McAb-ELISA间接夹心法检测家鼠型HFRS疫区人和动物血清中特异性抗体

用McAb-ELISA间接夹心注和IFAT或酶标SPA染色法平行检测山西地区(家鼠型HFRS疫区)的人及动物血清中HFRS病毒特异性IgM和/或IgG抗体。结果ELISA检测174份HFRS患者血清的阳性率及抗体滴度均明显高于IFAT。检测295份无明确HFRS病史的健康人血清,ELISA的阳性率也高于IFAT。检测215份鼠类血清、102份兔血清及108份猪血清,ELISA的阳性检出率与IFAT或酶标SPA染色法基本相同。用阻断试验等证明本ELISA检出的抗体确为HFRS病毒特异性抗体。     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体,特别是IgM抗体,对辅助临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT )和免疫酶染色法,虽已被广泛用于上述目的,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验测出的则主要是IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和lgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原的实验研究

间接荧光抗体技术(IFAT)已广泛用于肾综合征出血热(HFRS)病毒抗原的检测,其不足之处是需用荧光显微镜,有一定主观性及不能检测可溶性抗原。本文建立了以同样的抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)作为包被和第二抗体,以酶标葡萄球菌A蛋白(SpA)作指示抗体的双McAb ELISA间接夹心法,初步用于感染细胞培养上清及组织标本中HFRS病毒抗原的检测,获得较满意结果。     

测定HFRS患者血清中特异性抗体方法初探

作者建立了检测HFRS患者血清特异抗体的捕获ELISA和阻断ELISA,并与间接酶染色和间接免疫荧光抗体技术进行了比较。四种方法的阳性检出率相同。血清的几何平均滴度,捕获ELISA比IFAT高32倍;阻断ELISA、酶染色及IFAT无显著差异。但应用不同抗原,ELISA检测血清滴度亦有不同。     

ELISA检测抗精子抗体并与间接血凝法比较

本文结果表明,188份结扎兔血清中,ELISA抗精子抗体阳性者为85.1％,间接血凝(IHT)为62.8％,差异显著(P<0.005),以118份IHT阳性血清的抗体滴度对数值与相对应的ELISA光密度值相关分析结果表明,二者有非带显著的正相关(P<0.001)。我们认为,ELISA检测抗精子抗体是一种灵敏度高、方便、迅速且易于操作的免疫学方法。     

McAb-ELISA间接夹心法对西北部分地区HFRS的血清流行病学调查初报

用McAb-ELISA间接夹心法检测西北部分地区健康人血清中的HFRS病毒特异性IgG抗体。结果在陕西省汉中地区采集的290份血清中检出47份阳性,取其中部分阳性血清进行阻断试验及IFAT检查,证实了其特异性,从而表明该地区存在着HFRS的隐性感染。采自宁夏地区的211份血清检测结果均为阴性。采自新疆地区的390份血清中有1份为阳性。     

ELISA捕捉法与间接夹心法检测肾综合征出血热患者血清IgM抗体的比较

作者用ELISA捕捉法和间接夹心法平行检测106份第7病日内的肾综合征出血热患者血清IgM抗体,其阳性检出率分别为92.5％和87.7％,其中40份第4病日内的血清阳性率分别为90.0％和85.5％,差异均无显著性意义,但前法检出的抗体滴度(平均1:102 400)明显高于后者(1:3200)     

快速MacELISA法检测流行性出血热特异性IgM抗体

作者在IgM抗体捕获酶联免疫吸附试验(IgM antibody—capture ELISA,MacELISA)检测流行性出血热(EHF)IgM抗体方法的基础上,通过提高反应温度,应用新的、稳定、无致癌性的底物—四甲基联苯胺(TMB),建立了快速MacELISA法。用快速法测原法阳性血清61例,阳性符合率100％,测原法阴性的肝炎病人血清20例及正常人血清10例,无1例阳性。改进后的方法与原法相比,具有快速、使用安全、结果稳定等优点。     

检测HFRS患者血清IgM抗体的ELISA捕捉法的建立

肾综合征出血热(HFRS)在我国流行广泛,病死率较高。本病绝大多数患者在发病初期就有特异性IgM抗体产生,及时检出此类抗体对于HFRS的早期诊断和治疗有重要意义。我们曾建立一种检测IgM抗体的ELISA间接夹心法,其特异性和敏     

