左旋丁基苯酞对Aβ1-42诱导的原代培养神经元Caspase-3的影响

目的观察左旋丁基苯酞对Aβ1-42原代培养海马及基底前脑神经元Caspase-3表达影响,并探讨其脑保护机制。方法运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑及海马胆碱能神经元并进行鉴定,用2trmol／L的Aβ1-42建立神经细胞损伤模型,用不同剂量左旋丁基苯酞处理48h后,噻唑蓝（MTT）法测定细胞的存活率,免疫印记检测Caspase-3的含量变化,观察Aβ1-42对神经元的损伤及不同剂量的左旋丁基苯酞对神经元的影响。结果与正常组相比,Aβ1-42作用于基底前脑及海马神经元48h后,存活率显著下降,Caspase-3增高（P〈0．01）,不同剂量左旋丁基苯酞能够显著增高神经元存活率,抑制Caspase-3表达（P〈0．05）,且以中、高剂量组的作用显著。结论Aβ1-42能够诱导原代培养神经元Caspase-3表达,左旋丁基苯酞能够降低Aβ1-42诱导的基底前脑和海马神经元Caspase-3的激活。     

丁基苯酞通过p38丝裂原活化蛋白激酶通路拮抗β淀粉样蛋白致皮质神经元凋亡

目的研究丁基苯酞是否可以通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,抑制β淀粉样蛋白(Aβ)_(1 42)致原代培养皮质神经元凋亡。方法将原代培养的皮质神经元随机分为对照组、Aβ_(1-42)干预组(干预组)、Aβ_(1-42)+丁基苯酞0.1μmol/L组(A组)、Aβ_(1-42)+丁基苯酞1μmol/L组(B组)、Aβ_(1 42)+丁基苯酞10μmol/L组(C组)。Aβ_(1-42)作用24 h后,采用免疫荧光法染色观察细胞形态及凋亡比率,Western blot定量检测总p38、p-p38、caspase 3蛋白表达水平。结果免疫荧光双染显示,对照组神经元细胞体边缘光滑,突触长,细胞核完整;干预组细胞边缘塌陷,突触缩短,细胞核碎裂。与对照组比较,干预组、A、B、C组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),干预组p p38和caspase-3蛋白表达明显增加(P相似文献   

红车轴草异黄酮对认知损害大鼠NF-κB信号通路及突触可塑性的调节作用

目的探讨红车轴草异黄酮对Aβ1~42致大鼠认知功能损害的保护作用。方法将75只Wistar大鼠随机分为五组,除假手术组外,其余大鼠海马双侧注射Aβ1~42肽建立认知功能损伤模型,治疗组灌胃给予红车轴草异黄酮,连续3 w。采用免疫组织化学法检测各组大鼠海马神经元退行性。TUNEL法测定各组大鼠海马神经细胞的凋亡率;ELISA实验检测各组大鼠海马组织中白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达情况;Western印迹法检测海马组织中核因子(NF)-κB信号通路相关蛋白和突触可塑性相关蛋白的表达情况。结果红车轴草异黄酮能改善Aβ1~42致大鼠的学习记忆障碍。进一步研究表明,红车轴草异黄酮可显著减弱海马神经元退行性,降低Aβ1~42致海马IL-1β和TNF-α的过度表达;减弱星形胶质细胞和小神经胶质细胞的增生,明显抑制海马NF-κB的活化。此外,红车轴草异黄酮还可增加突触可塑性相关蛋白和脑源性营养因子(BDNF)水平。结论红车轴草异黄酮对Aβ1~42诱导的学习和记忆损伤有明显改善作用,其机制可能与抑制NF-κB活化,减少神经炎症、调节突触可塑性相关蛋白的表达,以及提高BDNF水平有关。     

Aβ_（1-42）对大鼠基底前脑神经元脑红蛋白表达的影响

目的 研究β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)对原代培养基底前脑胆碱能神经脑红蛋白(NGB)表达的影响,探讨NGB在阿尔茨海默病(AD)发病中的机制.方法 运用细胞原代培养方法培养大鼠基底前脑胆碱能神经元并进行鉴定,用2 μmol/L的Aβ1-42对原代培养细胞进行干预,RT-PCR及Western印迹观察干预后不同时间(分别为24、48、72 h)细胞NGB mRNA和蛋白表达水平的变化.结果 Aβ1-42作用胆碱能神经元24 h后,NGB的表达与对照组相比显著增多(P＜0.05),48 h后NGB的表达与对照组相比,仍显著增高(P＜0.05),而72 h后,NGB表达与对照组相比,无明显变化(P＞0.05).结论 Aβ1-42作用胆碱能神经元不同的时间(24、48、72 h),NGB在24、48 h的表达均显著增高,而在72 h变化不明显;NGB可能在AD早期阶段起到神经保护作用.     

