结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分离株embB基因突变的研究

目的 了解结核分枝杆菌耐乙胺丁醇（EMB）分离株embB基因突变情况,研究其应用价值。方法 通过聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP)、CPR－限制性片段长度多态性（RFLP）和PCR－直接测序技术分析102株结核分枝杆菌临床分离株embB基因。结果 以H37Rv标准株为对照,102株结核分枝杆菌临床分离株的162rDNA SSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同。41株药物敏感株的embB基因SSCP均泳动正常,RFLP和测序分析与对照株相同。61株耐EMB分离株可,23株（37．7％）embB基因SSCP泳动异常;8株RFLP分析异常;测序分析23株均为306位密码子突变,其EMB MICs均≥20μg/ml,其中8株为ATG→ATA或ATT突变,13株为ATG→GTG或CTG突变,后者EMB MICs均≥30μg/ml。结论 部分结核分枝杆菌耐EMB是由于其embB基因突变所致,PCR－SSCP技术可能成为测定部分结核分枝杆菌EMB耐药基因型,简便、快速的方法。     

embB基因突变与乙胺丁醇药敏表型及耐多药关系的研究

目的 研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)embB306位点及其他突变位点与乙胺丁醇(ethambutol,EMB)的耐药表型及耐多药(multidrug resistant,MDR)的关系;分析embB基因突变与EMB药敏表型及MDR的关系. 方法 对临床分离的MTB采用BD MGIT 960 SIRE试剂比例法进行药敏试验,取48株EMB耐药、46株EMB敏感但耐其他药及7株四药均敏感MTB提取核酸并扩增embB基因全序列,对扩增产物进行测序分析embB基因序列,与H37Rv标准株序列比对,分析embB基因各突变位点、形式及频率. 结果 101株MTB发现embB基因序列上有17个不同位点突变形式.53株MTB在embB基因序列上发生突变,其中46株为EMB耐药,7株为EMB敏感;embB基因野生型的MTB有48株,其中2株为EMB耐药,46株为EMB敏感;embB突变型与embB野生型的MTB之间EMB耐药率有显著性差异(x2=68.95,P＜0.01).101株MTB中MDR有51株,其中有42株发生embB突变,9株为embB基因野生型,embB基因突变率在MDR和非MDR之间有显著性差异(x2=36.9,P＜0.01). 结论 embB306位点与EMB耐药及MDR中度相关,embB基因突变与EMB耐药及耐多药结核菌(multidrug resistant-Mycobacteriumtuberculosis,MDR-TB)高度相关,embB基因突变可作为MDR-TB的检测分子标记物,指导临床用药.     

结核分枝杆菌对乙胺丁醇耐药突变基因检测方法的建立

乙胺丁醇 (EMB)是一线抗结核药物 ,最近的研究结果表明 ,结核分枝杆菌 (结核菌 )对EMB耐药的产生与阿拉伯糖基转移酶编码基因embB改变有关。其中embB基因 (尤其是 30 6位密码子 )突变是产生对EMB耐药的主要分子机制。聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR SSCP)是近年发展起来的最常用的基因突变分析技术 ,结合染色法 (silverstaining) ,使其应用前景更为广阔。我们应用PCR SSCP银染技术和PCR 直接测序法对河南省耐药监测中收集的 87株结核分离株embB基因进行了研究。一、材料和方法1 .结核菌H3 7Rv标准株来源于中国药品生物…     

