组织工程软骨修复兔膝关节软骨大面积深层缺损的实验研究

目的　将培养的软骨细胞埋在胶原凝胶中,观察其对家兔漆关节软骨大面积深层缺损的修复作用。方法体外培养软骨细胞,然后与胶原以一定比例混合培养,植入免膝关节股骨负重面的缺损（５ｍｍ ×４ｍｍ）部位,观察 ２、４、８．１２周软骨缺损的修复情况,并进行大体和组织学观察。结果移植后第 ８周,所修复组织的边缘变得模糊,与周围宿主整合得很好,缺损边缘不清晰。组织学观察,缺损处表面光滑,边缘与宿主完全整合,缺损处呈典型的关节软骨样组织,并且底部有新形成的软骨及骨小梁生成。对照组（未移植组）组织学观察缺损部位主要为纤维组织所填充,未见有由新生软骨细胞形成的软骨组织。结论埋在胶原凝胶中软骨细胞对家兔膝关节软骨深层缺损的修复作用。     

体外重建组织工程关节软骨的实验研究

目的　用胶原蛋白和人血纤维蛋白混合物为载体在体外进行软骨细胞三维立体培养 ,构建人工软骨组织。方法　取 2周龄的新生兔关节软骨 ,经消化 ,将获得的软骨细胞与牛 型胶原、人血冻干纤维蛋白原、凝血酶按一定比例混合 ,制成软骨培养物并在体外培养。培养第 3周时 ,取材进行 HE、甲苯胺蓝染色和透射电镜检查。结果　体外培养 3周 ,培养物内细胞均存活 ,形成软骨陷窝 ,同源性细胞簇出现 ,并分泌软骨基质。透射电镜下可见丰富的粗面内质网和线粒体 ,及少量的高尔基复合体。结论　用胶原蛋白和人血纤维蛋白为载体支架体外培养软骨细胞 ,可构建较大的组织工程软骨     

组织工程软骨修复全层大面积关节软骨损伤的实验研究

目的观察由软骨细胞体外培养的人工软骨组织对家兔膝关节软骨全层缺损修复的可行性.方法分离收集兔软骨细胞(4周龄),用培养液悬浮,经离心管体外培养成组织工程软骨,然后植入兔膝关节股骨负重面的缺损(5 mm×4 mm)部位,观察2,4,8,12周软骨缺损的修复情况,并进行大体和组织学观察.结果移植后第8周,移植部位填充物与宿主已完全整合,缺损处表面光滑;组织学显示,缺损部位新生软骨与所移植软骨有较好的连续性,并且缺损底部有软骨下骨及海绵状骨生成;对照组(未移植组),从组织学观察到缺损部位呈纤维样修复,未见有由新生软骨细胞形成软骨组织.结论用体外培养的组织工程软骨做移植物修复家兔关节软骨组织深层缺损具有较好的疗效.     

应用同种异体组织工程软骨修复关节软骨缺损观察

目的用胶原蛋白和人血纤维蛋白混合物为载体支架在体外进行软骨细胞三维立体培养,构建人工软骨组织,利用此人工软骨修复关节软骨缺损。方法取2周龄兔关节软骨,经消化、分离的软骨细胞体外培养。培养第3周时,进行免疫组织化学分析;利用培养3周的人工软骨对异体成兔的关节软骨损伤进行修复。结果培养物内软骨细胞均得到较好存活,形成软骨陷窝,出现同源性细胞簇,分泌软骨基质;DNA和糖胺多糖(GAG)在培养第24天时达到高峰,分别为(5.18±0.19)、(214.3±2.8)μg/块;对异体关节软骨损伤的移植修复结果良好,在12周时,移植物与周边正常组织结合紧密、齐高,移植的软骨细胞趋于柱状排列,为透明软骨组织。结论用胶原蛋白和人血纤维蛋白为载体支架体外培养软骨细胞,可构建较大的组织工程软骨,能较好地修复同种异体关节软骨缺损。     

骨髓基质干细胞和基因强化组织工程修复软骨的实验研究

由于目前应用的移植软骨细胞体外扩增能力较弱．且取材不便，易对供体部位造成损伤，限制了临床应用。因此．寻找能在体外控制性生长的种子细胞成为近年软骨组织工程研究的热点。本文就骨髓基质干细胞和基因强化组织工程在软骨修复中的研究进展概述如下。     

