熟地配伍黄芪对去卵巢大鼠骨代谢的影响

目的观察熟地配伍黄芪对去势大鼠骨代谢及调控途径的影响。方法去卵巢造模后的60只大鼠随机分为六组,黄芪组,熟地组,熟地配伍黄芪组,雌激素组,模型对照组,空白对照组。分别给予相应的药物灌胃,连续给药16w,处死动物取血清和骨组织,进行骨代谢及wnt通路表达相关指标检测。结果与模型组比较,熟地-黄芪组大鼠血清TRACP水平明显降低(P0.05),IGF-1水平明显升高(P0.05);大鼠骨组织Wnt2、LRP5及β-catenin mRNA表达水平均出现明显升高(P0.01)。结论熟地配伍黄芪可能通过Wnt/LRP/β-catenin信号通路的激活,降低破骨细胞活性,促进成骨细胞生成,从而达到调节骨代谢的目的。     

桑寄生对去卵巢骨质疏松大鼠的影响

目的:观察桑寄生对去卵巢大鼠骨质疏松影响,并探讨其作用机制.方法:将26只Wistar大鼠随机分为假手术组(8只)、模型组(8只)、桑寄生组(10只).模型组和桑寄生组切除大鼠双侧卵巢, 制备去卵巢骨质疏松的动物模型,观察服用桑寄生水煎剂后,去卵巢骨质疏松大鼠骨密度(BMD)、血清雌二醇( E2 )、骨钙素(BGP)及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)的变化.结果:模型组大鼠的E2和BMD水平显著下降(P<0.01),而血清BGP和TRACP水平明显升高(P<0.01).桑寄生组大鼠BMD水平增加,而 TRACP水平得到恢复.结论:桑寄生能抑制去卵巢大鼠的骨质疏松,具有调节骨代谢的作用.     

去卵巢大鼠骨质疏松症中Sost对Wnt信号通路的影响

目的观察去卵巢大鼠骨质疏松时股骨中Sost、lrp5和β-catenin的表达水平的变化,探讨Sost在去卵巢骨质疏松发生中的作用。方法 20只雌性SD大鼠随机分为去卵巢组和假手术组（对照组）,去卵巢组切除大鼠双侧卵巢诱发骨质疏松,假手术组开腹后仅切除少量脂肪即缝合。确定造模成功后自腹主动脉取血测定E2水平,利用骨骼强度检测仪对一侧股骨进行生物力学检测并用双能X线骨密度仪进行骨密度测定;提取另一侧股骨总RNA,行RT-PCR检测Sost、lrp5和β-catenin mRNA水平;提取总蛋白,利用Western blot检测Sost表达产物sclerosteosis、Lrp5和β-catenin的蛋白含量。结果与假手术组相比,去卵巢组大鼠血清E2浓度显著降低;股骨组织中Sost表达明显上调,lrp5的mRNA水平及蛋白水平检测变化不大,β-catenin mRNA变化不大,但蛋白含量显著减少;股骨抗弯曲力和抗压碎力明显减弱,骨密度降低。结论卵巢摘除术可导致SD大鼠E2分泌明显减少,进而诱发骨质疏松在此过程中伴有Sost基因表达水平增高,β-catenin降解增多,提示去卵巢后E2分泌减少导致大鼠骨质疏松发生其机制可能和Sclerosteosis竞争性结合LRP5,抑制Wnt通路,从而下调β-catenin有关。     

针刺肾俞、足三里抑制大鼠绝经后骨质疏松症的机制研究*

目的探讨针刺肾俞足三里调节wnt/β-catenin通路抑制大鼠绝经后骨质疏松症（PMOP）的作用机制。方法将50只雌性SD大鼠随机分为空白组、假模型组、模型组、穴位组和非经非穴组。治疗组、非经非穴组每天针刺1次,留针30 min,10次为1个疗程,疗程间休息5 d,共针刺6个疗程后,X线检测股骨颈、股骨骨密度,比色法检测大鼠血清碱性磷酸酶（ALP）活性及RT-PCR法检测腰椎Wnt1,β-catenin,GSK-3β,Dsh,mRNA表达。结果与模型组、非经非穴组比较,实验组大鼠股骨颈骨密度明显升高,血清ALP活性明显降低,Wnt1、GSK-3β、Dsh的mRNA表达差异均有统计学意义（P<0.05）。结论针刺肾俞、足三里穴对绝经后骨质疏松症有明显抑制作用,其作用机制可能与调节Wnt/β-Catenin通路中信号分子表达有关。     

