糖尿病神经性疼痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞变化的研究

目的 观察糖尿病神经性疼痛(DNP)大鼠脊髓星形胶质细胞的变化. 方法 SD大鼠30只,分为正常对照(NC)组10只和糖尿病(DM)组20只.DM组腹腔单次注射STZ(80 mg/kg),NC组腹腔注射生理盐水.两周后眼眶内眦取血测定血糖值,血糖＞16.7 mmol/L大鼠作为糖尿病模型.4周后测定大鼠热板反应潜伏时间作为痛阈指标,选取DM组痛阈最低的10只作为DNP模型组.取DNP组大鼠脊髓腰段组织切片.神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)标记星形胶质细胞,观察星形胶质细胞在脊髓背角的分布;采用多媒体彩色病理图像分析系统检测阳性面积(Area)μm2和灰度值(Gray Scale). 结果 DM组痛阈(18.41±6.25)较NC组(37.40±7.35)降低(P＜0.01),DNP组GFAP染色阳性脊髓星形胶质细胞面积(1377.37±271.83)μm2和灰度值(8638.21±1861.90)水平较NC组升高(P＜0.01).结论 糖尿病神经性疼痛时大鼠脊髓星形胶质细胞被激活增生,表达水平升高,抑制脊髓星形胶质细胞激活可能成为治疗DNP的新策略.     

GTPs 对 PD 小鼠脊髓前角星形胶质细胞过度活化的影响及机制探讨

目的观察绿茶多酚（GTPs）对帕金森病（PD）小鼠脊髓前角星形胶质细胞过度活化的影响,并探讨其机制。方法将45只C57BL／6J小鼠随机分为3组各15只。模型组及预防组以1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）腹腔注射7d,30mg／（kg·d）,但预防组于模型制备前3个月开始GTPs干预,至注射MPTP结束;正常组连续7d腹腔注射同体积生理盐水,饮水中未加入GTPs,余处理方法及时长均与上述两组相同。采用免疫组化法对脊髓进行染色,光镜下观察脊髓胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性细胞变化,计数GFAP阳性细胞个数;电镜下观察各组星形胶质细胞变化;比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。结果3组GFAP阳性细胞形态无明显差异。与正常组及预防组比较,模型组颈膨大、腰膨大GFAP阳性细胞数增加（P均〈0．01）。模型组出现较多活化的星形胶质细胞,增生、肥大,常成群分布,细胞胞体、胞核增大,胞质丰富,其内细胞器增多;预防组及正常组活化的星形胶质细胞较少。与正常组比较,模型组颈膨大、腰膨大SOD水平降低,MDA水平升高;与模型组比较,预防组颈膨大、腰膨大SOD水平升高,MDA水平降低（P均〈0．01）。结论GTPs能缓解PD脊髓前角星形胶质细胞过度活化,其机制可能为降低脊髓前角氧化应激水平。     

白血病抑制因子对急性脊髓损伤模型大鼠后肢运动功能及GFAP表达的影响

目的探讨白血病抑制因子（LIF）对急性脊髓损伤（ASCI）的保护作用。方法将36只大鼠随机分为观察组和对照组各18只。观察组采用Allen’s打击法建立ASCI模型并以微量注射器分别向损伤处及手术野头、尾侧注射100ng／ml的LIF溶液6山;对照组仅注射等量生理盐水。术后1d、1周、1个月分别采用BBB分级法及改良Tarlov法评估两组后肢运动功能,采用免疫组化法检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达。结果随术后时间延长,两组后肢运动功能均有所恢复,但术后l周及1个月观察组BBS分级评分显著高于对照组,术后1个月观察组改良Tarlov法评分显著高于对照组;两组GFAP表达均有升高趋势,但观察组术后1周和1个月观察组GFAP均显著高于对照组。结论LIF对脊髓损伤有一定保护作用,可能机制为促进神经元生长及其他神经营养因子分泌和表达,改变神经轴突生长方式。     