耐多药结核分枝杆菌中embB基因突变与乙胺丁醇耐药的相关性研究

目的 研究耐多药结核分枝菌中embB基因突变与乙胺丁醇耐药的相关性. 方法 比例法检测84株耐多药结核分枝杆菌的乙胺丁醇(EMB)耐药性,基因测序检测embB基因的突变,2检验分析二者之间的相关性. 结果 84株耐多药结核分枝杆菌中有43株(51.2%)对EMB耐药,41株(48.8%)对EMB敏感,57株耐多药菌株(67.9%)的embB基因发生突变.在43株EMB耐药菌株中,embB基因突变的菌株为40株(93.0%),而41株EMB敏感菌株中,embB基因突变的菌株为17株(41.5%),embB基因在耐药菌株中的突变频率远高于敏感菌株(2=25.58,P=0.00).embB306是最常见的突变位点,其在耐药菌株的突变率也高于敏感菌株(2=12.37,P=0.00),embB基因和embB306位点检测EMB耐药的敏感度、特异度和准确性分别为93.0%和65.1%,58.5%和73.2%,76.2%和69.0%. 结论 EMB耐药的产生与embB基因和embB306突变有关,二者用于检测EMB耐药有一定的参考意义.     

结核分枝杆菌rpoB基因突变检测的进展

利福平(rifampin,RFP)是最主要的抗结核药物之一,它在结核病治疗,特别是短程化疗中起着重要作用,抗结核药物也同其它抗生素一样,面临耐药性问题,2000年全国结核病流行病学抽样调查结果显示:结核分枝杆菌对RFP的耐药率为16.6%[1],耐药问题是结核病化疗中的难题,也是控制结核病面     

广西结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药基因突变特征

目的 了解广西壮族自治区结核分枝杆菌乙胺丁醇(EMB)耐药基因突变特征及其影响因素，为结核病的分子诊断和临床治疗用药提供依据。方法 对2018-2019年广西30个结核病耐药监测点连续不间断收集的655株结核分枝杆菌(其中52株乙胺丁醇耐药菌株，603株乙胺丁醇敏感菌株)进行全基因组测序，分析乙胺丁醇耐药基因突变特征及其影响因素。结果 655株结核分枝杆菌中，54株发生乙胺丁醇耐药基因突变，突变率为8.24%(54/655)。在比例法检测EMB耐药的52株菌株中，21株发生基因突变，突变率为40.38%(21/52);603株EMB敏感株中，33株发生基因突变，突变率为5.47%(33/603)，耐药株中的基因突变率高于敏感株(χ²=77.133,P=0.000)。EMB耐药表型与基因突变的符合率为40.38%(21/52)，二者检测结果吻合度不高(Kappa值=0.343,P <0.001)。54株发生基因突变的菌株，突变基因为emb A、emb B和emb C，突变形式有20种，其中单位点突变29株，占53.70%(29/54)，联合位点突变25株，占4...     

结核分枝杆菌快速检测仪检测非结核分枝杆菌

我们用结核分枝杆菌快速检测仪 (ＢＡＣＴＥＣ) ,对 2 0 1株抗酸杆菌做 ρ 硝基 α 乙酰氨基 β 羟基苯丙酮 (ＮＡＰ)试验 ,初选非结核分枝杆菌 (ＮＴＭ ) ,并以常规法对照。另用ＢＡＣＴＥＣ做 11株ＮＴＭ药敏试验 ,现报告如下。一、材料和方法1 标本来源 :2 0 1株抗酸杆菌获自我院 1996年 3月～2 0 0 1年 2月结核科、内科病人。2 试验材料 :(1)ＢＡＣＴＥＣ检测仪、12Ｂ培养瓶、ＮＡＰ培养瓶和药物纯品 [利福平 (ＲＦＰ)、链霉素 (ＳＭ )、乙胺丁醇(ＥＭＢ)、异烟肼 (ＩＮＨ) ]均购自美国Ｂ Ｄ公司。 (2 )改良罗氏培养基、对硝基苯甲酸…     

结核分枝杆菌耐药性检测研究进展

自20世纪80年代以来，结核病疫情重新上升，据WHO估计，目前全球约有20亿人感染结核分枝杆菌(TB)，其中约有5000万人感染耐药TB。因此对TB耐药机制和耐药性检测的研究意义重大。分子生物学技术的发展，为研究TB提供了良好技术平台，极大地促进了TB耐药性检测的研究进程。目前临床正在使用和研究的药敏试验方法归纳起来有表型和基因检测2类。     