盘龙七片调节Wnt/β-catenin通路对大鼠胫骨骨折愈合的影响

目的 探讨盘龙七片对大鼠胫骨骨折愈合的促进作用及可能作用机制。方法 选用58只8周龄、SPF级SD雄性大鼠为实验大鼠,分为造模大鼠（n=48）与Sham组大鼠（n=10）。建立胫骨骨折模型大鼠,并将模型大鼠分为 Model组、盘龙七片组（Treat组）、β-catenin抑制剂组（XAV-939）及盘龙七片+β-catenin抑制剂组（Treat+XAV 939组）4组,每组10只。X光片观察大鼠胫骨骨折愈合状况;骨密度测定仪检测胫骨骨矿物质密度值（BMD）;HE染色观察大鼠骨折部位结构变化;酶联免疫吸附法检测血清中ALP、bFGF、TNF α、IL 1β;免疫印迹法检测骨组织中p 糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、Wnt3、β 链蛋白（β=Catenin）及淋巴增强因子1(LEF1)蛋白表达。结果 与Sham组相比,Model组骨组织影像学愈合评分、BMD、ALP、bFGF水平、Wnt3、β-Catenin、LEF1蛋白表达降低,TNF α、IL 1β水平升高;与Model组相比,Treat组骨组织影像学愈合评分、BMD、ALP、bFGF水平、Wnt3、β Catenin、LEF1蛋白表达升高,TNF α、IL 1β水平降低;Treat+XAV 939组骨组织影像学愈合评分、BMD、ALP、bFGF水平、Wnt3、β-Catenin、LEF1蛋白表达高于XAV 939组,TNF α、IL 1β水平低于XAV 939组,差异有统计学意义（均P＜0.05）。 结论 盘龙七片可促进大鼠胫骨骨折愈合,其机制与抑制Wnt/β-catenin通路、缓解骨折大鼠机体炎症反应有关。     

杜仲叶颗粒抗骨质疏松作用及其机制

目的：评价杜仲叶颗粒对去除卵巢致骨质疏松大鼠的作用,并初步探讨其作用机制。方法：SD大鼠行双侧卵巢切除术进行骨质疏松模型构建。手术一周后,以雌二醇片和杜仲叶颗粒连续灌胃给药12周,然后取大鼠股骨进行骨密度检测;取血清测定ALP活力和CTX-1含量;HE染色观察骨组织形态和骨丢失情况;采用定量PCR法测定胫骨组织中Wnt3a、β-catenin、DKK1的mRNA表达水平。结果：杜仲叶颗粒能显著升高骨密度,显著降低血清ALP和CTX-1含量,且能显著增加Wnt3a、β-catenin的mRNA表达水平,降低DKK1的mRNA表达水平。结论：杜仲叶颗粒具有明显的抗骨质疏松作用,其机制可能是通过激活wnt/β-catenin信号通路实现的。     

