临床分离黏质沙雷菌染色体及质粒介导的喹诺酮类耐药机制研究

目的 了解安徽地区临床分离株黏质沙雷菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的流行情况以及gyrA、parC基因变异对抗菌药物的耐药性产生的影响.方法 采用琼脂稀释法测定2005至2010年34家医院收集的104株黏质沙雷菌的MIC;采用PCR检测其中31株耐环丙沙星的黏质沙雷菌的qnr、aac(6’) -Ib、qepA基因以及gyrA和parC基因,对阳性扩增产物进行测序分析;对qnr、aac(6’) -Ib-cr阳性菌株做转移接合试验,PCR扩增并测序确定接合子的基因型,测定供体菌、受体菌和接合子对喹诺酮类及其他类型抗菌药物的MIC.结果 共检出31株环丙沙星耐药的黏质沙雷菌,共6株携带qnr基因和(或)aac(6’)-Ib-cr基因,其中2株携带qnrB6亚型,1株携带qnrS2亚型,4株携带aac(6’)-Ib-cr基因(其中1株同时携带qnr基因).9株检测出gyrA基因突变,7株检测出parC基因突变.6株携带qnr基因和(或)aac(6’)-Ib-cr基因的菌株中有5株转移接合成功.接合子与受体菌相比,对喹诺酮类的MIC值均有不同程度的提高.结论 染色体及质粒介导的耐药基因在临床分离的黏质沙雷菌对喹诺酮类药物耐药中起重要的作用,且可以水平传播,故应引起高度重视.     

大肠埃希菌对氟喹诺酮类的质粒介导耐药机制研究

目的了解近年来发现的质粒介导耐药机制在临床分离大肠埃希菌中对氟喹诺酮类耐药所起的作用。方法用MIC琼脂稀释法筛选耐左氧氟沙星大肠埃希菌;采用聚合酶链反应对qnrA、qnrS、qnrB、aac(6′)-Ib基因进行扩增,并进行PCR扩增产物直接双向测序。用接合实验了解是否存在水平传播的氟喹诺酮耐药性传播机制。结果 90株耐氟喹诺酮类大肠埃希菌中7株检出aac(6′)-Ib-cr基因,未检出qnrA、qnrS、qnrB基因。78株符合供体菌标准的大肠埃希菌中有2株接合成功,接合率2.6%。结论该地区存在质粒介导的氟喹诺酮类耐药性的水平传播。     

肠杆菌科临床株质粒介导的喹诺酮类耐药机制的研究

目的了解天津地区肠杆菌科临床株中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrA、aac（6＇）-Ib-cr的分布并研究其耐药机制。方法从天津地区8家三甲医院收集环丙沙星耐药（CPLX，MIC≥4μg／ml）的肠杆菌科菌株共116株，包括77株大肠埃希菌、24株阴沟肠杆菌、15株克雷伯菌属细菌。应用PCR方法筛查所有临床株的qnrA基因，并对大肠埃希菌进行aac（6＇）-Ib的检测；琼脂稀释法测菌株的药敏情况；DNA测序检测aac（6＇）-Ib—cr基因变异体；接合传递试验方法探讨细菌质粒介导的耐药性传递。结果116株喹诺酮类耐药的肠杆菌科临床株中未发现qnrA基因阳性株；77株环丙沙星耐药的大肠埃希菌15株检出aac（6＇）-Ib，其中对卡那霉素耐药10株、中敏4株、敏感1株；选出对卡那霉素耐药表型不同的6株菌的aac（6＇）-Ib扩增产物进行测序，结果表明5株菌在第223位（T→C或T→A）和454位（G→T）发生变异，均携带aac（6＇）-Ib-cr；6株测序菌株中4株接合传递成功，临床株对喹诺酮类和氨基糖甙类的耐药性部分传递给了受体株。结论qnrA基因在天津地区116株肠杆菌科临床株中甚为罕见；首次在天津发现aac（6＇）-Ib—cr介导的喹诺酮类耐药。     

