三氧化二砷协同肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体抗胃癌细胞的作用及其机制

目的研究三氧化二砷（As2O3）联合肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体（TRAIL）对胃癌细胞生长和凋亡的影响及其机制。方法人胃腺癌细胞株SGC7901以As2O3、rsTRAIL及两者联用处理；用MTT法检测细胞生长；用双染色流式细胞仪检测细胞凋亡；用间接免疫荧光染色结合流式细胞技术检测细胞表面TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5分子表达；RT—PCR方法检测TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5 mRNA表达。结果As2O3和rsTRAIL在单用或联用时均可以抑制胃癌细胞SGC7901生长，并在一定范围内呈时间、剂量依赖性；联合用药组抑制率显著高于单用As2O3或rsTRAIL组（P〈0．01），金正均方法分析提示两药联用有协同抑制细胞生长效应。As2O3和rsTRAIL在单用或联用时均可以诱导胃癌细胞SGC7901凋亡，联合用药组细胞凋亡率显著高于单用As2O3或rsTRAIL组（P〈0．01）。As2O3单独或联合rsTRAIL作用于SGC7901细胞24h后，死亡受体TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5在细胞表面的表达明显上调（P〈0．01），其mRNA表达水平亦相应增加（P〈0．01）。结论As2O3联合rsTRAIL可以协同抑制胃癌细胞SGC7901生长并显著增强两药诱导胃癌细胞凋亡的作用，其机制可能是As2O3增加细胞TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5 mRNA表达、上调细胞表面TRAIL死亡受体从而增加胃癌细胞SGC7901对rsTRAIL的敏感性。     

幽门螺杆菌对胃上皮细胞株GES-1凋亡及XIAP表达的影响

目的观察幽门螺杆菌（Hp）慢性感染对胃上皮细胞凋亡及X凋亡抑制蛋白（XIAP）表达的影响。方法通过Hp SS1与人非肿瘤性胃上皮细胞株GES-1共培养,建立GES-1模型细胞,检测模型细胞凋亡率及胃上皮细胞XIAP mRNA的表达。结果Hp感染8周、12周、16周模型细胞凋亡率分别为64．55％、60．58％、45．52％,模型胃上皮细胞的XIAP mRNA实时定量PCR的CT值分别为0．901、0．842、0．796,明显低于对照组细胞凋亡率75．52％（P〈0．05）及XIAP mRNA的CT值1．030（P〈0．01）。结论Hp慢性感染能抑制胃上皮细胞凋亡,其机制可能与上调XIAP mRNA表达有关。     

X染色体连锁的凋亡抑制蛋白在胰腺癌组织及细胞中的表达及与化疗耐药的关系

目的研究X染色体连锁的凋亡抑制蛋白（XIAP）在胰腺癌组织及细胞中的表达情况，并探讨XIAP表达与胰腺癌细胞对化疗药物耐药性之间的关系。方法运用免疫组化染色法研究XIAP在胰腺癌组织中的表达水平以及与临床分期、病理分级之间的关系；用5-氟尿嘧啶（5-FU）间歇诱导SW1990提高其对药物的耐药性，以逆转录-聚合酶链反应（RTPCR）和Western印迹检测XIAP在胰腺癌细胞系中表达的改变，探讨与细胞耐药性之间的关系。结果在胰腺癌（20／23，89．6％）、正常胰腺组织（4／12，33．3％）和SW1990细胞中均有XIAP的表达。胰腺癌组织中的表达阳性率（P〈0．01）以及表达水平均强于癌旁正常胰腺组织（P〈0．05）；5-FU可诱导SW1990的耐药性（P〈0．01）和XIAP的表达水平升高（P〈0．05），XIAP的表达水平与细胞耐药性之间存在相关性（P〈0．05）。结论XIAP在胰腺癌中的表达水平升高，可能与胰腺癌的化疗耐药性、恶性转化以及增殖有关，可以作为胰腺癌基因治疗的一个新靶点。     