艾灸对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 观察艾灸三阴交、关元穴对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)中Wnt/β-catenin信号通路的影响,探索艾灸影响骨代谢的内在机制。方法 将60只6月龄SD大鼠随机分为正常组（20只）和去卵巢组（40只）,采用去卵巢法复制大鼠骨质疏松症模型,将去卵巢组再随机分为模型组、雌二醇组和艾灸组,每组10只。采用MTT法检测大鼠BMMSCs活性,酶联免疫吸附法检测大鼠BMMSCs中骨钙素（bone glaprotein,BGP）含量,实时荧光定量PCR法测定Wnt3a、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5（low density lipoprotein receptor associated protein-5,LRP-5）、LRP-6、Dkk1、β-连环蛋白（β-catenin）和T细胞因子（T-cell factor, TCF）mRNA相对表达水平,Western blot法测定Wnt3a、Dkk1、β-catenin、TCF蛋白的表达水平。结果 在体外培养第12、16天时,艾灸可显著提高骨质疏松症大鼠降低的BMMSCs活性。艾灸可显著升高骨质疏松症大鼠BMMSCs中降低的BGP含量,显著上调BMMSCs中降低的LRP-5、LRP-6 mRNA的表达水平,显著上调降低的Wnt3a、β-catenin和TCF mRNA及其蛋白的表达水平,显著下调升高的Dkk1 mRNA及其蛋白的表达水平,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 艾灸三阴交、关元穴增加去卵巢大鼠BMMSCs活性,提高BGP含量,其机制与干预Wnt/β-catenin信号通路有关。     

柴胡桂枝汤加减通过调节Wnt/β-catenin信号通路对骨质疏松大鼠的改善作用及机制研究

目的 探讨柴胡桂枝汤加减(CGD)调节Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对骨质疏松大鼠的改善作用。方法 将SD大鼠分组为Model组、CK组、高剂量CGD组(CGD-H组,20 g/kg)、低剂量CGD组(CGD-L组,5 g/kg)、戊酸雌二醇组(EV组,9 mg/kg)、DKK-1组(Wnt/β-catenin通路抑制剂,100 mg/kg)和CGD-H+DKK-1组(20 g/kg+100 mg/kg),每组12只。除CK组外,其他组大鼠均通过灌胃70 mg/kg维甲酸的方式构建骨质疏松症(OP)大鼠模型,CK组大鼠灌胃等量的生理盐水。造模4周开始给予相应的药物干预4周。ELISA法检测大鼠血清中Ⅰ型胶-原C端肽(CTX-Ⅰ)、骨钙素(BGP)水平;观察股骨微观结构相关指标骨体积分数、骨小梁厚度、骨密度、骨小梁数量的变化;HE染色检测大鼠股骨病理变化;碱性磷酸酶(ALP)钙-钴染色检测大鼠股骨中成骨细胞活性;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测大鼠股骨组织中破骨细胞活性;Western blot检测各组大鼠股骨组织中Wnt3a、β-catenin蛋白。结果 与C...     

强骨合剂通过Wnt3a/β-catenin/VEGF信号通路促进血管生成改善围绝经期大鼠骨质疏松的研究

  目的  探讨强骨合剂对围绝经期骨质疏松SD大鼠的疗效及其可能的作用机制。  方法  采用HPLC建立强骨合剂标准指纹图谱。将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、强骨合剂高剂量(12 g · kg-1)组、低剂量(6 g · kg-1)组, 每组10只。双侧卵巢切除法制备围绝经期大鼠骨质疏松模型, 分别灌胃给予生理盐水,雌二醇,高、低剂量强骨合剂, 连续给药30 d。记录大鼠体质量和子宫质量, 检测大鼠骨力学相关指标, 股骨HE染色观察成骨细胞量及骨小梁面积。qPCR检测Wnt3a、β-catenin、VEGF、OPG mRNA表达水平; 免疫荧光检测VEGFR-2、CD31, 评价血管生成情况; Western blot检测股骨组织Wnt3a、p-GSK3β、VEGF、β-catenin、Lamin蛋白表达情况。  结果  10批次提取的强骨合剂指纹图谱相似度均大于0.9, 表明10批样品质量稳定。与模型组比较, 雌二醇组,强骨合剂高、低剂量组可显著改善大鼠子宫指数、骨密度、骨力学性能指标(P < 0.05, P < 0.01), 明显改善骨微结构, 提高股骨组织中Wnt3a、β-catenin、VEGF、OPG mRNA水平(P < 0.05, P < 0.01), 以及VEGF、CD31、Wnt3a、p-GSK3β、β-catenin、Lamin蛋白表达水平(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  强骨合剂可能通过Wnt3a/β-catenin信号通路调节VEGF表达, 促进血管生成, 从而提高大鼠骨密度, 改善骨组织形态, 进而发挥抗骨质疏松的作用。      

