空弯菌苗诱导不同品系小鼠的肠道粘膜免疫应答

<正> 空肠弯曲菌是感染率不亚于沙门氏菌和志贺氏菌的重要肠道致病菌。该菌能在宿主体内粘附、定居、侵入血流和产生毒素。在临床上,可见类似炎症性肠病(IBD)的病理学变化。我们曾报道用甲醛化空弯菌菌苗(CJ-S131)经口免疫昆明小鼠,成功地诱导了该鼠的特异性肠道粘膜免疫应答,     

空肠弯曲菌HSP43诱导自身抗体产生

小鼠每周注射１次次空弯菌ＨＳＰ４３共１０Ｗ。ＨＳＰ４３抗体第４周起显著升高一直持续到１６Ｗ，抗ｄｓ－ＤＮＡ，ｓｓ－ＤＮＡ自身抗体在６Ｗ和１６Ｗ出现两个高峰，抗ＥＮＡ自身抗体在４－１６Ｗ逐渐升高，抗组蛋白抗体在８Ｗ最高然后下降。     

痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠诱导不同部位淋巴组织的免疫应答

目的 探讨痢疾菌苗滴鼻免疫后，小鼠不同粘膜部位和其它部位免疫应答的影响。方法将Ｂａｌｂ／ｃ小鼠随机分为３组，每组１５只。舰疾菌苗株 ＴＩＭ－２１１７或 ＦＳ－５４１６，按 ５×10～6、１×１０～７、４×１０～７和４×１０～７ＣＦＵ／只滴鼻跟 Ｂａｌｂ／ｃ小鼠４次涧隔两 ｗｂ。分离鼻相关淋巴组织（ＮＡＬＴ）、鼻通道（ＮＰ）及脾、小肠的ＰＰ结淋巴细胞。一部分细胞采用流式细胞术检测淋巴细胞表型的变化；另一部分细胞与全菌破碎抗原共培养，于不同时间点取出，提取ＲＮＡ做ＲＴ－ＰＣＲ。结果两株菌苗经鼻内免疫后，ＮＡＬ、ＮＰ和ＰＰ结的淋巴细胞中ＣＤ３Ｔ细胞显著增加，其中以ＣＤ４＋Ｔ细胞增加为主。ＴＳＭ－２１１７株免疫组的脾细胞中，Ｂ２２０＋细胞显著增加；而ＦＳ－５４１６株免疫组的脾细胞中，ＣＤ３＋Ｔ细胞显著增加。免疫小鼠的ＮＡＬＴ、ＮＰ和ＰＰ结淋巴细胞，在体外经抗原刺激后，均在不同时间出现ＩＦＮ－γ和ＩＬ-４ｍＲＮＡ的表达，ＴＧＦ－β ｍＲＮＡ的表达在免疫前后无明显变化。结论痢疾菌苗经鼻粘膜免疫，可诱导不同粘膜部位及全身免疫应答的产生。     

空肠弯曲菌DNA疫苗构建及其疫苗免疫程序研究

目的:构建空肠弯曲菌peb1A基因真核表达载体,探讨DNA疫苗不同免疫程序的免疫效果。方法:以重组pET28a(+)-peb1A质粒为模板,将空肠弯曲菌peb1A基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转染COS-7细胞中表达,Western blot鉴定表达蛋白;昆明小鼠随机分组:设空白对照组、空载体对照组、pcDNA3.1(-)-peb1A实验组,用ELISA法检测免疫后的昆明小鼠血清IgG和IgM抗体水平。结果:重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A经双酶切和PCR鉴定,构建正确。peb1A基因测序结果与GenBank中peb1A基因序列一致。重组质粒成功转染COS-7细胞,并能正确表达重组蛋白。裸DNA组IgG水平均高于两对照组,有显著性差异(P<0.05)。同一剂量短时间(0、10、20天)免疫程序优于长时间(0、15、25、35天)免疫程序(P<0.05)。结论:成功构建空肠弯曲菌真核表达重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A,其经肌肉注射免疫小鼠,具有较好的免疫原性,短时间免疫程序免疫效果好。     

