体外培养正常人黑素细胞内皮素A受体mRNA表达的研究

目的 探讨正常人黑素细胞中是否存在内皮素-1的高选择性A受体(ETA-R)的mRNA表达。方法 采用体外黑素细胞培养技术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测正常人黑素细胞ETA-R的mRNA表达情况。结果 正常人黑素细胞有ETA-R的mRNA表达,凝胶电泳显示有特异性条带,以分子量标记电泳条带作为参照,cDNA产物片段长度约为400 bp。结论 内皮素-1可能是通过与其高选择性ETA-R结合而发挥其对黑素细胞的促增殖作用。     

内皮素对黑素细胞的调控作用

内皮素系统包括内皮素及其受体。该系统能够单独或者协同α-黑素细胞刺激素、干细胞因子和编码性别相关转录因子等信号分子调节黑素细胞的发育、分化、增殖、黑素合成、黏附和移行，并在色素沉着过度、白癜风和黑素瘤等皮肤色素障碍性疾病的发病过程中起着重要的作用。因此，深入研究内皮素系统与色素障碍性疾病的关系，以及研发选择性作用于内皮素受体的新型药物将为某些色素障碍性皮肤病的治疗提供新的思路和方法。     

内皮缩血管肽1和促肾上腺皮质激素对体外培养的正常人黑素细胞增殖的影响

目的 了解内皮缩血管肽1及促肾上腺皮质激素(ACTH)对体外培养的正常人黑素细胞增殖的影响.方法 采用体外黑素细胞培养技术、四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)研究不同浓度内皮缩血管肽1、ACTH对黑素细胞增殖的影响.结果 从0.1~1000nmol/L浓度的内皮缩血管肽1均可不同程度地促进正常人黑素细胞的增殖,低浓度0.1nmol/L内皮缩血管肽1具有很好的促增殖作用.10^-13~10^-9mol/L的ACTH也可不同程度地促进正常人黑素细胞的增殖,与对照组相比,P值均<0.05,其中又以高浓度10^-9mol/LACTH促增殖能力最强,10^-12mol/L、10^-11mol/L、10^-10mol/L 3个浓度间差异无统计学意义.结论 内皮缩血管肽1及ACTH具有促进体外培养的正常人黑素细胞增殖的作用,较低浓度内皮缩血管肽1即具有很好的促增殖作用,正常人生理水平(10^-12~10^-11mol/L)及更高浓度ACTH均有较强的促增殖作用.     

黑素生成素诱导小鼠成黑素细胞增殖和分化的研究

目的 观察从胎盘中提取的黑素生成素对小鼠成黑素细胞NCCmelb4M5增殖和分化的影响，从诱导成黑素细胞增殖和分化的角度，探讨其治疗白癜风的可能机制。方法 NCCmelb4M5细胞的增殖应用常规MTT法检测；倒置显微镜直接观察黑素生成素作用后细胞形态的变化。RT－PCR检测不同浓度黑素生成素作用后细胞表面分子表达的变化。结果 50，100，200 μg/mL的黑素生成素均可促进NCCmelb4M5细胞的增殖（P < 0.001），100 μg/mL作用效果最为明显；50，100 μg/mL黑素生成素可以刺激表面分子c-Kit和酪氨酸酶在NCCmelb4M5细胞中的表达由阴性转为阳性，并增加小眼畸形相关转录因子（MITF）在细胞内的表达。100 μg/mL的黑素生成素可明显诱导NCCmelb4M5细胞的形态从成黑素细胞向黑素细胞改变。结论 从胎盘中提取的黑素生长素可诱导NCCmelb4M5细胞由成黑素细胞向黑素细胞分化，这种诱导作用可能是使白斑复色的途径之一。     

甲氧沙林对人毛囊黑素细胞增殖、活化和黑素合成作用的研究

目的 研究甲氧沙林对人毛囊黑素细胞活化、增殖和黑素合成的影响.方法 体外培养正常人毛囊黑素细胞,观察不同浓度甲氧沙林(10～500μmol/L)对毛囊黑素细胞形态、增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响.结果 50μmol/L甲氧沙林处理细胞7d后,毛囊黑素细胞树突明显增多延长,胞浆内出现较多棕褐色颗粒,酪氨酸酶活性和黑素含量增加显着高于对照组(P<0.01).结论 甲氧沙林能诱导毛囊黑素细胞树突增多延长,酪氨酸酶活性和黑素含量增加.     