淫羊藿苷对去卵巢骨质疏松大鼠骨细胞凋亡及骨组织OPG、RANKL mRNA表达影响

目的:探讨淫羊藿苷对去卵巢骨质疏松大鼠骨细胞凋亡及骨组织骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响。方法:选取健康雌性SD大鼠70只,采用去卵巢法建立骨质疏松模型,造模成功的51只大鼠随机分为模型组、尼尔雌醇组、淫羊藿苷组,各17只;对照组15只接受假手术,各组给予相应的药物治疗。对大鼠股骨骨密度(BMD)、骨矿含量(BMC)、血清生化指标水平、骨细胞及成骨细胞凋亡指数(AI)、骨组织OPG mRNA、RANKL mRNA、核因子κβ受体活化因子(RANK)mRNA表达水平进行检测。结果:治疗后,与模型组比较,各组大鼠股骨BMD、BMC水平较高,且淫羊藿苷组尼尔雌醇组(P0.05);各组大鼠血清骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)、钙(Ca)水平较高,且淫羊藿苷组尼尔雌醇组(P0.05);各组大鼠骨细胞AI、成骨细胞AI较低,且淫羊藿苷组尼尔雌醇组(P0.05);各组大鼠骨组织OPG mRNA表达水平较高,且淫羊藿苷组尼尔雌醇组(P0.05);各组骨组织RANKL mRNA、RANK mRNA表达水平较低,且淫羊藿苷组尼尔雌醇组(P0.05)。结论:淫羊藿苷能增加去卵巢骨质疏松大鼠骨密度和骨矿含量,改善血清BGP、ALP、Ca水平,抑制骨细胞及成骨细胞凋亡,可能与上调骨组织OPG mRNA表达,下调RANKL mRNA、RANK mRNA表达有关。     

胃癌细胞株SGC-7901的Wnt／β-Catenin信号途径与Caspase-8、Caspase-3及Bcl-2的关系

目的:研究人胃癌细胞系SGC-7901中β-Catcnin与原癌基因Bcl-2及凋亡基因Caspase-8、Caspase-3表达的关系,初步探索Wnt/β-Catenin通路在肿瘤发生过程中作用机制.方法:(1)采用RT-PCR法分别检测人胃癌细胞系SGC-7901受吲哚美辛干预组和未受干预组中的β-Catenin、Bcl-2、Caspase-8及Caspase-3mRNA的表达;(2)采用MTT法检测吲哚美辛抗癌效应.结果:(1)吲哚美辛干预组较未受干预组表现为伴随β-Catenin表达水平降低,Bcl-2表达下调,而Caspase-8及Caspase-3mRNA表达上调.(2)吲哚美辛对人胃癌细胞系SGC-7901抑制率呈浓度和时间依赖性.结论:胃癌的发生、发展可能是Wnt/β-Catenin通路功能亢进,进一步激活原癌基因Bcl-2,并抑制凋亡基因Caspase-8、Caspase-3,导致细胞增殖与凋亡失衡的结果.     

补肾强督方对骨髓间充质干细胞成骨过程Wnt通路中因子表达的影响

目的:研究补肾强督方含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨过程Wnt/β-catenin通路中因子表达的影响。方法:BMSCs细胞分为空白对照组、西药对照组、补肾强督方低中高剂量组,分别进行成骨诱导分化,茜素红染色法检测各组成骨程度,实时荧光定量PCR检测GSK3β、wnt5a和SOST基因mRNA表达,Western blot检测Wnt/β-catenin通路关键因子GSK3β、wnt5a和SOST蛋白表达。结果:空白组BMSCs成骨分化培养后可见明显矿化结节形成,补肾强督方干预组未见明显矿化结节。与空白对照组比较,补肾强督方含药血清组BMSCs中SOST、GSK3β蛋白表达显著升高,Wnt5a蛋白的表达显著降低(P<0.05)。与空白对照组比较,补肾强督方含药血清组BMSCs中SOST、GSK3βmRNA的表达显著升高,Wnt5a mRNA的表达显著降低(P<0.05)。结论:补肾强督方含药血清具有抑制强直性脊柱炎骨化的作用,其机制可能与抑制BMSCs成骨过程中的Wnt/β-catenin信号通路相关。     