成纤维细胞生长因子2对创伤后应激障碍模型大鼠行为及海马星形胶质细胞的影响

目的探讨成纤维细胞生长因子2（FGF2）对创伤后应激障碍（PTSD）模型大鼠的行为以及海马星形胶质细胞的作用。方法采用单次延长应激（SPS）建立大鼠PTSD模型,然后在SPS大鼠第7d给予高剂量FGF2因子腹腔注射,采用自发活。刃、高架十字迷宫方法观察高剂量FGF2单次给药对SPS模型大鼠行为学的影响;同时利用星形胶质细胞标志物——胶艇纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色方法,观察各组大鼠海马星形胶质细胞阳性表达的情况,并利用双重荧光Westernt印迹法验证GFAP在不同实验组的蛋白表达情况。结果与SPS组大鼠相比,FGF2高剂量给药后明显减轻SPS大鼠的焦虑或抑郁状态,且明显增强海马内GFAP免疫反应阳性星形胶质细胞的表达。结论FGF2可明显改善SPS大鼠的焦虑或抑郁症状,其治疗PTSD的机制可能与增加星形胶质细胞的活性有关。     

嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤的修复作用及机制

目的探讨嗅鞘细胞（OECs）移植对损伤脊髓的作用及机制。方法取48只成年SD大鼠制备脊髓损伤模型,造模成功后将大鼠随机分为两组各24只,OECs组行OECs移植：取10μl的OECs悬液于脊髓损伤处及损伤段远、近端蛛网膜下腔分别注入8、1、1μl,并各留针2 min,缓慢退针;对照组予生理盐水10μl注入,其他操作同观察组。应用BBB运动功能评分比较两组行为学指标,HE染色、胶原纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组化染色分别观察脊髓损伤组织学变化及T9星形胶质细胞增生情况。结果干预后2～8周OECs组运动功能恢复情况、BBB评分均显著高于对照组及干预前,P均〈0.01。干预后4周HE染色示对照组脊髓组织有较多空腔,神经纤维及细胞坏死,颜色较暗;而OECs组脊髓组织中无明显空腔,空泡小而少,色泽较亮。GFAP免疫组化染色示两组受损脊髓节段均出现星形胶质细胞反应性增生,但OECs组明显轻于对照组。结论 OECs对损伤脊髓具有修复和保护作用,其机制为促进损伤脊髓的轴突再生,减少星形胶质细胞增生。     

rhG-CSF对脑梗死区周边神经元和星形胶质细胞的影响

将36只健康雄性SD大鼠随机分为观察组与对照组各18只，观察组于缺血再灌注后24h自颈部皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF），1次／d，连用5d；对照组予等体积生理盐水。于缺血再灌注后7、14、21d分别处死6只大鼠．观察两组神经功能缺损评分及梗死区周边神经元和星形胶质细胞的特异性标记物微血管相关蛋白-2（MAP-2）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果与对照组相比．观察组神经功能缺损评分较低，MAP-2表达增高而GFAP表达降低。提示rhG-CSF可抑制神经元死亡和胶质疤痕形成，从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

鞘内注射盐酸奈福泮对甲醛致痛大鼠脊髓背角环氧化酶-2表达的影响

目的 研究在甲醛致痛大鼠模型中鞘内注射奈福泮对脊髓背角环氧化酶-2（COX-2）表达的影响，以探讨奈福泮镇痛的脊髓机制。方法 雄性SD大鼠40只，随机分为对照组（C组）、模型组（F组）、生理盐水组（NS组）及盐酸奈福泮组（N组）。鞘内置管后5d，F组、NS组及N组大鼠于左后足掌部皮下注射5％甲醛100uL，注射甲醛前20min，NS组鞘内注射20uL生理盐水，N组鞘内注射5uL盐酸奈福泮（100ug）后经导管注入15uL生理盐水冲管，C组足底注射100uL生理盐水。采用疼痛加权评分评价疼痛行为学，并在足底注射2h后将所有动物处死取脊髓膨大处，采用免疫组织化学法观察脊髓背角COX-2表达。结果 与C组比较，F组、NS组脊髓背角COX-2表达增加（P〈0．05）；与F组、NS组比较，N组脊髓背角COX-2表达降低（P〈0．05）。结论 鞘内注射盐酸奈福泮可抑制甲醛炎性疼痛引起的脊髓中COX-2表达增加，可能与奈福泮的镇痛作用有关。     

