乙型肝炎患儿细胞因子与HBV DNA及血清乙肝标志物的关系

探讨小儿慢性乙型肝炎（CHB）细胞因子IL-12和INFγ与HBV DNA定量及HBVM的关系及意义。46例慢性乙型肝炎患儿和30例健康儿童均分别以ELISA法检测IL—12和IFNγ及HBVM,以荧光定量PCR法检测HBV DNA。HBeAg阴性组IL—12和IFNγ较HBeAg阳性组明显升高（P值均〈0．05）。高病毒载最组IL-12和IFNγ水平均显著高于对照组（P值均〈0．01）。慢性乙型肝炎患儿IL—12和IFNγ与HBeAg及HBV DNA水平密切相关。     

支原体感染

肺炎支原体感染的流行病学研究——王素梅等（安徽蚌埠医学院附属医院儿科233004）；《蚌埠医学院学报》，2006，31（2）：132—133[目的：研究小儿肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，MP）感染的流行特点、与年龄、季节、性别的关系以及MP感染后的首发症状。方法：对1999-2004年门诊和住院14岁以下部分患儿的血清，用被动凝聚法检测MP特异IgM抗体。结果：MP-Ab阳性率有一定规律；一年四季间差异有显著性（P〈0．01）；男女性别间差异有显著性（P〈0．005）；多见于学龄前儿童（32．24％）和学龄期儿童（40．63％）；近年来，NIP感染引起的肺外症状有明显增加趋势。结论：MP感染的流行与年龄、季节、性别有密切的关系，MP感染引起的肺外损伤有增加趋势。]     

尿液HCMV-DNA和血清HCMV-IgM抗体诊断人巨细胞病毒感染的价值

目的提高人巨细胞病毒（HCMV）感染的诊断水平。方法对960例临床疑诊HCMV感染患儿分别应用FQ—PCR、CLIA法检测尿液HCMV—DNA及血清HCMV-IgM抗体水平。结果尿液HCMV-DNA阳性478例,HCMV-IgM抗体阳性206例;二者均阳性191例。478例尿液HCMV—DNA阳性者中,血清IgM抗体阳性HCMV-DNA拷贝数对数均值高于阴性者（P〈0．01）。结论尿液HCMV-DNA定量和血清HCMV-IgM抗体联合检测有助于HCMV感染的诊断。     

肺炎支原体感染与冠状动脉粥样硬化的关系

目的探讨肺炎支原体（MP）感染与冠状动脉粥样硬化（CAS）的关系。方法采用EusA法检测CAS患者（CAS组）和健康者（对照组）的血清MP抗体IgG、IgM,胶乳增强免疫比浊法检测CAS组的血清高敏C反应蛋白（Ha-CRP）,酶法检测血脂,ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6。结果CAS组MPIgG阳性率明显高于对照组（P〈0．01）;与MPIgG阴性患者比较,CRP组MPIgG阳性患者的TC、TG、LDL-C明显升高,HDL—C明显降低,TNF-α、IL-1β、IL-6明显升高（P〈0．01或〈0．05）。各检测指标与CAS患者MP感染均独立相关,以Hs—CRP、IL-6的相关性最大（P〈0．01或〈0．05）。结论MP感染与CAS有关,其可能通过感染及炎症反应参与CAS的发生、发展。     

儿童耐药肺炎支原体DNA拷贝量与临床预后相关性分析

目的探究儿童耐药肺炎支原体(MP)DNA拷贝量及其与临床预后的相关性。方法选取1年内反复MP感染且不规律应用大环内酯类抗菌药物≥2次的110例患儿为研究组,采集咽拭子标本进行MP培养及药敏试验,根据MP耐药情况将患儿分为耐药组(27例)和敏感组(15例),MP检测阳性患儿实施阿奇霉素序贯治疗,观察患儿的临床特点及预后情况,荧光定量PCR检测MP-DNA拷贝量,测定血清白介素-6(IL-6)、降钙素(PCT)、急性期应激反应蛋白(hs-CRP)水平及白细胞总数、血沉。结果MP培养显示,110例患儿中MP阳性感染患儿42例,阳性率38.18%,42例MP阳性中27例阿奇霉素敏感,15例耐药;耐药组治疗2周后治愈率为59.26%(17/27);4周后治愈率为77.78%(21/27);敏感组治疗2周后治愈率为100%(15/15);耐药组发热时间、住院时间均高于敏感组(P<0.05);耐药组患儿MP-DNA拷贝量、血清hs-CRP、IL-6水平显著高于敏感组(P<0.05),白细胞总数、PCT、血沉与敏感组无显著差异(P>0.05);多因素分析发现,MP-DNA拷贝量、血清hs-CRP水平是影响耐药MP感染患者预后的独立危险因素。结论儿童耐药肺炎支原体DNA拷贝量异常增加,与临床预后相关。     

