Gd-DTPA-单克隆抗体组在注射MR对比剂后的早期,肿瘤表现为缓慢轻度的强化,在注射对比剂24 h后,肿瘤强化达25%,与其他各时间点有统计学差异.Gd-DTPA对照组内,肿瘤表现为快进快出的强化特点.结论使用Gd-DTPA-单克隆抗体进行靶向显像具有特异性作用,有助于肿瘤的定性诊断.     

抗伏马菌素B1单克隆抗体的制备和特性

目的建立敏感、特异和快速的针对伏马菌素B1(fumonisin B1, FB1)的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay ,ELISA)检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒.方法利用B细胞杂交瘤技术,建立能分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果用伏马菌素B1-牛血清白蛋白(FB1-BSA)偶联物免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经过3～4次亚克隆建立了1个稳定分泌抗伏马菌素B1毒素抗体的杂交瘤细胞株,命名为5A9.将杂交瘤细胞打入BALB/c小鼠腹腔,获得含抗伏马菌素B1毒素单克隆抗体的腹水,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化,得到单克隆抗体.该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为2.56×106,参考工作浓度为3.2×105.纯化后抗体的IgG含量为10.4 g/L,亲和常数为8.3×10-8 mol/L.该抗体与其他结构类似物无交叉反应,具有较高的特异性.结论制备了具有高特异性和亲和力的抗伏马菌素B1单克隆抗体,初步形成了针对伏马菌素B1的ELISA检测试剂盒.     

实体瘤免疫导向治疗研究进展

实体瘤的免疫导向治疗主要通过单克隆抗体以及偶联物对肿瘤相关靶点的特异性结合发挥对肿瘤细胞的特异性杀伤作用.许多药物对肿瘤细胞有高度靶向性杀伤作用并在动物实验中证实,有些药物已经应用于临床.就原理、单克隆抗体、肿瘤相关靶点、单克隆抗体偶联物以及介入放射学在该领域的运用等方面对实体瘤免疫导向治疗的研究进展做一综述.