补土益水汤对去卵巢大鼠骨质疏松影响

目的:探讨补土益水汤对去卵巢致骨质疏松症大鼠的作用。方法:以切除雌性大鼠双侧卵巢诱导骨质疏松为模型,观察补土益水汤对大鼠血清钙、磷含量,碱性磷酸酶(Alkalin phosphatase,ALP)、骨钙素(Bone Glaprotein,BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resisitant acid phosphatase,TRACP)含量测定,尿吡啶啉(Pyridinoline,PYD)/尿肌酐(Creatinine,Cr)及骨密度(Bone mineral density,BMD)等指标的影响。结果:补土益水汤可显著降低血清ALP、TRACP、BGP含量,降低PYD/Cr比值,增加骨密度。结论:补土益水汤对去卵巢所致的实验性骨质疏松症具有明显的改善作用。     

壮骨止痛方对去势大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察壮骨止痛方对去势大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其治疗骨质疏松的机制。方法:60只3月龄SD雌性大鼠,按体重随机分为假手术组、空白组、模型组、壮骨止痛方组,15只/组。模型组、壮骨止痛方组采用双侧去卵巢建立绝经后骨质疏松大鼠模型,假手术组切除卵巢周围相应质量脂肪。术后5 d开始药物干预,连续13 w。取股骨,观察病理形态及Wnt7b、TCF3、GSK3β蛋白的表达。结果:与模型组相比,壮骨止痛方组骨小梁密度及梁髓比均提高。与模型组相比,壮骨止痛方组骨组织中Wnt7b、TCF3蛋白表达增高,GSK3β蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论:壮骨止痛方可通过上调去势大鼠骨组织中Wnt7b、TCF3蛋白表达,下调GSK3β蛋白表达来调控Wnt/β-catenin信号通路。     

给予足跟痛患者抗骨质疏松辅助治疗的价值研究

目的:研究给予足跟痛患者抗骨质疏松辅助治疗的价值。方法:选取2017年10月-2018年10月本院足跟痛患者86例,简单随机法分为联合组与参照组,各43例。参照组单纯使用非甾体抗炎药治疗,联合组使用降钙素+钙剂+非甾体抗炎药治疗。比较两组治疗效果、治疗前后骨代谢指标[总碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、Ⅰ型胶原交联C端肽(β-CTX)及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)]、骨密度(BMD)及氧化应激中晚期氧化蛋白产物(AOPP)、超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果:联合组总有效率为95.35%高于参照组79.07%(P0.05)。治疗1个疗程后,联合组L2～4及右股骨颈BMD均高于参照组(P0.05)。治疗1个疗程后,联合组血清ALP、BGP水平均高于参照组,血清β-CTX、TRACP水平均低于参照组(P0.05)。治疗1个疗程后,联合组血清SOD水平高与参照组,血清AOPP水平低于参照组(P0.05)。结论:抗骨质疏松辅助治疗足跟痛,疗效显著,能有效增加骨密度,改善骨代谢,恢复机体抗氧化能力。     