两种不同方法检测咽拭子标本中肺炎支原体临床诊断价值的比较

应用聚合酶链反应 （PCR）与实时TaqMan荧光定量PCR（Real-time PCR）检测咽拭子标本中的肺炎支原体DNA（Mp-DNA）,比较两种方法检测结果的临床诊断价值。 方法 随机选取临床儿科门诊患儿566例,包括临床治诊Mp感染患儿106例和临床疑似Mp感染患儿460例,分别采用PCR法和实时TaqMan Real-time PCR法检测,以临床治诊Mp作为参照标准,采用 检验评定两种检测方法诊断的灵敏度和特异度,比较两种检测方法对Mp的诊断价值。 结果 566份受检患儿的咽拭子标本中,PCR法检测阳性45例（7.95%） （临床治诊Mp感染患儿5例,临床疑似Mp感染患儿40例）,实时TaqMan Real-time PCR法检测阳性175例（30.92%） （临床治诊Mp感染患儿95例,临床疑似Mp感染患儿80例）。实时TaqMan Real-time PCR法检测咽拭子Mp-DNA诊断Mp感染的敏感度显著高于PCR法（敏感度Real-time PCR 89.62 %,PCR 4.72 %, =146.322, P=0.000, P<0.05）,特异度与PCR法的差异无统计学意义（特异度Real-time PCR 87.61%, PCR 91.30 %, =3.331, P=0.068, P>0.05）。 结论 应用实时TaqMan Real-time PCR法检测咽拭子中的Mp-DNA对儿童Mp感染的诊断价值优于应用PCR法检测咽拭子中的Mp-DNA, 其中应用实时TaqMan Real-time PCR检测对Mp感染患儿的早期诊断有更大的临床价值。     

2005年至2014年苏州地区儿童呼吸道肺炎支原体感染流行病学分析北大核心CSCD

目的分析苏州地区儿童呼吸道肺炎支原体（MP）感染流行病学特征,为临床合理诊治及卫生行政部门制订防控措施提供参考依据。方法收集2005年10月至2014年12月苏州地区20021例因呼吸道感染住院患儿痰标本,荧光定量PCR法检测MPDNA;同时在人院24h内及治疗7～10d采集静脉血,ELISA法检测血清特异性MP抗体IgG、IgM,分析MP检出情况。各组阳性率比较采用卡方检验或Fisher确切概率法,计量资料采用Wilcoxon秩和检验。结果20021例患儿中,MP感染率为36．08％（7224／20021）,其中女性患儿MP感染率为40．81％（3057／7490）,明显高于男性患儿的33．25％（4167／12531,x^2=116．20,P〈0．01）。〈6个月、～1岁、～3岁、～7岁以及〉7岁患儿的MP感染率分别为18．35％、29．39％、43．93％、54．10％和64．48％,MP感染率随着年龄的增大逐渐升高（x^2=1949．65,P〈0．01）。春夏秋冬四季MP感染率分别为31.97％、41．57％、40．88％和29．90％,夏秋季患儿MP感染率明显高于冬春季（x^2=234．61,P〈0．01）。2008年秋季为10年中最高MP检出季节,达55．07％,而2010年春季MP感染率为10年中最低季节（18．48％）。除2007年四季MP感染率无明显波动外,其余年份四季的MP感染率均有不同程度的波动。2008年、2009年、2012年及2013年苏州地区MP感染率分别为46．03％、46．60％、39．28％和47．40％,处于较高水平,2011年为25．24％,为10年来最低水平,其余年份MP感染率均维持在30％左右。结论苏州地区儿童呼吸道MP感染处于较高水平,女性患儿感染率高于男性,MP感染可发生在各个年龄段儿童,但随着年龄的增大感染率逐渐升高,夏秋季节为MP感染高发季,每隔2-3年MP感染出现一个流行小高峰,流行期可持续2年左右。     