二氮嗪预处理对Aβ_(1~42)作用神经元NR2B亚基蛋白表达的影响

目的研究ATP敏感的钾离子通道开放剂二氮嗪(diazoxide)预处理对Aβ1~42作用原代培养神经元N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B(NR2B)亚基蛋白表达的影响。方法原代培养大鼠皮层海马神经元并进行鉴定,将细胞随机分为对照组、单纯Aβ1~42干预组、二氮嗪预处理1h后Aβ1~42干预组(Aβ1~42+diazoxide)、单纯二氮嗪预处理组,并采用免疫印迹检测不同时间点(24 h、72 h)细胞NR2B亚基蛋白表达水平的变化。结果 Aβ1~42(2μmol/L)作用神经元24 h后,与对照组相比,单纯Aβ1~42干预组和Aβ1~42+diazoxide组的NR2B亚基蛋白表达均无明显改变。Aβ1~42作用神经元72 h后,与对照组比较,单纯Aβ1~42组NR2B亚基蛋白表达量显著升高(P0.05);而与单纯Aβ1~42干预组相比,Aβ1~42+diazoxide组NR2B亚基蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 Aβ1~42作用原代培养神经元72 h,能够显著增加神经细胞NR2B亚基蛋白的表达量;同时,二氮嗪能拮抗Aβ1~42所引起的NR2B亚基蛋白表达量升高,提示二氮嗪可能通过NMDA受体通路影响Aβ1~42的细胞毒性作用。     

神经保护肽对老年性痴呆模型大鼠病理学及海马NF—κB mRNA表达的影响

目的 探讨神经保护肽(NAP)对老年性痴呆模型大鼠病理学及海马内核因子(NF)-κB mRNA表达的影响.方法 Wistar雄性大鼠40只,随机分为对照组,假手术组,痴呆组,治疗组,每组10只.建立β-淀粉样蛋白(Aβ)大鼠海马注射的老年性痴呆大鼠动物模型,利用HE染色观察病理变化,利用原位杂交的方法观察大鼠海马内NF-κB mRNA的表达.结果 HE染色观察病理变化:治疗组可看到部分神经细胞的坏死,形状不规则,核固缩,染色加深,与痴呆组相比,神经元损伤情况明显减轻.原位杂交结果:痴呆组可见较多的NF-κB mRNA阳性神经元,治疗组大鼠海马区NF-κB mRNA表达较痴呆组明显减少,但较对照组NF-κB mRNA表达增多.痴呆组的平均光密度及平均灰度值与对照组、治疗组有显著性差异(均P<0.01).结论 NAP对老年性痴呆大鼠海马神经元具有保护作用.     

Aβ1-42诱导原代海马神经细胞建立阿尔茨海默病细胞模型

目的 以Aβ1-42诱导原代海马神经细胞建立阿尔茨海默病细胞模型.方法 体外培养原代海马神经细胞,加入不同浓度Aβ1-42诱导并收获细胞,采用MTT法观察细胞活力,流式细胞术观察细胞凋亡及继发性死亡情况.结果 Aβ1-42作用于神经细胞后细胞活力明显下降,细胞存活率呈浓度依赖性降低;流式结果显示细胞凋亡及继发性死亡呈浓度依赖性增加.结论 Aβ1-42诱导后海马神经细胞存活率下降,细胞凋亡,可作为理想的AD细胞模型.     

丁基苯酞注射液对慢性脑缺血大鼠脑自由基代谢及海马聚腺苷二磷酸核糖聚合酶表达的影响

目的探讨丁基苯酞注射液对慢性脑缺血大鼠脑自由基代谢及海马聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）表达的影响。方法 80只大鼠随机分为四组：假手术组、双侧颈总动脉结扎慢性脑缺血模型组、大剂量丁基苯酞治疗组和小剂量丁基苯酞治疗组各20只。用药4周后,观察前脑组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量以及海马PARP蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组前脑组织SOD活力下降、MDA含量增加（P均〈0.05）;丁基苯酞注射液大、小剂量组较模型组SOD活力显著增加、MDA含量显著下降（P均〈0.05）。丁基苯酞注射液大、小剂量组与模型组比较海马PARP蛋白表达降低（P均〈0.05）。结论丁基苯酞注射液可通过抑制PARP蛋白的表达和减轻自由基损伤而保护慢性脑缺血大鼠的神经功能。     