非发酵菌和环丙沙星敏感肠杆菌科细菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测

目的了解3类质粒介导的喹诺酮类耐药基因在浙江省温州地区分离的非发酵菌和环丙沙星敏感肠杆菌科细菌中的分布情况。方法收集2008年1月至2013年6月温州地区分离的非发酵菌和环丙沙星敏感肠杆菌科细菌,共600株,其中非发酵菌419株,环丙沙星敏感肠杆菌科细菌181株。采用聚合酶链反应(PCR)检测qnrA、qnrB、qnrS、aac(6)-Ib以及qepA基因,并通过DNA测序确定qnr基因型和aac(6')-Ib-cr基因变异体;通过接合转移实验研究细菌质粒介导的耐药性传递情况。结果 419株非发酵菌临床株中未检测到qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib和qepA等耐药基因。181株环丙沙星敏感的肠杆菌科细菌临床株中未检到qepA,检到2株qnrA1阳性株,分别为1株肺炎克雷伯菌和1株大肠埃希菌;2株qnrB4阳性株,均为阴沟肠杆菌复合菌;12株检测到aac(6')-Ib,分别为6株大肠埃希菌、3株阴沟肠杆菌复合菌和3株克雷伯菌属细菌。接合转移试验中,2株qnrA1阳性株和1株qnrB4阳性株接合转移成功,12株携带aac(6')-Ib-cr基因的阳性株中4株接合转移成功。结论温州地区,质粒介导的喹诺酮类耐药基因不仅存在于环丙沙星耐药株中,而且还存在于环丙沙星敏感的肠杆菌科细菌中,可能不存在于非发酵菌中。     

中国九家教学医院肠杆菌科细菌质粒介导的喹诺酮耐药机制研究

目的 研究质粒介导的喹喏酮类的耐药基因qnr和aac(6')-Ib-cr在我国肠杆菌科临床株中的分布状况.方法 从全国9家教学医院收集的421株非重复的4种肠杆菌科细菌[大肠埃希菌(eco)、肺炎克雷伯菌(kpm)、阴沟肠杆菌(ecl)、弗劳地柠檬酸杆菌(cfr)]中,按环丙沙星(CW)≥0.25μg/ml、头孢噻肟(CTX)≥2.0μg/ml、头孢曲松(cno)≥2.0μg/ml的条件筛选出197株,其中cfr30株,ecl 35株,eco 77株,kpm 55株.采用PCR检测筛选菌株的qnrA、qnrB、qnrS和aac(6')-IB质粒介导耐药基因;并以内切酶BtsCI酶切消化aac(6')-Ib PCR阳性产物以确定aac(6')-Ib-cr.接合试验确定喹诺酮耐药的可转移性;用琼脂稀释法测定接合子及其供体菌和受体菌对环丙沙星及其他抗菌药的MIC值.结果 在197株筛选出的肠杆菌科细菌中,qnr共检出83株,总阳性率为42%(83/197),其中qnrA有17株(9%),qnrB有46株(23%),qnrS有24株(12%);qnrA和qnrB同时阳性有2株,qnrB和qnrs同时阳性有2株.aac(6')-Ib共检出90株(46%),aac(6')-Ib-cr共检出36株(18%).qnr和aac(6')-Ib-cr同时阳性的有18株.在ecl、kpn、cfr、eco中,qnr的阳性率分别为66%、66%、63%、6%,aac(6')-Ib-cr阳性检出率分别为9%、22%、27%、17%.qnr和aac(6')-Ib-cr在所有的4种肠杆菌科细菌中的阳性率分别为20%(83/421)和9%(36/421).质粒接合试验获得了13株接合子,环丙沙星对接合子的MIC范围为0.125～1μg/ml,相差8倍;接合子与受体菌相比,CIP的耐药性提高了16～125倍,左氧氟沙星的耐药性提高了16～31倍.结论 在中国,qnr和aac(6')-Ib-cr相关的质粒介导喹诺酮类耐药性在肠杆菌科临床分离株中分布广泛;qnr和aac(6')-Ib-cr能介导喹诺酮低水平耐药,这可能是我国细菌对喹诺酮类耐药性上升迅速的重要原因.     