Wnt/β-catenin信号通路对问充质干细胞衰老的影响及其作用机制

目的:研究不同年龄血清对Wnt/β-catenin信号通路激活水平的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞(MSCs)衰老、增殖、存活能力的作用及其机制.方法:提取年轻(8 ～12周)及老年(64—72周)SD大鼠血清,实验分为4组,分别为年轻血清(Young rat serum,YRS)组,YRS+ Wnt 3a组、老年血清(Old rat serum,ORS)组和ORS+ DKK1组.免疫细胞化学染色和Western blotting检测胞浆、胞核β-catenin的表达.SA-β-半乳糖苷酶染色检测各组细胞衰老,MTT法检测细胞增殖,AO/EB染色法检测MSCs存活和凋亡.为研究Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的作用机制,免疫细胞化学染色和Western blotting检测γ-H2A.X和p53蛋白表达,RT-PCR法检测p53、p21 mRNA表达.结果:ORS组β-catenin表达较YRS组明显增强,尤其是胞核,出现β -catenin聚集现象,而ORS+ DKK1组β-catenin表达减弱.与YRS组相比,YRS+ Wnt 3a组细胞SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著增多(P＜0.01),细胞增殖和存活能力减弱.而ORS+ DKK1组与ORS组相比,SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著减少(P＜0.01),细胞增殖和存活能力增强.免疫细胞化学染色、Western blotting和RT-PCR检测结果显示,ORS组内γ-H2A.X、p53、p21表达较YRS组明显增强,而在ORS内加入DKK1后,γ-H12A.X、p53、p21表达较ORS组明显减弱.结论:ORS培养可以激活MSCs内Wnt/β-catenin信号通路.Wnt/β-catenin信号通路对MSCs衰老发挥重要调控作用.DNA损伤反应和p53/p21途径是Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的重要介导因素.     

TGF-β/Smad与Wnt/β-catenin在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达及相互作用

目的观察TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在肺纤维化大鼠模型肺组织中的表达,探讨两条通路对肺纤维化的影响及其相互作用。方法取Wistar大鼠36只,随机分为正常对照组和肺纤维化模型组,每组18只。采用气管内注入博来霉素(BLM)建立Wistar大鼠肺纤维化模型,每组分别于第14、21和28天处死大鼠各6只;取肺组织称重,测定肺组织中HYP、IL-1β水平,观察肺组织Col-I、IL-1β、TGF-β1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-catenin、LEF-1 mRNA的表达,并进行HE染色和Masson胶原染色。结果 (1)与正常对照组比,造模后14~28 d大鼠肺指数均明显升高(P0.01);肺组织HE染色呈现明显的肺纤维化病理改变,Masson染色结果可见造模后14~28 d肺间质蓝色胶原呈渐进性增加。(2)造模后第14天,肺组织IL-1β含量、IL-1βmRNA相对含量均显著升高(P0.01),随后逐渐降低,至造模后第28天IL-1β表达量接近正常水平(P0.05)。(3)造模后14~28d大鼠肺组织HYP含量、Col-I mRNA相对表达量均明显升高(P0.01)。(4)与正常组相比,模型组中TGFβ1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-Catenin、LEF-1 mRNA表达显著增加(P0.01),且TGFβ1、Smad3 mRNA分别与Wnt1、LEF-1、β-catenin mRNA的表达呈显著正相关。结论 TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在博来霉素致大鼠肺纤维化中表达上调,两条通路对肺纤维化可能有促进作用且它们间可能存在一定联系。     

从Wnt/β-catenin通路研究滋肾降糖丸对糖尿病大鼠骨质疏松的防治作用

【目的】观察滋肾降糖丸对糖尿病大鼠骨代谢指标、骨密度及骨组织形态的影响及其对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路的调控作用,探讨其对糖尿病介导的骨量减少及骨质疏松形成的防治机制。【方法】采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立糖尿病大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、中药组、西药组,另设正常组,每组10只。中药组大鼠给予滋肾降糖丸浓缩液(剂量为5.85 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,西药组大鼠给予雷奈酸锶浓缩液(剂量为0.9 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,正常组与模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃。干预3个月后,观察各组大鼠生化指标的变化;采用苏木素—伊红(HE)染色法观察各组大鼠骨组织形态变化;采用实时定量PCR(qPCR)方法检测骨组织Wnt3α、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)、β-catenin、Runt相关转录因子2(RUNX-2)、Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)、硬化蛋白(SOST)基因表达水平。【结果】(1)与模型组比较,中药组大鼠空腹胰岛素(Fins)、血钙(BC)、血磷(BP)、骨特异性碱性磷酸酶(B-ALP)、骨钙素(OC)、骨密度(BMD)水平均升高(P0.01),空腹血糖(FBG)、β-I型胶原羧基端肽(β-CTX)、1型前胶原酶N端肽(P1NP)、骨保护素(OPG)水平均明显降低(P0.01),骨组织Wnt3α、LRP-5、β-catenin、RUNX-2基因表达量升高(P 0.01),而DKK-1及SOST基因表达量无显著性差异(P 0.05)。(2)中药组骨组织结构紊乱较模型组明显减轻,基本接近正常。【结论】滋肾降糖丸可能通过上调Wnt/β-catenin信号通路中重要分子Wnt3α、LRP-5、β-catenin、RUNX-2的基因表达,促进成骨细胞的分化,抑制骨破坏,改善骨组织形态,增加骨密度,调节骨代谢紊乱,进而发挥对糖尿病大鼠骨量减少和骨质疏松形成的防治作用。     