巢式实时荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌DNA的临床应用

目的探讨巢式实时荧光定量PCR（QNRT-PCR）检测结核分枝杆菌（MTB）DNA的临床价值。方法应用SYBR Green I建立检测结核分枝杆菌MTP64基因的QNRT—PCR方法,分别检测24份肺结核患者痰液,27份结核性胸膜炎患者胸水,以及对照组75份痰液和胸水的MTBDNA含量。结果以培养为金标准,QNRT—PCR敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）分别为95．83％、61．54％、69．70％和94．12％,结核性胸膜炎的阳性率为70．37％。三种PCR方法阳性率比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）,QNRT—PCR与实时荧光定量PCR拷贝数配对检验差异没有统计学意义（P〉0．05）,QNRT—PCR与实时荧光定量PCR的Cr值配对检验差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论QNRT—PCR方法可检测痰液和胸水MTB DNA,对含微量MTB DNA样本的高敏感性在结核病的早期诊断中有重要参考价值。     

BLyS/April在川崎病患者中的表达及意义

目的 探讨BLyS／April在川崎病（KD）免疫发病机制中的作用。方法 急性期KD患儿48例，正常同年龄对照组32名，KD患儿分别于静脉注射丙种球蛋白（IVIG）治疗前后直接取血备检。采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及荧光定量PCR检测单核-巨噬细胞（MC）BLyS和April，BLyS／April受体BR3、BCMA、TACI及细胞因子mRNA表达；双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆中细胞因子蛋白浓度。结果 ①急性期KD患儿MCBLyS和Aprilm RNA表达明显高于正常同年龄对照组（P〈0．01），经IVIG治疗后表达不同程度下降；②BLyS／April受体BR3、BCMA和TACI基因转录水平显著高于正常同年龄对照组（P〈0．01）；③急性期KD患儿抗体类型转换相关细胞因子白细胞介素（IL）-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-15 mRNA表达水平及蛋白浓度明显高于正常同年龄对照组（P〈0．01）；④KD患儿BLyS／April调控因子干扰素（IFN）-α/γ、IL-10 mRNA表达水平及血浆浓度明显高于正常同年龄对照组（P〈0．01）。结论 急性期KD患儿BLyS／April过表达可能是导致KD免疫功能紊乱的因素之一。     

乙肝病毒感染患儿细胞因子、血清标志物与HBV-DNA的相关性研究

对95例乙肝病毒（HBV）感染患儿和30例健康儿童用双抗夹心ELISA法检测其IL-10、IL-12和IFN-γ血清水平，同时检测HBV—DNA和HBVM。结果HBsAg携带（ASC组）和慢性乙型肝炎患儿（CHB组）的IL-10、IL-12和IFN-γ水平均显著高于对照组（两组P值分N〈0．05，〈0．01，〈0．01）。ASC组高病毒载量者IL-10和IFN-γ均显著高于对照组（P值均〈0．01），CHB组高载量者IL-10、IL-12和IFN-γ均显著高于对照组（P值均〈0．01）。ASC组和CHB组IL-10与IL-12、IFN-γ均呈显著正相关，IL-12与IFN-γ呈显著正相关。HBV感染患儿存在异常细胞免疫应答，与HBV—DNA水平密切相关。     