检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

目的：建立聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法，并评价共临床应用的价值。方法：依据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物，用PCR从临床分离株和直接从痰标本中扩增rpoB基因片段；对扩得的rpoB基因片段做DNA SSCP分析，并随机测定rpoB片段的序列。结果：PCR从所有212株结核分枝杆菌中均扩得230bp片段135份抗酸染色阳性的痰标本中，有113份扩得阳性片段（83．7％），在SSCP分析中，140份经L－J药敏试验检测为利福平耐受的结核分枝杆菌，有130份有rpoB基因突变（符合率为92．9％），72份经L－J药敏试验检测为利福平敏感的菌，有67份的rpoB基因无突变（符合率为93．1％），测序分析发现57份经SSCP检测为突变的rpoB片段均有序列改变，10份经SSCP分析为无突变的有8份无序列改变，SSCP与测序结果的符合率为94．0％，在本研究的菌株中，耐多药结核病（MDR－TB）占76．4％（107／140），有92．5％（99／107）耐多药菌株经SSCP检测有rpoB突变。结论：建立的PCR－SSCP分析方法，是一种较准确和稳定的检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法，可用于临床快速分析患者结核分枝杆菌对利福平的耐药性，并可作为MDR－TB判断的一个重要指标。     

结核分枝杆菌mpt64基因突变研究

目的分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)mpt64基因突变情况。方法提取MTB标准株H37Rv和45株MTB临床株的DNA,扩增mpt64基因并进行序列分析。结果 MTB标准株H37Rv和44株MTB临床株的mpt64基因无突变,1株MTB临床分离株的mpt64基因存在63个碱基的缺失突变。结论结核分枝杆菌mpt64基因突变频率低。     

结核分枝杆菌耐药突变检测的临床研究

<正>近年来,中国的结核病发病率和耐药率均有上升趋势,每年有将近12万新发耐多药结核病患者,未来数年内可能出现耐药菌为主的流行态势[1]。耐药结核病常规的疫情监测不仅是临床用药和评价化疗方案的重要依据,也是流行病学和结核病控制工作的重要指标[2]。如何快速、准确检测结核分枝杆菌对主要一线药物的耐药性具有重要的临床意义。据报道异烟肼耐药与过氧化氢酶-过氧化物酶的编码基因Kat G有关[3],同     

DNA芯片快速检测耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变

目的 开发快速检测耐利福平结核分枝杆菌(结核菌)rpoB基因突变的DNA芯片。方法 根据结核菌rpoB基因序列设计探针并制作基因芯片，从临床样品中分离出结核菌的基因组DNA，PCR扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段，荧光标记后与芯片上含有的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交，同时与DNA直接测序法测定序列比较。结果 35株耐利福平结核菌中有91．4％(32／35)用直接测序法检测出存在rpoB基因突变，DNA芯片的检测效率为71．4％(25／35)。结论 用DNA芯片检测结核菌对利福平的耐药性具有较高的特异性和敏感性，可用于临床结核菌耐药性检测。     

结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药的分子机制及其快速鉴定

目的：了解结核分枝杆菌乙胺丁醇(EMB)耐药的临床分离株embB基因突变的情况，并探索快速检测结核分枝杆菌EMB耐药性的实验方法。方法：应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术和PCR扩增产物测序方法。分析结核分枝杆菌EMB耐药和敏感各30株的embB基因。结果：以结核分枝杆菌H37RV标准株为对照。发现30株EMB耐药株中有11株(36．7％)embB基因扩增产物SSCP泳动异常，部分耐药菌株测序分析证实为306位密码子突变；而30株敏感株的embB基因扩增产物SSCP泳动均无异常。结论：embB基因突变是结核分枝杆菌EMB耐药的重要机制之一；PCR-SSCP技术可能成为一种检测结核分枝杆菌EMB耐药性的准确和快速的实验方法。     