耐喹诺酮类药物铜绿假单胞菌的质粒基因研究

目的研究耐喹诺酮类药物铜绿假单胞菌(PA)的质粒基因,并分析其耐药机制。方法临床分离的耐喹诺酮类药物的PA 100株,采用PCR法检测质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、aac(6′)-Ib-cr,并对阳性结果进行测序分析。结果 100株PA中检测出含有qnrA基因的菌株34株(34%);qnrB基因79株(79%);qnrD基因14株(14%);qnrS基因8株(8%);aac(6′)-Ib-cr基因55株(55%);未检测出qnrC和qepA基因的菌株。结论质粒携带的qnrA、qnrB/aac(6′)-Ib-cr耐药基因是PA耐喹诺酮类药物的主要机制。     

212～216年广东省中山社区鼠伤寒沙门菌同源性分析及对喹诺酮类药物耐药机制研究

目的 研究广东省中山社区鼠伤寒沙门菌(STM)的同源性及对喹诺酮类药物的耐药机制。方法 收集中山大学附属中山医院2012年3月～2016年12月临床分离鼠伤寒沙门菌78株(排除同一病人重复送检菌株)。通过琼脂稀释法检测鼠伤寒沙门菌对喹诺酮类药物的敏感度; 脉冲电场凝胶电泳(PFGE)方法分析耐药菌株的同源性; 使用PCR和DNA测序法分析gyrA,gyrB,parC和parE基因喹诺酮耐药决定区(QRDRs)的突变; PCR检测质粒介导喹诺酮类药物耐药基因qnr(qnrA,qnrB,qnrS,qnrD)和aac(6')-Ib-cr。结果 33株鼠伤寒沙门菌对环丙沙星产生耐药。33株鼠伤寒沙门菌共产生33种不同的PFGE图谱,相似度小于90%。29株耐药株gyrA位点发生单突变导致在第83或87位存在唯一氨基酸替代,其中第83位突变率占93.1%(27/29)。4株喹诺酮高耐药菌株的gyrA同时存在83和87号位双突变导致两个氨基酸发生替代,其中2株菌额外出现parC基因单碱基突变导致第80号位出现氨基酸替代。所有菌株中均未检测到qnr基因,但有15株鼠伤寒沙门菌检出aac-(6')-Ib-cr基因。结论 中山社区鼠伤寒沙门菌对喹诺酮类药物耐药性较高,主要机制是gyrA基因的单突变和携带aac-(6')-Ib-cr耐药基因。     

临床常见的革兰阴性杆菌耐药情况及其aac(6’)-Ib-cr基因检测结果分析

目的了解我院临床常见的革兰阴性杆菌的耐药状况及其质粒介导的能使喹诺酮类和氨基糖甙类药物同时耐药的基因aac(6’)-Ib-cr的流行分布状况和比较分析。方法用微量肉汤稀释法测定2010年从临床分离的299株临床常见的革兰阴性杆菌(53株鲍曼不动杆菌、66株铜绿假单胞菌、83株大肠埃希菌和97株肺炎克雷伯菌)的MIC值。采用PCR检测所有菌株的aac(6’)-Ib基因;并以内切酶BtsCI酶切消化aac(6’)-Ib的PCR阳性产物以确定aac(6’)-Ib-cr。结果氨苄西林耐药率最高,达75.3%,其次是头孢唑林,耐药率为58.5%;环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为25.1%和16.7%;哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星和亚胺培南的敏感率均在90%以上。共检出aac(6’)-Ib基因29株,其中有21株变异为aac(6’)-Ib-cr,变异率为72.4%(21/29);aac(6’)-Ib-cr的总阳性率为7.0%(21/299),其中大肠埃希菌有9株及肺炎克雷伯菌有22株,其阳性率为11.67%(21/180),而在鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌中未检出aac(6’)-Ib-cr(0.0%,0/119);经χ2检验,两者间的差异具有统计学意义(χ2=14.932,P<0.01)。结论目前哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星和亚胺培南为抗感染治疗的首选药;环丙沙星的耐药率较高,要慎选,而左氧氟沙星耐药率相对低一些,可优先于环丙沙星选用。aac(6’)-Ib-cr基因在肠杆菌科细菌与非发酵细菌中的分布差异具有统计学意义。     