小儿重症肺炎支原体肺炎血清降钙素原的水平测定及其临床意义

目的探讨重症肺炎支原体肺炎（MPP）患儿血清降钙索原（PCT）的含量及其临床意义。方法观察组为2007年1月－8月诊断为重症MPP的住院患儿36例,对照组为同期无感染的正常儿童15例。分别于入院24小时内急性期及恢复期取外周静脉血2ml,离心后留取血清标本,－70℃冰箱保存备用,对照组同样方法留取标本,采用发光免疫分析法定量测定PCT。结果观察组患儿急性期和恢复期血清PCT平均值分别为（0．21±0．13）ng／ml,（0．09±0．14）ng／ml,对照组儿童PCT平均值为（0．04±0．03）ng／ml。急性期与恢复期PCT比较差异有显著性（P〈0．01）,恢复期PCT与正常对照差异无显著性（P〉0．05）。结论重症MPP在急性期血清PCT仅轻度增高,在恢复期降至正常范围。对肺炎支原体肺炎的诊断,血清PCT不能取代MP-IgM抗体,MP—IgG抗体,而且需结合年龄、临床症状、肺部体征、胸片特点等综合判断。     

CEA蛋白、CEAmRNA检测在大肠癌、胃癌早期诊断中的价值及方法探讨

目的研究癌胚抗原（CEA）蛋白、CEAmRNA在大肠癌、胃癌患者血清、癌组织中的表达,为大肠癌、胃癌的早期诊断提供理论依据,并探讨最佳诊断方法。方法选取21例大肠腺癌、20例胃腺癌住院患者和20例胃肠道良性疾病患者,检测其术前血清CEA蛋白表达;用免疫组织化学法和实时荧光定量RT—PCR法检测癌组织、癌旁组织及良性胃肠道疾病组织中CEA蛋白和CEAmRNA表达。结果大肠癌、胃癌组织CEA蛋白及CEAmR-NA的表达均高于癌旁组织及良性胃肠道疾病组织（P〈0．01,或〈0．05）,胃癌组织CEAmRNA表达与血清及组织中CEA表达比较有统计学差异（P〈0．05）;大肠癌组织CEAmRNA表达与血清CEA表达比较有统计学差异（P〈0．05）。结论应用实时荧光定量RT—PCR法检测组织CEAmRNA在大肠癌和胃癌早期诊断中有重要价值。     

支原体肺炎与毛细支气管炎的临床研究

目的探讨肺炎支原体（MP）感染与毛细支气管炎的相关性，分析其临床特点。方法对186例毛细支气管炎患儿血清采用酶联免疫法（ELISA）MP-IgM检测，MP-IgM阳性为MP感染（感染组），MP-IgM阴性为对照组，对两组进行比较分析。结果感染组64例（34．4％），其中年龄〈6个月13例（20．3％），～2岁51例（79．7％），冬春发病38例（59．4％），夏秋26例（40．6％）。对照组122例，其中年龄〈6个月78例（63．9％），～2岁44例（36．1％），冬春发病112例（91．8％），夏秋10例（9．2％）。两组发病年龄和发病季节均有显著性差异（P〈0．01）。两组患儿均有咳嗽、喘憋及呼吸困难，与对照组比较，MP感染组中高度发热62例（96．9％）、肺部x线片状阴影48例（75％），均高于对照组，有显著性差异（P〈0．01）。CRP、白细胞总数（WBC）两组无显著性差异。并发症发生率，MP感染组18例（28．1％），对照组19例（15．5％），P〈0．05。结论以中高度发热，且持续时间较长，肺部x线有片状阴影的毛细支气管炎患儿，应疑为MP感染及时进行MP抗体的检查，早期作出诊断与治疗。     

定量PCR检测HCMV-DNA结合细胞培养分离病毒法诊断小儿HCMV感染

目的探讨实时荧光定量PCR检测HCMV-DNA结合细胞培养分离病毒,对诊断小儿HCMV感染的价值。方法使用实时荧光定量PCR法检测尿液HCMV-DNA与细胞培养分离尿液HCMV二种方法检测。结果（1）该实时荧光定量PCR检测HCMV-DNA体系,与相关的三种病毒（I型单纯疱疹病毒、腺病毒和呼吸道合胞病毒）无交叉反应,20例正常幼儿皆为阴性。（2）40例临床患儿实时荧光定量PCR检测尿液HCMV-DNA,阳性10例。其中,唇腭裂组阳性6例（6/11）,肺炎组阳性4例（4/29）,两组检出结果比较,差异有显著性（χ2=5.06,P〈0.05）,唇腭裂组阳性检出高于肺炎组。（3）40例临床患儿细胞培养法HCMV分离检测,阳性8例,其中,唇腭裂组阳性4例（4/11）,肺炎组阳性为4例（4/29）,两组检出结果比较,差异无显著性（χ2=1.21,P〉0.05）。（4）40例临床患儿,实时荧光定量PCR检测尿液HCMV-DNA与细胞培养分离病毒结果符合度比较,差异无显著性（χ2=3.33,P〉0.05）。二种方法阳性检出比较,差异无显著性（χ2=0.38,P〉0.05）。结论实时荧光定量PCR检测尿液HCMV-DNA,与细胞培养法分离病毒联合应用可提高HCMV感染诊断阳性率。     