结核分枝杆菌耐药基因与检测方法的研究进展

结核分枝杆菌(MTB)的高耐药问题已成为新世纪结核病控制的三大难题之一[1]。近年来,随着分子生物学技术的迅速发展,人们对MTB耐药的分子机制进行了深入研究,并已取得了很大进展。本文就此内容综述于下。一、研究内容近年来,国内外研究者主要从遗传学领域研究入手,企图阐明MTB耐药的分子基础,以找出耐药基因序列。并寻找耐一种药物可能存在的多种耐药基因、寻找耐多药菌株的可能耐药机制、寻找耐药基因突变与可能的诱变因素之关系,建立快速检测MTB耐药基因型的分子生物学诊断技术,以便在控制结核病的流行中发挥作用。二、研究进展(一)阐…     

结核分枝杆菌耐药性检测研究进展

自2 0世纪80年代以来,结核病疫情重新上升,据WHO估计,目前全球约有2 0亿人感染结核分枝杆菌(TB) ,其中约有5 0 0 0万人感染耐药TB[1 ] 。因此对TB耐药机制和耐药性检测的研究意义重大。分子生物学技术的发展,为研究TB提供了良好技术平台,极大地促进了TB耐药性检测的研究进程。目前临床正在使用和研究的药敏试验方法归纳起来有表型和基因检测2类。一、表型检测1 .常规药敏试验方法　用L J或Middlebrook7H1 0培养基做直接或间接药敏试验。此法由于受TB生长速度的影响而费力费时(需6～8周甚至更长时间) ,不能满足临床之急需,目前已较少…     

结核分枝杆菌耐药基因突变的研究

结核病在许多国家出现回升的一个主要原因是细菌耐药性问题 ,随着联合药物治疗的使用 ,又出现了耐多药结核分枝杆菌 (结核菌 ) ,使许多结核病 ,难以治疗 ,增加了死亡率[1] 。目前对于结核菌的耐药机制的研究已有了较大的进展 ,细菌内一些酶的基因突变或缺失是导致耐药的重要原因。随着分子生物学技术的发展 ,通过聚合酶链反应 (PCR)等方法对耐药基因进行快速检测 ,大大缩短了检测时间 (2～3d) ,为耐药结核菌的治疗提供参考。本研究通过PCR -SSCP ,PCR -测序技术检测结核菌临床分离株的katG、rpoB和rpsL基因序列 ,分析济南军区结核菌…     

结核分枝杆菌链霉素耐药分离株rpsL基因突变的检测

目的 探讨结核分枝杆菌（结核菌）对链霉素（Ｓｍ）产生耐药性的分子机制,建立直接快速检测结核菌Ｓｍ药物敏感性的试验方法。方法 应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染分析技术检测３２例结核菌临床分离株的ｒｐｓＬ基因。结果 以结核菌标准株（Ｈ３７Ｒｖ）为对照,３２株结核菌临床分离株中,１０株Ｓｍ敏感株的ｒｐｓＬ基因未见ＳＳＣＰ泳动异常,２２株Ｓｍ耐药株中,１６株（７２．７％）的ｒｐｓＬ     

非结核分枝杆菌及实验室诊断研究进展

近年非结核分枝杆菌(NTM)感染的发病率呈上升趋势。但由于诊断治疗的困难,且不会发生人与人间传播,所以临床和实验室对该病的认识均留有空白。应提高对NTM所引发的各种临床症候的认识,发展可靠快速的实验室检测技术,以辅助临床明确诊断。该文就NTM的相关知识、感染后的主要临床征象和目前实验室在NTM检测技术上的一些研究、探索、进展进行了回顾性综述。     

结核分枝杆菌喹诺酮类耐药基因研究进展

日益增多的耐喹诺酮类结核分枝杆菌给结核病疫情的控制带来了巨大挑战,深入研究结核分枝杆菌喹诺酮类耐受机制便成为应对挑战的关键.药物靶基因突变是导致结核分枝杆菌喹诺酮类耐受的主要因素,近年来该方面的研究逐步受到重视并取得了一些进展,本文特对此进行述评.