阴沟肠杆菌临床分离株中3类质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的检测

目的 了解3类质粒介导喹诺酮类药物耐药基因在阴沟肠杆菌中流行情况.方法 采用聚合酶链反应检测2005年1-12月本院临床分离的101株阴沟肠杆菌中qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib以及qepA基因,对aac(6')-Ib基因阳性菌株采用FokI酶切确认aac(6')-Ib-cr基因,同时检测ESBLs及AmpC酶的产生情况.结果 101株阴沟肠杆菌对环丙沙星的耐药率为32.7%.41.6%(42/101)菌株携带qnr基因和(或) aac(6')-Ib-cr基因,其中39株(38.6%)携带qnr基因,7株( 6.9% )携带aac(6')-Ib-cr基因,4株同时携带qnrB4和aac(6')-Ib-cr,未检测到qepA基因.qnr基因阳性菌株中qnrA 19株、qnrB 18株、qnrS 3株(其中1株同时含有qnrB和qnrS).环丙沙星耐药与敏感菌株中qnr基因检出率分别为48.5%(16/33)和32.8% (21/64),经卡方检验两组差异无统计学意义(P=0.22).产与非产ESBLs菌株中qnr基因检出率分别为 62.7% (32/51)和14.0%(7/50),两者差异有统计学意义(P<0.01).结论 临床分离的阴沟肠杆菌中质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因检出率高,在环丙沙星敏感阴沟肠杆菌中qnr基因的检出率与耐药株中的检出率相仿.     

宋内志贺菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药性研究

目的 检测宋内志贺菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药情况,探讨染色体介导DNA旋转酶A亚单位(gyrA)和拓扑异构酶ⅣC亚单位(parC)基因突变或(和)质粒介导qnrA基因存在与宋内志贺菌耐喹诺酮类药物的相关性.方法 用K-B纸片扩散法对58株宋内志贺菌进行耐药性检测;PCR法检测宋内志贺菌喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关gyrA、parC基因,并根据药敏结果 挑选5株菌扩增片段进行DNA测序;PCR法扩增qnrA基因片段.分析宋内志贺菌gyrA、parC基因突变或(和)qnrA基因存在与喹诺酮类药物耐药性的关系.结果 宋内志贺菌对萘啶酸的耐药率高达94.8%.58株宋内志贺菌中,8株检出qnrA基因,5株测序gyrA、parC基因的菌株中,4株萘啶酸耐药菌株均在gyrA 83位发生有义突变TCG(Ser)→TTG(Leu),但未发生parC基因突变,gyrA基因突变菌株对萘啶酸全耐药.qnrA基因阳性菌株对5种喹诺酮类药物抑菌圈中位数比较都缩小;对NAL、氧氟沙星的耐药率高于qnrA基因阴性菌株(P<0.05),差异有统计学意义.结论 gyrA Ser83分→Leu突变是导致宋内志贺菌临床分离株对喹诺酮类药物耐药的关键突变,宋内志贺菌若携带质粒介导qnrA基因则会导致对喹诺酮类药物的敏感性下降,若两者同存也可引起喹诺酮类药物耐药增强,除萘啶酸耐药外对其他喹诺酮类药物也可呈中介.     

Plasmid-mediated quinolone resistance mechanisms in ESBL positive Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae strains at a Tertiary-Care Hospital in Turkey

Plasmid-mediated quinolone resistance mechanisms in extended spectrum beta-lactamase positive and quinolone resistant Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae strains isolated from Ege University Hospital were investigated. The presence of qnrA, qnrB, qnrS, aac(6')-Ib and qepA genes were detected by PCR and the products were sequenced. Clonal relationship of isolates was determined by REP-PCR and mutations in gyrA and parC genes were investigated in representative strains. aac(6')-Ib-cr, qnrB and qnrS genes were detected in both E. coli and K. pneumoniae strains, but qnrA detected only in K. pneumoniae strains. qepA determinant is detected in an E. coli strain first time in Turkey. Mutations were observed in both gyrA and parC genes of all representative nalidixic acid and ciprofloxacin resistant E. coli isolates but no mutation was found in parC genes of E. coli and K. pneumoniae strains that were resistant to only nalidixic acid.     

High prevalence of acquired quinolone-resistance genes among Enterobacteriaceae from Saudi Arabia with CTX-M-15 β-lactamase