鼻咽癌患者外周血EBV DNA水平与癌组织细胞凋亡的相关性

目的探讨鼻咽癌患者外周血EB病毒（EBV）DNA水平与癌组织细胞凋亡的相关性。方法分别采用荧光定量PCR法、流式细胞仪检测22例鼻咽癌患者外周血中EBV DNA拷贝数及鼻咽癌组织细胞的凋亡率。结果本组患者外周血EBV DNA检出率为86．5％（19／22）、中位数为2200拷贝／μl,癌组织细胞凋亡率为33．27％±13．46％;EBV DNA阳性鼻咽癌患者癌细胞凋亡率为35．93％±12．42％,EBV DNA阴性患者为16．47％±4．83％,两者比较,P〈0．05;鼻咽癌患者外周血EBV DNA拷贝数与癌细胞凋亡率呈正相关（r=0．517,P〈0．01）。结论鼻咽癌患者外周血EBV DNA水平与肿瘤细胞凋亡之间存在相关性。     

支原体肺炎患儿血清T细胞亚群和IFN-TNF变化及其临床意义

采用流式细胞仪和酶联免疫方法检测31例支原体（MP）肺炎患儿（MP组）急性期、恢复期血清CD3、CD4、CD8、CD4／CD8、IFN＋γ、TNF-α水平，并与非支原体肺炎患儿（对照组）比较。结果MP组急性期CD3、CD4、IFN-γ显著低于对照组（P〈0．05），CD8无明显变化，TNF-α显著升高（P〈0．01）。上述指标均于恢复期（4周后）恢复正常。提示MP患儿细胞免疫功能低下，治疗中应注意阻断TNF-α分泌，提高IFN-γ、CD4水平。     

外周血单个核细胞介导乙型肝炎病毒感染的transwell 小室体外模型研究

目的：观察感染 HBV 的 PBMC 经人绒毛膜癌滋养层细胞（Bewo 细胞）构建的胎盘屏障迁移情况,探讨 PBMC 作为载体转运 HBV 的生物学作用。方法培养并用细胞计数试剂盒-8检测培养 Bewo 细胞和 PBMC 的增殖和活性。用 HBV DNA 含量为5×106拷贝／mL 的乙型肝炎患者血清100μL 感染 PBMC 后,用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）荧光染料标记感染的细胞, transwell 小室建立 Bewo 细胞和感染 HBV 的 PBMC 共培养模型。用流式细胞仪检测感染 HBV 的PBMC 迁移情况,荧光定量 PCR 法检测 transwell 下室中 PBMC HBV DNA 含量。结果 PBMC、Bewo细胞均在接种24 h 左右开始增殖,120 h 左右开始进入生长停滞期。transwell 小室共培养0、12、24和48 h,下室中绿色荧光标记的 PBMC 量分别为（0．445±0．021）％、（21．180±4．653）％、（34．830±7．156）％和（64．185±3．161）％,随着培养时间的延长,下室中检测到的标有绿色荧光的 PBMC 量越多（F ＝68．983,P ＝0．001）。共培养24、48 h 时,下室 PBMC HBV DNA 分别为（1．925±0．431）×103、（2．565±0．361）×103拷贝／mL,即下室中的 PBMC 发生感染。结论 PBMC可以作为 HBV 肝外感染的靶细胞,利用 transwell 小室构建胎盘滋养层屏障可以为体外研究 HBV 跨胎盘传播提供新思路。     