三氧化二砷洗脱支架诱导猪损伤冠脉平滑肌细胞凋亡

目的观察三氧化二砷（As2O3）多聚左旋乳糖酸（PLLA）涂层支架对猪损伤冠脉平滑肌细胞的凋亡诱导作用及机制。方法在6头小型家猪的冠脉内随机植入裸金属支架、PLLA涂层支架、雷帕霉素洗脱支架和As2O3洗脱支架,7天后处死,TUNEL法检测支架段血管平滑肌细胞凋亡率、免疫组化和Western blot法检测凋亡蛋白p53和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达,体外观察As2O3对大鼠血管平滑肌细胞的凋亡诱导作用和p53表达。结果与裸支架和PLLA涂层支架相比,雷帕霉素洗脱支架和As2O3洗脱支架植入局部平滑肌细胞凋亡率以及p53表达明显增多,尤其以As2O3洗脱支架最为明显（P〈0．01）,雷帕霉素洗脱支架和As2O3洗脱支架植入局部PCNA表达较裸支架和PLLA涂层支架明显减少（P〈0．01）,但二者间无显著性差异（P〉0．05）。体外细胞培养显示As2O3呈剂量依赖性的诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡和p53蛋白的表达。结论As2O3洗脱支架具有诱导猪损伤冠脉平滑肌细胞凋亡的作用,且较雷帕霉素洗脱支架更明显,其凋亡诱导作用和增加局部细胞p53表达有关。     

三氧化二砷及干扰素对U266细胞TRAIL和其受体表达的影响

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）联合IFNα-2a治疗人多发性骨髓瘤（MM）的可行性。方法将人MM细胞系U266细胞株随机分为4组,空白对照组不行特殊处理,As2O3组加入As2O3,IFNα-2a组加入IFNα-2a,As2O3＋IFNα-2a组同时加入As2O3及IFNα-2a。孵育48h后用双标记流式细胞术检测细胞凋亡率,用流式细胞仪检测细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）及其受体表达。结果As2O3＋IFNα-2a组细胞凋亡率、TRAIL及其受体表达均显著高于其他三组（P〈0．05）,空白对照组TRAIL及其受体表达均显著低于其他三组（P〈0．05）。结论As2O3,及IFNα-2a均可上调TRAIL及其受体表达,促进U266细胞凋亡,且两者有协同作用;此为临床治疗MM提供了新的思路。     

骨肉瘤组织中XIAP mRNA、Caspase-9 mRNA的表达变化及意义

目的观察X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XiAP）mRNA和Caspase-9 mRNA在骨肉瘤中的表达变化及其与骨肉瘤临床病理指标的联系。方法采用原位杂交技术检测51例骨肉瘤组织中XIAP mRNA和Caspase-9 mRNA,并以10例骨软骨瘤（骨良性病变）组织为对照（对照组）。结果在51例骨肉瘤中XIAPmRNA和Caspase-9 mRNA的表达水平与骨肉瘤的临床病理特征无明显关系,XIAP mRNA的阳性表达率显著高于对照组（P〈0．05）;Caspase-9 mRNA则显著低于对照组（P〈0．05）;XIAP mRNA与Caspase-9 mRNA的表达呈等级负相关（r=-0．467,P〈0．05）。结论XIAP、Caspase-9 mRNA可能与骨肉瘤的发生、发展有关。以XIAP和Caspase-9为靶点进行诱导骨肉瘤细胞凋亡的治疗,将可能成为临床提高保肢手术成功率及患者生活质量的新治疗思路。     

华蟾素对肝癌细胞株SMMC-7721增殖、凋亡的影响

目的探讨华蟾素对离体肝癌细胞株SMMC-7721的增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法将肝癌细胞株SMMC-7721分为实验组及对照组,细胞培养后取对数生长期细胞,实验组加入0．4、0．6、0．8μmol／L华蟾素,对照组不加药,采用MTr法检测两组24、48h增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期比例及凋亡率,RT-PCR法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3mRNA表达,Westernblot法检测髓系白血病基因（Md）-1的蛋白表达。结果实验组增殖抑制率明显高于对照组,且呈时间和剂量依赖性,P均〈0．05;实验组凋亡率明显高于对照组,P〈0．05;实验组Caspase．3mRNA表达量明显高于对照组,P〈0．05;Mcl-1蛋白表达量明显低于对照组,P〈0．01。结论华蟾素对肝癌细胞株SMMC-7721具有增殖抑制及凋亡诱导的作用,其机理可能为使Caspase-3表达升高,Mcl-1表达降低。     