依达拉奉对Aβ25-35诱导分化PC12细胞NF-κB p65基因表达的影响

目的 探讨依达拉奉(MCI-186)对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的PC12细胞NF-κB p65基因表达的影响.方法 实验对象分为3组:MCI-186保护组(MCI-186 20 μmol/L,Aβ25-35 30 μmol/L)、Aβ25-35干预组(Aβ25-35 30 μmol/L)和正常对照组.采用MTT法测定细胞生存率;RT-PCR检测NF-κB p65 mRNA表达变化,Western印迹法检测NF-κB p65蛋白表达的变化.结果 Aβ25-35能增加NF-κB p65 mRNA及其蛋白的表达,促进细胞凋亡;MCI-186能抑制NF-κB p65 mRNA及其蛋白的表达,抑制细胞凋亡.结论 MCI-186具有神经细胞保护作用,可能的机制与其抑制NF-κB p65 mRNA及其蛋白表达有关.     

依达拉奉对Aβ1-40诱导PC12细胞NF-κB、Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的 探讨依达拉奉对β淀粉样蛋白(Aβ1-40)诱导PC12细胞NF-κB、Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响.方法 采用Western印迹法,RT-PCR等检测NF-κB、Bcl-2mRNA和蛋白的表达,观察MCI-186对其保护作用.结果 模型组中NF-κB P65 mRNA和蛋白表达水平明显升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低,与对照组比较有显著差异(P＜0.01).保护组中NF-κB P65 mRNA和蛋白及Bcl-2 mRNA和蛋白表达与模型组组间比较有统计学意义(均P＜0.05),而与对照组比较无统计学意义(P＞0.05).结论 Aβ1-40可以活化神经细胞内NF-κB,减少Bcl-2的表达,发生细胞凋亡.依达拉奉可以抑制NF-κB激活,增加Bcl-2的表达发挥抗凋亡作用,最终达到保护神经细胞的目的 .     

NF-κB在β-淀粉样蛋白25-35诱导分化PC12细胞中的作用

目的探讨NF-κB在Alzheimer病（AD）中的作用。方法对AB25-35抑制PC12细胞生长的时间-效应关系和剂量-效应关系进行分析，确定Aβ25-35抑制PC12细胞生长的IC50和最大抑制效应出现的时间（X小时）。对IC50浓度的Aβ25-35作用X小时的PC12细胞和正常PC12细胞进行NF-κB P65 mRNA及其蛋白检测，其中NF-κB P65 mRNA采用RT—PCR法，NF-κB P65蛋白采用Western印迹法。结果Aβ25-35在36h对PC12细胞的生长抑制作用最强，Aβ25-35抑制PC12细胞生长的IC50约为30μmol／L；Aβ25-35能使NF-κB P65 mRNA及其蛋白表达明显增加。结论NF-κB能够促进AD中细胞凋亡的发生。     

丙泊酚对大鼠缺氧后海马细胞谷氨酸转运蛋白表达及其功能的影响

目的观察缺氧后丙泊酚对体外培养海马神经细胞谷氨酸转运蛋白（EAAT2）表达及谷氨酸摄取功能的影响。方法取10个月龄sD大鼠海马区神经细胞进行培养,制备缺氧模型后随机分为对照组和丙泊酚组。采用用Western blot及Northern blot分别测定缺氧后EAAT2蛋白和基因表达;NF-κB正义寡核苷酸和反义寡核苷酸转染各组培养细胞后,行NF-KB和EAAT2蛋白测定;同位素标记法测定谷氨酸摄取量。结果与对照组相比,丙泊酚处理后海马细胞EAAT2蛋白及mRNA均增加。NF-κB正义寡核苷酸转染培养细胞后,丙泊酚处理可明显抑制细胞核内NF-κB的表达,并上调EAAT2的表达,提高谷氨酸摄取率。结论缺氧后丙泊酚处理可通过NF-κB通路上调海马细胞EAAT2的表达,提高谷氨酸摄取率,降低兴奋性神经毒性损伤。     

雷公藤内酯醇对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆和海马核因子-κB表达的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力和海马核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 15只SD雄性大鼠等分成对照组、模型组、用药组.模型组大鼠给予双侧海马各一次性注射凝聚态β淀粉样蛋白(Aβ)1～40,对照组大鼠海马注射等量生理盐水;用药组大鼠在海马注射凝聚态Aβ1～40后腹腔注射雷公藤内酯醇,Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力.免疫组织化学方法观察NF-κB表达的变化.结果 行为学试验显示,在定位航行试验中,模型组大鼠平均逃避潜伏期较对照组明显延长,用药组大鼠平均逃避潜伏期较模型组明显缩短;在空间探索试验中,模型组大鼠跨越原平台位置的次数较对照组明显减少,用药组大鼠跨越原平台位置的次数较模型组明显增多.免疫组织化学染色显示,模型组胞核表达NF-κB的细胞数明显高于对照组,用药组胞核表达NF-κB的细胞数明显减少.结论 雷公藤内酯醇对AD模型大鼠海马NF-κB的活化有抑制作用,并以此改善AD模型大鼠学习记忆能力.     