肺炎支原体感染与小儿支气管哮喘的关系

采用微量颗粒血清凝集沉淀方法．检测103例哮喘急性发作期患儿和30例非感染性疾病患儿静脉血中肺炎支原体（MP）特异性抗体IgM（MP—IgM）滴度及血清总IgE含量，并观察大环内酯类抗生素疗效。结果哮喘组MP-IgM阳性率为44．66％，对照组阳性率为6．67％，两者差异有统计学意义（P〈0.05）;MP—IgM阳性的哮喘患儿血清IgE含量明显高于阴性患儿，差异有统计学意义。认为MP感染与儿童哮喘关系密切，大环内酯娄抗牛素疗效确切，可降低短期哮喘发作率。     

婴儿人巨细胞病毒感染病原学和临床分析

目的了解婴儿人巨细胞病毒（HCMV）活动性感染的疾病诊断情况，探讨病原学结果与临床症状之间的关系。方法经血清HCMV IgM和抗凝外周血PP65抗原检测确定的HCMV活动性感染的婴儿378例，对其疾病诊断、病原学结果和临床症状之间的关系进行分析。其中107例患儿，使用套式聚合酶链反应（nPCR）加限制性长度多态性分析（RFLP）进行HCMV糖蛋白B（gB）基因分型。结果在378例HCMV感染患儿中，全身性感染和单脏器感染分别占27．78％和72．22％，肝炎、HCMV包涵体病、血小板减少性紫癜、肺炎等4种疾病分别以33．07％、27．78％、13．49％、6．35％占较大比例。≤2周HCMV包涵体病患儿的比例，明显多于3～12周（P〈0．05）和〉12周的患儿（P〈0．01）。高水平PP65阳性细胞率的患儿全身性感染率明显高于低水平PP65阳性细胞率的患儿（P〈0．01）。HCMV IgM和HCMV PP65、HCMV IgM和HCMV DNA、HCMVPP65和HCMV DNA的阳性符合率分别为31．4％、61．4％、57．1％。三项指标均阳性的患儿全身性感染的比例，明显高于一项或两项指标阳性的患儿（P〈0．01）；IgM和HCMV PP65两项阳性的患儿全身性感染的比例，也明显高于其中一项阳性患儿（P〈0．01）。107例患儿HCMV糖蛋白B（gB）基因的分型结果为gBI型53例，gBⅡ型20例，gBⅢ型18例，gBⅠ、Ⅱ混合型7例，gBⅠ、Ⅲ混合型5例，gBⅡ、Ⅲ混合型4例，未发现gBⅣ型。gBⅠ型占多数（49．53％）。结论婴儿HCMV感染临床表现多样；多种指标的检测，可提高检出率；婴儿HCMV感染，以gBⅠ型HCMV占多数。     

乙型肝炎病毒cccDNA定量与乙型肝炎临床及病理关系

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）肝组织HBVcccDNA定量与乙型肝炎的关系。方法分别采用荧光定量PCR、酶联免疫吸附分析法（ELISA）检测48例CHB肝组织HBVcccDNA定量、肝组织和血清HB VDNA定量、乙型肝炎病毒标志物。同时用链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶连接法（SP）检测肝细胞中HBcAg表达。分析肝组织HBVcccDNA与组织和血清HBV DNA、HBeAg、肝细胞内HBcAg水平及肝脏炎症活动度的关系.结果1．肝组织HBVcccDNA定量与组织和血清HBV DNA定量呈正相关（r=0．837，P〈0．001；r=0．627，P〈0．005）；2．肝组织HBV cccDNA定量与肝细胞内HBcAg半定量呈正相关（r=0．618，P〈0．005）；3．肝组织HBV cccDNA定量与肝脏炎症活动度尤明显相关（P〉0．05）：4．HBeAg阳性较抗-HBe阳性患者肝组织HBV cccDNA定量、肝组织和血清HBV DNA定量高（P〈0．05）。结论荧光定量PCR法检测肝组织HBV cccDNA定量是评价HBV复制最直接可靠的指标，在CHB的诊断和抗病毒治疗中有重要意义。但与肝组织炎症无明显相关。