HIF-1α基因修饰神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤组织NF200和GFAP表达的影响及意义

目的 探讨低氧诱导因子-1α基因(HIF-1α)修饰神经干细胞(NSC)移植治疗脊髓损伤的可行性及机制.方法 将120只SD大鼠随机分为四组各30只.假手术组仅行椎板切开术;单纯损伤组(SCI组)、神经干细胞组(NSC组)、HIF-1α基因修饰NSC组(HIF-NSC组)均采用电控脊髓损伤打击装置制作脊髓损伤模型,分别于脊髓注入生理盐水、NSC悬液、HIF-NSC悬液.采用免疫组化法检测1、3、7、14及28 d各组脊髓组织HIF-1α、NF200 、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达.结果 HIF-NSC组各时点HIF-1α表达明显高于其他各组(P均＜0.01),且表达高峰延迟至移植后14 d;除第1天外,NF200表达明显高于SCI组和NSC组 (P＜0.05),GFAP表达显著低于SCI组和NSC组 (P＜0.01).结论 HIF-1α基因修饰NSC移植可促进损伤脊髓神经轴突再生,减少胶质细胞的增生和胶质疤痕形成,为神经再生创造有利的微环境;其机制可能为促进HIF-1α、NF200表达,抑制GFAP表达.     

首乌仙海片对缺血性卒中模型大鼠脑组织GFAP表达的影响

目的观察首乌仙海片对缺血性卒中（MCAO）模型大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响,探讨中药治疗MCAO的作用机理。方法用Tamura法行右侧近端大脑中动脉电凝术制作MCAO大鼠模型。35只大鼠分为药物组、模型组和假手术组。于造模成功后第6天药物组灌胃给予首乌仙海片,剂量为9 g生药/（kg.d）,余二组分别灌胃给予等量生理盐水,1次/d。用免疫组织化学法观察MCAO大鼠脑组织GFAP的表达。结果药物组大鼠脑组织GFAP 2周内表达增强,而3周时表达降低。结论首乌仙海片治疗MCAO的作用机制可能是早期增强星形细胞活性,从而调动星形细胞对神经系统损伤的修复机能;后期抑制GFAP的表达,从而抑制胶质瘢痕的形成,以去除神经功能重塑的负面因素。     

促红细胞生成素对星形胶质细胞损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素（EPO）对体外培养的星形胶质细胞的作用。方法采用出生3 d内的SD大鼠大脑制成细胞悬液后,在含15%胎牛血清的DMEM培养液中培养,通过摇床和逐渐传代纯化星形胶质细胞,分为正常组、正常E组（正常细胞＋EPO 10 U/L）、损伤组（缺氧3 h）、损伤E组（损伤细胞＋EPO 10 U/L）。用免疫荧光技术鉴定星形胶质细胞,MTT法检测细胞活性和凋亡情况,PCR技术测定细胞纤维酸性蛋白（GFAP）。结果星形胶质细胞摇床后传至第3代,经鉴定其星形胶质细胞纯度达95%以上;缺营养3 h后部分细胞形态变圆甚至死亡,漂浮在正常细胞表面;正常E组和损伤E组细胞在分别加入EPO 3 d后,损伤E组细胞活性与GFAP表达均明显升高,正常E组则没有明显变化。结论EPO对缺营养损伤的星形胶质细胞有显著的保护作用,而对正常星形胶质细胞无保护作用。     