中药单体胡椒碱促进表皮黑素细胞黑素合成的实验研究

目的：研究中药单体胡椒碱对表皮黑素细胞黑素合成的影响,初步探讨胡椒碱影响表皮黑素细胞黑素合成的作用机制。方法：培养的表皮黑素细胞分别以系列浓度的胡椒碱作用24、72、120h,测定细胞增殖率、黑素含量,激光共聚焦显微镜观察并定量分析荧光染色后细胞内酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白酶(TRP)1、TRP2的表达情况。结果：胡椒碱呈浓度依赖性促进黑素合成。且作用72h时效果最明显。0．50mmol／L胡椒碱作用72h可促进表皮黑素细胞酪氨酸酶、TRP1的表达,而对TRP2的表达无明显影响。结论：中药单体胡椒碱可轻度抑制表皮黑素细胞的生长,明显促进表皮黑素细胞的黑素合成,其机制可能主要通过上调酪氨酸酶和TRP1的表达而发挥作用。     

含中药血清对体外黑素细胞增殖及黑素合成量的影响

目的　探讨含中药白净冲剂血清对黑素细胞 (MC)增殖及合成黑素功能的影响。方法　体外培养人MC,于对数生长期加 10%浓度的大鼠含中药白净冲剂血清培养 56h后,分别采用噻唑蓝法(MTT法)和NaOH法检测MC增殖及合成黑素的情况,并与大鼠转移因子注射后含药血清组作对照。空白对照大鼠血清为空白对照组。结果　中药白净冲剂及转移因子含药血清组对MC增殖较空白对照组有明显促增殖作用,合成黑素量显著增加,差异均有显著性 (P均<0. 01)。结论　含中药白净冲剂血清有促进MC增殖作用,并使MC合成黑素增加。     

卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响

目的 探讨卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响及其作用的可能机制.方法 用噻唑蓝比色法(MTT法)、酶学方法及NaOH法,观察卡泊三醇对黑素细胞增殖及色素合成的作用;RT-PCR和蛋白印迹分别检测卡泊三醇对黑素细胞酪氨酸酶基因转录和蛋白表达水平的影响.结果 10~(-9)～10~(-5) mol/L浓度范围的卡泊三醇对体外培养的黑素细胞增殖的影响与空白对照组比较差异无统计意义(P＞0.05).同样浓度范围下,10~(-9)、10~(-8)mol/L浓度的卡泊三醇能明显增强黑素细胞的酪氨酸酶活性和促进黑素细胞的黑素含量,与空白对照组比较,酪氨酸酶活性可分别升高137%、123%(P＜0.05),黑素含量分别增加40.63%、18.75%(P＜0.05).其中10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇增强黑素细胞的酪氨酸酶活性及促进黑素细胞的黑素含量最明显.与高浓度组、空白对照组比较,10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇使酪氨酸酶蛋白表达增高也最明显.较空白对照组增高270.4%(P＜0.05).结论 卡泊三醇对黑素细胞增殖无影响,可增加黑素细胞酪氨酸酶蛋白表达水平,提高酪氨酸酶活性,从而促进黑素细胞的黑素合成.     

皮肤创伤修复过程中表皮生长因子与黑素细胞及黑素生成关系的研究进展

创伤修复是一个复杂的过程,包括炎症反应、细胞增殖、基质沉积以及组织重塑过程.多种细胞及细胞因子共同参与促进创伤愈合.表皮生长因子被认为是其中的关键因素.表皮生长因子在创伤愈合中的积极作用已在动物实验及临床应用上得以证实,而在创伤修复过程中,表皮生长因子与黑素细胞及黑素生成的关系并不明确.近年来,研究发现,表皮生长因子可以抑制激光术后黑素细胞表达黑素,从而改善炎症后色素沉着.     