透明质酸保护组织工程软骨拮抗硝普钠抑制作用的机制研究

目的 研究透明质酸对壳聚糖复合支架与再分化软骨细胞构建的组织工程软骨的保护作用.方法 藻酸钠微球包被体外单层扩增培养的去分化软骨细胞2周以恢复其表型,Ⅱ型胶原蛋白表达的免疫组织化学监测分化状态.扫描电镜观察再分化软骨细胞在壳聚糖复合支架上的生长,3周后用硝普钠或(和)透明质酸以及β1整合素特异性阻断抗体作用于该组织工程软骨,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westem blot检测软骨特异性的Ⅱ型胶原或聚集蛋白聚糖(aggrecan)的表达.结果 藻酸钠微球包被去分化软骨细胞2周能显著提高Ⅱ型胶原的表达.壳聚糖支架支持再分化软骨细胞的贴附、增殖和迁徙.硝普钠呈剂量依赖性地抑制组织工程软骨上的软骨细胞Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA的表达,而透明质酸显著提高Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA的表达.当用特异性抗体阻断β1整合素后,透明质酸不能逆转硝普钠对组织工程软骨中Ⅱ型胶原蛋白表达的抑制作用.结论 藻酸钠微球包被去分化的软骨细胞2周能恢复细胞的表型.透明质酸通过β1整合素信号通路拮抗低浓度硝普钠对组织工程软骨的抑制作用,保护软骨组织.     

组织工程心脏瓣膜支架材料进展

当前应用于临床的瓣膜置换物(生物瓣和机械瓣)都不同程度的存在着一定缺陷。组织工程心脏瓣膜为理想生物瓣膜替代物的出现带来了希望。组织工程心脏瓣膜的构建包括:⑴支架的选材及制备;⑵种子细胞的选择、分离与培养;⑶种子细胞在支架上的种植与培养三部分。现重点综述近年来国内外在组织工程心脏瓣膜支架材料研究上的新进展新突破,展望了支架材料发展的方向和前景。     

应用离心管技术以异体微粒软骨脱细胞基质为支架体外构建组织工程软骨

目的将软骨细胞与异体软骨微粒脱细胞基质相结合．构建组织工程软骨。方法分别利用氯化钾、胰蛋白酶和乙二胺四乙酸钠对绵羊关节软骨进行脱细胞，并制成直径0．100—0．154mm的微粒。先分离异体关节软骨细胞并进行体外扩增，再将异体软骨细胞与软骨微粒脱细胞基质混合培养，离心后应用离心管体外培养。结果本脱细胞方法可以使关节软骨细胞完全脱落，且软骨细胞紧紧围绕于异体软骨微粒脱细胞基质四周，生长和分泌功能良好。结论软骨细胞与异体软骨微粒脱细胞基质有良好的生物相容性．可于体外形成软骨样组织。     

骨关节炎软骨组织工程"种子"细胞的研究进展

骨关节炎(osteoanhritis,OA)是一种常见的中老年疾病,发病机制尚不明确,可能是生物力学和生物化学因素共同作用,引起软骨细胞、软骨细胞外基质及软骨下骨三者间分解与合成代谢失衡,导致关节软骨进行性变性和破坏。如何修复受损的关节软骨并保持其功能,是OA的治疗目标。作为发病环节之一的关节软骨细胞．其难以再生和修复,是制约OA治疗的瓶颈。     

应用转染BMP7基因组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损观察

目的 构建转染骨形态发生蛋白-7(BMP7)基因组织工程软骨,观察对家兔膝关节软骨缺损的修复作用.方法 将转染BMP7基因的软骨细胞(5×109个/L)接种于胶原-纤维蛋白凝胶的支架中,培养14 d后移植于家兔膝关节软骨表面,直径为5.0 mm,深达软骨下骨板的全层软骨缺损部位.移植后4、8、12周处死家兔,通过创面形态观察、组织形态的光镜观察、BMP7基因在移植部位的表达,评价转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损的修复作用.结果 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨培养物的体积分别为9 mm × 9 mm×2 mm和8 mm×8 mm×2 mm.转染BMP7基因组移植于家兔膝关节软骨后4、8、12周,均有软骨缺损修复作用,且移植部位有红褐色BMP7 mRNA和棕红色BMP7蛋白表达.移植后12周修复效果佳.优于未转染BMP7基因组.结论 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损均有修复作用,但转染BMP7基因组织工程软骨修复作用更强.     

心血管组织工程支架材料研究进展

组织工程的概念是由美国化学工程师RoberLanger与医生JosephePVacanti[1]于1987年共同提出,并由美国国家科学基金会(NSF)正式确立,其定义为应用细胞生物学和工程学的原理,研究和开发,能修复和改善损伤组织结构与功能的生物替代物的一门科学。组织工程学是在多学科基础上发展起来的,被认为是继细胞生物学和分子生物学之后,生命科学发展史上又一新的里程碑。目前组织工程面对许多挑战,组织工程支架材料是关键问题之一。1组织工程支架材料性能和要求组织工程的核心和主要研究方向主要集中在种子细胞、生物材料(即细胞外基质替代物)和组织工…     

心脏瓣膜组织工程研究新进展

瓣膜置换术是目前临床上治疗心脏瓣膜病的最终手段。但临床应用的各种人工心脏瓣膜在持久性和远期疗效上,都存在着难以克服的缺陷。而随着组织工程技术的发展,组织工程瓣膜以良好的组织相容性、经久耐用且具有生物活性等多方面的优势而成为近年来心脏外科领域的研究热点之一。现综述了近年来国外组织工程心脏瓣膜在瓣膜材料、培养方式及种子细胞等方面的最新进展并展望了该领域的研究未来。     

心脏组织工程支架材料的研究进展

近年来,心脏组织工程研究的迅速发展,为心脏病的外科治疗提供了一种新的治疗策略.理想的支架材料是心脏组织工程成功的关键之一.了解支架材料的研究进展,可为心脏组织工程支架材料的选择提供参考.     