大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间充质干细胞的诱导分化作用

目的探讨大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经样细胞的作用。方法分离得到的MSCs在体外扩增、传代。用碱性成纤维生长因子(bFGF)预诱导后加入不同时间的臂丛神经损伤大鼠脊髓匀浆上清液诱导。免疫细胞化学染色检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,以鉴定分化细胞的表型特征。结果细胞诱导后具有神经元或胶质细胞样细胞的形态,相应细胞表面标志NSE或GFAP阳性,以损伤后7d脊髓匀浆上清液诱导组NSE阳性和GFAP阳性率最高(P<0.05)。结论臂丛根性撕脱伤大鼠脊髓匀浆上清液在体外能够有效地诱导骨髓MSCs分化为神经样细胞,伤后1w可以作为MSCs移植的最佳时间。     

促红细胞生成素对慢性脑缺血大鼠认知障碍及海马星形胶质细胞的影响

目的 观察促红细胞生成素干预后慢性脑缺血大鼠的空间学习记忆功能及海马星形胶质细胞的变化.方法 结扎大鼠双侧颈总动脉建立慢性脑缺血模型,治疗组术后给予EP01 000 U/kg腹腔内注射5d.术后第8周时3组大鼠Morris水迷宫测试后断头取脑做免疫组化检测观察CA1区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达.结果 缺血组水迷宫表现同假手术组和EPO治疗组相比有显著差异(P＜0.01).EPO干预能改善慢性脑缺血大鼠的空间学习记忆能力(P＜0.01).缺血组海马CA1区GFAP表达较假手术组相比明显增多,而EPO组海马CA1区GFAP表达同缺血组相比明显降低(P＜0.01).海马CA1区GFAP阳性细胞数与学习记忆能力呈负相关.结论 EPO能显著改善慢性脑缺血大鼠认知障碍,机制可能与减少海马星形胶质细胞增生有关.     

雌激素对Aβ1-40诱导大鼠星形胶质细胞和NOS阳性细胞变化的影响

目的 探讨雌激素对淀粉样β蛋白诱导大鼠星形胶质细胞及NOS阳性细胞变化的影响.方法 于雄性SD大鼠双侧海马注射Aβ1～40,制作AD大鼠病理模型,颈部皮下植入E2,60 d后取脑行冻切片.采用组化和免疫组化方法,观察大鼠海马GFAP与NOS阳性细胞表达的变化,以及雌激素对上述指标的影响.结果 AD大鼠出现海马星形胶质细胞增生、肥大,数量明显多于正常对照组（P＜0.05）,并出现一氧化氮阳性星形胶质细胞;海马一氧化氮神经元数量较正常对照组显著减少（P＜0.05）.E2处理组星形胶质细胞增生不明显,数量明显少于AD模型组（P＜0.05）,且未见一氧化氮阳性星形胶质细胞;海马一氧化氮神经元数量较AD模型组显著增加（P＜0.05）.结论雌激素可减轻神经系统的损伤,对AD有一定防治作用,但其作用机制尚需进一步探讨.     

参附注射液对脑缺血再灌注大鼠bcl-2、p53表达的影响

目的 研究参附注射液(SFI)对脑缺血再灌注损伤神经元凋亡、bcl-2、p53蛋白表达的影响及对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法 健康大鼠分为缺血对照组和SFI治疗组,再灌注开始时治疗组大鼠腹腔注射SFI,对照组注射生理盐水,于再灌注6、12、24 h处死大鼠取脑组织制切片,分别进行bcl-2、p53蛋白及凋亡细胞检测.结果 TUNEL染色结果各组均有阳性细胞表达,SFI治疗组凋亡细胞数与缺血对照组比较显著减少.bcl-2蛋白结果显示治疗组bcl-2阳性细胞数均明显高于对照组.p53蛋白检测结果显示治疗组阳性细胞数均明显低于对照组.结论 SFI能抑制脑缺血再灌注损伤神经元凋亡,其抗凋亡机制可能与上调bcl-2蛋白及下调p53蛋白表达有关.     