检测抗肾综合征出血热病毒mAb在患者体内代谢的方法建立与应用

目的 :研究抗HFRS病毒鼠源性mAb治疗HFRS患者后其体内血药浓度的变化以及抗鼠抗体的产生情况 .方法 :建立检测人血清中鼠IgG及抗鼠抗体的ELISA方法 ,并以此检测二期及三期临床试验的HFRS患者血清 1 6 5份 .结果 :建立的两种方法均特异性强 ,敏感度高 ,稳定性好 .观察到血清中鼠IgG血药浓度在用药后 1～ 3d最高 ,平均为(1 .0 4± 0 .84 )mg/L ;随后迅速下降 ,6～ 1 0d组平均浓度为(0 .2 1± 0 .2 1 )mg/L ;用药 1 2d以后绝大多数已测不到 .而抗鼠抗体主要产生在用药 1 2d以后 ,阳性率为 78.0 % ,平均效价为 1∶5 5 7;用药后 6～ 1 0d组的阳性率为 2 8.6 % ,平均效价为1 3∶5 5 .结论 :抗HFRS病毒mAb(鼠IgG)在HFRS患者体内代谢较为迅速 ,而 1 2d后产生的抗鼠抗体不是影响其代谢的主要因素 .     

Detections of HFRS Virus Antigen and Antibody by a McAb ELISA Indirect Sandwich Method

An ELISA indirect sandwich method using monoclonal antibodies(McAb)against hem-orrhagic fever with renal syndrome(HFRS)virus has been developed fordetections of HFRS virus antigen and specific antibody.Dynamic changes of HFRS virusantigens in the cells infected and their culture supernatants were observed by indirectfluorescence-antibody technique(IFAT)and ELISA separately.It was shown that HFRSvirus antigens in the cells and in the supernatants peaked separately 8 days and 14 daysafter infection.A hundred and seventy-nine brain and lung specimens of suckling miceinfected were examined by ELISA and IFAT.The positive rates were 72.1% and 68.2%,respectively.Furthermore,the IgM antibodies of 121 sera from HFRS patients wereexamined by ELISA and IFAT.The positive rates were 90.1% and 83.5% respectively.The IgG antibodies of 178 sera from HFRS patients were also examined by the twomethods,and both of the positive rates were 89.3%.The antibody titer measured byELISA was higher than the titer by IFAT.The above results suggest that the ELISA is aspecific and sensitive method and can be used for early diagnosis,epidemiologicalsurveillance and etiological study of HFRS.     

流行性出血热110例血凝抑制抗体分型与临床特征

用血凝抑制试验测定110例流行性出血热血清抗体分型，发现：江西省高安县88例中野鼠型41例，家鼠型47例，为混合感染区；南昌市22例中，野鼠型19例（郊区及近郊），家鼠型3例（市区），由于病例分散，有关感染类型尚不能得出结论。病期重叠者9例，均系野鼠型，“跳期”者家鼠型为多；野鼠型中重型和危重型病例占一半，家鼠型以轻型病例为主。肾损害及腔前出血等严重并发症在野鼠型中发生率高，证明血凝抑制试验有实用价值。     

提高免疫酶技术检测HFRS病毒抗原敏感性的初步研究

以磷苯二胺为辣根过氧化物酶底物显色剂的ELISA双抗体夹心法检测HFRSV抗原中,用四甲基联苯胺替代邻苯二胺,用生物素-抗生素蛋白的BA-ELISA和高效价抗HFRSV的McAb进行McAb-ELISA,使检测抗原的敏感性分别提高4倍以上。如果四甲基联苯胺与BA-ELISA或与McAb-ELISA联合应用,则比原ELISA敏感16倍以上。     

EHF患者血清特异性IgG的动态观察及其与病情的关系

采用ELISA间接法对流行性出血热病程中及病后180天血清特异性IgG抗体的消长情况进行了系统的动态观察,并按病情轻重进行了对比分折。特异性抗体IgG在病后1～5天即出现,第20天下降,病后180天仍维持在一定水平。重型患者抗体水平高于轻、中型患者(P<0.01)。提示这种特异性抗体反应可能与病情的严重程度有关。     

应用免疫粘连血凝试验进行肾综合征出血热病毒抗原测定和抗原性分析

应用免疫粘连血凝试验(IAHA)检测肾综合征出血热病毒抗原。其敏感性比双抗体夹心法ELISA低2～4倍。但方法简单、快速,非特异性弱。实验发现HFRS病毒单克隆抗体不能用于免疫粘连血凝。结果证实了大鼠属和姬鼠属来源的病毒,在IAHA交互滴定中表现出程度不等的单向交叉反应;它们与从北美草原田鼠分离的病毒PHV株几乎没有交叉反应。IAHA为国内深入进行流行性出血热病毒的抗原分析提供了一新方法。     

单克隆抗体亲和层析法粗提HFRS病毒的初步研究

用McAb亲和层析法粗提HFRS病毒81-14A株感染BHK细胞培养上清液,效果较满意。病毒抗原获得率为48.07％。经McAb亲和层析洗脱,病毒抗原,蛋白峰值基本一致。特异性试验证明洗脱物为HFRS病毒抗原。SDS—PAGE经氨银染色主要有4条区带。