埃罗替尼对胰腺癌细胞BxPC3生长的影响及其机制

目的观察表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂埃罗替尼对体外培养的胰腺癌细胞BxPC3生长的影响,并探讨其作用机制。方法应用MTT法检测埃罗替尼作用后BxPC3细胞的增殖情况;用流式细胞分析、透射电镜和原位末端标记（TUNEL）法观察细胞凋亡和细胞周期的变化;RT—PCR法检测细胞bcl-2、bax、bcl-xl、bak mRNA表达。结果埃罗替尼呈剂量和时间依赖性抑制BxPC3细胞生长。72h后,1、100μmol／L的埃罗替尼处理组细胞存活率分别为（90．25±2．62）％和（40．75±2．98）％。两者比较具有统计学意义（P〈0．01）。50μmol／L埃罗替尼处理BxPC3后24、96h的细胞存活率分别为（74．0±4．08）％和（49．50±1．29）％,两者比较也具有统计学意义（P〈0．01）。50μmol／L埃罗替尼处理组的细胞凋亡率为（11．0±1．1）％,显著高于对照组的（6．2±1．1）％（P〈0．01）;G0／G1细胞占（73．4±1．3）％,也显著高于对照组的（63．3±1．0）％;透射电镜可见细胞呈现明显凋亡形态,并见凋亡小体形成。埃罗替尼处理组细胞bcl-2、bcl—xl mRNA表达下调,bax mRNA表达轻微上调,bak mRNA的表达不受影响。结论EGFR抑制剂埃罗替尼体外可抑制胰腺癌细胞系BxPC3的生长,其机制可能与阻滞细胞周期,上调促凋亡蛋白和下调凋亡抑制蛋白有关.     

As2O3对TRAIL抑制人肺癌A549细胞增殖及调节DR4 mRNA、DR5 mRNA表达作用的影响

目的观察三氧化二砷（As2O3）对人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）抑制人肺癌A549细胞增殖作用的影响及机制。方法体外培养A549细胞至对数生长期后随机分为As2O3组、TRAIL组、联合组及对照组,As2O3组分别加入1、10μmol／LAs2O3,TRAIL组加入100μg／LTRAIL,联合组分别加入1μmol／LAs2O3＋100μg/LTRAIL、10μmol／LAs2O3＋100μg／LTRAIL,对照组加入DMEM培养液。四组均继续培养24、48、72h,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长情况,计算细胞增殖抑制率（IR）;用RT-PCR法检测死亡受体4（DR4）mRNA、死亡受体5（DR5）mRNA表达变化。结果 联合组IR显著高于As2O3,组及TRAIL组,尤以作用48h和72h为著（P均〈0．05）;联合组DR4 mRNA和DR5 mRNA表达均明显强于As2O3组及TRAIL组（P均〈0.05）。结论 As2O3,可增强TRAIL对A549细胞增殖的抑制作用,机制可能为上调DR4m RNA和DR5 mRNA表达;此为肺癌的临床靶向治疗根供了依据．     

熊去氧胆酸诱导肝癌细胞株HepG2凋亡及对Survivin、Caspase-3表达的影响

目的探讨熊去氧胆酸（UDCA）对肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡及Survivin、Caspase-3表达的影响。方法UDCA孵育细胞后，分别采用MTT法、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、半定量RT-PCR法等观测相关指标。结果UDCA能抑制HepG2增殖，诱导其凋亡，并具有浓度、时间依赖性。随着Survivin表达下调，Caspase-3表达上调（r=-0．9959，P〈0．01）、细胞增殖抑制（r=0．9883，P〈0．05）、凋亡指数增加（r=-0．9521，P〈0．05）。结论UDCA可能通过干预Survivin的表达，减弱后者对Caspase-3的负调控作用，而影响肝癌细胞的增殖、凋亡。     