雷公藤氯内酯醇对拟阿尔茨海默病样大鼠海马神经元的保护作用

目的 研究雷公藤氯内酯醇(T4)对拟阿尔茨海默病(AD)样大鼠海马神经元的保护作用及可能机制.方法 应用脑立体定向技术向SD大鼠海马背侧注射凝聚态β-淀粉样蛋白(Aβ)25-35建立具有拟AD样AB沉积病理变化的大鼠模型.35只大鼠随机分为正常对照组、假注射组、模型组、T4低剂量(5μg/kg)组、T4高剂量(20μg/kg)组,每组7只.于模型制作后7 d收集脑组织标本,采用Western blot方法观察海马组织核因子(NF-κB)激活情况;酶联免疫吸附法检测海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)水平;TUNEL染色观察海马神经元凋亡情况.结果 与模型组相比,T4高、低剂量组海马组织NF-κB表达减少,TNF-α、IL-1β水平降低,凋亡神经元减少,高剂量组作用更明显(P＜0.01).结论 T4可能通过阻断NF-κB信号通路,发挥对拟AD样大鼠海马神经元的保护作用.     

Aβ诱导海马神经元调亡的机制及补肾方的调控作用

目的 探讨Aβ诱导海马神经元凋亡的机制及补肾方的药效。方法 原代培养的大鼠海马神经元经Aβ1-42处理后,FDA与PI双染判断神经元存活率,Hoechst33258染色、TUNEL检测神经元凋亡,免疫细胞化学观察Caspase-3表达,Northern Blot、RT-PCR研究凋亡相关基因怕表达。结果 神经元经Aβ1-42处理后,活细胞数减少,染色质浓缩、核碎裂,TUNEL染色阳性神经元增多,Caspase-3表达增加,bcl-2的mRNA表达减少,而bax与c-jun表达增加、c-fos的表达变化不明显。补肾方可明显改善上述变化。结论 Aβ通过对凋亡相关基因表达的调控并经Caspase-3途径引起神经元凋亡。补肾方可抑制Aβ诱导调亡。     

神经病理性疼痛大鼠海马组织中NF-κBmRNA、iNOSmRNA、nNOSmRNA表达及意义

目的探讨神经病理性疼痛大鼠模型海马核因子-κB（NF-κB）mRNA、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mR-NA和神经元型一氧化氮合酶（nNOS）mRNA表达及意义。方法将70只雄性Wister大鼠随机分为实验组和对照组各35只,于慢性坐骨神经挤压性损伤（CCI）术前1d及术后1、4,7、14、21、28d测定机械痛阈及热痛阈后处死大鼠,取海马组织,采用RT-PCR法测定NF-κBmRNA、iNOSmRNA、nNOSmRNA水平。结果与对照组及术前比较,实验组术后各时点术侧机械痛阈及热痛阈明显降低;NF-κBmRNA水平于术后4d开始增加,7d达到高峰,术后14、28d仍维持于较高水平（P〈0．05）;iNOSmRNA水平于术后4d开始增加,nNOSmRNA水平于术后7d开始增加,两者均在21d达到高峰,在28d仍维持在较高水平（P〈0．05）。结论CCI参与了神经病理性疼痛的维持,其机制可能为海马组织NF．KB活化并上调iNOS和nNOS表达。     