We examined the prevalence of acquired quinolone resistance determinants among Enterobacteriaceae with extended-spectrum β-lactamases (ESBLs) in Riyadh, Saudi Arabia. qnrA, qnrB, qnrS, aac(6')-Ib-cr, and qepA genes were sought by polymerase chain reaction (PCR) in 160 nonduplicate, clinical Enterobacteriaceae with ESBLs from Prince Salman Hospital in Riyadh during 2009. MICs were determined for qnr- and aac(6')-Ib-cr-positive isolates. Mutations in gyrA and parC were determined for isolates with qnr. ESBL genes were characterized by PCR and sequencing. Among 99 ESBL-producing Escherichia coli, 73% were ciprofloxacin resistant, as were 74% of 61 ESBL-positive Klebsiella pneumoniae. The aac(6')-1b-cr gene was present in 76 ESBL producers, comprising 34 K. pneumoniae and 42 E. coli, whereas qnrA or qnrB genes were found in 21 isolates, all of them also harbouring aac(6')-1b-cr and bla(CTX-M-15), with the latter encoding what was considerably the dominant ESBL in the collection. The qnr-positive isolates harboured a variety of mutation in gyrA and parC but, even with aac(6')-1b-cr also present, high-level ciprofloxacin resistance (MIC >32 μg/mL) was invariably associated with double mutations in gyrA, affecting both Ser83 and Asp87 along with >1 substitution in parC, affecting Ser80 or Glu84.     

临床分离气单胞菌喹诺酮类的耐药机制研究

摘要:目的探讨临床分 离气单胞菌属细茵(Aeromonas spp. )喹诺酮类药物耐药机制。方法收集从北京友谊医院2017年腹泻患者粪便标本中分离的气单胞菌,采用微量肉汤稀释法检测其对喹诺酮类药物的敏感性,提取菌株核酸进行PCR扩增,测序分析气单胞茵喹诺酮耐药决定区(quinolone-resistancedeter mining region, QRDR)及喹诺酮耐药质粒相关( plasmid-mediated quinolone resistance, PMQR)基因。结果共收集 111株气单胞菌,其中7株(6.3%)对萘啶酸(NAL)和环丙沙星(CIP )均耐药,54株(48.6%)对NAL耐药但对CIP敏感,50株(45.0%)对NAL和CIP均敏感。QRDR测序结果显示,NAL耐药菌株gyrA基因第83位发生丝氨酸(Ser)突变,突变为异亮氨酸(le)、缬氨酸(Val)或酪氨酸(Tyr)。对NAL-CIP耐药的菌株中,除了 gyrA基因突变外,parC基因第87位Ser突变为Ile。 CIP 敏感的104株菌株中,仅有7株parC基因第87位Ser突变。PMQR基因检测结果显示,QnrS基因检出率为7.2%(8株) ,aac(6'')-lb-cr 基因检出率为6.3%(7株),且QnrS和aac(6'' )-1b-cr基因检出 主要集中在CIP耐药菌株中,CIP耐药菌株PMQR基因检出率为85.7%。结论气单胞菌喹诺酮低水平耐药主要与 gyrA基因第第83位突变或QnurS基因有关。gyrA基因第83位突变和parC基因第87位突变Ser87lle联合PMQR基因存在时,可能与气单胞茵对喹诺酮的高水平耐药相关。     

志贺菌gyrA、parC基因突变与喹诺酮类耐药

目的探讨DNA旋转酶A亚单位（gyrA）和拓扑异构酶Ⅳ C亚单位（parC）基因突变与志贺菌耐喹诺酮类药物的相关性。方法用聚合酶链反应（PCR）检测志贺菌喹诺酮耐药决定区（QRDR）相关gyrA、parC基因并挑选11株菌扩增片段进行DNA测序,分析突变位点与药敏结果的关系。结果11株扩增片段测序结果显示,9株耐萘啶酸菌均在gyrA83位发生有意义突变TCG（Ser）→TTG（Leu）,宋内志贺菌未发生parC基因突变,5株耐萘啶酸、诺氟沙星和／或环丙沙星中介敏感福氏志贺菌在parC80位发生有意义突变AGC（Ser）→ATc（Ile）。结论志贺菌对喹诺酮类药物耐药严重,福氏志贺菌比宋内志贺菌更耐此类药物,靶酶基因突变是其耐喹诺酮类药物的主要机制之一,gyrA Ser83→Leu突变是导致志贺菌临床株对萘啶酸耐药的关键突变。parC基因突变在gyrA基因突变的基础上才会发生,parC突变可能引起诺氟沙星和／或环丙沙星不敏感。     