三氧化二砷对肺成纤维细胞株NIH3T3增殖和凋亡的影响

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）的抗肺纤维化（PF）作用及其机制。方法将对数生长期成纤维细胞株NIH3T3随机分为对照组及观察1组、观察2组,分别用含0、2、4μmol／LAs2O3的DMEM培养液处理24h和48h,采用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法检测细胞增殖抑制率（IR）,流式细胞术检测细胞周期分布,透射电镜和Hoechst染色方法观察细胞超微结构及细胞核形态变化。结果 观察1组和观察2组细胞增殖IR均显著高于对照组,尤以作用48h时和观察2组为著（P均〈0.01）;观察1组和观察2组G0／G1,期细胞显著多于对照组,而G2／M期细胞显著少于对照组,尤以观察2组为著（P均〈0.01）;观察1组和观察2组细胞具有早、中期凋亡形态学特征（细胞膜结构完整、细胞质浓缩、染色质边集、固缩）。结论As2O3可抑制肺成纤维细胞株NIH3T3增殖并促进其凋亡,此为临床PF治疗提供了新思路。     

不同砷化合物对人舌鳞癌细胞的毒性研究

目的研究不同的砷化合物(一甲基亚砷酸,三氧化二砷,砷酸氢二钠,二甲基砷酸钠)对人舌鳞癌细胞株增殖的影响。方法以人舌鳞癌细胞株(Tca8113)为研究对象,分别暴露于0.032 6～33.500 0μmol/L一甲基亚砷酸(CH3AsO,MMAⅢ),0～3 200.0μmol/L三氧化二砷(As2O3,iAsⅢ),砷酸氢二纳(Na2HAsO4.7H2O,iAsⅤ)和二甲基砷酸钠(C2H6AsO2Na.3H2O,DMAⅤ)48 h,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞生存率;将细胞暴露于10.00 mol/L的三氧化二砷,砷酸氢二钠和二甲基砷酸钠,0.13μmol/L的一甲基亚砷酸,收集细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)。结果高于一定浓度的一甲基亚胂酸(≥8.34μmol/L),三氧化二砷(≥50.00μmol/L),砷酸氢二钠(≥1 600.00μmol/L)和二甲基砷酸钠(≥400.00μmol/L)均能够显著降低Tca8113的细胞生存率,且在一定剂量范围内具有剂量-效应关系;CH3AsO,As2O3,Na2HAsO4.7H2O和C2H6AsO2Na.3H2O暴露48 h的Tca8113细胞的50%生存率(IC50)经计算分别为15.68、288.40、1 720.00、1 483.00μmol/L;细胞内活性氧含量依次为CH3AsOAs2O3Na2HAsO4.7H2OC2H6AsO2Na.3H2O。结论砷化合物在高于一定浓度时可以明显抑制Tca8113细胞增殖,其中MMAⅢ的毒性最强;砷价态相同时,有机态砷的毒性高于无机态砷。随着药物浓度的增加,ROS也增加,其中也以MMAⅢ最高。砷化合物的细胞毒性可能与诱导的氧化损伤有关。     

三氧化二砷对rIL-13诱导肺成纤维细胞增殖和炎性介质表达的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）的抗肺纤维化机制。方法将体外培养的肺成纤维NIH3T3细胞株随机分为对照组及观察组,对照组仅予DMEM培养基,观察组予80 ng/ml重组白细胞介素（rIL）-13及不同浓度As2O3处理24、48 h。MTT法检测细胞增殖;原位杂交方法检测巨噬细胞炎症蛋白（MCP）-1αmRNA表达;放射免疫法检测细胞培养上清液IL-6、IL-8水平。结果 As2O3处理后细胞增殖明显受抑,且呈时间和剂量依赖性（P〈0.01）;rIL-13处理后细胞MCP-1αmRNA和IL-6、IL-8表达增强,联用As2O3后此作用明显受抑（P〈0.01）。结论 As2O3可能通过抑制rIL-13诱导的肺成纤维细胞增殖及炎性介质表达而发挥抗肺纤维化作用。     