非霍奇金淋巴瘤细胞株中Wnt信号通路功能检测及siRNA敲低Wnt信号通路对细胞活力的影响

目的:研究非霍奇金淋巴瘤细胞株中Wnt信号通路功能及siRNA敲低Wnt信号通路对细胞活力的影响.方法:培养SUDHL-4细胞株(弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株)、Namalwa细胞株(Burkitt淋巴瘤细胞株)和正常淋巴细胞,检测Wnt信号通路功能;采用siRNA干扰的方式敲低淋巴瘤细胞株中Wnt蛋白的表达,检测细胞活力以及MYC、CylinD1、Bcl-6的mRNA含量.结果:SUDHL-4细胞株和Namalwa细胞株中Wnt、β-catenin、LRP5、Tcf、Lef的mRNA含量高于正常淋巴细胞,GSK-3β含量低于正常淋巴细胞,差异具有统计学意义(P＜0.05);抑制Wnt蛋白表达后,SUDHL-4细胞株和Namal-wa细胞株的细胞活力明显减低,细胞中MYC、CylinD1、Bcl-6的mRNA含量明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:非霍奇金淋巴瘤细胞株中Wnt信号通路功能增强;抑制Wnt信号通路能够降低细胞活力和相关靶基因的表达.     

赶黄草调控Wnt4抑制TGF-β诱导肺纤维化相关基因表达的研究

目的 探讨赶黄草通过调控Wnt信号通路中的Wnt4抑制转化生长因子-β(TGF-β)诱导的肺纤维化.方法 从基因表达数据库GEO中搜索TGF-β组(6个组)和对照组(5个组)相关转录组学的差异基因RNAs,对信号通路中的Wnt信号进行差异基因GO、KEGG、REACTOME富集,分析TGF-β和Wnt信号通路中相关基因的联系,并在体外实验中验证TGF-β和Wnt信号通路中的相关基因的关系.随后加入赶黄草检测是否通过调控Wnt相关基因来抑制TGF-β诱导的肺纤维化.实验细胞分空白组、TGF-β组、Wnt4组和赶黄草+TGF-β组,采用实时荧光定量PCR法检测MRC-5细胞中的纤连蛋白(FN1)、平滑肌肌动蛋白A2(ACTA2)、Wnt4等基因表达情况,激光共聚焦检测FN1和Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)蛋白荧光定量情况.结果 基因转录组学分析发现,TGF-β通过激活Wnt信号通路中的Wnt4基因使其表达升高,且TGF-β和Wnt信号通路的激活呈正相关.MRC-5细胞的实时荧光定量PCR结果显示,与空白组比较,TGF-β组FN1、Wnt4基因mRNA表达水平明显升高,Wnt4组FN1基因mRNA表达水平明显升高(P<0.05).与TGF-β组比较,赶黄草+TGF-β组FN1、ACTA2、Wnt4 mRNA表达水平明显降低(P<0.05).激光共聚焦显微镜检测结果显示,与TGF-β组比较,空白组和赶黄草+TGF-β组FN1和COL1A1蛋白荧光明显降低(P<0.05).结论 赶黄草可能通过调控Wnt信号通路中Wnt4的表达来抑制TGF-β诱导的肺纤维化.