从患者胆汁分离的大肠埃希菌中质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因的检测

目的 分析浙江省衢州市开化县第二人民医院消化内科胆汁分离的大肠埃希菌的耐药特点并调查质粒介导的喹诺酮类耐药基因的分布情况和流行特点。方法 收集该院消化内科患者2011年1月至2013年6月分离的大肠埃希菌724株,均为非重复性菌株,采用全自动微生物分析仪器VITEK 2 COMPACT进行细菌鉴定及药物敏感性分析,采用聚合酶链反应 (polymerase chain reaction,PCR)分析质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因(plasmid-mediated quinolone resistance genes, PMQR) 如qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib-cr和qepA 基因的流行特点。结果 胆源性大肠埃希菌的构成比达18.65%(135/724),其对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率高达61.5%(83/135)和55.6%(75/135),未检出碳青霉烯类抗生素耐药菌株;PCR检测PMQR基因结果显示:135株胆源性大肠埃希菌中,121株 (89.63%) qnrA1 基因阳性,45株(33.33%) qnrB4 基因阳性,32株 (23.70%) qnrB6 基因阳性,43株(31.85%) qnrS1 基因阳性,34株(25.19%) aac(6')-Ib-cr 基因阳性菌株,未检出qepA基因;其中45株(33.33%)同时携带 qnrA1、qnrB4 基因,32株(23.70%)同时携带 qnrA1、qnrB6, 25株(18.52%)同时携带 qnrA1、qnrB4、qnrS1, 21株(15.56%)同时携带 qnrA1、qnrB4、qnrS1、acc(6')-Ib-cr, 12株(100%)同时携带 qnrA1、qnrB6、qnrS1、acc(6')-Ib-cr, 且环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率随着PMQR基因组合种类的增多而增多。结论 消化内科胆汁分离的大肠埃希菌氟喹诺酮类抗生素耐药严重,耐药基因主要以 qnrA1为主,qnrB4和qnrB6 次之,且存在多种PMQR基因组合形式,这些潜在播散的氟喹诺酮耐药基因对于临床胆道感染的治疗有很大的挑战。     

Decreased susceptibility to ciprofloxacin among Shigella isolates in the United States, 2006 to 2009

We characterized 20 Shigella isolates with decreased susceptibility to fluoroquinolones. Most patients (80%) from whom a travel history was obtained reported travel to South or Southeast Asia. Mutations within the quinolone resistance determining regions of gyrA and parC and plasmid-mediated resistance determinants (qnrB, qnrS, and aac(6')-Ib-cr) were identified. The rise in antimicrobial resistance among Shigella isolates may necessitate the increased use of extended-spectrum cephalosporins or macrolides in some patients.     

Molecular mechanisms of decreased susceptibility to fluoroquinolones in avian Salmonella serovars and their mutants selected during the determination of mutant prevention concentrations

OBJECTIVES: Salmonella enterica isolates of six serovars and mutants obtained during determination of mutant prevention concentrations (MPCs) were investigated for mechanisms of decreased susceptibility to fluoroquinolones. METHODS: The quinolone resistance determining regions (QRDRs) of gyrA, gyrB, parC and parE genes were sequenced. MIC values were determined in the presence/absence of the efflux pump inhibitors carbonyl cyanide m-chlorophenyl-hydrazone (CCCP) or Phe-Arg-beta-naphthylamide (PA beta N). PCR assays for the quinolone resistance genes qnrA, qnrB, qnrS or aac(6')-Ib-cr were applied. The MPC values of ciprofloxacin (MPC(CIP)) were determined for all isolates and selected mutants were investigated for their quinolone resistance mechanisms. RESULTS: In contrast to 11 nalidixic acid-susceptible isolates, 24 nalidixic acid-resistant isolates exhibited single mutations in gyrA (Asp-87 --> Tyr, Gly, Asn or Ser-83 --> Phe, Tyr) or parC (Thr-57 --> Ser). While CCCP had no influence on the MICs, PA beta N decreased the MIC(CIP) values by 1-3 dilution steps and MIC(NAL) values by up to 6 dilution steps. Of the resistance genes investigated, only qnrS was present, in a single Salmonella Infantis isolate. The MPC(CIP) values were 4-64-fold higher than the MICs and ranged between 1-16 and 0.12-1 mg/L, respectively, for isolates resistant or susceptible to nalidixic acid. Only mutants obtained from formerly nalidixic acid-susceptible isolates developed single mutations in gyrA or gyrB. CONCLUSIONS: In field isolates and mutants, target site mutations and efflux seem to be important mechanisms for decreased fluoroquinolone susceptibility. Mutants derived during MPC determination from field isolates already harbouring single-step mutations in gyrA did not exhibit further mutations in any target genes.