A Novel Effect of Lipids Extracted from Vernix Caseosa on Regulation of Filaggrin Expression in Human Epidermal Keratinocytes

BackgroundVernix caseosa (VC), which is known as a unique human substance, is a biofilm that covers the skin of most human newborns. VC has many biological functions including anti-infective, skin cleansing and skin barrier repair.ObjectiveIn the study, we purpose to investigate the novel effect of lipids extracted from VC on the regulation of filaggrin (FLG) expression and anti-inflammation in normal human epidermal keratinocyte (NHEK) cells.MethodsThe lipids were extracted by chloroform/methanol (Folch method) and the major properties of fatty acid methyl esters were determined with gas chromatography-mass spectrometer. The relative viability of NHEK cells was evaluated by Cell Counting Kit 8 assay. The related expression of skin barrier protein was accessed with real-time quantitative polymerase chain reaction, Western blot and Immunofluorescence in NHEK cells with or without poly (I:C). Meanwhile, the changes of thymic stromal lymphopoietin (TSLP) and tumor necrosis factor alpha (TNF-α) are analyzed by enzyme-linked immunosorbent assay.ResultsVC lipids mostly contained saturated and branched chains fatty acids. The expression of mRNA and protein of FLG were significantly increased after the supplement with lipid in NHEK cells. Meanwhile, lipids reversed the inhibition of poly (I:C) on FLG. Moreover, lipids suppressed the over secretion of TSLP and TNF-α induced by poly (I:C).ConclusionThese results indicate that lipids extracted from VC has positive effects on the expression of FLG and anti-inflammation, suggesting that lipids of VC may be used for a reference for novel therapeutic method in reducing and remedying skin disease like atopic disease.     

白癜风患者血清抗人黑素浓集素受体-1自身抗体的检测及分析

目的检测白癜风患者血清中抗黑素浓集素受体-1(MCHR1)的自身抗体,探讨其在白癜风发病中的意义。方法构建真核表达载体pcDNA3.1/MCHR1,经限制性内切酶双酶切及DNA测序鉴定后,用阳离子脂质体介导转染CHO细胞,经G418筛选,利用ELISA,RTPCR及蛋白印迹法鉴定表达MCHR1蛋白的阳性克隆。采用活细胞ELISA法检测白癜风患者血清抗MCHR1及抗黑素细胞(MC)膜表面抗原的自身抗体。结果白癜风患者血清中抗MCHR1自身抗体阳性率为17.1%,抗MC膜表面抗原的自身抗体阳性率为41.4%,所有抗MCHR1自身抗体阳性的血清抗MC膜表面抗原自身抗体均为阳性,正常人血清中抗MC膜表面抗原及抗MCHR1抗体均为阴性。结论白癜风患者血清中存在抗MCHR1的自身抗体,MCHR1是MC膜表面的白癜风相关抗原。     

α-硫辛酸对体外培养的黑素细胞影响的实验研究

目的　建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系 ,研究α 硫辛酸对体外培养的黑素细胞的影响。方法　采用MTT法测定α 硫辛酸对黑素细胞活力的影响 ,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性 ,NaOH裂解法测定黑素合成 ,并与茶多酚的结果进行比较。结果　α 硫辛酸对黑素细胞活力有抑制作用 ,能使细胞增殖力降低 ,酪氨酸酶活性减弱 ,黑素合成减少。结论　α 硫辛酸对体外培养的黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素生成都有抑制作用 ,这为临床应用α 硫辛酸治疗色素性疾病提供了实验依据。     

Activation of Toll-like Receptors 1, 2, 4, 5, and 7 on Human Melanocytes Modulate Pigmentation