空肠弯曲菌HSP43诱导自身免疫机理──分子模拟和抗原优势

我们曾发现空肠弯曲菌４３ｋＤ热休克蛋白（ＨＳＰ４３）能诱导小鼠产生自身免疫应答，本文则进一步分析了这种诱导作用的机理。二株针对ＨＳＰ６０保守区序列的单克隆抗体ＩＩＨ９和ＭＬ－３０不但能结合人及小鼠细胞中ＨＳＰ６０家族成员，而且也能结合ＨＳＰ４３，表明ＨＳＰ４３、人及小鼠ＨＳＰ６０三者均属同一家族成员，具有序列上的高度同源性。小鼠用空肠弯曲菌免疫后出现了针对１０种菌体蛋白的抗体，其中最早被诱导的抗体是针对ＨＳＰ４３的，并且该种抗体在随后８０ｄ观察期间内保持了较高活性，表明ＨＳＰ４３是优势抗原。本文结果提示，ＨＳＰ４３较易被免疫系统识别而产生应答，通过和宿主ＨＳＰ６０高度序列同源性而可能呈现分子模拟，从而诱导自身免疫损伤。     

小鼠肠上皮内淋巴细胞在粘膜免疫应答中的形态学研究

采用免疫组织化学和电镜方法，观察了ＢＡＬＢ／ｃ小鼠灌服伤寒杆菌后回肠及集合淋巴小结圆顶区肠上皮内淋巴细胞（ＩＥＬ）的形态和分布特征，以探讨ＩＥＬ在抗原诱导下的粘膜免疫应答中的作用。经免疫组织化学方法证实灌服伤寒杆菌后回肠及集合淋巴小结圆顶区肠上皮内含Ｂ和Ｔ两种淋巴细胞，以Ｂ淋巴细胞为主；电镜下可见上皮内淋巴细胞主要由由小和中等淋巴细胞组成，且后者有两种形态。一种细胞器较少，与上皮微绒毛之间有紧密接     

旋毛虫Ts87重组蛋白诱发小鼠保护性免疫的研究

为了进一步探讨旋毛虫Ts87基因原核表达重组蛋白的保护性免疫作用 ,本试验用此纯化重组蛋白组分加福氏完全佐剂 (FCA)皮下注射免疫NIH小鼠 3次 ,继以旋毛虫感染性幼虫 2 5 0条攻击 ,攻击后每周取血清测抗体IgG滴度 ,第 35天计数小鼠肌肉幼虫数。结果显示重组蛋白免疫鼠的肌肉幼虫减虫率为4 2 3% ,血清抗Ts87重组蛋白体IgG的几何平均倒数滴度 (GMRT)达到 80 0 0以上 ,均显著高于佐剂组和对照组。Ts87基因表达的重组蛋白可产生明显的保护性免疫作用     

长期空肠弯曲菌感染诱导的小鼠自身免疫综合征

空肠弯曲菌(CJ-S131)感染昆明(KM)小鼠后15个月,KM小鼠仍然具有并发展了感染后3个月所表现的自身免疫综合征。其表现为抗核抗体阳性;多种自身抗体(抗ds-DNA,ss-DNA,组蛋白,ENA和胸腺细胞抗体)升高;肠淋巴组织增生,胸腺呈纤维化倾向,脾脏、淋巴结肿大;免疫复合物性肾小球肾炎和血管炎;肠道及肠外多器官(肝脏、肺、心脏和唾液腺等)慢性炎症;空弯菌外膜蛋白(CJ-OMP)特异性抗体与自身抗体的消长相背离,随感染时间延长,CJ-OMP抗体阳性百分率下降,抗ds-DNA,ENA和胸腺细胞等抗体的阳性率上升。本文再次证实,慢性空弯菌感染可诱发小鼠自身免疫综合征,而诱发因子特异性抗体随自身免疫综合征的出现而下降。     

甲状腺激素对小鼠细胞免疫及体液免疫的影响

用注射Ｌ－Ｔ４和ＰＴＵ灌胃的方法成功地制备了甲状腺机能增高（甲高）和甲状腺机能减低（甲低）小鼠模型，并对这些小鼠的免疫功能进行了检测。发现甲低小鼠脾细胞数减少，甲高和甲低小鼠脾细胞对ＣｏｎＡ反应性减弱。     

空肠弯曲菌HSP60家族成员的鉴定

用针对ＨＳＰ６０保守区的二株单抗ⅡＨ９和ＭＬ－３０进行了Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ和ＥＬＩＳＡ试验，发现空肠弯曲菌ＣＪ－Ｓ１３１株４３ｋＤ通道蛋白属ＨＳＰ６０家族成员，命名其为空弯菌ＨＳＰ４３。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描显示ＨＳＰ４３是主要菌体蛋白。虽然ＨＳＰ极端保守，但用ＣＪ－Ｓ１３ｌｌｙｓａｔｅ免疫小鼠后，发现最早诱导的抗体是针对ＨＳＰ４３的，并且这种抗体活性在随后８０ｄ的观察期间一直维持较高活性。此结果为研究感染诱致自身免疫病分子机理提供了新的线索。     