电针对糖尿病胃轻瘫大鼠胃电活动与延髓神经元和星状胶质细胞可塑性的影响

[目的]观察电针对糖尿病胃轻瘫（DGP）大鼠胃电活动与延髓迷走孤束复合体（VSC）内神经元和星状胶质细胞可塑性变化的影响。[方法]实验大鼠分为空白对照（空白）组、DGP模型（模型）组、模型加电针足三里穴（足三里）组和模型加电针三阴交穴（三阴交）组。模型制备采用腹腔注射5％四氧嘧啶和熟地灌胃诱导的方法。实验3周后记录大鼠的胃电活动,取延髓进行抗Fos蛋白和抗胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的免疫组化染色。[结果]与空白组比较,模型组的胃电平均频率和振幅明显降低。而足三里组和三阴交组的平均频率和振幅较模型组明显升高（P〈O．01,〈0．05）;以足三里组升高更明显,与三阴交组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。除空白组外,Fos阳性神经元、GFAP阳性星状胶质细胞集中表达于VSC。以模型组的Fos和GFAP表达最高,而足三里组与三阴交组的表达较模型组明显减少,且它们之间差异有统计学意义（P〈0．01）。[结论]针刺可改善糖尿病胃运动功能障碍,延髓VSC内免疫阳性神经元和胶质细胞可能参与了此调节作用。     

hIGF-1转基因对周围神经损伤后脊髓运动神经元作用的实验研究

目的 观察周围神经损伤局部转染外源性人胰岛素样生长因子-1（hIGF-1）基因对脊髓运动神经元的保护作用.方法 90只雄性Wistar大鼠,建立坐骨神经挤压伤模型后随机分为3组.hIGF-1治疗组：挤压伤处神经外膜下即刻注射pcDNAhIGF-1和LipfectAmine转染液10 μl;模型组注射pcDNA3.1、LipfectAmine和蒸馏水混合液10 μl ;空白对照组：不注射任何物质.术后免疫组化法观察不同时相hIGF-1在脊髓的表达,TUNEL法检测运动神经元的凋亡,Marsland和LFB双重染色观察运动神经元细胞以及胞体内尼氏体的病理变化,通过脊髓前角超微结构观察神经毡的变化.结果 hIGF-1在周围神经损伤局部转染可以通过轴浆运输在脊髓前角表达,其表达高峰在转染后1 w左右.转染后7、14和21 d,hIGF-1治疗组脊髓运动神经元的凋亡数少于模型组及空白对照组（P＜0.01）.转染后2、7、14和28 d脊髓前角运动神经元细胞数hIGF-1治疗组多于模型组及空白对照组（P＜0.01）,且hIGF-1治疗组胞质内尼氏体的消退变化较另两组轻.转染后56 d脊髓前角超微结构hIGF-1治疗组神经毡大致正常,模型组及空白对照组见突起间隙增大,局部空化.结论 周围神经损伤后应用外源性胰岛素样生长因子-1有保护脊髓运动神经元的作用.     

黄芪皂甙Ⅳ联合ADSC对坐骨神经缺损后大鼠运动功能的修复作用

目的 探讨黄芪皂甙Ⅳ联合脂肪源性干细胞（ADSC）对大鼠坐骨神经缺损后运动功能恢复的影响.方法 将40只清洁级雄性SD大鼠随机分为4组各10只,4组均采用化学萃取脱细胞方法制备大鼠缺损脱细胞神经支架（ARSN）.ARSN组注入等剂量DMEM于ARSN;黄芪皂甙Ⅳ组注入等剂量DMEM于ARSN,并于术前5 min及术后12、24 h腹腔注射黄芪皂甙Ⅳ（20 mg/kg）;ADSC组注入等剂量ADSC（1×10^6/mL）于ARSN;黄芪皂甙Ⅳ＋ADSC组同时采用黄芪皂甙Ⅳ组、ADSC组的方法.用各组的神经移植体桥接长1 cm坐骨神经两断端间的缺损造模,术后8周取材.检测各组坐骨神经功能指数（SFI）、神经电生理参数（神经传导速度、潜伏期、波幅）及胫前肌湿重比率.结果 与ARSN组比较,黄芪皂甙Ⅳ组、ADSC组和黄芪皂甙Ⅳ＋ADSC组术后各时点SFI增高,神经传导速度增快,潜伏期缩短,波幅增大,胫前肌湿重比率增高（P均＜0.05）;与黄芪皂甙Ⅳ组比较,黄芪皂甙Ⅳ＋ADSC组术后56 d SFI增高,神经传导速度增快,潜伏期缩短,波幅增大,胫前肌湿重比率增高（P均＜0.05）.结论 黄芪皂甙Ⅳ联合ADSC移植能促进大鼠神经再生和运动功能恢复,其作用优于单独应用黄芪皂甙Ⅳ或ADSC.     