Human melanocytes are not simply pigment-producing cells. It may be part of the inflammatory response, during which the pigmentary system may produce more melanin or suppress melanization. Toll-like receptors (TLRs) have been implicated in both innate host defense against pathogens and inflammatory response. Therefore, it may be possible that activation of TLRs in melanocytes may play a role in the modulation of melanogenesis. In this study, we investigated whether normal human melanocytes expressed TLRs and analyzed pigmentation changes upon TLR stimulation. The expression of TLR1~10 mRNA in cultured human melanocyte was analyzed using RT-PCR, Western blotting and immunocytochemistry. Human melanocytes constitutively express mRNA and protein for TLR2, 3, 4, 5, 7, 9 and 10. Stimulation of TLR1/2 and 4 with Pam3CSK4 and lipopolysaccharide induced pigmentation of melanocytes. Activation of TLR5 and 7 with flagellin and imiquimod treatments reduced pigmentation of melanocytes and zebrafish. In summary, the results provided evidence for TLRs expression in normal human melanocytes. It is speculated that a response of melanocyte to TLR ligands may play a role in the pigmentary change in the skin.     

三氧化二砷对A375人恶性黑素瘤细胞株酪氨酸酶活性及黑素生成的影响

目的 探讨三氧化二砷(As₂O₃)对A375人恶性黑素瘤细胞株酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法 利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,465nm比色法测定黑素含量。结果 As₂O₃浓度<0.01μmol/L时,随As₂O₃浓度的增加,促进黑素瘤细胞的增殖、黑素的合成及上调酪氨酸酶的活性;As₂O₃浓度等于0.01μmol/L时作用最强。0.1～1μmol/L则表现为抑制作用;>1μmol/L则出现细胞毒性作用。结论 经As₂O₃处理后A375人恶性黑素瘤细胞株的细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素的生成与As₂O₃浓度呈双相性变化。     

五倍子对角质形成细胞、黑素细胞和成纤维细胞体外增殖的影响

目的 了解中药五倍子治疗瘢痕疙瘩的药用成分和药用机制以及可能存在的不良反应。方法 用MTT比色试验研究五倍子单宁酸对正常人皮肤中的角质形成细胞、黑素细胞和成纤维细胞体外增殖的影响。并与秋水仙碱及红花和芦荟进行了比较。结果 ①五倍子单宁酸与五倍子生药醇提物对人成纤维细胞的增殖具有相似的抑制作用。在20μg/mL及以上质量浓度时,对人皮肤黑素细胞的抑制作用较大,其细胞增殖率是不加药对照组的73.6%～68%。在50μg/mL以下的质量浓度对人角质形成细胞的体外增殖有轻微的促进作用(111%～112%)。②红花生药醇提物和芦荟水提液在实验浓度下均可促进人角质形成细胞的体外增殖,芦荟水提液还可促进人成纤维细胞的体外增殖。结论 单宁酸是五倍子醇提物中的主要活性物质,其对黑素细胞的抑制作用提示五倍子单宁酸可能存在毒副作用。     

不含佛波醇酯和霍乱毒素条件下黑素细胞的培养

目的:建立不含佛波醇酯(TPA)和霍乱毒素(CT)培养液培养人类正常表皮黑素细胞的方法,避免TPA的致瘤危险和霍乱毒素的毒性。方法:临床环切包皮经中性酶-胰酶(D ispaseⅡ-Trypsin)两步消化后,获得表皮基底细胞悬液,于不含TPA和CT的KC-SFM角质形成细胞无血清培养基培养,用差速贴壁法及胰酶差速消化法去除角质形成细胞,用两段法去除成纤维细胞污染,观察黑素细胞的增殖情况和树突伸展状态,采用多巴(Dopa)染色和免疫组化对黑素细胞进行鉴定。结果:经过7天的培养,黑素细胞达到70%汇合,细胞呈双极、三极或多极的树突状。经1-2次传代,黑素细胞纯度达98%以上,Dopa染色和抗S-100单抗染色阳性。结论:用不含TPA和CT的KC-SFM角质形成细胞培养基可以获得大量高纯度黑色素细胞。