阿司匹林对Aβ_(25-35)诱导神经元炎性损伤的保护作用研究

目的观察阿司匹林对Aβ_(25-35)诱导神经炎性反应中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(1L-1β)、核因子κB(NF-κB)/p65核蛋白和磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKB-α)总蛋白表达的影响,探讨NF-κB通路在此过程中的作用。方法取孕龄17~18 d SD大鼠的海马神经元,将培养至第7天的神经元随机分为4组:(1)Aβ组:加入终浓度为20μmol/L的Aβ_(25-35);(2)低剂量阿司匹林组:加入终浓度为50μmol/L的阿司匹林和20μmol/L的Aβ_(25-35);(3)高剂量阿司匹林组:加入终浓度为100μmoL/L的阿司匹林和20μmol/L的Aβ_(25-35);(4)空白对照组:加入等量维持培养基。继续培养48 h后,采用双抗体夹心ELISA法测定上清液中TNF-α和IL-1β含量,Western-Blot法检测NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α总蛋白表达水平。结果(1)与对照组比较,Aβ组TNF-α和IL-1β的含量明显升高(P0.01),NF-κB/p65核蛋白和pIKB-α总蛋白的表达水平也明显升高(P0.01);(2)与Aβ组比较,低剂量和高剂量阿司匹林均可降低TNF-α和IL-1β的含量(P0.05),并减少NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α总蛋白表达水平(P0.05);(3)低剂量和高剂量阿司匹林组两组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论阿司匹林可能通过抑制NF-KB的激活来减轻Aβ_(25-35)诱导神经元的炎性损伤。     

硝普钠对体外培养的海马神经元NF-κB和caspase-3基因表达的影响

目的探讨NO供体硝普钠（SNP）诱导体外培养的海马神经元凋亡与核因子-kappaB（NF）-κB p65和caspase-3表达变化的关系。方法终浓度分别为0、25、50、100、200、400μmol/L的SNP处理海马神经元24 h,用MTT比色法分析细胞存活率;Hoechst33258荧光染色观察凋亡的形态学改变;DNA琼脂糖凝胶分析凋亡的生化特征;用RT-PCR检测NF-κB p65、caspase-3 mRNA表达变化;Western印迹检测NF-κB p65、caspase-3蛋白表达的变化。结果SNP可剂量依赖性的降低神经元的存活率;荧光显微镜可见染为高亮蓝色的典型凋亡小体,其细胞核明显固缩、凝聚和断裂;电泳图谱显示清晰的DNA梯度。随着SNP剂量的增加,NF-κB p65 mRNA、NF-κB p65蛋白表达逐渐增加;caspase-3 mRNA表达无改变,但caspase-3酶原被裂解活化;从50μmol/LSNP起,caspase-3相对酶活性显著增加,为对照组的3.02倍,100μmol/L达最大值。结论SNP可诱导培养的海马神经元凋亡,其凋亡机制可能与增加NF-κB p65表达及激活caspase-3酶原有关。     

rLent／NT4-NAP对AD大鼠行为学及海马内NF-κB mRNA及caspase-3 mRNA表达的影响

目的 探讨神经保护肽慢病毒(rLent/NT4-NAP)感染老年性痴呆(AD)大鼠鼻黏膜后分泌表达NAP对AD大鼠行为学及海马内NF-κB mRNA及caspase-3 mRNA表达的影响.方法 选择无菌级雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、假手术组、AD组、慢病毒组,每组10只.Aβ1-40联合转移生长因子β1(TGFβ1)注入各实验大鼠左侧海马区制备AD动物模型,利用水迷宫实验检测大鼠记忆能力,利用原位杂交方法观察大鼠海马内NF-κB mRNA和caspase-3 mRNA的表达.结果 AD组与正常组、假手术组比较,逃避潜伏期明显延长,差异有统计学意义(P＜0.05);慢病毒组与AD组比较逃避潜伏期明显缩短,差异有统计学意义(P＜0.05);慢病毒组与正常组、假手术组比较差异无统计学意义(P＞0.05).原位杂交结果示:AD组NF-κB mRNA,caspase-3 mRNA相对表达水平明显升高,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).慢病毒组NF-κB mRNA,caspase-3 mRNA相对表达水平与AD组比较明显降低(P＜0.01);与正常组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 rLent/NT4-NAP感染AD大鼠鼻黏膜后能够分泌表达 NAP;NAP能够下调AD大鼠海马NF-κB mRNA,caspase-3 mRNA的表达,抑制细胞凋亡,对AD大鼠海马神经元具有保护作用.     

NF-κB、TGF-β1在退变椎间盘组织中的表达及意义

目的 探讨核因子-κB（NF-κB）、转化生长因子β1（TGF-β1）在椎间盘退变组织中的表达及意义。方法 分别采用免疫组化法、酶联免疫吸附法检测30例退变椎间盘组织（病变组）中NF-κB、TGF-β1表达,并与10例正常椎间盘组织（对照组）比较。结果 病变组椎间盘组织NF-κB、TGF-β1的表达明显高于对照组,P〈0.05。结论 结论 NF-κB、TGF-β1可能在椎间盘组织退变中起重要作用。