联合应用生长激素和谷氨酰胺对短肠大鼠小肠粘膜吸收功能的影响

目的 :探讨联合应用生长激素和谷氨酰胺对短肠大鼠小肠粘膜吸收功能的影响。材料和方法 :研究选用 40只手术成功的SD短肠大鼠 ,按 2× 2析因实验设计随机分为四组 ,分别给予常规全肠外营养、附加谷氨酰胺、附加生长激素及附加谷氨酰胺和生长激素全肠外营养 ,持续 6天。应用生化酶学的方法测定各组小肠粘膜上皮Na+ ,K+ ATPase的活性。结果 :谷氨酰胺组小肠粘膜Na+ ,K+ ATPase的活性较常规组明显增高 ;生长激素组Na+ ,K+ ATPase的活性无明显增高 ;而联合应用谷氨酰胺和生长激素组小肠粘膜上皮Na+ ,K+ ATPase的活性较常规组亦有显著性增高。结论 :研究表明联合应用谷氨酰胺和生长激素能够有效的增加小肠粘膜上皮Na+ ,K+ AT Pase的活性 ,从而提高其吸收功能。     

GENETIC CONTROL OF PQ PROLONGATION OF THE ELECTROCARDIOGRAM IN THE MOUSE IMMUNIZED WITH THE KILLED GROUP A STREPTOCOCCI

Genetic control of PQ prolongation of the electrocardiogram (ECG) in the mouse, immunized with killed group A streptococci, was studied by using various congenic mice. Mice of H-2^a, H-2^k and H-2^f haplotypes showed high frequencies of PQ prolongation, while haplotypes of H-2^b, H-2^d and H-2^s showed low frequencies of PQ prolongation. Studies using various recombinant mice revealed that at least one immune-associated (Ir) gene mapped in the left side of the I-B subregion. High responsiveness of F₁ hybrids of H-2^b and H-2^d, as well as B1O.A(5R) and B10.A(3R), suggests the existence of a complementing gene. In addition, the differences between C3H and CKB, as well as differences between C3H.SW and CWB, indicate that another Ir gene maps in the immunoglobulin heavy chain (Igh) coding loci. Repeated injections of anti-I-J or anti-I-A antisera also modified this PQ prolongation. These results suggested that both the major histocompatibility complex (MHC) and immunoglobulin (Igh) loci seem to be playing important roles in the pathogenesis of PQ prolongation.     

重组弓形虫棒状体蛋白5诱导小鼠的免疫应答及其抗弓形虫感染的保护作用

为探讨重组弓形虫棒状体蛋白5诱导的免疫应答及其免疫保护效应,本研究克隆表达了弓形虫棒状体蛋白5,并分析其诱导的细胞免疫、体液免疫应答和抗弓形虫感染的保护作用。采用PCR方法从刚地弓形虫cDNA中扩增出ROP5基因片段,将该基因片段克隆至pET-28a原核表达载体表达,用重组ROP5蛋白免疫BALB／c小鼠,ELISA检测免疫后小鼠抗体和细胞因子的变化。以强毒型RH株弓形虫攻击感染免疫小鼠,统计小鼠不同时间存活率,评价重组蛋白产生的免疫保护性。结果表明ROP5重组蛋白疫苗免疫BALB／c小鼠诱导机体产生高水平的IgG、IgG1、IgG2a抗体和IFN—y、IL-2及IL-10细胞因子。与PBS及佐剂对照组相比,重组蛋白免疫组小鼠的存活时间明显延长。本实验证实了ROP5重组蛋白免疫BALB／c小鼠能够诱导其产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,以及一定的抗弓形虫感染保护作用。     

萎缩小肠粘膜上皮细胞凋亡及其相关基因表达的研究

目的：探讨细胞凋亡与小肠粘膜萎缩发生之间的关系。材料和方法,采用原位末端标记,免疫组化和ＲＴ－ＰＣＲ的方法,对正常小肠粘膜上皮和萎缩小肠粘膜上皮细胞凋亡的发生及其相关基因的表达进行对比研究。结果萎缩小肠粘膜上皮细胞凋亡的发生率明显高于正常小肠（Ｐ〈０．０５）;Ｃ－ＭＹＣ在萎缩小肠绒毛顶部异常高表达,ＢＡＸ和ＢＣＬ－２呈弥散分布,ＢＣＬ－２在萎榨小肠粘膜上皮的表达显著低于正常小肠（Ｐ〈０．０５）,Ｂ