小檗碱对糖尿病大鼠外周神经功能及神经病理性痛的影响

目的探讨小檗碱(Berberine,Ber)对糖尿病(DM)大鼠外周神经功能和神经病理性痛的影响及其作用机制。方法以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导形成DM模型,随机分成对照组、模型组和Ber组,其中Ber组给予187.5 mg/kg的Ber灌胃。用机械刺激法、热板法,分别测缩足反应阈值(MWT)、热痛阈值(HPT);电刺激诱导动作电位法测定坐骨神经传导速度(NCV);光镜观察脊髓组织形态学改变;用硝酸还原法、化学比色法测定一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)含量或活性。结果 DM大鼠MWT、HPT均明显降低(P<0.01),坐骨神经NCV明显减慢(P<0.05),脊髓背角萎缩,神经元变性坏死,核仁消失,尼氏小体消失,Ber组则明显恢复;DM大鼠血清、坐骨神经NO、NOS均明显减少(P<0.01),Ber组则明显升高(P<0.05)。结论 Ber能减轻DM大鼠神经病理性疼痛症状,维持外周神经的结构和功能,这种作用与其增加NOS活性,促进NO的合成和释放,抑制NO的灭活有关。     

局灶性脑缺血预处理大鼠星形胶质细胞GFAP表达的变化

目的观察GFAP在大鼠局灶脑缺血和局灶脑缺血预处理(IPC)中的表达水平。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,将大鼠分为正常组、MCAO组、IPC+MCAO组,按缺血时间不同各组又分为3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d组,观察1 d时间点大鼠神经功能、梗死体积,观察不同时间星形胶质细胞变化及其标志物GFAP表达水平。结果 101 min IPC可使大鼠神经功能增加并减少梗死体积,MCAO和IPC+MCAO后星形胶质细胞标志物GFAP表达随缺血时间延长阳性表达增多,10 min IPC随缺血时间延长,星形胶质细胞阳性细胞数增多,在缺血1 d、3 d、7 d明显增加,与MCAO相比差异显著。结论 IPC可能通过激活星形胶质细胞产生缺血耐受作用。     

大鼠脊髓损伤模型脊髓组织中Mst3b、GAP-43的表达及意义

目的观察大鼠损伤脊髓组织中哺乳动物ste20样蛋白激酶3b（Mst3b）、神经生长相关蛋白43（GAP-43）的表达变化,探讨其意义。方法 68只SD大鼠,取4只作正常对照（A组）,余随机均分为假手术（B）组、单纯损伤（C）组、肌苷治疗（D）组和6-硫代鸟嘌呤（6-TG,E）组。C、D、E组建立大鼠脊髓半横断损伤模型,B组只咬除棘突及椎板不损伤脊髓。各组分别于术后3、7、14、28 d采用免疫组化SP法检测脊髓中的Mst3b和GAP43蛋白。采用BBB运动功能评分法评定术后各时点C、D、E组动物左右肢功能。结果 A组大鼠脊髓组织中Mst3b、GAP-43无表达,B组极少表达,C、D、E组有明显表达（P均〈0.01）;Mst3b、GAP-43分别在术后7、14 d表达率最高,与大鼠左右肢功能的恢复趋势一致（P均〈0.01）;Mst3b与GAP-43的表达呈正相关（r=0.804,P〈0.01）。大鼠左右肢BBB评分D组高于C组,C组高于E组（P均〈0.01）。结论 Mst3b、GAP-43在大鼠正常脊髓组织中无表达,在损伤脊髓组织中表达明显,且二者表达呈正相关关系。Mst3b、GAP-43可能在脊髓损伤修复过程中起重要作用。