瓣膜组织工程构建的研究进展

瓣膜病是常见病和多发病,主要治疗手段为瓣膜置换术.目前临床上应用的人造心脏瓣膜主要有机械瓣、生物瓣(包括同种瓣),但这些瓣膜均无生长性.     

应用人胚软骨细胞修复关节软骨缺损的研究

目的了解应用人胚胎关节软骨细胞修复家兔膝关节软骨大面积深层缺损的效果,为临床上进一步应用人胚胎关节软骨细胞进行同种异体细胞移植的可行性提供佐证.方法将分离的人胚胎关节软骨细胞以天然胶原作为细胞外基质网架,进行体外三维培养1周后,植入家兔关节软骨大面积深层(5 mm×5 mm×4 mm)缺损处,对修复组织进行大体观察及组织学评估.结果移植术后12周,缺损部位平坦、光滑,已为类似关节软骨的半透明组织填充,修复组织与宿主关节软骨组织整合较好,界限模糊;移植术后24周,缺损表面为透明软骨填充,缺损深部的软骨下骨组织已经重建.结论人胚胎关节软骨细胞可以作为软骨组织工程的种子细胞用于修复关节软骨组织的缺损.     

大骨节病患者软骨中组织蛋白酶D的活性

本文测定了大骨节病和非骨关节病患者的关节软骨溶酶体组织蛋白酶 D 活性。结果表明 大骨节病患者组织蛋白酶 D 活性不论是游离型或是酶的总活性均较非骨关节病惠者的酶活性升高,游离型与酶总活性的比值也增大。     

具生物活性组织工程血管支架的制备及支架与血管平滑肌细胞的相容性研究

目的 探索缓释血管内皮生长因子(VEGF)的可降解聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)支架的制备及其与血管平滑肌细胞(SMC)的相容性.方法 使用明胶微球做为缓释载体,加载 VEGF 和PLGA 构建组织工程血管支架(VEGF-PLGA)并观察体外 VEGE 释放效果.体外培养大鼠肺主动脉SMC 细胞,随机将培养至第 5 代或第 6 代细胞分为三组:VEGF-PLGA 组、PLGA 组与对照组.并将SMC 种植在 VEGF-PLGA 膜、PLGA 膜片上,对照组不放置膜片.用相差显微镜观察细胞生长情况,采用 MTT 绘制细胞生长曲线,检测细胞增殖和细胞黏附率.结果 (1)VEGF 在体外释放达 14d 以上;(2)SMC 在 VEGF-PLGA 膜片上生长良好;(3)MTT 法检测细胞增殖情况显示,VEGF-PLGA 明显好于其它组(P<0.05),细胞增殖符合细胞生长曲线;(4)细胞黏附率检测显示,三组无明显差异(P>0.05),VEGF-PLGA 对血管平滑肌细胞有良好的相容性.结论 明胶微球载体制备工艺简便,性能优良,VEGF-PLGA 制备方法简便,可在较长时间内持续释放活性 VEGF,对血管 SMC 具有良好的相容性,可用于组织工程血管的进一步构建.     

组织工程心脏瓣膜支架材料研究进展

心脏瓣膜置换术是治疗终末期心脏瓣膜病的主要方法，但目前临床应用的人工瓣膜的远期效果尚不令人满意。近年来，随着组织工程学技术的进展，利用培养的自身组织细胞种植于支架材料表面，体外重建理想的心脏瓣膜移植物日益成为研究热点，并取得一定进展。在组织工程研究中，寻找能充分发挥组织再生潜力的仿生型细胞外基质一支架材料是一重要内容和难点之一。支架材料主要承担瓣膜力学构型和细胞粘附载体的作用，它不仅影响细胞的生物学行为和培养效率，而且决定着移植后能否与机体很好的适应、结合、修复和替代的效果，是限制组织工程能否真正应用于临床的一个关键因素。本文综述近年来组织工程心脏瓣膜支架材料研究进展情况，并指出目前研究中存在的问题和下一步研究中需攻克的技术难题。     

心肌组织工程研究进展

冠心病是现代社会危害公众健康的主要疾病之一,而现有的治疗手段并不能从根本上治愈冠心病所引起的心肌损害和心功能下降,心肌组织工程概念的提出有望为解决这一难题提供新途径。本文结合近年来的文献对心肌组织工程的国内外研究进展作一综述。