β-榄香烯对肾癌786-0细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的观察β-榄香烯对肾癌786-0细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法使用不同浓度β-榄香烯作用于786-0细胞24 h,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,W estern b lot法检测细胞内磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）及总Akt。结果随β-榄香烯浓度增大,细胞存活率逐渐降低,细胞凋亡率明显增加,细胞内p-Akt表达水平逐渐降低,均呈一定浓度依赖性（P均〈0.05）。结论β-榄香烯可诱导肾癌细胞凋亡,其机制可能为抑制PI3K/Akt通路活性。     

维生素C对AS2O3抑制肺癌A549细胞增殖、诱导细胞凋亡作用的影响及机制

目的探讨维生素C对三氧化二砷（AS2O3）抗癌作用的影响及其可能机制。方法将体外培养的肺腺癌A549细胞随机分为6组,其中对照组不行特殊处理,AS2O3 1—3组分别加入0．4、4．0、40μg/ml的AS2O3,维生素C组加入400μg／ml的维生素C,联合组加入400μg／ml维生素C＋0．4μg／ml AS2O3。采用缩胆囊素八肽（CCK-8）法及克隆形成实验检测细胞生长情况（A值）,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,用RT-PCR方法检测Caspase-3 mRNA、多药耐药相关蛋白基因1（MRP1）mRNA、多药耐药基因1（MDR1）mRNA表达情况（维生素C组）。结果联合组及AS2O3 2、3组A值均显著低于对照组及AS：O3组、维生素C组,且随作用时间延长逐渐降低（P〈0．05）;联合组细胞集落显著少于其他五组,G0／G1期所占比例及凋亡率均显著高于其他五组（P〈0．05）;维生素C组Caspase-3 mRNA、MDR1 mRNA表达升高（P〈0．05）、MRP1 mRNA表达无明显变化（P〉0．05）。结论维生素C对As2O3抗肺腺癌A549细胞的作用具有协同性,可能机制为上调Caspase-3表达;两者联用可望成为低毒高效的化疗组合。     

Effect of arsenic trioxide on human hepatoma cell line BEL-7402 cultured in vitro

AIM:To study the effect of a varying concentrations of arsenic trioxide on human hepatoma cell line BEL-7402 cultured in vitro and its mechanism of action.METHODS:The BEL-7402 cells were treated with arsenic trioxide (at the concentrations of 0.5 1 2&mgr;mol/L, respectively) for 4 successive days. The cell growth and proliferation were observed by cell counting and cell-growth curve. Morphologic changes were studied with electronmicroscopy. Flow cytometry was used to assay cell-DNA distribution and the protein expression of Bcl-2 and Bax detected by immunocytochemical method.RESULTS:The cell growth was significantly inhibited by varying concentrations of arsenic trioxide as revealed by cell counting and cell-growth curve, which was dose- and time-dependent. Arsenic trioxide treatment at 0.5, 1 and 2&mgr;mol/L resulted in a sub-G1 cell peak, the apoptosis rate of the control group was 9.31% and that of 0.5&mgr;mol/L arsenic trioxide 15.53%, no significant difference was seen between the two.The apoptosis rates of 1,2&mgr;mol/L arsenic trioxide were 19.10% and 21.87% respectively, which were much higher (both P < 0.05). Decrease of G(0)/G(1) phase cells and increase of S phase cells were observed by flow cytometry, suggesting the inhibition effect of 0.5, 1, 2&mgr;mol/L arsenic trioxide on BEL-7402 cell lay in the G(0)/G(1) phase. Morphologic changes such as intact cell membrane, nucleic condensation, apoptotic body formation were seen under transmission electronmicrescopy, whereas the 0.5mol/L arsenic trioxide-treated BEL-7402 cells showed decrease of nucleocytoplasmic ratio, round nucleus, well-differentiated organelles in the cytoplasm. The processes and microvilli on the cell surface of the experimental groups under scanning electron microscopy were significantly decreased. High expressions of Bcl-2 and Bax were detected in 1 and 2&mgr;mol/L arsenic trioxide-treated cells, these were 46%, 87.33% and 83.08%, 95.83% respectively, among which that of Bax was more significant. Arsenic trioxide treatment at 0.5&mgr;mol/L resulted in a higher expression level of Bcl-2 and lower expression level of Bax,which were 8.81% and 3.83% respectively, as compared with that of the control group (15.33%) (P(1)<0.01, P(2)<0.01).CONCLUSION:Arsenic trioxide not only inhibited proliferation but also induced apoptosis of human hepatoma cell line BEL-7402. The induced-apoptosis effect of 1,2&mgr;mol/L arsenic trioxide was related to the expression level of Bcl-2 and Bax.     

三氧化二砷对人体胃肠癌细胞凋亡及P53、Bcl-2表达的影响

目的研究三氧化二砷（As2O3）在人体内诱导胃癌、结肠癌细胞凋亡及对凋亡相关基因P53、Bel-2表达的影响,探讨其抗肿瘤作用机制。方法采用原位末端转移酶标记技术和免疫组化法分别检测As2O3用药前后胃癌和结肠癌细胞凋亡指数和凋亡相关基因P53、Bcl-2的表达变化情况。结果As2O3用药后胃癌、结肠癌细胞凋亡率分别为15．53％和16．76％,与用药前比较均有显著性差异（P〈0．05）;用药后胃癌、结肠癌细胞P53蛋白阳性表达率分别为35．42％和30．83％,与用药前的38．08％和31．58％比较无显著性差异（P〉0．05）;用药后胃癌、结肠癌细胞Bcl-2蛋白阳性表达率分别为23．80％和16．90％,与用药前比较显著下调,二者均具有显著性（P〈0．05）。结论As2O3在人体内可诱导胃癌和结肠癌细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其机制可能是通过调节bcl-2基因的表达来实现。     

The effect of arsenic trioxide on human hepatoma cell line BEL-7402 culturedin vitro

AIM To study the effect of a wide range of concentration of arsenic trioxide on human hepatoma cell lineBEL-7402 and its mechanism.METHODS The BEL-7402 cells were treated with arsenic trioxide (a final concentration of 0.5, 1 and2 μmol/L, respectively) in various durations or for 4 successive days. The cell growth and proliferation wereobserved by cell counting and cell-growth curve. Morphologic changes were studied under electronmicroscopy. Flow cytometry was used to assay cell-DNA distribution and the protein expression of Bcl-2 andBax was detected by immunocytochemical method.RESULTS The cell growth was significantly inhibited by the different concentrations of arsenic trioxide asrevealed by cell counting and cell-growth curve. Arsenic trioxide treatment at 0.5, 1 and 2 μmol/L, resultedin a sub-G1 cell peak. The decreased G0/G1 phase cell and the increased percentage of S phase cell were observed by flow cytometer, suggesting that the inhibiting effect of arsernic trioxide on BEL-7402 cell lay inG0/G1 phase cell. Apoptotis-related morphology, such as intact cell membrane, nucleic condensation,apoptotic body formation, can be seen under the electron microscopy. High protein expression level of Bcl-2and Bax was detected in 1 and 2 μmol/L arsenic trioxide-treated cells, but that of Bax was more significant.Arsenic trioxide treatment at 0.5 μmol/L resulted in higher expression level of Bcl-2 and lower expressionlevel of Bax compared with control (P1<0.01, P2<0.01).CONCLUSION Arsenic trioxide not only inhibited the proliferation but also induced apoptosis of humanhepatoma cell line BEL-7402. The induced-apoptosis effect of 1 and 2 μmol/L arsenic trioxide was relative tothe expression level of Bcl-2 and Bax.